专利名称：含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品及制备方法
技术领域：
本发明涉及保健制品及其制备领域，具体地讲是涉及一种能够增强机体免疫力的保健品及制备方法，尤其涉及一种含有粘细菌子实体或粘细菌子实体的浸提物的增强机体免疫力的保健品及制备方法。
粘细菌是一类具有特殊社会学行为特征和复杂发育生活史的可滑动的单细胞细菌。粘细菌通过滑动运动，可以在固体培养基上，特别是贫瘠的培养基上发育形成薄的膜状扩展菌落。在一定条件下，粘细菌的细胞可以聚集并发育形成子实体结构——由坚硬度不同的分化的细胞和粘孢子组成的简单或复杂的休眠体。作为最高等的原核生物，粘细菌特殊的社会行为现象和多细胞形态发生在进化上不仅高于一般原核生物，而且与真核生物有着极大的相似性，被认为是原核生物和真核生物间界面上的微生物类群。粘细菌丰富的次级代谢产物使粘细菌在保健品开发中成为极有潜力的资源。
以粘细菌的子实体或子实体的浸提物为主要原料制成的保健品，经体内试验证明无毒，并具有提高机体免疫力的效果，经过文献和专利的检索，由粘细菌子实体或其浸提物制备的增强免疫力的保健品在国内外技术文献或专利中未见报道。
本发明是通过如下的技术方案实现的含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品，其成分中粘细菌子实体或其浸提物的重量百分含量为60％-90％。
上述的含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品，其成分中还可以包括如下重量百分含量的辅料灵芝孢子粉或虫草粉 4-30％蔗糖3-5％焦糖1-5％蜂蜜2-4％西洋参香精或果味香精0-0.5％上述的粘细菌子实体可以是新鲜子实体，或干燥保存的粘细菌子实体粉，或粘细菌子实体的孢子，或粘细菌子实体的浸提物。
上述粘细菌子实体的浸提物是粘细菌子实体水浸提物或粘细菌子实体有机溶剂浸提物。
上述粘细菌子实体水浸提物是用80℃热水洗提，由洗提液经减压蒸发浓缩，80℃烘干制成。
上述粘细菌子实体有机溶剂浸提物是指由极性有机溶剂浸提制成的粘细菌子实体极性有机溶剂浸提物和/或由非极性有机溶剂浸提制成的粘细菌子实体非极性有机溶剂浸提物。
上述粘细菌子实体极性有机溶剂浸提物是由甲醇或乙醇对粘细菌子实体进行浸提，浸提液经过60℃的减压蒸发，除尽有机溶剂制成。
上述粘细菌子实体非极性有机溶剂浸提物是由二氯甲烷或石油醚对极性有机溶剂浸提过的样品再次浸提，浸提液经过40℃的减压蒸发，除尽有机溶剂制成。
上述含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品的制备方法，是利用药剂学的常规方法，将粘细菌的子实体或子实体粉及辅料以重量百分比混合，制成口服冲剂或片剂或胶囊。
上述含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品的制备方法，是利用药剂学的常规方法，将粘细菌的子实体的浸提物及辅料以重量百分比混合，制成口服冲剂或片剂或胶囊。
本项发明的创造性在于1)、开创了以粘细菌的子实体为材料进行药物开发的新思路，2)、以粘细菌的子实体或子实体的浸提物为主要原料制备药物，能够起到明显增强机体免疫力的效果。3)、通过体内试验证明了粘细菌子实体是在医疗保健方面具有很高价值的应用材料。4)、通过粘细菌子实体或子实体的浸提物与灵芝孢子粉等辅料的合理配比，增强机体免疫力的效果更显著。
本发明的含粘细菌子实体的增强免疫力的保健品和及其制备方法，为有效利用粘细菌子实体制备增强免疫力的保健品开创了一条新的途径，所涉及的粘细菌子实体或其浸提物为新型药物开发提供了良好的材料，并且本发明制备的药物生产方法简单，成本低，具有很好的经济效益和市场前景。
下面结合动物实验，对本发明的含粘细菌子实体的增强免疫力的保健品在药理学和毒理学以及增强机体的非特异性免疫能力方面的功能效果作进一步说明1.毒性试验实验动物成年健康KM小鼠，合格证号2000 01 004，共50只，雌雄各半，体重22-26克，由山东省卫生防疫站提供。
实验方法动物称重，编号，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分笼饲养。其中的4组为实验组，1组为对照组。
采用灌喂口服给药，具体操作见表一表一组别样品名称给药浓度(mg/m1) 给药量(m1)第1组子实体悬浮液 5 1.0第2组子实体水浸提物 3 1.0第3组子实体极性有机溶剂浸提物 1 1.0第4组子实体非极性有机溶剂浸提物 1 1.0对照组 蒸馏水 1.0
连续给药7天，观察其毒作用表现，包括小鼠外部特征变化及死亡情况，停药后连续观察3天，第11天称重后脱椎处死。实验结果见表二表二组 样品名称 实验前平均体重实验后平均体重 死亡率别 (X±SD) (X±SD) (％)第1组 子实体悬浮液 25.2±0.3532.5±1.68 0第2组 子实体水浸提物25.3±0.4530.2±1.81 0第3组 子实体极性有机溶剂浸提物 24.6±1.3631.1±1.45 0第4组 子实体非极性有机溶剂浸提物24.9±0.4630.6±1.54 0对照组 蒸馏水23.6±0.5028.8±2.22 0结论经口给小鼠试验样品7天，毒作用观察结果为小鼠均生长发育正常，被毛浓密而光泽，运动活泼，鼻腔、空腔、耳道、眼、肛门及生殖器官均未见异常，LD50计算结果也说明该样品无毒。
2.非特异性免疫试验——小鼠碳廓清试验实验动物普通级KM小鼠20只，体重20±2克，雌性。鲁抗医药集团提供，合格证号鲁动200008001。
实验样品粘细菌子实体水浸提物和有机溶剂浸提物的混合物，用水配成5mg/ml浓度。
主要试剂印度墨汁(进口) 济南豪普医疗器械有限公司。Na2CO3天津市天达净化材料精细化工厂生产。
实验方法KM小鼠称重、编号、分组。其中样品组、对照组各10只，分笼饲养。灌胃28天(灌胃前禁食4小时以上)。
灌喂剂量样品组1.0ml/只.日对照组正常饮水饲养正常饲喂，保持饲养环境温度25±2℃，温度60±5％操作步骤灌胃结束后第一天，每只小鼠按0.01ml/g量，尾静脉注射20％印度墨汁。注射后分别于3分钟及15分钟眼眶静脉丛取血20ul溶于2ml 0.1％Na2CO3溶液中，摇匀。上述溶液于600nm波长，0.1％ Na2CO3溶液为对照。测吸光度(A)。小鼠脱椎处死，解剖剥离肝脏及脾脏，分别称重。
实验结果按公式K＝(logA1-logA2)/(t2-t1)，计算未校正碳廓清指数。按公式
计算校正碳廓清指数。结果见表三。
表三样品对小鼠巨噬细胞功能的影响
从计算结果可知样品可明显增强机体的非特异性免疫能力。3.特异性免疫试验——50％溶血试验测定血清中总补体活性实验动物普通级KM小鼠20只，体重20±2克，雌性，鲁抗医药集团提供。合格证号鲁动200008001。
实验样品粘细菌子实体水浸提物和有机溶剂浸提物的混合物，用水配成5mg/ml浓度。
主要试剂溶血素(兔抗羊红细胞抗体)卫生部上海生物制品研究所生产。绵羊血 济南市医学科学研究所提供。巴比妥缓冲液(PH7.4) 实验室配制。
实验方法KM小鼠称重，编号，分组。其中样品组、对照组各10只，分笼饲养。灌胃28天(灌胃前禁食4小时以上)。
灌喂剂量样品组1.0ml/只.日对照组正常饮水饲养正常饲喂，保持饲养环境温度25±2℃，温度60±5％操作步骤灌胃结束后第一天，上述小鼠腹腔注射5％绵羊红细胞悬液0.5ml/只。免疫后第5天，称体重，摘取眼球取血，分离血清后，立即进行补体活性测定。制备2％的绵羊红细胞悬液，同时对该悬液进行标准化试验。进行溶血素效价滴定，制备2单位溶血素溶液。比色用标准管配制。1ml 2％羊红细胞悬液加入4ml蒸馏水。50％溶血取2ml上述稀释的血液液体加入2ml巴比妥缓冲液。稀释待检血清样品组做1∶2稀释，对照做1∶2稀释。将各试验管依次加入1∶2稀释血清、巴比妥缓冲液、2单位溶血素、2％羊血红细胞，摇匀。
上述所有试管2500转/分，离心5分钟。
上述试管与50％溶血标准管均以巴比妥缓冲液为空白对照，波长542nm测吸光度。实验结果见表四。
表四
50％溶血管吸光度为0.269结果处理分析选择与50％溶血管吸光度值最接近的测试管吸光度值为计算标准，由表四可知，最接近的是8号动物的3号测试管，其吸光度值为0.232。
血清总补体活性(U/ml)＝1/血清用量×稀释倍数＝1/0.32×2＝6.66(U/ml)通过与对照组结果比较，说明纤维堆囊菌子实体提取物可以提高小鼠血清中补体的活性。
4.免疫器官变化试验——小鼠胸腺指数和脾脏指数测定实验动物普通级KM小鼠20只，体重20±2克，雌性，鲁抗医药集团提供.合格证号鲁动200008001。
实验样品粘细菌子实体水浸提物和有机溶剂浸提物的混合物，用水配成5mg/ml浓度。
主要试剂绵羊血 济南市医学科学研究所提供。实验方法KM小鼠称重，编号，分组。其中样品组、对照组各10只，分笼饲养。灌胃28天(灌胃前禁食4小时以上)灌喂剂量样品组1.0ml/只.日对照组正常饮水饲养正常饲喂，保持饲养环境温度25±2℃，温度60±5％操作步骤灌胃结束后第一天，上述小鼠腹腔注射5％绵羊红细胞悬液0.5ml/只。免疫后第5天，称体重，眼框放血后脱椎处死，解剖，剥取脾脏、胸腺。电子天平称取脾脏、胸腺的重量。
实验结果见表五和表六。
表五样品对小鼠体重的影响
表六样品对小鼠脏器/体重比值的影响
结论由试验可知，子实体提取物可使小鼠主要免疫器官胸腺增重，从而起到增强机体免疫功能的作用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明实施例1一种含有粘细菌子实体水浸提物的增强免疫力的口服液保健品及其制备方法。
具体步骤如下(1)粘细菌子实体的准备及处理取培养制备的粘细菌子实体直接新鲜使用，或将粘细菌的子实体干燥后制粉备用。
(2)原料的配制按照以下重量百分比配制主料与辅料粘细菌子实体70％，灵芝孢子粉30％。
(3)水浸提物的制备将(2)配制的原料用80℃热水洗提，提洗液经减压蒸发浓缩，80℃烘干制成水浸提物。
(4)口服液的制备将(3)的水浸提物称重，加入其重量百分比的蔗糖3.5％，焦糖2％，蜂蜜4％，西洋参香精(或其他果味香精)0.5％，用20倍纯净水溶解，调pH至6.5，分装至10ml/支玻璃小瓶中，然后高压顺时灭菌，即得含有粘细菌子实体水浸提物的增强免疫力的口服液保健品。
实施例2一种含有粘细菌子实体有机溶剂浸提物的增强免疫力的口服冲剂保健品及其制备方法。具体步骤如下(1)粘细菌子实体的准备及处理取培养制备的粘细菌子实体直接新鲜使用，或将粘细菌的子实体干燥后制粉备用。
(2)原料的配制按照以下重量百分比配制主料与辅料粘细菌子实体90％，灵芝孢子粉10％。
(3)甲醇浸提物的制备将(2)制备的原料用极性有机溶剂甲醇浸提，浸提液经60℃减压蒸发浓缩，除尽有机溶剂，制成甲醇浸提物。
(4)二氯甲烷浸提物的制备将(3)甲醇浸提后的样品用非极性有机溶剂二氯甲烷浸提，浸提液经40℃减压蒸发浓缩，除尽有机溶剂，制成二氯甲烷浸提物。
(5)口服冲剂药物的制备将(3)和(4)的浸提物称重后，等比混合。按本技术领域人员公知的方法将上述混合浸提物制备成规格为10克/包的冲剂；或以上述混合浸提物为主料，以蔗糖、淀粉为辅料，以重量比为70-95∶30-5的比例，再加入极少量的柠檬酸、甘露糖添加剂，混合，制粒，烘干，整粒，制成规格为10克/包冲剂。
实施例3一种含有粘细菌子实体有机溶剂浸提物的增强免疫力的口服冲剂保健品及其制备方法。具体步骤如下(1)粘细菌子实体的准备及处理取培养制备的粘细菌子实体直接新鲜使用，或将粘细菌的子实体干燥后制粉备用。
(2)以重量百分比100％的比例选取、制备粘细菌子实体。
(3)乙醇浸提物的制备将(2)制备的原料用极性有机溶剂乙醇浸提，浸提液经60℃减压蒸发浓缩，除尽有机溶剂，制成乙醇浸提物。
(4)石油醚浸提物的制备将(3)乙醇浸提后的样品用非极性有机溶剂石油醚浸提，浸提液经40℃减压蒸发浓缩，除尽有机溶剂，制成石油醚浸提物。
(5)口服冲剂药物的制备将(3)和(4)的浸提物称重后，等比混合。按本技术领域人员公知的方法将上述混合浸提物制备成规格为10克/包的冲剂；或以上述混合浸提物为主料，以蔗糖、淀粉为辅料，以重量比为70-90∶30-10的比例，再加入极少量的柠檬酸、甘露糖添加剂，混合，制粒，烘干，整粒，制成规格为10克/包冲剂。
实施例4
一种含有粘细菌子实体有机溶剂浸提物的增强免疫力的口服囊保健品及其制备方法。具体步骤如下(1)粘细菌子实体的准备及处理取培养制备的粘细菌子实体直接新鲜使用，或将粘细菌的子实体干燥后制粉备用。
(2)原料的配制按照以下重量百分比配制主料与辅料粘细菌子实体80％，虫草粉20％。
(3)甲醇浸提物的制备将(2)制备的原料用极性有机溶剂甲醇浸提，浸提液经60℃减压蒸发浓缩，除尽有机溶剂，制成甲醇浸提物。
(4)二氯甲烷浸提物的制备将(3)甲醇浸提后的样品用非极性有机溶剂二氯甲烷浸提，浸提液经40℃减压蒸发浓缩，除尽有机溶剂，制成二氯甲烷浸提物。
(5)口服胶囊药物的制备将(3)和(4)的浸提物称重后，等比混合。按本技术领域人员公知的方法将上述混合浸提物制备成规格为100mg/囊的口服胶囊。或将上述混合浸提物以重量百分比计，加入2％的蔗糖，8％的淀粉，粉碎、磨细、混匀，以淀粉浆为黏合剂，制成细小颗粒，装入胶囊中制成规格为100mg/囊的口服胶囊。
实施例5一种含有粘细菌子实体的增强免疫力的口服片剂保健品及其制备方法。
具体步骤如下(1)粘细菌子实体的准备及处理取培养制备的粘细菌子实体直接新鲜使用，或将粘细菌的子实体干燥后制粉备用。
(2)原料的配制按照以下重量百分比配制主料与辅料粘细菌子实体85％，灵芝孢子粉15％。
(3)口服片剂药物的制备将(2)中的原料混合后，按本技术领域人员公知的方法，以重量百分比计，加入2％的蔗糖，8％的糊精为辅料，制粒，干燥，压片，制成片剂。片剂的规格为100mg/片。
权利要求
1.一种含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品，其成分中粘细菌子实体或其浸提物的重量百分含量为60％-90％。
2.如权利要求1所述的含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品，其成分中还可以包括如下重量百分含量的辅料灵芝粉孢子或虫草粉 4-30％蔗糖 3-5％焦糖 1-5％蜂蜜 2-4％西洋参香精或果味香精 0-0.5％
3.如权利要求1或2所述的含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品，其特征在于所述的粘细菌子实体可以是新鲜子实体，或干燥保存的粘细菌子实体粉，或粘细菌子实体的孢子，或粘细菌子实体的浸提物。
4.如权利要求3所述的含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品，其特征在于所述粘细菌子实体的浸提物是粘细菌子实体水浸提物或粘细菌子实体有机溶剂浸提物。
5.如权利要求4所述的含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品，其特征在于所述粘细菌子实体水浸提物是用80℃热水洗提，由洗提液经减压蒸发浓缩，80℃烘干制成。
6.如权利要求4所述的含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品，其特征在于所述粘细菌子实体有机溶剂浸提物是指由极性有机溶剂浸提制成的粘细菌子实体极性有机溶剂浸提物和/或由非极性有机溶剂浸提制成的粘细菌子实体非极性有机溶剂浸提物。
7.如权利要求6所述的含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品，其特征在于所述粘细菌子实体极性有机溶剂浸提物是由甲醇或乙醇对粘细菌子实体进行浸提，浸提液经过60℃的减压蒸发，除尽有机溶剂制成。
8.如权利要求6所述的含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品，其特征在于所述粘细菌子实体非极性有机溶剂浸提物是由二氯甲烷或石油醚对极性有机溶剂浸提过的样品再次浸提，浸提液经过40℃的减压蒸发，除尽有机溶剂制成。
9.如权利要求1或2所述的含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品的制备方法，其特征在于利用药剂学的常规方法，将粘细菌的子实体或子实体粉及辅料以重量百分比混合，制成口服冲剂或片剂或胶囊。
10.如权利要求1或2所述的含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品的制备方法，其特征在于利用药剂学的常规方法，将粘细菌的子实体的浸提物及辅料以重量百分比混合，制成口服冲剂或片剂或胶囊。
全文摘要
本发明公开了一种含有粘细菌子实体的增强免疫力的保健品及制备方法，该药物是以粘细菌的子实体或其浸提物为主要原料，配以常规辅料组成；经粘细菌的子实体或其浸提物及辅料以重量百分比混合后，采用药剂学的常规方法，制成口服药物。动物实验证明，由粘细菌子实体及其浸提物制备的该类口服制剂无毒，无副作用，可以较显著地增强机体免疫力。
文档编号A61P37/00GK1435253SQ0311189
公开日2003年8月13日 申请日期2003年2月27日 优先权日2003年2月27日
发明者李越中, 刘新利, 扈锡涛, 胡玮, 韩冠君, 夏志洁 申请人:山东大学