自身免疫疾病的药剂和治疗方法

专利名称：自身免疫疾病的药剂和治疗方法
本申请要求保护2002年2月21日递交的美国临时申请系列号60/359,419和2002年10月21日递交的美国临时申请系列号60/420,472的优先权，两个申请都以全文引入作为参考。本发明是在国立卫生研究院的准许号CA81776的资助下产生的。美国政府在本申请中有一定的权利。
背景技术：
发明领域本发明涉及具有独特生理特性的一些抗CD22的单克隆抗体的治疗用途。更具体地说，本发明涉及用具有独特的细胞凋亡前的特性的阻断性抗CD22抗体治疗B细胞恶性肿瘤，如淋巴瘤和白血病以及自身免疫疾病的方法。
相关技术的说明CD22是在接近所有的B淋巴细胞和大多数B细胞淋巴瘤上发现的膜糖磷蛋白质。交联的CD22引发了CD22酪氨酸的磷酸化，组装了激活应激活化蛋白激酶(SAPK)途径的效应物蛋白质的复合物。CD22交联在初始B细胞中提供了一个有效的共刺激信号并且在肿瘤性B细胞中提供细胞程序死亡前的信号。在结构上，CD22是免疫球蛋白(Ig)基因超家族的“唾液酸黏附素”亚类的成员，具有单一氨基端V系列Ig区域和6个C-2系列Ig区域的七个细胞外Ig区域。Wilson等，J.Exp.Med.，173137-146(1991)；Engel等，J.Exp.Med.，1811581-1586(1995)；和Torres等，免疫学杂志，1492641-2649(1992)。已有显示，CD22是关键的淋巴细胞特异性的信号转导分子，通过再集结信号效应器分子到生理上适当的位点，消极地和积极地调节B淋巴细胞抗原受体(BCR)的发信号。Tedder等人，免疫学年评，15481-504(1997)；Sato等人，Immunology 10287-297)1998)。
例如在美国专利号5,484,892；6,183,744；6,187,287；6,254,868和在Tuseano等人，血液94(4)1382-92(1999)中已经描述了抗CD22的抗体。例如通过Renner等人，白血病11(第2卷)S55-9(1997)中综述了在非单克隆抗体，包括抗CD22的抗体霍金奇氏淋巴瘤的治疗中的的用途。人源化的抗CD22抗体，LymphoCideTM(empatuzumab，Immunomedics公司)处于III期临床实验中，用于治疗无痛的和攻击性形式的非霍金奇氏淋巴瘤。一个yttrium-90标记版本的这一抗体目前处于I期临床实验，可用于同样的适应症。
尽管在癌症治疗方面有最新的进展，B细胞恶性肿瘤，如非霍金奇氏淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病的B细胞亚类是与癌症相关的死亡的主要原因。因此，对进一步改进的治疗B细胞恶性肿瘤的治疗方案有巨大的需要。
自身免疫疾病作为一个整体能引起明显的发病和失能。根据从1965到1995年收集的发病率数据，据估计，在下个5年中，约有1,186,015个人将发展成新的自身免疫疾病。Jocabsen等人(临床免疫学免疫病理，84223(1997))评价了130多个公开的研究并估算1996年在美国8.5百万人至少患有24种这些研究检测到的自身免疫疾病中的一种。考虑到自身免疫疾病对公共健康的重要影响，着手这些病症的负担需要有效而安全的治疗。所以，在本领域需要治疗自身免疫疾病的经过改进的药剂和方法。
发明概要本发明涉及在人类患者中利用阻断的抗CD22单克隆抗体的独特的特性治疗B细胞恶性肿瘤和自身免疫疾病的改进的临床方法。
在一个方面，本发明涉及治疗被诊断患有B细胞恶性肿瘤人类患者的方法，包括(1)对患者给药有效量的阻断性抗CD22单克隆抗体，该抗体特异地结合SEQ ID NO1的天然的人CD22(hCD22)的开始的两个Ig类似区域或开始的两个Ig类似区域相关的抗原表位，和(2)检测恶性肿瘤对治疗的应答。
在另外的方面，本发明涉及治疗被诊断患有自身免疫疾病的受试者(例如，人患者)的方法，包括(1)对受试者给药有效量的阻断性抗CD22单克隆抗体，和选择性地(2)检测自身免疫疾病对治疗的应答。
作为另一方面，本发明提供了(1)通过对受试者(例如，人患者)给药有效量的阻断性抗CD22单克隆抗体，降低B细胞活性，降低B细胞或B细胞亚系的数目，甚至基本去除B细胞或特定的B细胞亚系，提高B细胞的更新率和/或降低B细胞产生抗体，(2)检测对治疗的应答的方法。“降低”指的是至少降低约25％、35％、50％或75％的降低或更少。“基本去除”指的是约90％，95％，98％或更多的降低。“提高更新率”指的是在更新率上约25％，35％，50％，75％，100％，150％或更多的升高。
在一个特定的实施方案中，所用的抗体基本上与抗体选自包括HB22-7(HB11347)，HB22-23(HB11349)，HB22-33，HB22-5，HB22-13，和HB22-196，优选地HB22-7，HB22-23，或HB22-33，更优选地HB22-7或HB22-33的抗体的同一表位结合。
在另外的实施方案中，抗体阻断与配体结合的CD22至少70％，优选地至少约80％。
在另一个实施方案中，抗体包括具有与SEQ ID NO9(HB22-5VH序列)的氨基酸1到100，或SEQ ID NO11(HB22-7VH序列)的氨基酸1到97；或SEQ ID NO13(HB22-13VH序列)的氨基酸1到100；或SEQID NO15(HB22-23VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ IDNO17(HB22-33VH序列)的氨基酸1到98；或SEQ ID NO19(HB22-196VH序列)的氨基酸1到100的序列至少具有大约95％的序列同一性的VH序列的重链。
仍然在另一个实施方案中，抗体包括具有与SEQ IDNO11(HB22-7VH序列)的氨基酸1到97；或SEQ ID NO15(HB22-23VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ ID NO17(HB22-23VH序列)的氨基酸1到98的序列至少大约95％的序列同一性的VH序列的重链。
仍然在另一个实施方案中，抗体包括选自包括SEQ IDNO11(HB22-7VH序列)；SEQ ID NO15(HB22-23VH序列)的氨基酸1到100和SEQ ID NO17(HB22-33VH序列)的VH序列。
在一个不同的实施方案中，抗体包含具有与SEQ IDNO21(HB22-5Vκ序列)；或SEQ ID NO23(HB22-7Vκ序列)；或SEQ IDNO25(HB22-13Vκ序列)；或SEQ ID NO27(HB22-23Vκ序列)；或SEQID NO29(HB22-33Vκ序列)；或SEQ ID NO31(HB22-196Vκ序列)的氨基酸序列至少大约95％的序列同一性的Vκ序列的轻链。
在一个特定的实施方案中，抗体包括具有与SEQ IDNO23(HB22-7Vκ序列)；或SEQ ID NO27(HB22-23Vκ序列)；或SEQID NO29(HB22-23Vκ序列)的氨基酸序列具有至少大约95％的序列同一性的Vκ序列的轻链。
在另一个实施方案中，抗体包括选自氨基酸序列SEQ IDNO23(HB22-7Vκ序列)；SEQ ID NO27(HB22-23Vκ序列)；和SEQ IDNO29(HB22-23Vκ序列)的氨基酸序列的Vκ序列的抗体。
在一个优选的实施方案中，抗体包括选自SEQ ID NO11(HB22-7VH序列)的氨基酸1到97和SEQ ID NO23(HB22-7Vκ序列)的氨基酸序列；SEQ ID NO15(HB22-23VH序列)的氨基酸1到100和SEQ IDNO27(HB22-23Vκ序列)的氨基酸序列；和SEQ ID NO17(HB22-33VH序列)的氨基酸1到98和SEQ ID NO29(HB22-33Vκ序列)的氨基酸序列的VH和Vκ序列。
在一个不同的方面，本发明涉及编码如上所述的任意的抗体重链或轻链可变区或其任意部分的核酸。
作为另一个方面，本发明提供了具有如上所述的重或轻链可变区或其部分的多肽。
目标症状可以是任意类型的自身免疫疾病或B细胞恶性肿瘤，包括但不限于定位的B细胞恶性肿瘤，或B细胞或各种抗体参与的任何其他症状。一般的B细胞恶性肿瘤的代表是非霍金奇氏淋巴瘤，Burkitt淋巴瘤，多重骨髓瘤，慢性淋巴细胞白血病，毛发性细胞白血病，和原淋巴细胞白血病的B细胞亚型。
本发明的治疗方法可以在没有恶性肿瘤B细胞或自身免疫疾病的任何其他治疗时进行。当与没有治疗、相同的抗体和放射性免疫治疗的结合治疗或单独的放射性免疫治疗相比时，对于B细胞恶性肿瘤，本发明的治疗方法通常能提高治愈的速度，和/或提高生存率和/或很大地减少肿瘤的体积。
抗体可以是完整的抗体，或抗体片断，包括例如，从抗体片断形成的Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片断、双体、线性抗体、单链抗体分子和多重特异性的抗体。所以，该抗体可以具有其他抗原特异性，例如可以是双特异的抗体。双特异的抗体可以例如与CD22的另一个表位结合的。此外，双特异抗体可以具有其他抗原的结合特异性，如CD19、CD20、CD52、CD3、CD28或HLA-DR10(Lym-1)；或Fc受体，例如CD16、CD64和CD89。
该抗体可以是嵌合的、人源化的、灵长类化的或人的。
给药该抗体可以通过任意的常规途径进行，如通过重复性静脉内灌注的静脉内(i.v)给药。
对治疗的应答可以通过本领域技术人员公知的方法来检测，包括检测固体肿瘤的皱缩时间，例如通过磁共振成像(MRI)，或如本领域技术人员已知的，通过测定自身免疫疾病的临床指标的改善或稳定来检测。
附图的简要说明

图1.显示了人CD22(hCD22)的氨基酸序列，其中标出了Ig类似区域(区域1-7)的分界。
图2.用111In-2IT-BAD-抗CD22(HB22-7)注射的患Raji和Ramos肿瘤的裸小鼠的整个身体的放射自显影。注射后48小时杀死小鼠，并且进行放射自显影。上面的图象是Raji肿瘤小鼠，下面的图象是Ramos肿瘤小鼠。
图3.在用125uCi90Y-DOTA-肽-Lym-1(RIT)单独，抗CD22单独(HB22-7)，或试验081500中的RIT和HB22-7(CMRIT)的三个不同的序列处理或未处理的Raji异种移植的小鼠的肿瘤体积的实时评价。每星期评价肿瘤体积3次。将各个处理组的小鼠的数目列表(表2)。
图4.在所有独立的异种移植的试验中观察到的肿瘤体积的概要分析。如图2所述处理该试验。将各个试验的小鼠数目列表(表2)。
图5.如图2中所述处理的Raji异种移植的小鼠的应答和治愈速率。将肿瘤应答如下进行归类C，治愈(肿瘤消失，在84天的研究结束时不再生长)；CR，完全退化(肿瘤消失至少7天但后来又再生长)；PR，部分退化(肿瘤体积下降了50％或更多至少7天，然后再生长)。数据代表了所有独立实验的结果。
图6.对如图2中所述处理的Raji异种移植的小鼠评估了全面的生存率。在所患肿瘤大小超过2000mg或在84天实验结束时将小鼠安乐死。数据代表了所有独立实验的结果。
图7a，7b和7c。对在如图2所述处理的Raji异种移植的小鼠通过一星期两次测定白血细胞(WBC)(图7b)、红血细胞(RBC)(图7c)和血小板计数(图7a)来评估血液学毒性。当与RIT单独比较时，CMRIT组中血液学毒性没有差异。此外，在用HB22-7单独处理的小鼠中没有观察到血液学毒性。
图8.通过对在如图2所述处理的Raji异种移植的小鼠中1星期两次测定体重来评估非血液学毒性。在所有5个异种移植的试验中，在任意的处理组中体重没有明显的差异。
图9.在用RIT处理开始后5天，通过在整个身体(WB)和血液中测定放射性活性来评估RIT的清除率。根据90Y的T1/2调节衰变后对结果进行报道。在任意的CMRIT处理组中RIT清除率没有明显的差异。
图10.阻断配体结合的抗CD22抗体的VH氨基酸序列分析。各个Ab的编码序列的氨基酸计数和起点的设计是根据Kabat等人(免疫学意义的蛋白质的序列，美国政府出版办公室，Bethesda，MD，1991)，其中VH基因编码了氨基酸位置1-94、CDR1和2，和FR1，2和3.与5’PCR引物交迭的序列没有显示。点表示序列中插入的裂隙从而使相似的氨基酸序列的比对最大化。在VH、D和J区之间，为了清楚，在序列中导入了裂隙。显示的序列的排列顺序是基于与HB22-5序列的相关性。
图11-16.来自杂交瘤HB22-5(SEQ ID NOS8和9)，HB22-7(SEQID NOS10和11)；HB22-13(SEQ ID NOS12和13)；HB22-23(SEQ IDNOS14和15)；HB22-33(SEQ ID NOS16和17)；和HB22-196(SEQ IDNOS18和19)的抗CD22Abs的重链VH-D-JH连接序列的核苷酸和编码氨基酸序列。与5’PCR引物交迭的序列用双划线表示。D区序列下面划线。
图17.阻断配体结合的抗CD22Abs的轻链Vκ氨基酸序列分析。各个Ab的编码序列的氨基酸计数和起点的设计是根据Kabat等人的惯例，出处同上。在预测的信号序列剪切位点后的氨基酸编号为1。点表示了在该序列中插入的一个裂隙，使相似的氨基酸序列的比对最大化。在Vκ，J区段和κ恒定区域(下面双划线)序列之间为了清楚，导入裂隙。
图18-23.来自杂交瘤HB22-5(SEQ ID NOS20和21)；HB22-7(SEQID NOS22和23)；HB22-13(SEQ ID NOS24和25)；HB22-23(SEQ IDNOS26-27)；HB22-33(SEQ ID NOS28-29)；和HB22-196(SEQ IDNOS30-31)的抗CD22 Abs的κ轻链V-J-恒定区域连接序列的核苷酸和推断的氨基酸序列。与5’PCR引物交迭的序列用双下划线表示。
优选的实施方案的详细说明除非特别定义，在此处所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属的领域的普通技术人员通常理解的相同的意义。在此处本发明的描述中所用的术语是只用于描述特定的实施方案的，并且不打算限制本发明。
本文提到的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献以全文引入作为参考。
A.定义除非特别说明，本文所用的技术和科学术语具有如本发明所属的领域中的普通技术人员一般理解的相同意义。
本领域的技术人员将会识别可以用于本发明的实践中的许多方法和材料或此处所述的方法和材料的等同物。事实上，本发明不以任何方式限制所述的方法和材料。为了本发明的目的，将下面的术语定义如下。
术语“免疫球蛋白”(Ig)用于指血清的球蛋白的给予免疫性的部分，以及其他的糖蛋白，他们可以不是天然存在的但具有相同的功能特征。术语“免疫球蛋白”或“Ig”特异性地包括“抗体”(Abs)。当抗体显示与特定的抗原的结合特异性时，免疫球蛋白包括缺乏抗原特异性的抗体和其他抗体类似分子。天然的免疫球蛋白是由命名为浆细胞的分化的B细胞分泌的，没有任何抗原特异性的免疫球蛋白是淋巴系统低水平产生和骨髓瘤高水平产生的。如本文所用的，术语“免疫球蛋白”、“Ig”和其语法变体用于包括抗体(如此上所定义的)和没有抗原特异性的Ig分子。
天然的免疫球蛋白通常是由两个相同的轻(L)链和两个相同的重(H)链组成的大约150,000道尔顿的杂四体糖蛋白。每个轻链与重链是通过一个共价的二硫键连接的，而二硫键的数目在不同的免疫球蛋白异型之间变化。每个重链和轻链也具有常规的被间隔的链间二硫键。每个重链在一端具有一个可变区(VH)，接着若干恒定区。每个轻链在一端具有一个可变区(VL)并在另一末端具有一个恒定区；轻链的恒定区是与重链的第一个恒定区一起排列的，并且轻链的可变区是与重链的可变区一起排列的。特定的氨基酸残基据信在轻链和重链的可变区之间形成界面。
在血清中发现了主要的Ig异型(类别)，将显示于括号中的对应的Ig重链列在下面IgG(γ链)血清中的基本Ig，应对抗原产生的主要抗体，这一抗体穿过胎盘。
IgE(ε链)这一Ig紧密结合肥大细胞和碱性粒细胞，当另外结合抗原时，引起释放组胺和速发型过敏反应的其他介导物；在过敏反应中起着基本作用，这些过敏反应包括枯草热、气喘和过敏反应；并且可以起抗寄生虫的保护性作用；IgA(α链)这一Ig存在于外分泌物中，如唾液、眼泪、粘液和初乳。
IgM(μ链)在应答抗原中首先诱导的Ig；它通常具有比后来产生的其他抗体异型更低的亲和力，一般是五体。
IgD(δ链)这一Ig是在脐血中发现的相对高浓度的物质，可以是抗原的早期细胞受体，并且是主要的淋巴细胞表面分子。
本文中的术语“抗体”是在最广泛的意义中使用的，并且特异性地覆盖单克隆抗体(包括，但不限于全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多重特异抗体(例如，双特异抗体)和抗体片断，只要它们具有需要的生物学活性。
“抗体片断”包括全长抗体的一部分，通常为结合抗原的可变区(V)。抗体片断的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片断；二体；线性抗体；单链抗体分子；和从抗体片断形成的多重特异性抗体。
如本文所用的术语“单克隆抗体”指从基本同源的抗体的群体得到的抗体，即包括该群体的个别抗体是相同的，除了可能以小量存在的天然存在的突变。单克隆抗体是高度特异的，定向抗单个抗原位点。另外，与通常包括不同的定向抗不同决定蔟(表位)的抗体的常规(多克隆的)抗体制剂相反，每个单克隆抗体是定向抗抗原上的单个决定簇的。
此处的单克隆抗体特定地包括“嵌合的”抗体(免疫球蛋白)，以及这样的抗体的片断，只要它们具有需要的生物活性(美国专利号，4,816,567；Morrison等人，美国国家科学院院刊，816851-6855(1984)；Oi等人，生物技术，4(3)214-221(1986)；和Liu等人，美国国家科学院院刊843439-43(1987))。
非人(例如，小鼠)抗体的“人源化的”或“CDR移植的”形式是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中受体的高变区残基被来自非人物种(供体抗体)如小鼠、大鼠、兔子或具有需要的特异性、素和性和能力的非人灵长类的高变区残基所取代。在一些情况中，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基也被对应的非人残基(所谓的“回复突变”)替代。另外，人源化抗体可以进行修饰，以包含受体抗体或供体抗体中没有发现的残基，以便进一步改善抗体的特性如亲和性。通常，人源化抗体会基本包括所有的，至少一个，通常两个可变区，其中所有或基本所有的高变区对应非人免疫球蛋白的高变区并且所有或基本所有的FRs是免疫球蛋白序列的FRs。人源化抗体也将至少包括一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，一般是人的免疫球蛋白的那部分。关于其他细节，参见Jones等人，自然，321522-525(1986)；和Reichmann等人，自然332323-329(1988)。
“单链Fv”或“sFv”抗体片段包括抗体的VH和VL区域，其中这些区存在于单个的多肽链中。通常，Fv多肽另外在VH和VL区之间包括能使sFv形成抗原结合所期望的结构的多肽联结子。一篇sFv的综述参见Plückthun的单克隆抗体的药物学，113卷，Rosenburg和Mooreeds.Springer-Verlag，纽约，269-315(1994)。
术语“二体”指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，这些片段在相同的多肽链(VH-VL)中，利用一个接头将重链可变区(VH)与轻链可变区(VL)连接，这一接头太短以致使得在相同链上的两个区域之间配对，强迫这些区域与另一个链的互补区域配对，产生了两个抗原结合位点。二体在例如，EP 404,097；WO93/1161；和Hollinger等人，美国国家科学院院刊，906444-6448(1993)中叙述得更充分。
当用于本申请通篇时，表达语“线性抗体”指Zapata等人，蛋白质能量8(10)1057-1062(1995)中所述的抗体。简要地说，这些抗体包括一对串联的Fd片段(VH-CH1-VH-CH1)，形成了一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异或单特异的。
IgG、IgE、IgA、IgM和IgD异型的抗体可以具有相同的可变区，即相同的抗原结合腔，尽管在它们的重链恒定区中是有区别的。免疫球蛋白，例如抗体的恒定区没有直接参与将抗体与抗原结合，但显示出各种效应物功能，如抗体参与抗体依赖细胞毒性(ADCC)。
一些主要的抗体异型(类别)被分成另外的亚类。IgG具有四个已知的亚类IgG(γ1)、IgG2(γ2)、IgG3(γ3)和IgG4(γ4)，而IgA具有两个已知的亚类IgA1(α1)和IgA2(α2)。
术语“表位”用于指蛋白质抗原上的抗体的结合位点(单克隆的或多克隆的)。
结合到天然序列人CD22的氨基酸序列内区1和/或2的抗体，或结合到与本文特异地公开的任何单克隆抗体，如HB22-7、HB22-23和HB22-33所结合的基本相同的表位的抗体可以通过“表位图谱”来鉴定。本领域有许多已知的定位和鉴定蛋白质上的表位的位置的方法，包括溶解抗体-抗原复合物的结晶结构、竞争性试验、基因片段的表达试验、基于合成肽的实验，如例如在Harlow和Lane的第11章，抗体利用，实验室手册，冷泉港实验室出版，冷泉港，纽约，1999中所述的。根据基因片段表达试验，编码蛋白质的开放读码框架被任意地或通过特异的遗传构建体片段化了，并且确定了蛋白质的表达片段与待测试的抗体的反应性。基因片段可以例如通过PCR产生，然后在存在放射活性氨基酸时体外转录并翻译成蛋白质。然后，通过免疫沉淀和凝胶电泳确定抗体与放射活性标记的蛋白质片段的结合。一些表位也可以利用在噬菌体颗粒(噬菌体文库)表面呈现的随机肽序列的大文库来鉴定。或者，可以在简单的结合试验中测试一个已确定的交迭的肽片段的文库与测试抗体的结合。后一种方法适于确定大约5到15个氨基酸的线性表位。
当两个抗体识别相同的或空间上交迭的表位时，抗体结合“基本相同的表位”作为参照抗体。确定是否两个表位结合相同的或空间上交迭的表位的最广泛利用的和快速的方法是竞争性测试(例如，竞争性ELISA测试方法)，它可以利用标记过的抗原或标记过的抗体构成所有不同的格式。通常，将抗原固定在96孔板上，利用放射活性或酶标记测定阻断标记的抗体的结合的未标记抗体的能力。
如本文所用的术语氨基酸或氨基酸残基指如下所述的与变异体相关的天然存在的L氨基酸或D氨基酸。通常使用的氨基酸的一个和三个字母缩写为本文所用(Bruce Alberts等人，细胞分子生物学，格兰特出版社，纽约(第三版，1994)。
如本文所用，术语“多肽”包括肽和蛋白质，包括融合蛋白质。
将“序列同一性”定义为在比对该序列和导入的裂隙后，在候选序列中的氨基酸残基的百分数，必要的话达到序列同一性的最大百分数，并且不考虑作为序列同一性的一部分的任何保守取代。序列同一性的百分数值可以通过NCBI BLAST2.0软件产生，如Altschul等人，(1997)所确定的，“Gapped BLAST和PSI-BLAST新产生的蛋白质数据库研究程序”，核酸研究，253389-3402。将参数设定为缺省值，除了设定为-1的错配的罚分。
如本文所用，“治疗”或“处理”是得到有益的或期望的临床结果的途径。为了本发明的目的，有益的或期望的临床结果包括，但不限于，症状的缓解、疾病程度的消失、疾病的稳定(即没有恶化)状态、疾病发展的推迟或减慢、疾病状态的改善或舒减，和减轻(无论部分或全部)，不论是可检测的或不可检测的。“治疗”或“处理”也可以指与如果不接受治疗的期望的生存期相比的延长了的生存。“治疗”或“处理”是出于防止进一步发展或改变疾病的病理的目的而进行的干预。因此，“治疗”或“处理”既指治疗性的处理也指预防或防止性的措施。需要治疗的那些包括疾病已经有的以及其中病症可以预防的。对于自我免疫疾病，治疗产生了一些改善、改良、稳定和/或受试者中的自我免疫疾病的至少一个临床症状的稳定和/或延迟。在B细胞恶性肿瘤中，治疗可以减少恶性肿瘤细胞的数目，减少肿瘤的大小；抑制(减慢或终止)恶性肿瘤细胞的传播，包括渗入周边器官，例如软组织或骨；抑制(减慢或终止)转移；抑制肿瘤生长；提供与B细胞恶性肿瘤相关的症状的缓解；降低死亡率；提高生活质量等。用本文的抗体的治疗可以导致细胞抑制和/或细胞毒性的效果。
术语“B细胞恶性肿瘤”和其语法变体在最广的意义上被使用以指B细胞的恶性肿瘤或赘生物，通常在淋巴组织中产生，如骨髓或淋巴结，但也可以在非淋巴类组织中产生，如甲状腺、胃肠道、唾液腺和关节。本发明的治疗方法特异性地涉及CD22-阳性B的细胞恶性肿瘤，包括但不限于非霍金奇氏淋巴瘤的B细胞亚型、Burkitt淋巴瘤、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病、毛发性细胞白血病和前淋巴细胞白血病。
术语“自身免疫疾病”指与正常的身体组织反应的抗体的产生导致的或加重的的症状。这是免疫系统错误攻击身体自身器官和组织的症状。
B.详细的描述1.抗体称为HB22-7、HB22-23、HB22-33、HB22-5、HB22-13和HB22-196的阻断性抗CD22单克隆抗体是已知的，并且已经在美国专利号5,484,892，Tuscano等人，当代免疫学杂志，261246(1996)，和Tuscano等人，血液，94(4)，1382-1392(1999)中公开了。HB22-7和HB22-23可以从美国典型培养物收藏中心(ATCC)，12302帕克兰加伏，洛克菲勒，Md.20852，登记号HB22347和HB11349下得到。这些抗体的制备也在下面的实施例1中有叙述。CD22的表位图谱已经显示，这些阻断的单克隆抗体结合开始的两个Ig-类似区域或结合与人CD22的开始的两个Ig-类似区域相关的表位(美国专利号，5,484,892和Tedder等人，免疫学年评，15481-504(1997))。抗体的重和轻链可变区序列也公开在本申请中。
本发明部分地基于具有在治疗B细胞恶性肿瘤中HB22-7、HB22-23、HB22-33、HB22-5、HB22-13和HB22-196的全部特征的阻断性抗CD22抗体的意想不到的优良特性，基于B细胞类型的非霍金奇氏淋巴瘤(NHL)的异种移植的模型中得到的结果。本发明进一步基于在治疗自身免疫疾病中的具有HB22-7、HB22-23、HB22-33、HB22-5、HB22-13和HB22-196的全部特征的阻断性抗CD22抗体的使用。
可以通过本领域中已知的任何标准的方法如，例如通过杂交瘤方法(Koehler和Milstein，自然256495-497(1975)；和Goding，单克隆抗体原理和实践，59-103(学术出版社，1986))，或通过例如在美国专利号4,816,567和Wood等人，自然314446-9(1985)中公开的重组技术来生产抗CD22单克隆抗体。
现在也可能生产在没有内源免疫球蛋白产生时在免疫后能生产人抗体的所有组成成分的转基因动物(例如，小鼠)。例如，有人描述在嵌合的和胚系突变的小鼠中纯合的抗体重链结合区(JH)基因的删除导致内源抗体产生的完全抑制。在这样的胚系突变小鼠中转移人的胚系免疫球蛋白基因的排列将导致在抗原攻击后产生人抗体。参见，例如Jakobovits等人，美国国家科学院院刊，90，2551-255(1993)；Jakobovits等人，自然，362，255-258(1993)。
Mendez等人(自然遗传学，15146-156(1997))已经进一步改进了技术并产生了命名为“异种小鼠II”的转基因小鼠系，它在当用抗原攻击时，产生高亲和力的完整的人抗体。这是通过将百万碱基的人重链和轻链座位胚系整合进小鼠，并且在如上所述的内源JH区段中有缺失而实现的。II型异种小鼠含有1,020kb的人重链座位，含有大约66个VH基因，完整的DH和JH区域和三个不同的恒定区域(μ，δ和χ)，并且也含有800kb的人κ座位，其中含有32Vκ基因，Jκ区段和Cκ基因。在这些小鼠中产生的抗体各个方面近似于那些在人中观察到的抗体，包括基因再重排、组装和全部组成成分。由于在防止小鼠座位的再重排的内源JH区段中的缺失，人抗体优选地在内源抗体上进行表达。
选择性地，噬菌体呈现技术(McCafferty等人，自然，348，552-553(1990))可以用于从来自未经免疫的供体的免疫球蛋白可变区(V)基因的全部组成部分，在体外生产人抗体和抗体片段。根据这一技术，将抗体V区基因在框架内克隆进丝状噬菌体的大的或小的外壳蛋白基因，如M13或fd，并且在噬菌体颗粒表面上作为功能抗体片段呈现。因为丝状颗粒含有噬菌体基因组的单链DNA拷贝，根据抗体的功能特性的筛选也导致了编码具有那些特性的抗体的基因的筛选。所以，噬菌体模拟了B细胞的一些特性。噬菌体呈现可以各种方式进行；对于它们的综述可以参见例如，Johnson，Kevin S.和Chiswell，David J.，结构生物学的现代评论，3.564-571(1993)。V基因区段的几个来源可以用于噬菌体呈现。Clackson等人，自然，352，624-628(1991)从源自免疫小鼠的脾的V基因的小的随机组合的文库分离出抗恶唑酮抗体的各种排列。根据Marks等人，分子生物学杂志，222，581-597(1991)，或Griffith等人，EMBO J.12，725-734(1993)所述的技术可以构建来自未免疫的人供体的V基因的全部组成成分并且可以基本上分离各种抗原(包括自身抗原)的不同排列的抗体。在天然的免疫应答中，抗体基因高速积累了突变(体细胞高变)。一些导入的变化将能带来更高的亲和力，优选地对呈现高亲和力的表面免疫球蛋白的B细胞进行复制，并且在随后的抗原攻击过程中分化。这一天然的过程可以通过利用已知为“链穿梭”的技术进行模拟(Marks等人，生物技术，10，779-783)。
在这一方法中，通过噬菌体呈现得到的“初级”人抗体的亲和力可以通过用从未免疫的供体得到的V区基因的天然发生的变异体(全部组成成分)按顺序替代重链和轻链V区域基因来提高。这一技术允许生产nM范围的亲和力的抗体和抗体片段的生产。Waterhouse等人，核酸研究，21，2265-2266(1993)已经叙描了制造非常大的噬菌体抗体全部组成成分的策略。
对于涉及单克隆抗体的其他信息，也参见例如Goding，J.W.，单克隆抗体原理和实践，第3版，学术出版社，伦敦，圣地亚哥，1996；Liddell和Weeks抗体技术一个全面综述，生物科学出版社，牛津，英国，1995；Breitling和Dubel重组的抗体，John Wiley & Sons，纽约，1999；和噬菌体呈现实验室手册，Barbas等人编辑，冷泉港实验室，冷泉港，2001。
已经开发了各种技术用于生产抗体片段。传统上，这些片段是通过完整的抗体的蛋白质分解消化来得到的(参见例如，Morimoto等人，J.Biochem.Biophys.Methods，24107-117(1992)和Brennan等人，科学22981(1985))。但是，这些片段现在可以直接由重组宿主细胞来生产。例如，Fab’-SH片段可以直接从大肠杆菌来回收并进行化学偶联以形成F(ab’)2片段(Carter等人，生物技术10163-167(1992))。在另一个实施方案中，利用亮氨酸拉链GCN4形成F(ab’)2以便促进F(ab’)2分子的组装。根据另一个方法，可以直接从重组的宿主细胞培养物中分离Fv、Fab或F(ab’)2片段。生产抗体片段的其他技术对于本领域技术人员是显而易见的。
由两个共价结合的抗体组成的异种结合抗体也在本发明的范围内。这样的抗体已经例如被提议将免疫系统细胞打靶到不想要的细胞(美国专利号，4,676,980)，并用于治疗HIV感染(PCT申请公开号，WO91/00360和WO92/200373)。异种结合抗体可以利用公知的，商业上已有的交联剂以任何合适的交联的方法来制成。
本发明的抗体，不管是啮齿动物、人或人化的抗体也可以具有其他的抗原特异性，以形成双特异性抗体。第二结合特异性可以指引，例如抗其他的B细胞抗原，如CD19、CD20、CD52和其他B细胞上表达的CD抗原，特别是与靶B细胞恶性肿瘤结合的抗原。例如，已知CD20在90％以上的非霍金奇氏淋巴瘤中表达。抗CD20抗体(Rituxan，IDEC药学)在临床使用中是用于非霍金奇氏淋巴瘤的治疗中的。CAMOATH-1H(抗CD52w)是被开发治疗B细胞恶性肿瘤的另一种抗体。具有与CD20或CD52抗原的结合特异性的双特异抗体特异性地包括在本文的范围内的。本发明的双特异性抗体可以结合的另一个B细胞抗原是HLA-DR10(Lym-1)，一个已知的非霍金奇氏淋巴瘤的标记。可以生产双特异性抗体增强肿瘤的定位以及恢复和/或增强肿瘤特异免疫应答。其他抗原的靶的例子包括CD3、CD28和Fc受体(CD16、CD64和CD89)。双特异性抗体可以预期具有增强的细胞毒性，并且作为结果提高缓解的速度和存活。
基本结合相同表位如HB22-7、HB22-23、HB22-33、HB22-5、HB22-13和/或HB22-196的抗体可以通过表位图谱来鉴定。确定两个不同的抗体是否认识相同的表位的最简单的方法是竞争性结合试验。该方法确定是否抗体能够相互阻断与抗原的结合，并且为两个构象性和线性表位而起作用。竞争性结合试验可以大量不同的方式，利用标记抗原或标记抗体来进行。在该试验的大多数普通的版本中，将抗原固定在96孔板上。然后，利用放射活性的或酶标记测定未标记抗体阻断标记抗体与抗原的结合的能力。对于其他详细细节，参见例如Wagner等人，免疫学杂志，1302308-2315(1983)；Wagner等人，免疫学方法杂志，68269-274(1984)；Kuroki等人，癌症研究，504872-4879(1990)；Kuroki等人，免疫学研究，21523-538(1992)；Kuroki等人，杂交瘤，11391-407(1992)，和抗体利用实验室手册，Harlow和David Lane编辑，冷泉港实验室出版，冷泉港，纽约，1999，386-389。
或者，或此外，可以利用基于抗原的片段化的技术并检测以抗体得到的片段的反应性进行表位图谱定位，抗体随机地或通过特异的遗传构建体结合该抗原。片段化也可以在核酸水平上进行，例如通过PCR技术，接着进行转录并在存在放射性氨基酸时在体外翻译成蛋白质。对于另外的细节参见例如，Harlow和Lane，出处同上，390-392。
根据表位图谱的另一个方法，合成了一系列交迭的肽，各对应于蛋白质抗原的一个小的线性区段，并且排列在固相上。然后，用测试抗体探测肽系列，利用酶标记的二次抗体来检测结合的抗体(Harlow和Lane，出处同上，393-396)。
本领域已知的表位定位的其他方法是从随机合成的或噬菌体呈现的肽文库筛选抗体。噬菌体呈现文库是通过将编码的肽寡聚核苷酸的复合混合物克隆进fl-型ssDNA噬菌体的小外壳蛋白基因的氨基末端来构建的。这样的噬菌体呈现文库是商业现有的，例如从新英格兰生物实验室得到。扩增该文库作为原种，然后，将足以代表各个独立的克隆的多个拷贝的等分试样与目的抗体混合。通过称为“生物淘选”的方法回收抗体结合噬菌体，除去未结合的噬菌体。洗脱结合的噬菌体并用于感染细菌，扩增筛选的原种。将最后筛选的原种的个别噬菌斑进行培养，并且例如通过ELISA检测其特异性的抗体反应性，将插入位点周围的DNA测序。分析编码抗体结合的肽的序列确定了抗体的特异性。其他细节参见例如，Smith和Scott，酶学方法，217228-257(1993)，和Harlow和Lane，出处同上，397-398。
可以进一步修饰非人(啮齿动物)抗体使它们更适于人的临床应用。用拼接入人恒定区基因区段的具有所需的特异性的小鼠可变区基因片段生产嵌合抗体(参见例如，美国专利号4,816,567)。
当在人的治疗中利用抗体时，为了避免抗原性的问题也可以人源化非人(啮齿动物)抗体。通常，人化抗体具有在从非人来源中导入的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基经常称为“输出”残基，通常取自“输出”可变区。通过用人抗体的相应的序列取代啮齿动物编码区或编码区序列，采用Winter和其同事的方法，可以基本地进行人源化(Jones等人，自然，321522-525(1986)；Riechmann等人，自然，332323-327(1988)；Verhoeyen等人，科学，2391534-1536(1988))。尽管抗体人源化有比较直接的特性，在人框架(FR)中简单移植啮齿动物CDR并不总能再构成原初的啮齿动物单克隆抗体的结合亲和力和特异性。人源化抗体的特性可以通过适当的设计来改进，包括例如，将来自啮齿动物抗体的残基取代进人框架(回复突变)。这样的回复突变的位置可以通过序列和结构分析，或通过可变区的三维模型的分析来确定。此外，噬菌体呈现文库可以用于在抗体序列内的选定位置改变氨基酸。人源化抗体的特性也会受到人框架的选择的影响。早期的实验使用充分鉴定的人单克隆抗体的有限的亚系不考虑与啮齿动物单克隆抗体(所谓的固定的框架途径)的序列同一性。相对近期地，一些工作组使用与啮齿动物可变区具有高度氨基酸序列同一性的可变区(同源性匹配或最匹配的方法)。根据另一个方法，利用了一致的或胚系的序列，或从几个不同的人单克隆抗体筛选每个轻或重链可变区内的框架序列的片段。
可以通过在抗CD22 DNA中导入适当的核苷酸变化，或例如通过肽合成制备上面讨论的或其他现有的技术制备抗体的氨基酸变体。氨基酸变化也可以改变人源化或变异的抗CD22抗体的翻译后过程，如改变糖基化位点数目或位置。
在恒定区的保守的位置上糖基化抗体(Jefferis and Lund，化学免疫学，65111-128(1997)；Wright and Morrison TibTECH1526-32(1997))。免疫球蛋白的寡糖侧链影响蛋白质的功能(Boyd等人，分子免疫学，321311-1318(1996)；Wittwe and Howard，生物化学，294175-4180(1990))，并且糖蛋白的各部分之间的分子间相互作用可以影响糖蛋白的构型和存在的三维表面(Jefferis and Lund，出处同上，Wyss and Wagner，现代生物技术评论，7409-416(1996))。寡糖也可以作用于将给定的糖蛋白质根据特异的识别结构打靶到一些分子上。例如，已经有报道，在无乳化IgG中，寡糖部位出自CH2内空间并且末端N乙酰糖基胺残基变成可以结合甘露糖结合蛋白质(Malhotra等人，自然方法，1237-243(1995))。通过糖肽酶从CHO细胞中产生的CAMPATH-1H(识别人淋巴细胞的CDw52的抗原的重组人源化小鼠单克隆IgG1抗体)除去寡糖导致了在互补介导的溶解(CMCL)中的完全降低(Boyd等人，分子免疫学，321311-1318(1996)，而利用神经酰胺酶对唾液酸残基的去除则不会导致CMCL的降低。也有报道抗体的糖基化能影响抗体依赖的细胞毒性(ADCC)。特别是，据报道具有β(1，4)-N-乙酰糖基氨基转移酶III(GnTIII)，一种催化剖面GlcNAc的形成的糖基转移酶的四环素调节的表达的CHO细胞能提高ADCC活性(Umana等人，成熟的生物技术，17176-180(1999))。
通过修饰下面划线的核苷酸序列中的糖基化位点可以制备抗体的糖基化变体。另外，抗体的糖基化也可以在不改变下面划线的核苷酸序列的情况下得以改变。糖基化是大大依赖于用于表达抗体的宿主细胞的。因为用于表达重组的糖蛋白，例如抗体作为潜在的治疗剂的细胞类型很少是天然细胞，可以期望在抗体的糖基化模式谱中的显著的变异(参见例如，Hse等人，生物化学杂志，2729062-9070(1997))。除了宿主细胞的选择，在重组抗体的生产过程中影响糖基化的因子包括生长方式、培养基的组成、培养物的密度、氧合作用、pH、纯化方案等等。有人建议用各种方法来改变在特定的宿主生物中实现的糖基化模式，包括导入或过度表达参与寡糖生产的一些酶(美国专利号，5,047,335，5,510,261和5,278,299)。可以例如利用内糖苷酶H(EndoH)酶学地将糖基化，或糖基化的一些类型从糖蛋白上去除。另外，可以将重组宿主细胞遗传工程化，例如在一些类型的聚多糖的加工中制成有缺陷的。这些以及类似的技术是本领域公知的。
本发明的抗体也可以通过抗体指示的酶药物前体治疗(ADEPT)来使用。ADEPT是一种利用单克隆抗体靶击肿瘤抗原的特异性将催化酶靶击到癌细胞表面的技术。本文中，酶是在将抗癌症药物的药物前体形式(例如，肽基化学治疗剂，参见WO81/01145)激活成它们的完全的活性形式的位置上。参见例如，WO88/07378和美国专利号，4,975,278。
用于本发明的方法中的酶包括但不限于用于将含有磷酸盐的药物前体转化成游离的药物的碱性磷酸酶；用于将含有硫酸盐的药物前体转变成游离的药物的芳基磺胺酶；用于将非毒性的5-氟胞嘧啶转变成抗癌药物5-氟尿嘧啶的胞嘧啶脱氨酶；蛋白酶如沙雷菌蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、羧肽酶和组织蛋白酶(如组织蛋白酶B和L)，可用于将含有肽的药物前体转变成游离的药物；D-丙氨酰羧肽酶，用于转变含有D氨基酸取代物的药物前体；碳水化合物裂解酶如β半乳糖苷酶和用于将糖基化的药物前体转变成游离的药物的神经酰氨酶；用于将β内酰胺派生的药物转变成游离的药物的β内酰胺酶；和用于将在它们的带有苯氧基乙酰基或苯基乙酰基的基团的胺氮派生的药物转变成游离的药物的青霉素酰胺酶，如青霉素V酰胺酶或青霉素G酰胺酶。或者，具有酶活性的抗体，在本领域中也已知为“抗体酶”，可以用于将本发明的药物前体转变成游离的活性药物(参见例如，Massey，自然，328457-458(1987))。抗体-抗体酶共轭物可以如本文所述制备成将抗体酶递送到肿瘤细胞群体中。
本文中的抗体的免疫共轭物也特异地包括在本发明中。免疫共轭物包括与细胞毒性剂共轭结合的抗体，如化学治疗剂、毒素或放射性同位素。
特别地，本文中的抗CD22的抗体的效率可以通过与细胞毒性放射性同位素缀合，使得特异地将放射性治疗打靶至靶位点(放射性免疫治疗)来提高。适合的放射性同位素包括例如，I131和Y90，两者都可以用于临床实践中。其他适合的放射性同位素包括但不限于In111、Cu67、I131、As211、Bi212、Bi213和Re116。
用于免疫共轭物的生成中的化学治疗剂包括例如，亚德利亚霉素、阿霉素、表柔比星、5-氟尿嘧啶，阿糖胞苷(“Ara-C”)、环磷酸酰胺、三胺硫磷、白消安、细胞毒素、紫杉烷，例如，紫杉醇(Taxol，Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，NJ)和doxetaxel(安素泰、Rhone-Poulenc Rorer，Antony，Rnace)、toxotere，氨甲喋呤、顺式铂铵、苯丙氨酸氮芥、长春花碱、博来霉素、足叶乙苷、异环磷酰胺、丝裂霉素C、米托蒽醌、长春花新碱、长春瑞宾、卡铂、表鬼白毒噻吩糖苷、道诺霉素、洋红霉素、氨基喋呤、更生霉素、丝裂霉素、埃斯波霉素(参见美国专利号，4,675,187)、5-FU、6-硫代鸟嘌呤、6-巯基嘌呤、放线菌素、VP-16、瘤可宁、苯丙氨酸氮芥和其他相关的氮芥。
本文中用于免疫共轭物中的毒素包括例如，白喉A链、外毒素A链、蓖麻蛋白A链、伊诺霉素和tricothecenes。特别地包括在内的是抗体-美登木素生物碱和抗体-加利车霉素共轭物。含有美登木素生物碱的免疫共轭物被在例如美国专利号5,208,020，5,416,020和欧洲专利号EP 0425 235中公开了。还参见例如，Liu等人，美国国家科学院院刊，938618-8623(1996)。例如，在美国专利号5,712,374，5,714,586；5,739,116；5,767,285；5,770,701；5,770,710；5,773,001；和5,877,296中公开了抗体-加利霉素共轭物。
利用各种双功能蛋白质偶联剂如N-琥珀酰胺基-3-(2-吡啶二硫代基)丙酸盐(SPDP)、亚氨基硫代烷(IT)、咪唑酯的双功能衍生物(如二甲基adipimidate HCl)、活性酯(如二琥珀酰基辛二酸)、醛(如戊二醛)、双叠氮化合物(如双(p-叠氮苯甲酰)己烷二胺)、双重盐衍生物(如双-(p-重盐苯甲酰)-乙二胺)、二异氰(如tolyene 2，6-二异氰酸)和双活性氟化合物(如1，5-二氟-2，4-二硝基苯)。例如，蓖麻蛋白免疫毒素可以如Vitetta等人，科学，2381098(1987)中所述进行制备。碳-14标记的1-异硫代氰酸苯基-3-甲基二乙基三氨基戊乙酸(MX-DTPA)是示范性的螯合剂，用于与抗体的放射性核苷酸缀合，参见例如，WO94/11026。
抗CD22抗体的共价修饰也包括在本发明的范围内。如果可行，它们可以通过化学合成或通过抗体的酶学的或化学的裂解来制成。通过将抗体的靶向的氨基酸残基与有机的衍生剂反应，在分子中导入抗体的其他类型的共价修饰，所述衍生剂能够与筛选的侧链或N-或C-末端残基反应。抗体的共价修饰的优选的类型包括将抗体与各种非蛋白质多聚体例如，聚乙二醇、聚丙二醇、或聚氧烷中的一种以本领域已知的方法连接。
2.药物的配方和治疗方法B细胞型非霍金奇氏淋巴瘤是用于包括恶性(肿瘤性的)B细胞淋巴瘤引起的一大组淋巴瘤(超过29个类型)的术语，代表一大亚系的已知类型的淋巴瘤。已知B细胞在它们依赖于复杂的细胞内信号过程的生命周期中经历了许多变化，在B细胞的生命周期的不同时期可以存在明显的不同类型的B细胞恶性肿瘤。在干细胞时期，一般可以形成急性淋巴细胞白血病(ALL)或原淋巴细胞淋巴瘤/白血病。前体B细胞可以发展成前体B原淋巴细胞淋巴瘤/白血病。未成熟的B细胞的典型的恶性肿瘤包括小的非裂解的细胞淋巴瘤和可能的Burkitt/非Burkitt淋巴瘤。在抗原接触之前B细胞通常发展成慢性淋巴细胞白血病(CLL)，或小的淋巴细胞淋巴瘤，而在抗原接触后通常观察到滤泡状淋巴瘤，大细胞淋巴瘤和免疫母细胞性淋巴瘤。同时存在分类系统可以通过将快速和慢速的淋巴瘤区分的生长速度来鉴定B细胞淋巴瘤。例如，Burkitt/非Burkitt淋巴瘤和LCL淋巴瘤属于快速生长的组，而慢速生长的组包括滤泡中心细胞淋巴瘤(FCCL)，滤泡大细胞淋巴瘤，和滤泡小裂解细胞淋巴瘤。
通过发育的时期也可以鉴定非霍金奇氏淋巴瘤。时期I只在一个淋巴结区域，或只在淋巴结外面的一个区域或一个器官中发现癌症。时期II(1)在隔膜(帮助呼吸的肺下的薄肌肉)的同侧的两个或多个淋巴结区域中发现癌症，或(2)在淋巴结外的仅一个区域或器官或其周围的淋巴结中发现癌症，或(3)在薄层的同侧上的其他淋巴结区域也可以有癌症。时期III在薄层的两侧的淋巴结区域中发现癌症。癌症也可以已经传播到靠近淋巴结区域和/或靠近脾的区域或器官。时期IV(1)癌症已经扩散到淋巴系统外面的一个器官或许多器官；癌症细胞可能或不可能在靠近这些器官的淋巴结中发现，或(2)癌症已经扩散到淋巴结外的仅一个器官，但淋巴结远离涉及的器官。
B细胞恶性肿瘤包括非霍金奇氏淋巴瘤的当前的治疗意见依赖于恶性肿瘤的类型和时期。典型的治疗方案包括辐射治疗，也称外部光束治疗、化学治疗、免疫治疗以及这些方法的组合。一个有希望的途径是放射免疫治疗(RIT)。在外部光束治疗时，有限的身体区域受到辐射。在化学治疗下，治疗是系统的，经常不利地影响正常的细胞，引起严重的毒性副作用。靶向RIT是一种方法，其中B细胞特异抗体将毒性物质递送到肿瘤位点。在患有B细胞NHL的患者中RIT的治疗潜力已经利用不同的靶，包括CD20、CD19、CD22和HLA-DR10(Lym-1)显示了。更近地，联合用药疗法(CMT)已经成为治疗固体肿瘤的日益常见的方法，包括通过药物进行癌症细胞的辐射敏感性，以及化学治疗的直接的细胞毒性效果。治疗NHL的最常见的化学治疗方案是环磷酰胺-羟基阿霉素-长春碱(长春花新碱)-强的松(CHOP)结合治疗。一个对恶性的，但为早期的NHL的随机研究显示，用CHOP加场辐射的结果比单独CHOP的治疗优越。尽管有希望，但有关外部光束的辐射的治疗的缺点是外部光束的辐射仅仅可以高剂量递送到身体的有限的区域，而NHL是广泛分布的。因此，已经证明CMT对于局部早期恶性肿瘤在临床上是有用的。
另一条现有的方法是联合用药放射性免疫疗法(CMRIT)，它与对NHL的系统辐射(例如，90Y-DOTA-肽-Lym-1)的特异传递结合，该NHL具有另一个化学治疗剂的系统辐射敏感效应。因为在CMRIT中，辐射是连续递送的，含氧量低的癌症细胞可以再氧化，或通过在治疗过程中的细胞循环的辐射敏感G2/M期，使治愈更容易。另外，CMRIT首先通过Lym-1特异地靶击NHL，其次通过时间测定提供特异性。这使得辐射敏感剂只在RIT靶击的位点潜在地协同作用，所以使效率最大化使毒性最小。几个前面的异种移植研究已经证明，当在RIT 24-48小时后施用辐射合成仪(Taxol)，协同作用提高了。
尽管CMRIT目前被视为最先进的治疗NHL的治疗方法，但当在已经广泛接受的Raji和Ramos淋巴瘤异种移植模型中进行测试时，本发明的抗体单独也已经证明能在肿瘤体积减少、治愈速度和完全的生存方面提供优越的结果。
自身免疫疾病是导致抵抗自身的随后的免疫应答的自我耐受中的中断引起的，包括产生自身抗体和在受影响的组织中储存免疫球蛋白。自身抗体形成促进补体和Fc受体介导的组织炎症和破坏的免疫复合物。因为B细胞是自身抗体来源，他们提供了合适的靶，用于治疗这些类型的免疫介导的疾病。B细胞也可以提供抗原并和调节效应器T细胞的发育。这些疾病的病理性的机制是复杂的，并且经常包括体液的和细胞的免疫机制。
大部分自身免疫疾病来自与正常身体组织反应的抗体的生产或被其加剧。在抗原刺激和激活之后的B细胞产生了抗体。所以，阻断CD22功能可以抑制抗体的产生，包括自身反应抗体。80种自身免疫疾病已经得到鉴定。自身免疫疾病，他们的病原学和治疗在国立卫生研究院的自身免疫疾病协调委员会出版的自身免疫疾病研究计划中已经广泛讨论了。根据本发明可以治疗的自身免疫疾病包括但不限于免疫复合性疾病如肾小球肾炎，Goodspature综合症，坏死性脉管炎，淋巴腺炎，动脉外膜炎结节和系统性红斑狼疮。其他示例性的自身免疫疾病包括但不限于类风湿关节炎、牛皮癣关节炎、系统性红斑狼疮、牛皮癣、溃疡性结节炎、系统性硬化、皮肌炎/多肌炎、抗磷脂抗体综合症、硬皮病、perphigus vulgaris、ANCA相关的脉管炎(例如，韦格纳氏肉芽肿病、极微性多脉管炎)、urveitis，Sjgren氏综合症、克罗恩氏疾病、瑞特氏综合症、关节强硬性脊椎炎、莱姆关节炎、吉兰-巴雷综合症、桥本甲状腺炎和心肌病。其他与抗体生产相关的疾病包括但不限于，多发性硬化症、异位性皮肤炎、血小板减少性紫斑、粒细胞缺乏症、自我免疫溶血性贫血、抗外源抗原的免疫反应如在怀孕过程中的胎盘A-B-O血液组、重症肌无力、I型糖尿病、格雷夫斯氏疾病和变应性应答。本发明的方法可以用于治疗有关B细胞或抗体的任何其他疾病或症状，例如移植排斥。
本文的抗CD22抗体一般以对所有药物化学师公知的药物配方的形式给药。参见例如，Remington的药物科学(第15版，Mack出版公司，Easton，Pa(1975))，特别是87章，Blaug，Seymour。这些配方包括例如粉末、糊、油膏、凝胶、蜡、油、脂、无水吸收碱、水中油或油中水乳剂、乳化聚乙(各种分子量的聚乙二醇)、半固体凝胶和含有聚乙二醇的半固体混合物。一般的配药形式是无菌的，等渗的，适于通过静脉内(i.v)途径给药的基于水的溶液。本发明的抗体在药物配方中的浓度可以在从小于约0.1％，通常或至少约2％到多至约20％到50％或更多的重量比例的范围内广泛变化，并且将主要通过液体体积、黏度等，根据选择的给药的特定方式来进行选择。
本发明的组分也可以通过脂质体给药。脂质体包括乳剂、泡沫、胶态分子团、不溶的单层、液体结晶、磷脂分散剂、薄层等等。在这些制剂中，待递送的本发明的组合物是作为脂质体的一部分，单独或结合一个结合了需要的靶的分子如抗体或和其他治疗性的或免疫原性的组合物结合而整合入的。用于本发明的脂质体是从形成标准的载体的脂类形成的，通常包括中性的和带负电的磷脂和甾类如胆固醇。脂的选择通常是考虑例如血液中的脂质体大小，脂质体的酸的不稳定性和稳定性来指导的。各种制备脂质体的方法是现有的，如Szoka等人，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.9467(1980)，美国专利号4,235,871，4,501,728，4,837,028和5,019,369中所述。
本发明的抗体可以单独或结合其他治疗方案来给药。例如，在B细胞恶性肿瘤的情况中，这样的方案或治疗方法包括化学治疗、放射性免疫治疗(RIT)、化学治疗和外部光束辐射(联合用药疗法，CMT)，联合用药疗法放射性免疫治疗(CMRIT)，或细胞因子单独或结合在一起等等。所以，本发明的抗CD22抗体可以结合CHOP(环磷酰胺-羟基阿霉素-长春碱(长春花新碱)-强的松龙)，治疗非霍金奇氏淋巴瘤的最常见的化学治疗方案。另外，本文的抗CD22抗体可以结合其他抗体来给药，包括抗CD19、抗CD20和其他抗CD22抗体，如LymphoCideTM(Immunomedics，Inc.)或LymphoCide Y-90。参见例如，Stein等人，Drugs of the future 18997-1004(1993)；Behr等人，临床癌症研究53304s-33314s，1999(卷)；Juweid等人，癌症研究，555899s-5907s，1995；Behr等人，肿瘤靶击332-40(1998)和美国专利号6,183,744，6,187,287和6,254,868。
本发明的治疗也可以与自身的免疫紊乱的其他疗法结合使用。在特定的实施方案中，用本发明的抗体以及抗CD20抗体(例如，Rituxan，IDEC药学)和/或抗炎症药物(例如，皮质类固醇)对受试者进行治疗。
在特定的实施方案中，根据本发明治疗的患者将在它们的恶性肿瘤B细胞上表达CD22。CD22抗原的存在可以通过标准技术来确认，如免疫组织化学、FACS、用标记的(例如，放射性标记)抗CD22抗体的结合试验。
本发明的抗体组合物可以利用给药的常规方式来给药，包括但不限于静脉内、动脉内、腹膜内、口服、淋巴内、肌肉内、真皮内、皮下和鼻内给药。在特定的实施方案中，给药的途径是通过大剂量地或连续地灌注一个时期，如连续地或大剂量地灌注，1星期一次或两次。在其他的特定的实施方案中，给药的途径是通过皮下注射。剂量依赖于被靶击的B细胞恶性肿瘤或自我免疫疾病的特性、形式和阶段、患者的性别、年龄、症状、过去的治疗历史、所用的其他疗法以及本领域技术人员通常考虑的其他因素。例如，非霍金奇氏淋巴瘤患者或有自身免疫疾病的患者可以接受大约50到大约1500mg/m2/星期，具体地是大约100到大约1000mg/m2/星期，更具体地是从大约150到大约500mg/m2/星期的如本文所述抗CD22抗体。
通过本领域已知的标准技术可以检测患者以追踪B细胞恶性肿瘤或特定的自身免疫疾病的临床适应症。例如，在B细胞恶性肿瘤的情况中，肿瘤退化(例如，在固体肿瘤的情况中的肿瘤大小)，利用抗CD22抗体的循环的B细胞或活检组织的表现型是可以检测的。
当关于人的治疗对本发明进行讨论后，可以理解本发明的抗体也发现可以用于兽医学中。例如，猫的恶性淋巴瘤经常发现在家养的猫中，并显示与人的非霍金奇氏淋巴瘤相似的特征(Bertone等人，Am.J.Epidemiol.156268-73(2002))。类似地，已知狗也形成了各种淋巴瘤。因此，本文的抗体可以用于治疗猫和狗的恶性淋巴瘤。自身免疫疾病的动物模型也是本领域公知的。给药的剂量和途径依赖于待治疗的动物种类，并且它们的测定是本领域普通兽医公知的。
本发明的另外的细节在下面的非限制性的实施例中提供。
实施例除非特别说明，根据制造商的说明使用这些实施例中提到的商业上现有的试剂。除了如下面的实施例中公开的生产之外，生产单克隆抗体HB22-7的杂交瘤(ATCC登记号HB11349)可以从美国典型培养物保藏中心，洛克菲勒，马里兰处得到。
实施例1
抗CD22单克隆抗体的生产根据Engel等人，免疫学杂志，154710(1993)和美国专利号，5,484,892中的方法生产单克隆抗体(mAbs)HB22-7(IgG2b)、HB22-23(IgG2a)、HB22-33(IgM)、HB22-5(IgG2a)、HB22-13(IgG2a)、HB22-22(IgA)和HB22-196。还参见Tuscano等人，血液941382-1392(1999)。但是，也可以利用其他方法。简要地说，HB22 mAbs是通过杂交瘤技术，利用以全长CD22 cDNA作为免疫原稳定转染的小鼠原B细胞系300.19来生产的。更具体地说，通过将NS-1骨髓瘤细胞与来自用小鼠原B细胞系免疫3次的Balb/c小鼠的脾细胞融合产生33个与CD22反应的mAbs，用全长的CD22 cDNA稳定转染所述原B细胞。生产与用CD22 cDNA转染的小鼠L细胞反应但不与未经转染的L细胞反应的mAb的杂交瘤，将其克隆两次并且用于生产上清液或腹水。利用小鼠单克隆抗体同型试剂盒(Amersham，Arlington Heights，III)确定mAb的同型。利用Affi-Gel蛋白质A MAPS II试剂盒纯化IgGmAb(Bio-Rad，Richmond，Calif)。通过相对于蒸馏水的扩展透析来沉淀腹水的含有优球蛋白组分的HB22-33mAb(IgM)，并且通过SDS-PAGE分析显示是基本纯净的mAb.如美国专利号5,484,892的表II所公开的，mAbsHB22-7、HB22-22、HB22-23和HB22-33完全阻断了(80-100％)Daudi、Raji和Jurkat细胞与CD22转染的COS细胞的结合。MAbsHB22-5、HB22-13、HB22-24和HB22-28部分地阻断黏连(20-80％)。
利用鉴定CD22上的5个不同的表位(表位A、B、C、D和E)(Schwartz-Albiez等人，“CD22抗原的碳水化合物成分可以通过糖基化途径的抑制剂来调节”，图3中在白细胞IV型中用图描述了Workshop mAb的结合特异性，见白细胞分化抗原，Knapp等人，编辑，牛津大学出版社，Oxford，65(1989))的“车间”CD22阻断的mAb和一组mAb进行的mAb的交叉抑制的研究，鉴定了介导配体结合的CD22上的区域。已经发现本文的三个单克隆抗体HB22-7、HB22-22和HB22-23非常接近地结合或结合CD22上的相同表位。这些和其他阻断性抗体的表位图谱的结果公开在Tedder等人，Annu.Rev.Immunol.15481-504(1997)中。不象被提供用于治疗的其他抗CD22抗体，本发明的阻断性抗体结合hCD22氨基酸序列的开始两个Ig类似区域内的表位。
实施例2Raji和Ramos淋巴瘤异种移植实验这一实施例描述了来自我们的独立的Raji和Ramos淋巴瘤异种移植试验的结果。裸小鼠异种移植是临床前评估的重要的工具。利用淋巴瘤细胞系Raji和Ramos的含有人非霍金奇氏淋巴瘤(NHL)异种移植体的裸小鼠已经证明了对于评估治疗NHL的效率的用途。(Buchsbaum等人，癌症研究，52(23)6476-6481(1992)和Flavell等人，癌症研究574824-4829(1997))。
材料和方法试剂。作为稀释的HCl中的氯化物购买无载体90Y(太平洋西北国家实验室，Richland，WA)和111In(Nordion，Kanata，Ontario，Canada)。Lym-1(Techniclone公司，Tustjn，CA)是用人Burkitt淋巴瘤细胞核免疫的小鼠中产生的IgG2amAb.Lym-1识别恶性肿瘤B细胞上的细胞表面31-35kD的抗原，并且与超过80％的人B细胞NHL反应。根据需要大于95％的纯单体IgG的说明书通过聚丙烯酰胺凝胶电泳来评估Lym-1的纯度。90Y-DOTA-肽-Lym-1如前所述进行制备(O’Donnell等人，Cancer.Biother.Radiopharm.13251-361(1998)。通过HPLC、TLC和纤维素乙酸电泳的评估显示90Y-DOTA-肽-Lym-1制备到98％的放射化学纯度，聚集含量小于5％。
如前所述，利用蛋白质A琼脂糖快速柱(Pharmacia)制备抗CD22mAb，HB22-7。通过HPLC和流式细胞计数器确定HB22-7纯度，发现纯度大于95％。通过基于流式细胞计数器的细胞凋亡诱导的分析(Apo-Tag，Pharmacia)确定生理特性，并发现它与前面公开的结果一致(Tuscano等人，出处同上)。利用ActiClean ETOX柱(Sterogene)实现内毒素的除去，最后内毒素水平确定为小于0.15个内毒素单位(EU)/mg mAb(Bio Whitaker)。Lym-1和HB22-7mAbs符合用于小鼠、病毒、支原体、真菌，和细菌污染以及内毒素、致热原的MAP(小鼠抗体生产)的指标，以及动物中的DNA含量和常用的安全测试。
细胞系和Scatchard分析。Raji和Ramos Burkitt淋巴瘤细胞系购自美国典型培养物保藏中心(ATCC，Gathersberg，MD)。如前所述，两个细胞系通过利用HB22-7 mAb的流式细胞计数方法对表达CD22进行染色(Tuscano等人，出处同上)。这些细胞系是以0.5×106个细胞/ml在用10％的胎牛血清补充的RPMI1640中维持的。如前所述进行应用Raji和Ramos细胞的Scatchard分析(Scatchard，G.，Ann.of NY AcadSci.51660(1947))。简要地说，将HB22-7用125I通过氯胺T方法进行标记(特异的活性是1.1μCi/ug)。利用系列稀释的未标记的HB22-7进行竞争性结合试验。
小鼠研究。将7-9周龄的雌性无胸腺的BALB/c nu/nu小鼠(HarlanSprague-Dawley)，根据加利福尼亚大学，Davis动物保护纲领，在正常的饮食加利眠宁和在无致病原的条件下喂养。每个笼子圈养5个小鼠。在对数生长期收集Raji或Ramos细胞；在每个小鼠的两侧皮下注射2.5-5.0×106个细胞。在移植后的3星期启动研究，此时肿瘤为28到328mm3。这些组包括未处理的，单独的125uCi的RIT，单独的1.4mg的HB22-7，或RIT和HB22-7的结合，在RIT之前，同时或之后24小时给药HB22-7。为了使周围辐射最小，垫草在用90Y-DOTA-肽-Lym-1处理后1星期，每天更换，以后每星期更换两次。
杀肿瘤效果。如半椭圆的公式所述计算肿瘤体积(DeNardo等人，临床癌症研究，371-79(1997))。在治疗前一天确定最初的肿瘤体积。对每组在测量的每天计算平均肿瘤体积；已经完全退化的肿瘤认为体积是零。将肿瘤应答分类如下C，治愈(肿瘤消失并在84天的研究结束时不再生长)；CR，完全退化(肿瘤消失至少7天，但后来又再生长)；PR，部分退化(至少7天内肿瘤体积下降50％或更多，然后再生长)。
统计分析。利用Kruskall Wails等级和检验以无反应、部分退化、完全退化和治愈的顺序评估治疗组中之间在应答中的差异。利用Kruskall Walis检验同时评估了存活时间。在3个时间点比较肿瘤体积1个月(26-29天)、2个月(54-57天)和在研究结束时(84天)。如果由于与肿瘤相关的原因杀死动物，最后的体积继续升高，并且用于后来的时间点的分析中。利用变化的分析测试治疗组中的差异。P值是双尾的，代表各义上的p值。通过只在被发现统计学上为显著差异的组的亚系内测试，提供多重比较的保护。
结果Scatchard分析利用Scatchard分析评估HB22-7的结合亲和力以及Ramos和Raji细胞上CD22受体的数目。测试细胞的最大结合百分率(Bmax)、解离常数(Ka)和每个细胞结合的抗体的数目。表1中显示的结果是两个实验的平均值。
表1
Scatchard分析(表1)显示在每个细胞的HB22-7抗体结合的数目和Bmax中有将近2.5倍的增加，在Raji细胞对Ramos细胞的Ka中有2倍的增加。
全身的放射自显影为了评估HB22-7特异性的肿瘤靶向，进行了用111In-21T-BAD-抗-CD22(HB22-7)注射患肿瘤的裸小鼠的全身的放射自显影。在注射后58小时杀死小鼠，做成切片并且进行放射自显影(图2)，如在前所述(DeNardo等人，癌症371-79(1997))。放射自显影显示在Raji肿瘤小鼠中强烈的肿瘤定位和在Ramos肿瘤小鼠中的中等的定位。这一靶向研究是与Scatchard分析一致的，显示与Raji比较每个Ramos细胞结合了较少的HB22-7。但是，Ramos肿瘤的快速生长，和类似的中心性坏死也可以归因于对Ramos的明显低级的靶击。
RIT和CMRIT的效果在RIT之前24小时、同时或之后24小时(图3)进行起始的试验，起始的试验(081500)使用单独或结合HB22-7(1.4mg)的125uCi的90Y-DOTA-肽-Lym-1。在这一试验中，每组有5个小鼠，例外的组是用RIT单独处理的，有9个小鼠和5个未处理的对照(在表2中小鼠数目制成了表格)。
表2
正如从用90Y-21T-BAD-Lym-1的相似的Raji异种移植的研究所预测的，单独的RIT导致到21天时最大的平均肿瘤体积的减少，然后肿瘤体积增加。用90Y-21T-BAD-Lym-1(RIT)和HB22-7(CMRIT)处理异种移植体显示更大的更持续的平均肿瘤体积的减少，这种减少当在24小时后与RIT同时给药HB22-7时最大。令人吃惊的是，单独给药HB22-7导致2-3星期的平均肿瘤体积的稳定，然后有一个逐步的持续的肿瘤体积的减少。
进行几个其他的重复实验，得到高度可再生的结果(表2)。汇编来自所有试验的数据，当用图比较时，显示结果与起始的研究高度一致(图4)。当在RIT的同时和之后24小时给药HB22-7时，在约21天时最初的肿瘤体积的减少又一次达到最大。在用HB22-7单独处理的小鼠中，在处理后2星期肿瘤生长开始稳定，接着逐步持续地肿瘤体积减少，在所有随后的实验中这种生长的稳定也得以重复。利用变化的分析，当在30天时检测所有的处理组，差异是高度显著性的(p＜0.001)。而当在60天时，在所有的处理组中体积减少的分析没有显示显著性的差异(p＝0.39)，在84天时的差异再次是显著性的(p＝0.003)。图中观察到的结果显示，在RIT/CMRIT组中的体积的减少的差异是高度可重复的，并且与HB单独处理和未处理的对照不同，但是在所有评估的时间点(30，60和84天)只有RIT处理组(包括CMRIT)中体积的减少的比较没有发现明显的差异(p≥0.5)。另外的CMRIT实验是在RIT48和72小时后HB22-7给药进行。当与其中在RIT同时和24小时后给予HB22-7的实验比较时，在给药RIT和HB22-7之间延长的间歇没有导致肿瘤体积减少的提高，(数据未显示)。
应答和治愈的速率是与对肿瘤体积的处理效果一致的(图5)。用90Y-DOTA-肽-Lym-1单独处理产生48％的PR、13％的CR和13％的治愈速度。在CMRIT组中，当HB22-7和RIT同时给药产生45％PR、15％CR和25％的治愈时，整个应答速度最大。但是，在CMRIT组中，当在RIT后24小时给药HB22-7时，治愈速度是最大的(39％)，这是与未处理的(29％)、RIT单独的(13％)，24小时前的(10％)和同时的(25％)处理组中观察到的治愈速度比较得到的。当利用Kruskal Walis试验在所有的处理组中检测应答的程度时(治愈比CR更好，比PR更好)，差异在统计学上是显著性的(p＝0.01)。相对未处理的对照的个别的比较都是统计学上显著性的(p＜0.05)，例外的RIT单独(p＝0.06)和HB22-7是给药于RIT(p＝0.16)之前24小时的。当只有积极的处理组(RIT单独，CMRIT和HB22-7)的比较并非显著性差异(p＝0.18)，用HB22-7同时和在24小时后处理的CMRIT组具有最好的观察到的应答的图谱。有趣的是用HB22-7单独处理的组具有最高的治愈速度(47％)，这一速度在与未处理的对照比较时为显著性的提高(p＜0.05)。
肿瘤体积退化和治愈速度转化成存活的相似方式。在84天研究时期结束时，38％和42％的未处理和RIT单独的组分别存活(图6)。在CMRIT处理组中，当在RIT同时和以后24小时给药HB22-7时，存活分别提高到67％和50％。利用Kruskal Walis的存活分析对于比较所有的组是显著性的(p＜0.05)。与应答速率分析相似，在RIT组中的存活的比较没有发现显著性的差异(p＝0.41)，但是，当HB22-7在RIT同时或以后24小时给药时，一致观察到这些组中有最好的存活。
在用HB22-7单独处理的组中观察到最好的整体存活，76％，当与未处理的对照比较时有显著性的差异(p＝0.02)。
毒性分别通过血液计数和小鼠重量评估血液学的和非血液学的毒性(图7a-c)。在RIT处理组中的WBC和血小板的最低点分别在14-20和10-14天。WBC和血小板恢复分别大约在处理后的28和21天。WBC和血小板的最低点与利用150uCi的90Y-21T-BAD-Lym-1的前面的研究中的观察结果一致。RIT的血液学毒性没有被HB22-7的协同给药改变。在HB22-7单独处理的小鼠中没有检测到血液学毒性。在所有处理组中的单核细胞计数的分析显示HB22-7对RIT介导的单核细胞的最低点没有影响(数据未显示)。通过小鼠体重的改变评估非血液学毒性，并且发现在所有的处理组中是相当的(图8)。在任何处理组中没有因为毒性的死亡。
90Y-DOTA-肽-Lym-1药物动力学用或不用HB22-7的Raji-肿瘤的小鼠中血液和整个身体90Y-DOTA-肽-Lym-1的清除是相似的(图9)。血液生物学T1/2α对于RIT是1.4小时，对于之前24小时、同时和之后24小时的各组分别是2.2、2.4和2.0小时。血液生物学T1/2β对于RIT单独的组是127小时，对于之前24小时、同时和之后24小时的各组分别是133、87和103小时。全身的T1/2对于RIT单独的组是246小时，对于之前24小时、同时和之后24小时的各组分别是207、207和196小时。在RIT中加入HB22-7不改变90Y-DOTA-肽-Lym-1的药物动力学。
讨论设计Raji异种移植研究以确定当与RIT结合时抗CD22mAb(HB22-7)是否将产生其他的或协同的效果，以便增强细胞凋亡和/或低剂量速率辐射诱导的DNA损伤。当其用于评估单独利用90Y-DOTA-肽-Lym-1RIT的RIT的毒性和效率时，已经证明Raji异种移植裸小鼠模型是有用的(O’Donnell等人，癌症生物治疗和放射药物动力学，13351-361(1998))。在这一临床前的模型中的应答转化成人临床实验中的明显的效率(O’Donnell等人，抗癌研究.203647-55(2000)；O’Donnell等人，核酸医学杂志，40216(1999)(摘要))。
在这一实施例中所述的研究中，在90Y-DOTA-肽-Lym-1(125uCi)中加入抗CD22 mAb HB22-7增强了RIT的效率，而没有任何毒性的改变。以前的用150和200uCi的90Y-21T-BAD-Lym-1的Raji异种移植的研究产生的应答和治愈率，是可以与在本研究中观察到的那些比较的(O’Donnel等人，(1998)，出处同上)。根据这些以前利用2IT-BAD联结子的研究，选择125uCi剂量的90Y-DOTA-肽-Lym-1。当利用2IT-BAD的以前的研究证明利用200uCi剂量有最大的效率时，选择125uCi是基于这样的假说，即HB22-7将与RIT是协同的或增益性的，较低的剂量将可以更好地评估这些效率。这一实施例的研究利用了新的衔接物(DOTA-肽)，该衔接物过去未曾在淋巴瘤异种移植模型中检测到。设计DOTA肽衔接物用于增强未结合的放射药物的肝降解，从而导致更令人满意的生物分布。尽管肿瘤特异吸收在本研究中没有详细评估，用125uCi的90Y-DOTA-肽-Lym-1单独观察到的毒性情况是可接受的，无治疗相关的致死率并具有可预测的白细胞和血小板最低点。
根据体外研究选择HB22-7，这些研究证明了原细胞程序死亡和信号效应(Tuscano等人，血液，941382-1392(1999))。使用的HB22-7的治疗剂量是根据经验的，但是，它是根据在体外显示对诱导细胞凋亡有效的量，并且将此推及到小鼠模型中。另外，当配制HB22-7的剂量时考虑到用于人临床试验的Rituximab剂量的等同物(当在人相对于小鼠中调整体表面积差异时)。根据这是唯一现有的显示淋巴瘤治疗效果的裸mAb的事实使用Rituximab的剂量的近似值，假定Rituximab的最佳剂量目前尚不明确。
设计研究来评估单独的HB22-7、RIT和HB22-7的结合以及三个不同顺序的结合的效果。单独用90Y-DOTA-肽-Lym-1观察到的肿瘤体积的减少是与用90Y-21T-BAD-Lym-1的与应答的时间、数量级和持久度有关的前面的研究一致的(O’Donnel等人，1998，出处同上)。单独的RIT导致了在治疗后14天肿瘤体积约有50％的减少。当在最大的体积减少的大约的时间点(21-30天)时评估时，给RIT添加HB22-7明显地以顺序特异的方式增强了应答的程度。好像当在RIT同时或之后24小时给药时，加入HB22-7是最有效的。明显的体积减少的模式是高度可再复的。独立的重复试验显示相似的肿瘤体积减少的模式和程度。肿瘤体积的进一步减少转变成优良的应答速度和存活率。单独的RIT产生13％的CR和13％的治愈，当与RIT同时给药时，加入HB22-7提高治愈速度25％，当在RIT之后24小时给药HB22-7时，提高治愈速度39％。
这是第一次，将第二种单克隆抗体与RIT结合，并且显示了利用具有已经充分确定的生理特性的单克隆抗体或其他试剂的潜力，所述特性为可以提高效率而不增强毒性。
令人惊奇地，当与所有其他处理组比较时，用单独的HB22-7处理小鼠产生显著的肿瘤体积的减少，以及优良的治愈和存活率。几个独立的试验再次产生了与延迟的最初的肿瘤体积的稳定性高度一致的结果，然后，肿瘤体积的减少约在处理后14天开始。这转变成在任何处理组中观察到的最佳的治愈和整体存活率。
总之，当单独给药时，与其他处理方案包括CMRIT相比，本发明的抗体已经被证明能提供在肿瘤体积的减少、治愈速率和整体存活方面的上好的结果，所述CMRIT目前被视为最先进的治疗NHL的治疗方法。
实施例3抗CD22抗体的序列分析VH和轻链基因的利用利用Rneasy Mini试剂盒(Qiagen Chatsworth，CA)，从1-10×105杂交瘤细胞中提取细胞质RNA.利用寡聚dT引物和Surperscript试剂盒(Gibco BRL，Gaithersburg，MD)由细胞质RNA合成cDNA第一链。利用1ul的cDNA作为VH基因的PCR扩增的模板。在100ul的体积的反应混合物中进行PCR扩增，反应混合物由10mM Tris-HCl(pH8.3)、50mM KCl、1.5mM MgCl2、200uM dNTP(Perkin Elmer，Foster城，CA)、50pmol各个引物和5U的Taq聚合酶(ISC生物表达，Kaysville，UT)组成。扩增进行30个循环(94℃1分钟，58℃一分钟，72℃一分钟；热循环仪，Perkin Elmex)。VH基因是利用混杂的有意义的5’VH引物(Ms VHE5‘GGG AAT TCG AGG TGC AGC TGC AGGAGT CTG G3’；SEQ ID NO2)如前所述(Kantor等人，免疫学杂志1581175-86(1996))，和与Cμ编码区互补的反义引物(引物Cμ-in5’-GAG GGG GAC ATT TGG GAA GGA CTG3’；SEQ ID NO3)，或Cγ区(引物Cγ15’GAG TTC CAG GTC ACT GTC ACT GGC 3’；SEQ IDNO4)来扩增的。
利用有意义的Vκ引物[5’ATG GGC(AT)TC AAG ATG GAG TCACA(GT)(AT)(CT)(CT)C(AT)G G3’；SEQ ID NO5]和一个Cλ反义引物(5’ACT GGA TGG TGG GAA GAT G3’；SEQ ID NO6)扩增轻链CDNA.
利用不同的有意义的Vκ引物(5’ATG AAG TTG CCT GTT AGGCTG TTG GTG CTG 3’；SEQ ID NO7)扩增HB22-23轻链序列。
利用QIAquick凝胶纯化试剂盒(Qiagen)从琼脂糖凝胶中纯化扩增的PCR产物，并且在扩增后利用Perkin Elmer Dye末端测序系统，以Ampli Taq DNA聚合酶和最初的PCR扩增的相同引物利用ABI 377PRISM DNA序列仪在两个方向直接测序用于。将所有的VH和轻链区域在有意义和反义DNA链上都进行完全测序。
抗CD22单克隆抗体HB22-5、HB22-7、HB22-13、HB22-23和HB22-196的VH和Vκ氨基酸序列的比对如图10和17所示。图11-16显示来自杂交瘤HB22-5(SEQ ID NOS8和9)，HB22-7(SEQ ID NOS10和11)；HB22-13(SEQ ID NOS12和13)；HB22-23(SEQ ID NOS14和15)；HB22-33(SEQ ID NOS16和17)；和HB-22-196(SEQ ID NOS18和19)的抗CD22 Abs的重链VH-D-JH的接合的核苷酸和氨基酸序列。图18-33显示来自杂交瘤HB22-5(SEQ ID NOS20和21)；HB22-7(SEQID NOS22和23)；HB22-13(SEQ ID NOS24-25)，HB22-23(SEQ IDNO26-27)；HB22-33(SEQ ID NOS28-29)；和HB22-196(SEQ IDNOS30和31)的抗CD22Abs的κ轻链V-J恒定区接合的核苷酸和推断的氨基酸序列。
序列表<110>Duke UniversityTedder，Thomas F.
<120>自身免疫疾病的药剂和治疗方法<130>5405.306WO<140>PCT/US03/05549<141>2003-02-21<150>US60/420,472<151>2002-10-21<150>US60/359,419<151>2002-02-21<160>31<170>PatentIn version 3.2<210>1<211>847<212>PRT<213>人<400>1Met His Leu Leu Gly Pro Trp Leu Leu Leu Leu Val Leu Glu Tyr Leu1 5 10 15Ala Phe Ser Asp Ser Ser Lys Trp Val Phe Glu His Pro Glu Thr Leu20 25 30Tyr Ala Trp Glu Gly Ala Cys Val Trp Ile Pro Cys Thr Tyr Arg Ala35 40 45Leu Asp Gly Asp Leu Glu Ser Phe Ile Leu Phe His Asn Pro Glu Tyr50 55 60
Asn Lys Asn Thr Ser Lys Phe Asp Gly Thr Arg Leu Tyr Glu Ser Thr65 70 75 80Lys Asp Gly Lys Val Pro Ser Glu Gln Lys Arg Val Gln Phe Leu Gly85 90 95Asp Lys Asn Lys Asn Cys Thr Leu Ser Ile His Pro Val His Leu Asn100 105 110Asp Ser Gly Gln Leu Gly Leu Arg Met Glu Ser Lys Thr Glu Lys Trp115 120 125Met Glu Arg Ile His Leu Asn Val Ser Glu Arg Pro Phe Pro Pro His130 135 140Ile Gln Leu Pro Pro Glu Ile Gln Glu Ser Gln Glu Val Thr Leu Thr145 150 155 160Cys Leu Leu Asn Phe Ser Cys Tyr Gly Tyr Pro Ile Gln Leu Gln Trp165 170 175Leu Leu Glu Gly Val Pro Met Arg Gln Ala Ala Val Thr Ser Thr Ser180 185 190Leu Thr Ile Lys Ser Val Phe Thr Arg Ser Glu Leu Lys Phe Ser Pro195 200 205Gln Trp Ser His His Gly Lys Ile Val Thr Cys Gln Leu Gln Asp Ala210 215 220Asp Gly Lys Phe Leu Ser Asn Asp Thr Val Gln Leu Asn Val Lys His225 230 235 240
Thr Pro Lys Leu Glu Ile Lys Val Thr Pro Ser Asp Ala Ile Val Arg245 250 255Glu Gly Asp Ser Val Thr Met Thr Cys Glu Val Ser Ser Ser Asn Pro260 265 270Glu Tyr Thr Thr Val Ser Trp Leu Lys Asp Gly Thr Ser Leu Lys Lys275 280 285Gln Asn Thr Phe Thr Leu Asn Leu Arg Glu Val Thr Lys Asp Gln Ser290 295 300Gly Lys Tyr Cys Cys Gln Val Ser Asn Asp Val Gly Pro Gly Arg Ser305 310 315 320Glu Glu Val Phe Leu Gln Val Gln Tyr Ala Pro Glu Pro Ser Thr Val325 330 335Gln Ile Leu His Ser Pro Ala Val Glu Gly Ser Gln Val Glu Phe Leu340 345 350Cys Met Ser Leu Ala Asn Pro Leu Pro Thr Asn Tyr Thr Trp Tyr His355 360 365Asn Gly Lys Glu Met Gln Gly Arg Thr Glu Glu Lys Val His Ile Pro370 375 380Lys Ile Leu Pro Trp His Ala Gly Thr Tyr Ser Cys Val Ala Glu Asn385 390 395 400Ile Leu Gly Thr Gly Gln Arg Gly Pro Gly Ala Glu Leu Asp Val Gln405 410 415
Tyr Pro Pro Lys Lys Val Thr Thr Val Ile Gln Asn Pro Met Pro Ile420 425 430Arg Glu Gly Asp Thr Val Thr Leu Ser Cys Asn Tyr Asn Ser Ser Asn435 440 445Pro Ser Val Thr Arg Tyr Glu Trp Lys Pro His Gly Ala Trp Glu Glu450 455 460Pro Ser Leu Gly Val Leu Lys Ile Gln Asn Val Gly Trp Asp Asn Thr465 470 475 480Thr Ile Ala Cys Ala Arg Cys Asn Ser Trp Cys Ser Trp Ala Ser Pro485 490 495Val Ala Leu Asn Val Gln Tyr Ala Pro Arg Asp Val Arg Val Arg Lys500 505 510Ile Lys Pro Leu Ser Glu Ile His Ser Gly Asn Ser Val Ser Leu Gln515 520 525Cys Asp Phe Ser Ser Ser His Pro Lys Glu Val Gln Phe Phe Trp Glu530 535 540Lys Asn Gly Arg Leu Leu Gly Lys Glu Ser Gln Leu Asn Phe Asp Ser545 550 555 560Ile Ser Pro Glu Asp Ala Gly Ser Tyr Ser Cys Trp Val Asn Asn Ser565 570 575Ile Gly Gln Thr Ala Ser Lys Ala Trp Thr Leu Glu Val Leu Tyr Ala580 585 590
Pro Arg Arg Leu Arg Val Ser Met Ser Pro Gly Asp Gln Val Met Glu595 600 605Gly Lys Ser Ala Thr Leu Thr Cys Glu Ser Asp Ala Asn Pro Pro Val610 615 620Ser His Tyr Thr Trp Phe Asp Trp Ash Asn Gln Ser Leu Pro His His625 630 635 640Ser Gln Lys Leu Arg Leu Glu Pro Val Lys Val Gln His Ser Gly Ala645 650 655Tyr Trp Cys Gln Gly Thr Asn Ser Val Gly Lys Gly Arg Ser Pro Leu660 665 670Ser Thr Leu Thr Val Tyr Tyr Ser Pro Glu Thr Ile Gly Arg Arg Val675 680 685Ala Val Gly Leu Gly Ser Cys Leu Ala Ile Leu Ile Leu Ala Ile Cys690 695 700Gly Leu Lys Leu Gln Arg Arg Trp Lys Arg Thr Gln Ser Gln Gln Gly705 710 715 720Leu Gln Glu Asn Ser Ser Gly Gln Ser Phe Phe Val Arg Asn Lys Lys725 730 735Val Arg Arg Ala Pro Leu Ser Glu Gly Pro His Ser Leu Gly Cys Tyr740 745 750Asn Pro Met Met Glu Asp Gly Ile Ser Tyr Thr Thr Leu Arg Phe Pro755 760 765
Glu Met Asn Ile Pro Arg Thr Gly Asp Ala Glu Ser Ser Glu Met Gln770 775 780Arg Pro Pro Arg Thr Cys Asp Asp Thr Val Thr Tyr Ser Ala Leu His785 790 795 800Lys Arg Gln Val Gly Asp Tyr Glu Asn Val Ile Pro Asp Phe Pro Glu805 810 815Asp Glu Gly Ile His Tyr Ser Glu Leu Ile Gln Phe Gly Val Gly Glu820 825 830Arg Pro Gln Ala Gln Glu Asn Val Asp Tyr Val Ile Leu Lys His835 840 845<210>2<211>31<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成的寡核苷酸引物<400>2gggaattcga ggtgcagctg caggagtctg g31<210>3<211>24<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成的寡核苷酸引物<400>3gagggggaca tttgggaagg actg24
<210>4<211>24<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成的寡核苷酸引物<400>4gagttccagg tcactgtcac tggc24<210>5<211>31<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成的寡核苷酸引物<220>
<221>misc_特征<222>(7)..(7)<223>n为A或T<220>
<221>misc_特征<222>(24)..(24)<223>n为G或T<220>
<221>misc_特征<222>(25)..(25)<223>n为A或T<220>
<221>misc_特征<222>(26)..(26)<223>n为C或T<220>
<221>misc_特征<222>(27)..(27)<223>n为C或T<220>
<221>misc_特征<222>(29)..(29)<223>n为A或T<400>5atgggcntca agatggagtc acannnncng g31<210>6<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成的寡核苷酸引物<400>6actggatggt gggaagatg 19<210>7<211>30<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成的寡核苷酸引物<400>7atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg 30<210>8<211>357<212>DNA<213>人<400>8gaggtgcagc tgcaggagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggagcttc aatgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact gactacacca tgaactgggt gaagcagagc120catggaaaga accttgagtg gattggactt cttcatcctt tcaatggtgg tactagctac180aaccagaagt tcaagggcaa ggccacatta tctgtagaca agtcatccag cacagccttc240atggagctcc tcagtctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgtgc aagagggaca300ggtcggaact atgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 357<210>9<211>119<212>PRT<213>人<400>9Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala1 5 10 15Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr20 25 30Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile35 40 45Gly Leu Leu His Pro Phe Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe50 55 60Lys Gly Lys Ala Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe65 70 75 80Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys85 90 95Ala Arg Gly Thr Gly Arg Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110Thr Ser Val Thr Val Ser Ser115<210>10<211>351<212>DNA<213>人<400>10gaggtgcagc tgcaggagtc tggacctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60acatgcaccg tctcagggtt ctcattaagc gactatggtg taaactgggt tcgccagatt120ccaggaaagg gtctggagtg gctgggaata atatggggtg atggaaggac agactataat180tcagctctca aatccagact gaacatcagc aaggacaact ccaagagcca agttttcttg240aaaatgaaca gtctgaaagc tgatgacaca gccaggtact actgtgccag agcccccggt300aatagggcta tggagtactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc a 351<210>11<211>117<212>PRT<213>人<400>11Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln1 5 10 15Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr20 25 30Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ile Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu35 40 45
Gly Ile Ile Trp Gly Asp Gly Arg Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys50 55 60Ser Arg Leu Asn Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu65 70 75 80Lys Met Asn Ser Leu Lys Ala Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala85 90 95Arg Ala Pro Gly Asn Arg Ala Met Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser100 105 110Val Thr Val Ser Ser115<210>12<211>363<212>DNA<213>人<400>12gaggtgcagc tgcaggagtc tggaggaggc ttggtacagc ctgggggttc tctgagactc 60tcctgtgcaa cttctgggtt caccttcatt gattactaca tgaactgggt ccgccagcct120ccaggaaagg cacttgagtg gttgggtttt attaaaaaca aatttaatgg ttacacaaca180gaatacaata catctgtgaa gggtcggttc accatctcca gagataattc ccaaagcatc240ctctatcttc aaatgaacac cctgagagct gaggacagtg ccacttatta ctgtgcaaga300gggctgggac gtagctatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc360tca 363<210>13<211>121
<212>PRT<213>人<400>13Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ile Asp Tyr20 25 30Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu35 40 45Gly Phe Ile Lys Asn Lys Phe Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Thr50 55 60Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Ser Ile65 70 75 80Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr85 90 95Tyr Cys Ala Arg Gly Leu Gly Arg Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly100 105 110Gln Gly Thr Set Val Thr Val Ser Ser115 120<210>14<211>357<212>DNA<213>人<400>14gaggtgcagc tgcaggagtc tggaggaggg cttggtgcaa cctggagatc catgaaactc60
tcctgtgttg cctctggatt cactttcagt tactactgga tgaactgggt ccgccagtct120ccagagaagg ggcttgagtg gattgctgaa attagattga aatctaataa ttatgcaaca180cattatgcgg agtctgtgaa agggaggttc accatctcaa gagatgattc caaaagtagt240gtctacctgc aaatgaacaa cttaagagct gaagacactg gcatttatta ctgtaccagg300tatgatggtt cctcccggga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctca 357<210>15<211>119<212>PRT<213>人<400>15Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gly Ala Thr Trp Arg1 5 10 15Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr20 25 30Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile35 40 45Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu50 55 60Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser65 70 75 80Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr85 90 95Tyr Cys Thr Arg Tyr Asp Gly Ser Ser Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser115<210>16<211>354<212>DNA<213>人<400>16gaggtgcagc tgcaggagtc tggacctggc ctcgtgaaac cttctcagtc tctgtctctc 60acctgctctg tcactggcta ctccatcacc agtggttatt actggaactg gatccggcag120ccaggaaaca aactggaatg gatgggctac attaggtacg acggtagcaa taactaccca180tctctcaaaa atcgaatctc catcactcgt gacacatcta agaaccagtt tttcaagttg240ctgaagttga attctgtgac tactgaggac acagctacat attactgtgc aagagggggg300attacggttg ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca 354<210>17<211>118<212>PRT<213>人<400>17Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln1 5 10 15Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly20 25 30Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp35 40 45
Met Gly Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu50 55 60Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe65 70 75 80Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg Gly Gly Ile Thr Val Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr100 105 110Ser Val Thr Val Ser Ser115<210>18<211>366<212>DNA<213>人<220>
<221>misc_特征<222>(173)..(173)<223>n为I<400>18gaggtgcagc tgcaggagtc tggacctgac ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60tcctgtaagg cttctggtta ctcattcatt ggctattaca tgcactggct gaagcagagc 120catggaaaga gccttgagtg gattggagct gttaatccta acactgctgg tcntacctac 180aaccagaggt tcaaggacaa ggccatatta actgtagaca agtcatccaa cacagcctat 240atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgttc aagagtggac 300tatgatgact acgggtactg gttcttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 360
tcctca 366<210>19<211>122<212>PRT<213>人<400>19Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala1 5 10 15Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Gly Tyr20 25 30Tyr Met His Trp Leu Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile35 40 45Gly Arg Val Asn Pro Asn Thr Ala Gly Leu Thr Tyr His Gly Lys Ser50 55 60Leu Glu Trp Ile Gly Arg Val Asn Pro Asn Thr Ala Gly Leu Thr Tyr65 70 75 80Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ser Arg Val Asp Tyr Asp Asp Tyr Gly Tyr Trp Phe Phe Asp Val Trp100 105 110Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser115 120<210>20
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65 70 75 80Arg Phe Thr Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Asn85 90 95Thr Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr100 105 110Ser Ser Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg115 120 125Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val130 135<210>22<211>410<212>DNA<213>人<400>22aagatggagt cacagaccca ggtcttcgta tttctactgc tctgtgtgtc tggtgctcat 60gggagtattg tgatgaccca gactcccaaa ttcctgcttg tatcagcagg agacaggatt120accttaacct gcaaggccag tcagagtgtg actaatgatg tagcttggta ccaacagaag180ccagggcagt ctcctaaact gctgatatac tatgcatcca atcgctacac tggagtccct240gatcgcttca ctggcagtgg atatgggacg gatttcactt tcaccatcag cactgtgcag300gctgaagacc tggcagttta tttctgtcag caggattata ggtctccgtg gacgttcggt360ggaggcacca agctggaaat caaacgggct gatgctgcac caactgtatc 410<210>23<211>135<212>PRT<213>人
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85 90 95Thr Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr100 105 110Ser Ser Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg115 120 125Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val130 135<210>26<211>410<212>DNA<213>人<400>26aagatggagt cacagaccca ggtcttcgta tttctactgc tctgtgtgtc tggtgctcat 60gggagtattg tgatgaccca gactcccaaa ttcctgcttg tatcagcagg agacagggtc120accataagct gcaaggccag tcagagtgtg agtaatgatg tagcttggta ccaacagaag180ccagggcagt ctcctaaact gctgatatac tatgcatcca agcgctatac tggagtccct240gatcgcctca ctggcagtgg atatgggacg gatttcactt tcaccatcag cactgtgcag300gctgaagacc tggcagttta tttctgtcag caggatcata gctatccgtg gacgttcggt360ggaggcacca agctggagat caaacgggct gatgctgcac caactgtatc 410<210>27<211>135<212>PRT<213>人<400>27Met Glu Ser Gln Thr Gln Val Phe Val Phe Leu Leu Leu Cys Val Ser
1 5 10 15Gly Ala His Gly Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu20 25 30Val Ser Ala Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser35 40 45Val Ser Asn Asp Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro50 55 60Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Lys Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp65 70 75 80Arg Leu Thr Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser85 90 95Thr Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp His100 105 110Ser Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg115 120 125Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val130 135<210>28<211>419<212>DNA<213>人<400>28atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cagcagtgat 60gttgtgatga cccaaactcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc120
tcttgcagat ctagtcagag ccttgtacac agtaatggaa acacctattt acattggtac180ctgcagaagc caggccagtc tccaaagctc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct240ggggtcccag ataggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagatcagc300agagtggagg ctgaggatct gggagtttat ttctgctctc aaagtacaca tgttccgtac360acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaacgggctg atgctgcacc aactgtatc 419<210>29<211>139<212>PRT<213>人<400>29Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala1 5 10 15Ser Ser Ser Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val20 25 30Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu35 40 45Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro50 55 60Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser65 70 75 80Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr85 90 95Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys
100 105 110Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu115 120 125Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val130 135<210>30<211>410<212>DNA<213>人<400>30aagatggagt cacagaccca ggtcttcata tccatactgc tctggttata tggagctgat 60gggaacattg taatgaccca atctcccaaa tccatgtcca tgtcagtagg agagagggtc120accttgacct gcaaggccag tgagaatgtg gttacttatg tttcctggta tcaacagaaa180ccagagcagt ctcctaaact gctgatatac ggggcatcca accggtacac tggggtcccc240gatcgcttca caggcagtgg atctgcaaca gatttcactc tgaccatcag cagtgtgcag300gctgaagacc ttgcagatta tcactgtgga cagggttaca gctatccgta cacgttcgga360ggggggacca agctggaaat aaaacgggct gatgctgcac caactgtatc 410<210>31<211>135<212>PRT<213>人<400>31Met Glu Ser Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Ile Leu Leu Trp Leu Tyr1 5 10 15Gly Ala Asp Gly Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser
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1.一种治疗被诊断为自身免疫疾病的人患者的方法，包括(1)对所述的人患者给药有效量的阻断性抗CD22单克隆抗体，其中所述的抗体包含含有与SEQ ID NO9(HB22-5 VH序列)的氨基酸1到100；或SEQID NO11(HB22-7 VH序列)的氨基酸1到97；或SEQ ID NO13(HB22-13VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ ID NO15(HB22-23 VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ ID NO17(HB22-33 VH序列)的氨基酸1到98；或SEQ ID NO19(HB22-196 VH序列)的氨基酸1到100的序列至少具有大约95％的序列同一性的VH序列的重链；和(2)检测所述的自身免疫疾病对所述治疗的应答。
2.权利要求1所述的方法，其中所述的抗体包含含有与SEQ IDNO11(HB22-7 VH序列)的氨基酸1到97；或SEQ ID NO15(HB22-23VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ ID NO17(HB22-33 VH序列)的氨基酸1到98的序列至少具有大约95％的序列同一性的VH序列的重链。
3.权利要求2所述的方法，其中所述的抗体包含选自SEQ IDNO11(HB22-7 VH序列)的氨基酸1到97，SEQ ID NO15(HB22-23 VH序列)的氨基酸1到100；和SEQ ID NO17(HB22-33 VH序列)的氨基酸1到98的VH序列。
4.一种治疗被诊断为自身免疫疾病的人患者的方法，包括(1)对所述的人患者给药有效量的阻断性抗CD22单克隆抗体，其中所述的抗体包含含有与SEQ ID NO21(HBA22-5 Vκ序列)；或SEQ IDNO23(HB22-7 Vκ序列)；或SEQ ID NO25(HB22-13 Vκ序列)；或SEQID NO27(HB22-23 Vκ序列)；或SEQ ID NO29(HB22-33 Vκ序列)；或SEQ ID NO31(HB22-196 Vκ序列)的氨基酸序列至少具有大约95％的序列同一性的Vκ序列的轻链；和(2)检测所述的自身免疫疾病对所述的治疗的应答。
5.权利要求4所述的方法，其中所述的抗体包含含有与SEQ IDNO23(HB22-7 Vκ序列)；或SEQ ID NO27(HB22-23 Vκ序列)；或SEQID NO29(HB22-33 Vκ序列)的氨基酸序列至少具有大约95％的序列同一性的Vκ序列的轻链。
6.权利要求5所述的方法，其中所述的抗体包含选自SEQ IDNO23(HB22-7 Vκ序列)；SEQ ID NO27(HB22-23 Vκ序列)；和SEQ IDNO29(HB22-33 Vκ序列)的氨基酸序列的Vκ序列。
7.权利要求1所述的方法，其中所述的抗体包含选自SEQ IDNO11(HB22-7 VH序列)的氨基酸1到97和SEQ ID NO23(HB22-7 Vκ序列)的氨基酸序列；SEQ ID NO15(HB22-23 VH序列)的氨基酸1到100和SEQ ID NO27(HB22-23 VH序列)；和SEQ ID NO17(HB22-33 VH序列)的氨基酸1到98和SEQ ID NO29(HB22-33 Vκ序列)的氨基酸序列的VH和Vκ序列。
8.权利要求1所述的方法，其中所述的治疗没有伴随任何其他自身免疫疾病的治疗。
9.权利要求1所述的方法，其中所述的抗体是完整的抗体的一个片断。
10.权利要求9所述的方法，其中所述的抗体选自Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片断、双体、线性抗体、单链抗体分子和由抗体片断形成的多重特异性抗体。
11.权利要求1所述的方法，其中所述的抗体包含抗原特异性，并且能有效地结合CD22分子的两个开始的Ig类似区域，或结合在SEQID NO1的天然的人CD22(hCD22)的开始的两个Ig类似区域内的一个表位，并进一步具有一种另外的抗原特异性。
12.权利要求10所述的方法，其中所述的抗体是双特异性抗体。
13.权利要求12所述的方法，其中所述的抗体另外结合了CD22的另一个表位。
14.权利要求1所述的方法，其中所述的抗体是嵌合的。
15.权利要求1所述的方法，其中所述的抗体是人源化的。
16.权利要求1所述的方法，其中所述的抗体是人的。
17.权利要求1所述的方法，其中所述的抗体是在静脉内给药的。
18.权利要求17所述的方法，其中所述的抗体是每周通过静脉内输注给药的。
19.权利要求1所述的方法，其中所述的人患者另外给药一种抗CD20抗体。
20.权利要求7所述的方法，其中所述的抗体是嵌合的。
21.权利要求7所述的方法，其中所述的抗体是人源化的。
22.权利要求7所述的方法，其中所述的抗体是人的。
23.权利要求4所述的方法，其中所述的治疗没有伴随任何其他自身免疫疾病的治疗。
24.权利要求4所述的方法，其中所述的抗体是完整抗体的片断。
25.权利要求24所述的方法，其中所述的抗体选自Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片断、双体、线性抗体、单链抗体分子和由抗体片断形成的多特异性抗体。
26.权利要求4所述的方法，其中所述的抗体包括抗原特异性并能有效地结合CD22分子的开始的两个Ig类似区域，或结合SEQ ID NO1的天然人CD22(hCD22)的开始两个Ig类似区域内的表位，并且进一步具有一种另外的抗原特异性。
27.权利要求25所述的方法，其中所述的抗体是双特异性抗体。
28.权利要求27所述的方法，其中所述的抗体另外结合了CD22的另一个表位。
29.权利要求4所述的方法，其中所述的抗体是嵌合的。
30.权利要求4所述的方法，其中所述的抗体是人源化的。
31.权利要求4所述的方法，其中所述的抗体是人的。
32.权利要求4所述的方法，其中所述的抗体是经静脉内给药的。
33.权利要求32所述的方法，其中所述的抗体是每周静脉内输注给药的。
34.权利要求4所述的方法，其中所述的人患者另外给药一种抗CD20抗体。
35.一种包含编码具有与SEQ ID NO9(HB22-5 VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ ID NO11(HB22-7 VH序列)的氨基酸1到97；或SEQID NO13(HB22-13 VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ IDNO15(HB22-23 VH序列)的氨基酸1到100；或SEQ ID NO17(HB22-33 VH序列)的氨基酸1到98；或SEQ ID NO19(HB22-196 VH序列)的氨基酸1到100的序列至少有大约95％的序列同一性的VH序列的抗体重链可变区的核酸的分离的核酸分子。
36.一种包含编码具有与SEQ ID NOA21(HB22-5 Vκ序列)；或SEQ ID NO23(HB22-7 Vκ序列)；或SEQ ID NO25(HB22-13 Vκ序列)；或SEQ ID NO27(HB22-23 Vκ序列)；或SEQ ID NO29(HB22-33 Vκ序列)；或SEQ ID NO31(HB22-196 Vκ序列)的氨基酸序列至少具有大约95％的序列同一性的Vκ序列的抗体轻链可变区的核酸的分离的核酸分子。
37.一种包含编码选自SEQ ID NO11(HB22-7 VH序列)的氨基酸1到97；SEQ ID NO15(HB22-23 VH序列)的氨基酸1到100；和SEQ IDNO17(HB22-33 VH序列)的氨基酸1到98的VH序列的核酸的分离的核酸分子。
38.一种包含编码选自SEQ ID NO23(HB22-7 Vκ序列)；SEQ IDNO27(HB22-23 Vκ序列)；和SEQ ID NO29(HB22-33 Vκ序列)的氨基酸序列的Vκ序列的核酸的分离的核酸分子。
全文摘要
本发明涉及利用具有独特生理特性的抗CD－22单克隆抗体的治疗方法。具体地说，本发明涉及通过给药有效量的特异地结合开始的两个Ig－类似区域或在天然的人CD22(hCD22)内的开始的两个Ig－类似区域内的表位的阻断性抗CD22的单克隆抗体来治疗B细胞恶性肿瘤和自身免疫疾病的方法。
文档编号A61B5/055GK1646161SQ03808973
公开日2005年7月27日 申请日期2003年2月21日 优先权日2002年2月21日
发明者T·F·特德 申请人:杜克大学