专利名称：一种低分子硫酸皮肤素及其制备方法
技术领域：
本发明属于生物医药领域，特别是涉及一种低分子硫酸皮肤素及其制备方法。
背景技术：
硫酸皮肤素为一类结构复杂、硫酸化的糖胺聚糖，天然产物分子量一般在15kD～5kD，广泛存在于动物组织中。国内外研究表明，硫酸皮肤素抗凝活性低于未分级肝素，其抗血栓活性却明显比未分级肝素高，出血副作用明显比未分级肝素小，因此硫酸皮肤素已成为一种新型抗血栓药物。然而，硫酸皮肤素存在两个主要药动学问题一个是半衰期较短，另一个是皮下和肌肉注射途径给药时，生物利用度低。随着硫酸皮肤素分子量的升高，其生物利用度降低。Mascellani等人曾在美国专利“具有抗血栓形成作用、纤维蛋白溶解作用和抗炎活性的降解的硫酸皮肤素及其药物制剂成分”(专利号US4973580)报道了一种低分子硫酸皮肤素的制备方法，该法是用重金属离子作催化剂降解硫酸皮肤素，具有工艺复杂、收率低，并且引入了对人体有害的重金属离子等缺点。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足，单用过氧化氢降解硫酸皮肤素，提供一种具有较强的抗血栓作用和一定的溶栓作用的低分子硫酸皮肤素及其制备方法。
本发明是通过以下途径实现的一种低分子硫酸皮肤素，一种低分子硫酸皮肤素，分子结构中含有艾杜糖醛酸衍生物和乙酰氨基半乳糖衍生物，其特征是分子结构由2-O-硫酸基-艾杜糖醛酸-(1→3)-2-N-乙酰基-2-脱氧-4-0-硫酸基半乳糖组成，糖链中还含有2-N-乙酰基-2-脱氧-4，6-0-二硫酸基半乳糖，其化学结构如下 上述低分子硫酸皮肤素，其特征是分子量为3000～8000道尔顿，硫酸根与羧酸根的比值为0．8～1．2，激活肝素辅因子II活性为100～200U/mg，抗凝效价≤10 IU/mg。
本发明建立的过氧化氢降解法引起硫酸皮肤素主链(1→4)糖苷键断裂，获得低分子硫酸皮肤素，不引入其它杂质，提高反应温度和增加过氧化氢浓度有利于降低硫酸皮肤素的分子量，控制反应时间，即可得到所需分子量的产品。
一种制备上述低分子硫酸皮肤素的方法，其特征是包括以下步骤(1)硫酸皮肤素的降解硫酸皮肤素水溶液的浓度为1％～10％，溶液的pH值在4～10，过氧化氢的浓度为1％～20％，温度为20～80℃，反应时间为2～18小时，降解完毕用有机溶剂沉淀，常用的有机溶剂如甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇等；(2)分离所需要的低分子硫酸皮肤素片段上述降解产物配成水溶液后，用超滤法和凝胶层析法分离所需要的片段，常用的凝胶为Sephadex G-50、Sephadex G-75、Sephadex G-100、Superdex 200等，用氯化钠溶液进行洗脱，氯化钠的浓度为0.01～1.0mol/L。收集低分子硫酸皮肤素含量高的部分，用Sephadex G-10脱盐，冷冻干燥得低分子硫酸皮肤素。
本发明制得的低分子硫酸皮肤素具有较强的抗血栓作用和一定溶栓作用，还有口服易吸收、半衰期长和生物利用度高等优点。
具体实施例方式
下面给出本发明实施的一个最佳例子。
低分子硫酸皮肤素制备的关键是控制分子量，此法采用过氧化氢降解法，获得降解程度可控制的低分子硫酸皮肤素。
(1)低分子硫酸皮肤素的制备将硫酸皮肤素精品1g以蒸馏水配成1.0％的溶液，调节pH4～5，滴加30％的过氧化氢使终浓度达2％，于70℃水浴搅拌15小时，用氢氧化钠溶液调pH7，3倍量甲醇沉淀；(2)低分子硫酸皮肤素的纯化将步骤(1)的沉淀物配成0.5％的溶液，用分子截留值为8kD的膜超滤，收集透过液，用旋转蒸发仪浓缩后，上Sephadex G-100制备层析柱(2.6×82cm)，以0.3mol/L氯化钠溶液洗脱，206nm紫外检测，收集低分子硫酸皮肤素含量高的部分，用Sephadex G-10脱盐，冷冻干燥得所需低分子硫酸皮肤素。
将上述所得的低分子硫酸皮肤素分别进行分子量测定、结构测定和抗凝效价测定得到一种低分子硫酸皮肤素，分子结构中含有艾杜糖醛酸衍生物和乙酰氨基半乳糖衍生物，分子结构由2-O-硫酸基-艾杜糖醛酸-(1→3)-2-N-乙酰基-2-脱氧-4-O-硫酸基半乳糖组成，糖链中还含有2-N-乙酰基-2-脱氧-4，6-O-二硫酸基半乳糖，其化学结构如下 该低分子硫酸皮肤素的相对分子量为3000～8000道尔顿，硫酸根与羧酸根的比值为0.8～1.2，激活肝素辅因子II活性为100～200U/mg，抗凝效价≤10IU/mg。
权利要求
1.一种低分子硫酸皮肤素，分子结构中含有艾杜糖醛酸衍生物和乙酰氨基半乳糖衍生物，其特征是分子结构由2-O-硫酸基-艾杜糖醛酸-(1→3)-2-N-乙酰基-2-脱氧-4-O-硫酸基半乳糖组成，糖链中还含有2-N-乙酰基-2-脱氧-4，6-O-二硫酸基半乳糖，其化学结构如下
2.根据权利要求1所述的低分子硫酸皮肤素，其特征是分子量为3000～8000道尔顿，硫酸根与羧酸根的比值为0.8～1.2，激活肝素辅因子II活性为100～200U/mg，抗凝效价≤10IU/mg。
3.一种制备权利要求1或2所述低分子硫酸皮肤素的方法，其特征是包括以下步骤(1)低分子硫酸皮肤素的制备将硫酸皮肤素精品用蒸馏水配成1.0％～10％的溶液，调节pH4～10，滴加30％的过氧化氢使终浓度达1％～20％，在温度为20～70℃水浴搅拌2～18小时，用氢氧化钠溶液调pH7，3倍量甲醇沉淀。(2)低分子硫酸皮肤素的纯化将步骤(1)的沉淀物配成0.5％的溶液，用分子截留值为8kD的膜超滤，收集透过液，用旋转蒸发仪浓缩后，上SephadexG-75制备层析柱，以0.01～1.0mol/L氯化钠溶液洗脱，收集低分子硫酸皮肤素含量高的部分，用Sephadex G-10脱盐，冷冻干燥得所需低分子硫酸皮肤素。
全文摘要
本发明属于生物医药领域，特别是涉及一种低分子硫酸皮肤素及其制备方法。低分子硫酸皮肤素由硫酸皮肤素降解获得，分子量3000～8000道尔顿。其制备方法是将硫酸皮肤素在温和的条件下用过氧化氢降解，用超滤和凝胶层析分离纯化得低分子硫酸皮肤素。本发明制得的低分子硫酸皮肤素具有较强的抗血栓作用和一定的溶栓作用，还有口服易吸收、半衰期长和生物利用度高等优点。
文档编号A61P7/00GK1445245SQ03112180
公开日2003年10月1日 申请日期2003年4月18日 优先权日2003年4月18日
发明者姬胜利, 王凤山, 迟延青, 谢继青 申请人:山东大学