本发明涉及食品、保健食品及药品领域，尤其涉及一种增强免疫力的组合物及其生产方法。
背景技术：
：免疫力是指机体抵抗外来侵袭，维护体内环境稳定性的能力。空气中充满了各种各样的微生物：细菌、病毒、支原体、衣原体、真菌等等。在人体免疫力不足的情况下，它们都可以成为病原体。虽然人体对不同的病原体会产生相应的抗体，以抵御再次感染，但抗体具有专一性和时限性，比如链球菌抗体只能在较短时期内保护机体不受链球菌的再次侵犯，也并不能抵御其他病毒的感染。现如今，免疫力低下的人群在世界范围内普遍存在，且人数很多，伴随人们保健意识的增强，保健食品市场中对维持人体正常免疫功能的产品需求仍然存在。其中，含有中药组分的药物组合物，凭借其相互协同、增强疗效、缓和药性等特点，越来越得到人们的认可和欢迎。能够增强免疫力的药物有：人参、黄芪、灵芝、三七、丹参等，但由于每种物质的成分复杂，组合配伍后的功效不确定性很强。人参具有增强免疫力的功能主要是由于其具有稀有人参皂苷等活性物质。自1980年日本学者北川勋发现人参皂苷Rg3以来，全世界众多研究人员开始关注各种稀有人参皂苷的制备、生物学活性和应用的研究。其中关注度最高的是人参皂苷Rg3和人参皂苷Rh2，三十多年来也取得了巨大的研究成果，其中人参皂苷Rg3已经开发为一类新药，人参皂苷Rh2也被批准用于保健食品，上市以来产生了巨大的经济价值和社会价值，除了这两种稀有人参皂苷以外，还有很多新的稀有人参皂苷在相当长一段时间内并没有被进行深入的研究，主要原因是这些稀有人参皂苷中的大多数是常见人参皂苷的次级代谢产物，自然界中含量极低，所以很难获得足够量的单体供研究之用。现有大量的国内外研究文献已经证实稀有人参皂苷具有良好的生物学活性，尤其是在增强免疫器官功能、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤组织新生血管生成等方面具有显著的作用。但目前稀有人参皂苷的生产成本还是比较高，其主要原因是生产上也没有找到高效的生产工艺，转化效率极低，纯化难度又比较大，所以原料成本居高不下，所以严重限制了应用开发工作。目前红参作为增强免疫力的滋补品被用作食品和保健食品原料，白参在加工为红参的过程中可以产生少量的人参皂苷Rg5、人参皂苷Rk1、人参皂苷Rg3和人参皂苷Rh2，但是含量较低。黑参是近些年在韩国兴起的一种新型的人参炮制产品，目前还没有标准化的生产工艺和产品标准，直观上的界定标准是颜色比红参更深一些，呈现黑红色，稀有人参皂苷的含量比红参更高一些，作为增强免疫力的产品，效果要优于红参。传统的九蒸九曝的炮制工艺炮制得到的黑参往往稀有人参皂苷的含量较低；作为改进，申请号为201510317562.3的中国专利公开了一种高含量人参皂苷的黑参的制备方法，虽然一定程度上提高了活性物质人参皂苷的含量，但其工艺需要经过多次超声等处理，较为繁琐不适合工业化生产；而申请号为200780016985.5的中国专利公开了黑参、黑参浓缩液及黑参正果的制造方法，引入了乙醇，不仅增加了成本及工序的复杂性，同时生产环境的危险级别也会提高。因此，有必要发明一种工艺简单且稀有人参皂苷含量高的增强免疫力的组合物及其生产方法。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是：提供一种工艺简单且稀有人参皂苷含量高的增强免疫力的组合物及其生产方法。为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：本发明提供一种增强免疫力的组合物，包括灵芝提取物、黄芪及黑参，所述灵芝提取物、黄芪及黑参的质量比为0.1～0.2∶0.2～0.5∶1；所述黑参为稀有人参皂苷含量占人参总皂苷质量20％以上的黑参。本发明还提供一种上述增强免疫力的组合物的生产方法，包括以下步骤：步骤1：将人参进行加湿处理后，进行9～11次蒸制和烘干，制备成黑参，所述蒸制的温度为104～106℃；步骤2：将灵芝提取物、黄芪及黑参分别进行粉碎，过筛，得粉末状的灵芝提取物、黄芪粉及黑参粉；步骤3：将步骤2所得的粉末状的灵芝提取物、黄芪粉及黑参粉按质量比0.1～0.2∶0.2～0.5∶1混合。本发明的有益效果在于：本发明将稀有人参皂苷含量较高的黑参与灵芝提取物和黄芪进行组合配伍，将灵芝提取物作为组合物的原料，提高了灵芝的药效，同时，人参本身大补元气易上火，制成黑参后成为组合物原料，药性变得更温和，黄芪补虚，灵芝保肝解毒，三者配伍组合能协同增效，扶正固本，经过动物学及志愿者口服验证，本发明的组合物具有显著增强免疫力的效果，且毒副作用小；本发明的组合物，尤其是对于进行放化疗的肿瘤患者，不仅可以增强放化疗的治疗效果，还可以显著降低放化疗过程中产生的骨髓抑制、胃肠粘膜损伤、睡眠质量降低等副作用；本发明通过对人参进行加湿、反复蒸制及烘干制备出稀有人参皂苷含量高的黑参，再将黑参作为组合物原料，进一步提高了组合物的活性物质含量又使得组合物的药性更温和，同时组合物的配伍简单，生产工艺难度小，可大规模生产满足免疫力低下人群增强免疫力的需求。具体实施方式为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。本发明最关键的构思在于:将人参进行加湿、反复蒸制及烘干制成稀有人参皂苷含量高的黑参，并将黑参与黄芪和灵芝提取物进行配伍得到增强人体免疫力组合物。本发明提供一种增强免疫力的组合物，包括灵芝提取物、黄芪及黑参，所述灵芝提取物、黄芪及黑参的质量比为0.1～0.2∶0.2～0.5∶1；所述黑参是稀有人参皂苷含量占黑参质量20％以上的黑参。从上述描述可知，本发明有益效果在于：本发明将稀有人参皂苷含量较高的黑参与灵芝提取物和黄芪进行组合配伍，将灵芝提取物作为组合物的原料，提高了灵芝的药效，同时，人参本身大补元气易上火，制成黑参后成为组合物原料，药性变得更温和，黄芪补虚，灵芝保肝解毒，三者配伍组合能协同增效，扶正固本，经过动物学及志愿者口服验证，本发明的组合物具有显著增强免疫力的效果，且毒副作用小；本发明的组合物，尤其是对于进行放化疗的肿瘤患者，不仅可以增强放化疗的治疗效果，还可以显著降低放化疗过程中产生的骨髓抑制、胃肠粘膜损伤、睡眠质量降低等副作用。进一步的，所述稀有人参皂苷包括人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2、人参皂苷Rk1及人参皂苷Rg5。由上述描述可知，以上稀有人参皂苷已被证实具有均具有良好的生物学活性，尤其是在增强免疫器官功能、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤组织新生血管生成等方面具有显著的作用。进一步的，所述黄芪是黄芪甲苷含量占中药饮片质量0.1％以上的中药饮片。从上述描述可知，选用黄芪甲苷含量占中药饮片质量0.1％以上的中药饮片作为组合物的原料之一，在保持黄芪原本药效的同时简化组合物生产。进一步的，所述灵芝提取物为灵芝与水的提取物，灵芝提取物为磷脂多糖含量占灵芝提取物总质量的10％以上的灵芝提取物。从上述描述可知，选用灵芝与水的提取物更加安全，同时，选用磷脂多糖含量占灵芝提取物总质量的10％以上的灵芝提取物使得药效更好。本发明还提供一种增强免疫力的组合物的生产方法，包括以下步骤：步骤1：将人参进行加湿处理后，进行9～11次蒸制和烘干，制备成黑参，所述蒸制的温度为104～106℃；步骤2：将灵芝提取物、黄芪及黑参分别进行粉碎，过筛，得粉末状的灵芝提取物、黄芪粉及黑参粉；步骤3：将步骤2所得的粉末状的灵芝提取物、黄芪粉及黑参粉按质量比0.1～0.2∶0.2～0.5∶1混合。从上述描述可知，本发明的有益效果在于：本发明通过对人参进行加湿、反复蒸制及烘干制备出稀有人参皂苷含量高的黑参，再将黑参作为组合物原料，进一步提高了组合物的活性物质含量又使得组合物的药性更温和，同时组合物的配伍简单，生产工艺难度小，可大规模生产满足免疫力低下人群增强免疫力的需求。进一步的，所述步骤1的具体操作包括以下步骤：步骤a：将人参进行加湿处理，控制人参的含水量为18～22％；步骤b：将含水量为18～22％的人参于104～106℃环境下蒸制55-65min，再于55-65℃环境中烘干至含水量为18～22％；步骤c：将步骤b重复进行9～10次；步骤d：将步骤c处理后的红参于104～106℃环境下蒸制55-65min，再于55-65℃环境中烘干至含水量为9～11％得黑参。从上述描述可知，本发明的黑参制备方法操作简单，无需引入醇类等，只需水蒸及烘干，干净卫生，同时，制得的黑参稀有人参皂苷含量高。本发明还提供一种增强免疫力的组合物的生产方法，包括以下步骤：步骤1包括以下步骤：步骤a：将人参进行加湿处理，控制人参的含水量为18～22％；步骤b：将含水量为18～22％的人参于104～106℃环境下蒸制55-65min，再于55-65℃环境中烘干至含水量为18～22％；步骤c：将步骤b重复进行9～10次；步骤d：将步骤c处理后的红参于104～106℃环境下蒸制55-65min，再于55-65℃环境中烘干至含水量为9～11％得黑参；步骤2：将灵芝提取物、黄芪及步骤1得到的黑参分别进行粉碎，过筛，得粉末状的灵芝提取物、黄芪粉及黑参粉；步骤3：将步骤2所得的粉末状的灵芝提取物、黄芪粉及黑参粉按质量比0.1～0.2∶0.2～0.5∶1混合。从上述描述可知，本发明的黑参制备方法操作简单，条件易控，无需引入醇类等，只需水蒸及烘干，干净卫生，同时，制得的黑参稀有人参皂苷含量高。本发明还提供一种上述的增强免疫力的组合物的制剂。进一步的，所述制剂由增强免疫力的组合物与药学上可接受的载体组成，所述制剂的剂型包括硬胶囊、片剂或颗粒剂。由上述描述可知，将本发明的增强免疫力的组合物进一步制成硬胶囊、片剂或颗粒剂，方便根据食用者体重进行量化，食用更加方便。实施例1步骤1：黑参的制备将人参通过加湿，使含水量控制在(20±2)％，然后105℃蒸制1h，60℃烘至含水量(20±2)％，然后再105℃蒸制1h，60℃烘至含水量(20±2)％，反复10次，颜色逐渐加深，第10次烘干至含水量10％，即为黑参的成品；步骤2：将灵芝提取物(磷脂多糖含量占灵芝提取物总质量的10％以上的灵芝提取物)、黄芪(黄芪甲苷含量占中药饮片质量0.1％以上的中药饮片)及步骤1制备的黑参分别进行粉碎，过100目的筛，得粉末状的灵芝提取物、黄芪粉及黑参粉；步骤3：将步骤2中的粉末状的灵芝提取物、黄芪粉及黑参粉分别称取250g、750g及1500g简单混合后得组合物。本发明组合物的制剂(硬胶囊)，将组合物加入高速混合制粒机中，按照设备操作规程进行操作，转速300rpm，搅拌15min混合均匀，然后加入适量85％乙醇，继续搅拌5min至混合均匀得湿颗粒。将颗粒倾入容器内然后均匀铺在不锈钢盘中，厚度3-4cm，转入热风循环烘箱中，将温度控制在60℃±2℃，打开蒸汽排水阀，先排去蒸汽管道中的冷凝水，然后关闭，打开出汽阀，打开进汽阀，打开风机，加热开始同时记录温度，当温度升至60℃时开始计时，一共干燥3h，关闭进汽阀门及风机降温。制粒完成的物料水分控制在0.6％～0.9％。然后用胶囊填充机填充，采用0号胶囊，内容物400mg/粒。制备得到的胶囊的服用剂量为3粒/次，2次/日。黑参粉稀有人参皂苷的含量测定将步骤1所得黑参进行粉碎过100目筛，得到黑参粉末，用80％甲醇超声提取30分钟，滤膜过滤(微孔0.45μm，有机系)，待测。HPLC色谱条件：参照2015年版《中华人民共和国药典》(一部)中人参总皂苷检测方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm，载碳量11％)；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按表1中的洗脱条件进行梯度洗脱；柱温为30℃，流速为1.3mL/min，检测波长为203mn。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于6000，按人参皂苷Rd峰计算应不低于200000。HPLC测定结果人参皂苷Rh2、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rk1及人参皂苷Rg5的含量见表2所述。对照例1-4对照例1-3黑参的制备，按照实施例1的方法，将人参通过如下蒸制温度进行，其他与实施例1相同，得到以下3例黑参，并与实施例1进行对比。样品蒸制的温度(℃)对照例185对照例295对照例3115对照例4为市售黑参。对照例1-4所得黑参粉中稀有人参皂苷的含量测定参照实施例1，结果见表2。将灵芝提取物(磷脂多糖含量占灵芝提取物总质量的10％以上的灵芝提取物)、黄芪(黄芪甲苷含量占中药饮片质量0.1％以上的中药饮片)及对照例4的黑参分别进行粉碎，过100目的筛，得粉末状的灵芝提取物、黄芪粉及黑参粉，并按实施例1中步骤3的比例混合成组合物，并将本组合物按实施例1的方法制备成硬胶囊。表1HPLC测定稀有人参皂苷的梯度洗脱条件时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)0～30198130～3519→2481→7635～6024→4076→60表2黑参中稀有人参皂苷的含量测定结果实施例2实验动物和检测条件1材料与方法1.1实验动物和检测条件实验用SD大鼠，清洁级，体重60-80g。检测环境条件，屏障环境，温度20℃～23℃，相对湿度范围50％～70％。实验动物试验前在动物房环境中适应3天。1.2剂量设计本发明保健食品(配方为实施1中的组合物或胶囊)推荐量为2.4g/60kg·日。实验设三个剂量组和一个阴性对照组，低、中、高三个剂量分别为1.0g/kg、2.0g/kg、4.0g/kg体重，相当于人推荐量的25倍、50倍和100倍。实验各剂量组分别将样品按体重10％折算均匀拌入基础饲料，以饲料喂养方式给予。低、中、高三剂量组拌入方法：分别取200g、400g、800g供试样品加基础饲料至20kg，充分拌匀。低、中、高三剂量组受试物分别占饲料的1.0％、2.0％、4.0％。1.3实验方法SD大鼠80只，随机分4组，每组20只，雌雄各半，大鼠单笼饲养，自由进食、饮水。大鼠连续观察30天，每周记录体重和进食量并计算实物利用率，实验结束后禁食过夜，断头取血进行血液学检查和血生化检查，对每只大鼠进行脏器大体观察，同时取肝、肾、脾、胃、肠、睾丸(卵巢)进行病理组织学检查。2结果：由一般观察，实验期间，各组大鼠均未见异常症状和体征，也无死亡。对大鼠体重、进食量及总食物利用率、对大鼠血液学包括(HB、RBC、WBC)的影响、对大鼠血生化的影响、对大鼠脏器重和脏体比的影响的试验结果显示，与对照组比较差异均无显著性。对大鼠各脏器病理组织学检查均未发现明显异常。结论本发明产品的大鼠30天喂养试验三剂量组各项指标均未见明显毒性反应。实施例3细胞免疫功能试验1试验材料与方法实验材料实施例1制备的胶囊及对照例4制备所得胶囊。实验动物使用ICR小鼠，清洁级，雌性，体重20g～22g。检测环境条件，屏障环境，温度20℃～24℃，相对湿度40％～70％。动物于试验前在动物房环境中适应4天。1.2剂量设计实验设三个剂量组和阴性对照组(蒸馏水)。实施例3及对照例5样品低、中、高三个剂量均分别为0.25g/kg、0.5g/kg、1.5g/kg体重，相当于人推荐量的5倍、10倍和30倍(人推荐量为3.0g/60kg·日)三剂量组分别称取供试样品1.5g、3.0g和6.0g加蒸馏水至60mL，配制成浓度为0.02g/mL、0.04g/mL、0.12g/mL样品，灌胃给样品，灌胃容量按0.1mL/10g体重计。1.3实验方法按卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)，进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验，绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠DTH(足跖增厚法)，小鼠血清溶血素测定，抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验，小鼠碳廓清试验，NK细胞活性测定，脏器/体重比值测定进行功能评价。试验结果见表3。表3实施例1及对照例4胶囊对小鼠免疫功能的影响总体评价表实验结果分别与阴性对照组(蒸馏水)比较，对照例样品中、高剂量组均能提高小鼠左后足跖部24小时与0小时厚度差值和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率，差异均有显著性；高剂量组能提高小鼠脾淋巴细胞增殖能力，差异有显著性。而实施例1样品低、中、高剂量组均能提高小鼠左后足跖部24小时与0小时厚度差值、血清溶血素抗体积数、溶血空斑数和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率，差异均有显著性；中、高剂量组能提高小鼠脾淋巴细胞增殖能力，差异有显著性。实施例1与对照例4比较，淋巴细胞光密度差值、小鼠左后足跖部24小时与0小时厚度差值、血清溶血素抗体积数、溶血空斑数和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率等均显著优于对照例4。3实验结论本发明产品具有增强免疫力功能，且以本发明制备的黑参为原料的实施例1样品优于以市售黑参为原料的对照例4样品。实施例4组合物延长S180小鼠生存期实验1材料与方法1.1材料组合物1(实施例1的组合物)；组合物2(对照例4中的组合物)；环磷酰胺(CTX)，200mg/瓶，海正辉瑞制药有限公司。实验动物和细胞系：昆明种小鼠，雌性，体重17g～22g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供。Sarcoma180腹水型瘤株(S180)，购自黑龙江省肿瘤医院肿瘤研究所。1.2方法细胞保存与传代：自腹腔荷瘤小鼠无菌操作取瘤细胞，经无菌生理盐水稀释后无菌操作接种于健康成年小鼠腹腔，每7d传1代。荷瘤模型制作方法：处死腹腔传代7天的S180荷瘤小鼠，无菌操作取腹水。灭菌生理盐水稀释腹水调整瘤细胞浓度至1×107个/mL，瘤细胞死亡率≤5％。按无菌操作要求将瘤细胞悬液接种于小鼠腹腔，0.2mL/只。腹腔荷瘤细胞生存期实验：80只小鼠，随机分为8组，每组10只。分组包括腹腔荷瘤模型组，CTX治疗组，组合物低、中、高剂量组。CTX位腹腔注射给药，50mg/kg，连用7天。组合物都在腹腔荷瘤次日起灌胃给药。组合物1与组合物2的低、中、高剂量均分别为0.35g/kg、0.70g/kg、1.4g/kg；用至死亡前1天。观察生存期和一般情况。统计学处理：计量资料以均数±标准差(x±s)表示。采用单因素方差分析，组间两两比较采用q检验。结果组合物1低、中、高剂量组能显著延长S180小鼠生存期，且优于组合物2及CTX治疗组。结果见表4。表4组合物1、2对S180小鼠生存期的影响(n＝10，x±s)注：*、**分别表示在α为0.05、0.01水平显著。综上所述，本发明提供的增强免疫力的组合物，通过将稀有人参皂苷含量较高的黑参与灵芝提取物和黄芪进行组合配伍，将灵芝提取物作为组合物的原料，提高了灵芝的药效，同时，人参本身大补元气易上火，制成黑参后成为组合物原料，药性变得更温和，黄芪补虚，灵芝保肝解毒，三者配伍组合能协同增效，扶正固本，经过动物学及志愿者口服验证，本发明的组合物具有显著增强免疫力的效果，且毒副作用小；本发明的组合物，尤其是对于进行放化疗的肿瘤患者，不仅可以增强放化疗的治疗效果，还可以显著降低放化疗过程中产生的骨髓抑制、胃肠粘膜损伤、睡眠质量降低等副作用；本发明通过对人参进行加湿、反复蒸制及烘干制备出稀有人参皂苷含量高的黑参，再将黑参作为组合物原料，进一步提高了组合物的活性物质含量又使得组合物的药性更温和，同时组合物的配伍简单，生产工艺难度小，条件可控性强，可大规模生产满足免疫力低下人群增强免疫力的需求。以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的
技术领域：
，均同理包括在本发明的专利保护范围内。当前第1页1 2 3