专利名称:蛋白质及其制备方法，adn的顺序，抗体及其用途，痘病病毒，被转化或感染的细胞用于预 ...的制作方法
本发明涉及制备抗血吸虫病的疫苗。
血吸虫病(或者住血吸虫病)是遍及热带和亚热带地区的危害人类地寄生虫所造成的疾病(除了北美地区以外)，这种疾病同样蔓延到北非洲，並在埃及严重扩延在西班牙和葡萄牙也有所发现。
这种疾病影响了世界上2-4亿的人口，能造成血吸虫病的寄生虫是形状较小的扁平的蠕虫，其中通过淡水软体动物作为中间宿主以进行其生命的再生循环。由此可见，这种疾病能随着热带地区开发灌溉渠网和河坝而扩延。
我们知道造成人类血吸虫病的病原体有五种最广泛流行的是曼蚊血吸虫病(S.mansoni)，它一般在非洲和美洲蔓延;还有两种，即住血吸虫病(S.haematobium)和插入血吸虫病(S.intercalatum)，它们一般多发现于非洲;另外的两种是日本血吸虫病(S.japonicum)和湄公血吸虫病(S.mekongi)，一般多发现于亚洲。
我们有必要了解和掌握寄生虫的生活习性，以便能制定防止这种疾病的整体战略。
实际上，寄生虫几乎完全适应宿主的天然防御当其成年时，它能完全躲避免疫机构，並在靠近肠壁的血管或膀胱中生存5-20年(指曼蚊血吸虫或住血吸虫)寄生虫在人体中不再生繁殖，但雌虫每天能产下3000个卵。这些虫卵和寄生虫新陈代谢的排泄物不断出现于宿主的循环机构中，从而导致各种紊乱(肠系统紊乱，输尿系统紊乱，全身虚弱，贫血，肉芽肿及毛细血管堵塞，从而导致组织的纤维织炎和严重的肝炎)。
具有距的这些卵能穿透肠壁和膀胱壁，並在其中造成了微小的损伤，然后被排泄出去。如果它们能较快地接触到水，它们就在水中变成纤毛幼虫(纤毛蚴)，並在水中游动直至穿入软体动物内。在这中间宿主中，幼虫继续不断地进行无性繁殖，生产出能在水中自由游动的许多尾蚴(被单个纤毛蚴染污的软体动物，在8-10个月生存期中能生产出50000以上的尾蚴)。
尾蚴是只能生存1-2天的浮生幼虫，当它迂到哺乳动物，尤其是人体时，能穿透皮肤。在皮肤中，它能转变成血吸虫蚴体，即未成熟的寄生虫，然后随着人体的血循环相继地传到心脏、肺，並最终达到肝脏，就是在肝脏循环系统中这些蚴体变成了成虫。雄虫与雌虫在其中交配，雌虫定居于由雄虫的躯体合拢所构成的沟渠中，这对雌雄结合体最终定居于人体腹部的血管中，其中雌虫开始产卵了。
使血吸虫蚴体完全成熟变成一个成虫，需要半个月的时间。在成虫阶段，寄生虫是吸附在宿主的分子表面上，借助这种掩敝，使它能逃躲免疫的识别和保护机构。此外，寄生虫本身分泌出能够抑制免疫的物质。每一对血吸虫在其宿主中能生存若干年，並且每天能产下数以千计的虫卵。
现有一种抗成年寄生虫的有效药物，即吡喹酮，但是其价格太昂贵，以致于不可能考虑在发展中国家普遍使用之。而且这种药也不能作为防止再传染的预防药。然而，在病染地区，当地居民则往往是接触到受这些幼虫染污的水。
因此，预防这种疾病的最大希望只能寄托在制备能抗未成年寄生虫，即血吸虫蚴体的有效疫苗上。这种疫苗应该可用于儿童以预防初级传染，並且能用于已染上疾病，並用吡喹酮药治疗过的病人，以避免再次被传染。
这种疫苗应该包含一种或多种重要的血吸虫蚴体的抗原，而且应能诱导一种有效的免疫反应，以使幼虫在未逃躲宿主的保护机构前能被治住。
当前的研究工作(请阅1985年的Capron和Dessaint评论)能够鉴别出数量有限的出现在寄生虫及其幼虫表面上的蛋白质抗原，而且它们在诱导免疫性反应方面扮演了重要的角色。
1985年Balloul等人阐明了其中之一的上述抗原在用由凝胶提纯的曼蚊血吸虫病提取物对老鼠实施免疫以后，诱导抗体能识别出一种被称作P28的28Kd抗原，它是出现在寄生虫的幼虫和成虫上。这些相同的抗体能识别活体外的寄生虫的RNAm提取物的转译产物和血吸虫蚴体中被标记为1125I的一个外蛋白质。
这些抗体，抗-P28虽然本身不能中和血吸虫蚴体，但能激活细胞毒的细胞反应，从而能杀死血吸虫蚴体。
把提纯的蛋白质P28接种到试验用的大鼠和小鼠身上。这些免疫过的动物，在试验过程中具备高度的保护作用，以抗血吸虫蚴体的传染(Balloul等人，1986年)。
上述试验表明了抗原P28具有重要的诱导保护性免疫反应的作用。
本发明涉及CADN顺序的鉴别和测定，该顺序是为抗原P28或至少为一个多肽密码的，该多肽包含P28的抗原决定基，这些抗原决定基被用于抗天然的蛋白质P28的抗体所识别。
这就是为什么本发明首先涉及如图1所示的为成熟蛋白质P28密码的ADN顺序。
本发明同样涉及一种蛋白质，其中的合成是被CADN所操纵，该合成可以在不同的宿主细胞、细菌、酵母或超细胞中进行，这取决于CADN被插入的载体和它所属的表达的控制信号。
据本发明的蛋白质能表现出与出现在血吸虫蚴体的天然蛋白质P28相同的一级结构。然而它也可以是后者(即天然蛋白质P28)的衍生物，或是不完全的蛋白质P28，然而它包含用于被抗体识别的，因而用于诱导免疫的重要的抗原决定基。这种蛋白质或不完全的蛋白质，还能被融合到别的蛋白质上(或蛋白质的片段)，这可依据相应的ADN片段的基因操作法，以便有助于宿主细胞中的蛋白质的更好的表达或诱发其排出细胞外。
本领域技术人员已知，在各种不同宿主细胞中的外来基因的表达和克隆(无性繁殖)的工艺技术。这些工艺将在以后的实例中叙述，不过还可能用上其它的载体和其它的宿主细胞。
在E.coli(大肠杆菌)的情况下，在细菌中的P28基因的表达是采用含有启动子λPL和CⅡrbs作为核糖核蛋白体的固定部位的载体而取得的。所得的杂种蛋白质包含一段蛋白质CⅡ和蛋白质P28，或者一段蛋白质P28。
在宿主是酵母的情况下，例如，啤酒酵母(S.cerevisiae)，可以采用酵母的质粒载体，其在酵母中包含有一个功能性的复制原点，例如质粒2μ的复制原点和如URA3的选择基因。在这种情况下，所用的启动子是基因PGK的启动子，即部位5′的PGK基因，它能导致一个融合蛋白质，或者一个成熟的蛋白质。
当宿主是哺乳动物的细胞时，最好采用痘病病毒作为表达载体，例如疫苗的病毒，其中为蛋白质密码的基因，在基因的表达顺序的操纵下被痘病病毒所安置。这重组病毒包含为本发明的蛋白质密码的基因，它最好是被插入在疫苗的TK基因中，並处于强的启动子，如疫苗的7.5K蛋白质的启动子的操纵下。为本发明的蛋白质密码的基因同样可被融合到一个为功能性信号顺序密码的区域，例如白氨酸(interleukine)或狂犬病的糖蛋白质的信号顺序，以确保使蛋白质排出细胞外，在这种情况下相应的蛋白质是包含一部分非来源于血吸虫蚴体的蛋白质的杂种蛋白质。
为本发明的蛋白质密码的基因同样可以被融合到为狂犬病的病毒的糖蛋白质的跨膜带密码的区域中，以确保使蛋白质固定在受染细胞的细胞质膜中。
本发明同样涉及被本发明的蛋白质的表达载体所转化的宿主细胞，以及该蛋白质的制备方法，其特点是据本发明培养这些宿主细胞並回收这些蛋白质。
当然，本领域技术人员已知取决于宿主的蛋白质的培养、回收和分离方法。
本发明还最终涉及用于抗血吸虫病的疫苗的药剂组合物，其特点至少在医药上可接受的载体中包含有据本发明的痘病病毒或蛋白质。
本发明特别涉及活的疫苗，其特点它们包含表达据本发明蛋白质的活的重组疫苗的病毒，而且可用于在医药上可接受的载体中。
这些疫苗最好是制成药用的方式，例如注射剂，而医药上可接受的载体可以是用于注射的含水载体。
接种的方法应该适应所用的疫苗的形式(活的病毒或蛋白质)。
最后，本发明涉及用于抗本发明蛋白质的抗血清。
此外，本发明还阐明了重组蛋白质P28(或P28Ⅰ)的谷胱甘肽-S-转移酶的酶活性。
谷胱甘肽-S-转移酶是广泛分布的酶，存在于植物和动物中，而且在各种分子的解毒反应中起作用(狂犬病的亲电子化合物，内长植物的超氧化物，烷基化剂(agents alkylants)，除莠剂……)。
1986年Smith等人的研究工作表明日本血吸虫寄生虫能合成出谷胱甘肽-S-转移酶，它在抗由受染宿主的免疫性影响的细胞所产生的自由基因方面能起到保护寄生虫的作用。
本发明更特别涉及阐明了在E.coli或啤酒酵母(S.cerevisiae)中合成的，由曼蚊血吸虫衍生出的蛋白质P28Ⅰ的谷胱甘肽-S-转移酶的活性，其中有关的疫苗抗原已如上所述。
本发明还特别涉及已如上所述的蛋白质的应用，它可以作为，如蛋白质P28，谷胱甘肽-S-转移酶活性的显示剂。
本发明也涉及被前述的蛋白质的表达阻断所感染或转化的细胞的应用，它可以用作显示谷胱甘肽-S-转移酶活性的介质。
这些蛋白质和细胞可以在实施谷胱甘肽-S-转移酶活性的微生物的转化过程中作为转化剂加以应用。
本发明还详述，为次级蛋白质P28密码的，而且被用于抗天然蛋白质P28的抗体所识别的CADN顺序的测定和鉴别。实际上本发明涉及如图16所示的为成熟的蛋白质P28Ⅱ密码的ADN顺序。
本发明还涉及一种蛋白质，其中的合成是受CADN或一段CADN所操纵，该蛋白质是被用于抗天然蛋白质P28的抗体所识别。
本发明还涉及并入了为成熟蛋白质P28Ⅱ或P28Ⅱ片段密码的CADN的细胞。
在以后的实例中虽然蛋白质只是在细菌，E.coli中被表达，然而它的合成可以在不同的宿主细胞，细菌，酵母或超细胞中实施，这取决于插入CADN的载体，这已如前所述。
P28Ⅱ基因的表达，如上所述，可以用含有启动子λPL和核糖核蛋白体CⅡrbs的固定部位的载体所实现。
本发明还涉及通过培养前述的细胞，以制备该蛋白质。
本发明还涉及用于治疗和预防血吸虫病的药用组合物，其特点如前所述，它至少含有一种作为活性剂的蛋白质。
当然，如果CADN是被并入到如疫苗的痘病病毒中，那么这种痘病病毒在某些情况下，可以直接作为疫苗用剂加于利用。
同样可以培养用于抗这些蛋白质的抗体。这些抗体和蛋白质可以用作诊断血吸虫病的药剂。
在本发明中附图所示的基因的核苷酸顺序或者蛋白质的氨基酸不是无关紧要的部分，而是本发明和本发明说明书的不可分割的部分。
下面的实例是用于阐明本发明的其他的特点和优点。
用附图加以阐述本说明书。
本文附图如下说明
图1表示减去λTG06，λTG08，λTG09，λTG10和λTG11顺序的CADN的完整顺序。
开相从第7个核苷酸开始，该相为其分子量为28Kd的211氨基酸的多肽密码的。
图2表示通过把λTG06的插入物ECORⅠ合并到PTG1924所构成的PTG44。PTG1924是用相中的ECORⅠ部位，从PTG908衍生出来的，並位于CⅡ的起始密码子上游的46Pb.PTG44是为分子量为25Kd的融合蛋白质CⅡ/P28密码的。
图3表示被插入于PTG44的表达阻断所密码的融合蛋白质CⅡ/P28的顺序。
图4表示在丙烯酰胺-SDS凝胶电泳和染成Coomassie兰色以后E.coli TGE901 PTG44的全部提取物和不溶解部分的提取物。
箭头指示25Kd蛋白质的位置。
A.TGE901 PTG44在30℃时的全部提取物。
B.同一提取物中的非溶解部分。
C.在37℃下诱导7个小时后TGE901 PTG44的全部提取物。
D.同一提取物的非溶解部分。
E.在42℃下诱导7个小时后TGE901 PTG44的全部提取物。
F.同一提取物的非溶解部分。
G.可溶解于SDS(0.2%)的F部分。
H.在42℃下控制培养7个小时以后的TGE901 PTG1924的全部提取物。
I.同一个提取物的非溶解部分。
图5表示在丙烯酰胺-SDS凝胶电泳和染成Coomassie兰色以后，生成被结构PTG1885和PTG1886所密码的蛋白质P28的啤酒酵母(S.Cerevisiae)TGy1SP4的提取物。
A.TGy1SP4/PTG1885(28kd的未融合蛋白质)的提取物。
B.TGy1SP4对照培养的提取物。
C.TGy1SP4/PTG1886(30Kd的融合蛋白质)的提取物。
图6表示在“Western blot”中能用天然的P28的特定的兔子的抗体所分析的能生成成熟的或融合物的28Kd蛋白质的啤酒酵母(S.cerevisiae)和E.coli的提取物。这些固定的抗体是被抗-兔的抗体所识别，並被生物素所标记，而且接着这复合物被抗生蛋白链菌素-过氧化酶所显示並被HRP(多孔氧化铝-bioRad)所染色。
A.E.Coli TGE901 PTG44的全部提取物。
B.同一个提取物的非溶解部分。
C.能生成成熟蛋白质的啤酒酵母(S.Cerevisiae)TGy1SP4/PTG1885的全部提取物。
D.能生成被融合在PGK的22个第一氨基酸的成熟蛋白质的啤酒酵母TGy1SP4/PTG1886的全部提取物。
E.负对照的啤酒酵母(S.Cerevisiae)的提取物。F、G、与C和D相同的提取物，浓度低2倍。
图7表示相中ECORⅠ的部位，它在人类的白氨酸(interleu-kine)2的9个第一氨基酸的CADN区配中被诱变剂所操纵。
图8表示通过把λTG06和λTG09的ECORⅠ片段插入到PTG188-Ⅰ的ECORⅠ部位所形成的PTG45和PTG46的构成(请见图7的构成)。
图9表示被PTG45所密码的融合蛋白质IL2/P28的结构。人们标记信号肽的存在，该信号肽可以使含有P28最大部分的24Kd蛋白质排泄出去。
图10表示被PTG46所密码的融合蛋白质IL2/P28的结构。信号肽可以使含有抗原P28的中心部分的16Kd蛋白质排泄出去。
图11表示为IL2/P28密码的，並在7.5K疫苗的启动子控制下放置的基因，在带有疫苗基因TK的质粒中的插入。通过双重组的表达阻断在病毒的基因组中的插入进入到TK顺序。
图12表示在细胞培养介质BHK21中;排出的蛋白质被老鼠或兔子的专门抗体天然P28所检测，其中的培养介质BHK21是被重组病毒VV.TG.P28 Sm-1和VV.TG.P28 Sm-2所感染。
A和D VV、TG、P28 Sm-1的残留
B和E VV、TG、P28 Sm-2的残留
C和F 被未驯化VV所感染的培养的残留
A、B、C 被兔子的抗体所检测
D、E、F 被老鼠的抗体所检测
编号与独立的分离物相对应。
图13是被用天然蛋白质P28的“Western blot”试验所作的抗-P28抗体的检测，其中是在被E.Coli所合成的蛋白质CⅡ/P28所免疫的老鼠血清中进行的。
-NRS对比的老鼠血清，未被接种
-SR28-20，J8，J11，J16，J23是接种蛋白质CⅡ/P28以后第8，11，16和23天所取的老鼠血清
-SR28用天然蛋白质P28接种后老鼠的血清。
图14表示图13中的所有血清的生物活性，是在抗血吸虫蚴体的从属-细胞毒素-嗜曙红细胞(Cytotoxicité-éosinophile-dépendante)试验中测得的(见表Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ)。
-SR28-20表示抗克隆片段20KDa的抗血清，它是进行第二次注射以后在不同时间所回收的曼蚊血吸虫的28KDa抗原
-SR-28表示抗天然P28的抗血清，它是在第二次注射后第14天回收的。
图15表示如下的曲线
-鼠肝的GT(9μg，6μg)
-E.Coli的原始提取物，对照(o)，和TGE901/PTG54(
)
-啤酒酵母(S.Cerevisiae)的原始提取物，对照(
)，被质粒载体转化的(Δ)和TGy2SP13b/PTG2800(+)。
图16a和16b表示蛋白质P28Ⅱ的CADN的顺序，以及跟随本文中三个相的相应的蛋白质的顺序。
图17表示用Coomassie染成兰色后E.Coli提取物的在丙烯酰胺凝胶中的电泳
A，C和F 全部提取物
B、D和E 同一个提取物中的非溶解部分
A、B、C、D E.coli TGE901/PTG56
E、F E.Coli TGE901/PTG908(对照载体)
G 分子量的记号
例1
为蛋白蛋P28密码的CADN的克隆和鉴定
用于克隆为抗原P28密码的基因的策略，其中的顺序尚未为人所知，已经借助于抗P28的多克隆的抗体，去鉴别出在E.Coli中寄生虫的CADN库的表达产物。这些抗体是用在凝胶中分裂的曼蚊血吸虫寄生成虫的提取物的老鼠和兔子的免疫所诱导。
CADN库的制备
用血吸虫成虫的提取物ARN，通过MLV的逆转录酶的作用合成出互补的ADN小段，用核酸酶S1处理，通过Coli的聚合酶的Klenow片段的作用而生成双小段的ADN，以生成其自由末端，人们在蔗糖级度上选择所寻求的片段大小，也就是说500-4000Pb，借助于合成接受体5′-AATTCCCCCCCCCCC-3′(Bouc等人，1986年)向这些片段加入残留物dG，而且将它们插入到噬菌体的衍生物λgt10的ECoRⅠ部位(Huynh，1984年)。
在上述连接后，把这些重组的噬菌体装入试管中，接着把形成的噬菌体2×106库，通过在E.Coli POP101的接种而被放大(Lathe，1977年)。
放大后，把噬菌体用PEG浓缩，用两次离心提纯到Clcs级度，从而提取它们的ADN。CADN的插入是通过ECoRⅠ的消化作用而取得的，而且提纯到蔗糖级度，在使CADN和E.Coli的β-半乳糖苷糖的基因融合以后，接着把500-2000Pb的部分插入到表达载体中，即在乳糖启动子操纵下能表达外来基因的噬菌体的衍生物λgt11(young和Davis，1983年)。
库的筛选和挑选物的选择
在E.Coliy1090接种λgt11库(young和Davis，1983年)以形成稀释液(即在直径90mm的盒中有1×105噬菌体)作为样本。
在42℃下和有异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃苷的条件中，在乳糖启动子的操纵下开始表达蛋白质。
用硝化纤维素过滤器吸附这些合成的蛋白质，以便在有特别的兔子抗体P28存在下进行接种。这个固定的抗体被次级抗-兔抗体所识别，並用生物素标记，接着把这复合物用抗生蛋白链菌素-过氧化物酶反应以显示之，然后用HRP(多孔氧化铝-Bio Rad)染色。
这种用抗体的测定能够鉴定重组的噬菌体，其中CADN的插入导致带有抗原决定部位的部分蛋白质或蛋白质的合成，这些抗原决定部位(基)是被特种的抗体，抗-P28所识别的。
第一次挑选，选用了三个独立的分离物，λTG06，λTG08和λTG09，它们分别包含CADN在650，700和350碱基对上的插入。
被这些挑选物携带的插入物的核苷酸顺序部分重迭，並且包含其分子量是28Kd，一个假定的蛋白质的C-末端区域。合成一个被标记为32P的，並与λTG06插入的密码的区域的5′端互补的合成核苷酸5′-GGAATAGTTGGTTTGATT-3′，而且将其用于筛选在λgt10中的CADN库。
由此，可以分离出两个新的挑选物，λTG10和λTG11，这两个都含有为211氨基酸的蛋白质密码的完整的核苷酸顺序，28Kd的PM。
测定被重组噬菌体所携带的CADN顺序及相应的蛋白质
图1中显示了CADN的完全顺序(由不同的挑选物的顺序的测定所证实)和作为其来源的氨基酸的一级结构。
其结果和发表的东西中实际上没有提供任何有关天然的基因转译的初级产品和有关前体以及先于成熟蛋白质的信号肽的存在的情况。
然而，初级氨基酸的确切定位不在本发明的上下文中，因为用于分离基因和其表达所采取的策略包括了对出现在P28的主要抗原决定部位的研究，而这些抗原决定部位是被宿主的免疫系统所识别的。
这种论据适用于下列实例中，这些实例描述了在不同的有机体中重要的抗原决定部位的表达。
抗原P28的表达
用于表达位于P28的抗原性的抗原决定部位所发展的一般策略是把CADN的克隆过的片段融合成为已被有效表达和特征化的蛋白质的N-末端的区域密码的核苷酸顺序。一般所得的杂种蛋白质也被抗天然的成熟的P28的抗体所识别，而且它可能导致抗寄生虫的免疫反应。通过这种假设，可以用不同系统的宿主分析融合蛋白质的免疫学特性，如下列实例所述，或在活体内或在活体外同时进行上述分析。
例2
在E.Coli中的表达
为了制取在E.Coli中抗原P28的表达，可以用在专利申请83，00909所述的，表达质粒的衍生物PTG908去合成融合蛋白质，其中的结构如图3中所示。
载体PTG908含有复制原点，入噬菌体的启动子PL和包括基因CⅡ的N-端末端，以及位于转译的启动信号下游的限制部位的CⅡ的核糖核蛋白体的固定顺序。用密码子ATG下游的39pb的BamHⅠ部位，通过含有下列寡聚物的双小段接合体插入ECoRⅠ部位
5′-dGATCCGAATTCG-3′
3′-GCTTAAGCCTAGd-5′
合成的质粒，PTG1924，包括单独的ECoRⅠ部位与相中的GAA密码子，以及基因CⅡ的启动密码子，所有来自λgt11的重组体的CADN的插入，该重组体在用抗-P28血清挑选以后给出了正的信号，都是直接插入到这个部位的。当插入出现在正确的方向上，这就给出一个为基因CⅡ的N-端末端密码的，並用为抗体P28或其部分抗体密码的CADN的顺序延长的核苷酸的顺序。
其中的一个合成的质粒结构，PTG44，它在ECoRⅠ部位上含有自λTG06衍生的片段的插入，如图2所示。图3中示出了计有25Kd分子量的CⅡ-P28融合蛋白质的顺序。
被PTG44所转化的E.Coli的培养物N4830在LB介质中不断增长，直至DO600为0.2。然后，通过加温至42℃，反应8个小时就导致了融合蛋白质的合成。
培养终了，用Coomassie染成兰色，在丙烯酰胺凝胶中分析细胞提取物(图4)，在用声处理使细胞溶解以后，就从所得的不溶解物部分回收融合产物CⅡ-P28。在有0.2%SDS的参与反应的条件下，通过对不溶解物部分的提取，就能回收纯度为80%的蛋白质，用“Wistern blot”对最终制备物分析后，显示出这种特制的蛋白质有效地被用于抗天然的P28的抗原的兔子的抗体所识别(图5)。
例3
在啤酒酵母(S.Cerevisiae)中的表达
通过在酵母中表达P28的CADN能得到两种结构。第一种是包含N-端，酵母的磷酸甘油酸酯激酶(PGK)的22个第一氨基酸的融合蛋白质;第二种是与天然成熟蛋白质相似的蛋白质。
带有为PGK和P28密码的基因的融合的载体的构成(PTG1886)。
1)包括蛋白质P28的CADN的λTG10的ECoRⅠ插入是引入到往返于Coli-酵母之间的质粒中，PTG836。
·这质粒是PBR322的衍生物，它包含2微米酵母的质粒的复制原点，基因URA3(专利84.12598)和酵母的基因PGK(Hitzemann等人，1982年)。
·ECoRⅠ的单独部位，通过插入下列的合成接合体，被引入到BamHI部位(位于PGK起始因子密码子下游的20密码子)和Sal1部位(出现于PBR322顺序中)之间的位置
5′GATCTGAATTCAGATCTC-3′
3′-ACTTAAGTCTAGAGAGCT-5′
所得的质粒是PTG1880。
·在正确的方向上把λTG10的ECoRⅠ片段插入到PTG1880的ECoRⅠ部位，就得到PTG1883。
2)为了使PTG848插入到酵母的表达载体中，应得到被质粒所携带的表达阻断PGK-P28(法国专利85.06672)。在这里需要在噬菌体M13中的中间操作。
·为了得到M13TG1884，把含有表达阻断PGK-P28的HindⅢ-BglⅡ片段插入到居于HindⅢ和BamHⅠ两个部位之间的M13TG131中(Kieny等人，1983年)。
·这种结构，在有相邻的限制部位的情况下，能得到SmaⅠ-BglⅡ片段的相同的表达阻断。
·接着把这片段引入到表达载体pTG848的SmaⅠ和BglⅡ两个部位之间的位置上。
·所得的质粒是PTG1886。
3)用质粒PTG1886转化酵母TGy1SP4。
用“Western blot”方法和在丙烯酰胺-SDS凝胶上的电泳分析这些培养物的原始的细胞提取物。在图5和图6显示出明显的一个新的蛋白质带，30Kd的PM，即所期望的融合蛋白质PGK-P28，而且它是被用于抗血吸虫的天然的提取物P28的抗体所识别。
在启动子PGK操纵下，只包含P28的CADN的表达载体的构成
1)在上文所述的M13TG1884构成中，根据克隆技术蛋白质P28的起始因子密码子是在基因PGK的22个第一密码子和8个密码子的前面(特别是残基dc)。在寡核苷酸的存在下，这些附加的90碱基对被活体外的M13TG1884的致突变所缺失
5′-CAACAAAATATAAACA
GCTGGCGAGCATATC-3′
它是接着开始于密码P28的顺序的核苷酸的，PGK的mRNA前导顺序的16个第一核苷酸。在这两个顺序之间存在ATG，它同时是PGK的起始因子ATG和P28的起始因子ATG。
2)正确缺失的衍生物，M13TG1884m被SmaⅠ和BlgⅡ，以及带有未被融合的P28的CADN的顺序所消化(融合)，在PGK启动子的操纵下被放置，而且被插入到表达载体PTG884中(如上所述)，以便得到PTG1885。
3)用质粒PTG1885转化酵母TGy1SP4。
用“Western blot”方法和在丙烯酰胺-SDS凝胶上电泳分析这些培养物的原始细胞提取物，图5和图6中清楚显示了一个2Kd的PM的新的蛋白质带，它是被用于抗血吸虫的天然的提取物P28的抗体所识别。
例4
在重组疫苗的病毒中的表达
a)表达融合到第一氨基酸IL-2的P28的重组疫苗的病毒的构成。
把被噬菌体λTG06和λTG09所携带的CADN引入到一些适合的载体中，以便今后能被插入到疫苗的病毒的基因组中，而且能被表达到哺乳动物的细胞中。
本发明的这些载体可衍生一些用于表达人类的白氨酸-2(interleukine-2-humaine)的载体(见法国专利FR8509480)。同样地人们已制备出PTG188的衍生物，它包括在核苷酸区域中的ECORⅠ部位，它是在天然的白氨酸-2的N-末端丙氨酸残基下游的9个氨基酸(图7)。在正确方向上把λTG06和λTG09的CADN插入到ECoRⅠ部位和PTG188-Ⅰ部位之间，以便能得到为分子量分别是24Kd和16Kd的融合蛋白质IL-2/P28密码的质粒PTG45和PTG46(图8)，如在图9和10中所示。在该结构的上游的信号肽能使蛋白质排出到培养介质中。
质粒PTG45和PTG46的重要部分包括被为融合蛋白质IL2-P28密码的顺序所中断的病毒基因TK，该IL2-P28在有效的启动子操纵下被插入，即疫苗的蛋白质7.5K的启动子。
插入在疫苗的基因TK中的这些顺序可以在疫苗的病毒基因组中被双倒易重组合所转移(图11)，这如前已述(Panicalli和Paoletti，1982年;Mackett等人，1982年;Kieny等人，1984年)。
这些包括λTG06和λTG09的CADN衍生物的重组病毒VV.TG.P28Sm-1和VV.TG.P28Sm-2是被用来感染单层细胞BHK21在37℃下反应24个小时后，对培养的残留物进行分析，以测定融合蛋白质IL-2/P28是否存在，其中在硝化纤维素过滤中吸附，並用天然P28的特种的老鼠或兔子的抗体进行接种。
用抗兔子和老鼠的整体免疫球蛋白的含生物素的抗血清进行接种，以便检测出固定的抗体。接着用抗生蛋白链菌素-过氧化物酶反应和在染料HRP(Bio-Rad)的存在下进行最终染色，以呈现出这个复合物。
此外，对于VV·TG·P28Sm-1和VV·TG·P28Sm-2，这些特种的抗原(100ng/ml以上)可以在培养介质中检测出来(图12)，这是对不同的独立的重组体而言的。然而，只用原始病毒感染的细胞的残留物不能给出有意义的信号。
b)表达融合到狂犬病的糖蛋白的信号肽的P28的重组疫苗病毒的构成(VV·TG·1184)。
噬菌体M13TG177的构成
噬菌体M13TG169(法国专利86.05043)包括密码病毒的env基因HIV-1的，並处于为狂犬病的糖蛋白质的信号肽密码的顺序的5′-末端和为狂犬病的糖蛋白质的细胞质内区域以及跨膜区域密码的顺序的3′-末端的两旁的顺序。
把ECORⅠ部位引入到M13TG169的HindⅢ和KpnⅠ两个部位之间，以形成M13TG179，其结构如下
S狂犬病的糖蛋白的信号。
TM狂犬病的糖蛋白的跨膜区域。
处于信号肽下游的ECORⅠ部位被借助于如下寡核苷酸的局部致突变所消去。
5′GGGGAAATCGTAATC 3′
所得的噬菌体M13TG177具有单一的ECORⅠ部位。
噬菌体M13TG1105的构成
把包含密码P28的顺序的λTG10的受限片段ECORⅠ插入到M13TG177中，以便形成M13TG1105，其结构如下
噬菌体M13TG1108的构成
连着信号肽S的这两个第一氨基酸是被用下列寡核苷酸的局部致突变所融合，形成与密码P28的顺序相连的相。
5′CTTGATATGCTCGCCAGCAATAGGGAATTTCCCAAA3′
所生成的噬菌体叫M13TG1108。
质粒PTG1184的构成
用PstⅠ部分消化噬菌体M13TG1108，以便分离含有为P28密码的整个顺序的片段，而且把PstⅠ插入到质粒PTG186POLy的PstⅠ部位上，以便形成PTG1184。
c)表达融合到信号肽和狂犬病的糖蛋白质的跨膜的P28的重组疫苗的病毒的构成(VV·TG·1185)。
噬菌体M13TG1109的构成
在噬菌体M13TG1108中，用下列寡核苷酸把转译的终端的密码子前面的最后一个氨基酸与TM跨膜区域的第一个氨基酸相融合
5′TGCACTCAGTAATACATAGAAGGGAGTTGCAGGCCT3′
生成的噬菌体叫M13TG1109
质粒PTG1185的构成
如同构成PTG1184一样，噬菌体M13TG1109被PstⅠ部分消化，而含有为P28密码的整个顺序的片段被插入到PTG186POLy的PstⅠ部位上，以便形成PTG1185。
d)病毒VV·TG·1184和1185的特征化。
如前述，用质粒PTG1184和1185转录为疫苗的病毒的基因组中的P28密码的基因。
病毒VV·TG·1184表达融合到狂犬病的糖蛋白质的信号肽的P28。
病毒VV·TG·1185表达融合到狂犬病的糖蛋白质的跨膜区域和信号肽的P28。
在16个小时中，用VV·TG·1184或1185的病毒感染细胞BHK21，经加入蛋氨酸35S4个小时后，借助于用来抗P28的兔子的抗体使标记的蛋白质免疫沉淀。在VV、TG、1184病毒的情况下，显示了一个表示28Kd分子量的带，这种蛋白质同样大量存在于培养基的残留物中，表明蛋白质的排出。
在VV·TG·1185的情况下，显示了一个表示35Kd分子量的带，在培养基的残留物中，不存在这种蛋白质，表明这种蛋白质被狂犬病的糖蛋白质的跨膜区域扣留在细胞膜中。
例5
用以基因方法生产的抗原P28对动物注射疫苗
对含有一个或多个天然P28的大抗原决定基的重组蛋白质的生物效应进行分析，並与用从成熟的寄生虫的所有提取物中分离出来的成熟的天然P28进行大鼠免疫试验所观察到的反应进行比较。同时被如E.Coli或啤酒酵母(S.Cerevisiae)的微生物或被重组疫苗的病毒所生产的融合蛋白质都可以被使用以达到接近的效果，但是只有用融合蛋白质CⅡ/P28制备的产品在下文中有所阐述。
对大鼠的免疫处理
用50μg的融合蛋白质CⅡ/P28(例2)和辅药Freund通过腹膜内注射向三个月的“Fisher”雄鼠(20个)进行免疫处理。这些动物在两个星期以后接受第二次剂量的注射，从第8天开始抽取抗血清。
把每个含有5个标准试验量的4“Pools”血清进行三次试验，以测得识别天然蛋白P28和对于血吸虫蚴体的血清的细胞毒性的抗体的存在。
特种抗体的测试
用E.Coli的CⅡ/P28蛋白质提取物进行免疫的大鼠的血清在“Western-blot”中进行试验，以测试其抗成年寄生虫的全部提取物的P28的反应，该P28是在丙烯酰胺-SDS凝胶中被电泳而分离出来的。图13清楚地显示了被这些血清所作的对天然蛋白质P28的识别。
到第23天这反应到达了最大程度，而且实际上与用天然抗原所免疫的动物的血清所作的试验所能观察到的反应强度是相同的。
对依赖嗜曙红细胞的细胞毒性的估价
根据Capron等人所描写的工艺方法(1981年)进行依赖嗜曙红细胞的细胞毒性试验以估价相同的血清
在每一个欲试验的血清在场(未加热)或者在适当的控制下和有嗜曙红细胞在场时(含有40-70%嗜曙红细胞的“Lou”大鼠的非粘着的腹膜细胞)对50个蔓蚊血吸虫蚴体进行接种。在200μl总体积中对于每个血吸虫蚴体，反应混合物包含了6000个效应细胞。在37℃下接种48个小时以后，用显微镜观察並估量血吸虫蚴体的死亡百分比例。
表Ⅰ中所示的结果清楚地显示出细胞毒因子的存在能够导致血吸虫蚴体的较高的死亡率，这比率接近用蔓蚊血吸虫染污的大鼠血清所诱导的比率。
阐明IgE在细胞毒性反应中的特殊的作用
用加热的血清(在56℃加热2个小时)和补体的附加的加热血清实施同样的细胞毒性试验。试验结果列于表Ⅱ中，並显示出细胞毒性的相应的因子是热敏感性的，而且显示出所丧失的活性不能被补体的添加所补偿。
此外，人们能够通过被大鼠的IgE的特种的山羊的抗血清的吸附作用，有选择地消去欲研究的血清的IgE，而这种抗血清是被偶联到琼脂糖(Sépharose B.)这些被处理和透析过的血清进行了其依赖嗜曙红细胞的细胞毒的活性试验。
表Ⅲ显示出，老鼠血清在IgE方面的有选择的衰竭阻止了细胞毒性的表达。后者对被蛋白质CⅡ/P28免疫的大鼠的血清的IgE是很特效的。
阐明动物的预防尾蚴的试验注射
把一种在E.coli或在酵母中生产的P28抗原，在氢氧化铝的存在下，注射到Fischer大鼠身上(如前所述)，或者用表达抗原P28的疫苗的病毒，VV·TG·1185(每个动物用5×107ufp重组病毒)注射该大鼠。
而只用氢氧化铝注射到对照试验用的老鼠。
免疫以后六周，这些试验用的动物通过皮下途径被1000个尾蚴所感染(它们是被血吸虫病感染的幼虫)。
接种试验以后21天，解剖这些试验用的老鼠，並检查它们体内的寄生虫成虫，用生理水通过对肝脏静脉的灌注而取出这些寄生虫，然后计算其数。
人们发现相对于对照试验来说，所试验的大鼠中的寄生虫量是减少了。
用在E.Coli所生产的抗原，64±4%
用在酵母所生产的抗原，70±10%
用疫苗所生产的抗原，60±8%
例6
在表达mansoni血吸虫的蛋白质P28的啤酒酵母(S.Cerevisiae)的提取物TGy2sp13b/PTG2800和E.Coli的提取物TGE901/PTG54中展示了谷胱甘肽-S-转移酶活性(通过在Ura3基因的起动部位的170Pb的缺失，PTG2800只不同于在例3中所述的PTG1894)。
把培养物进行离心，並将其底部渣放入缓冲液变成悬浮液(100mM Tris-Hcl，PH＝7.5，1mM DTT)。用玻璃珠研磨酵母;用超声波处理细菌。离心该提取物以除去细胞残存物，测定残存物的活性(据1974年Habig等人以及1986年Moore
表Ⅰ
依赖嗜曙红细胞的细胞毒性的试验对被在
E.Coli中生产的蛋白质CⅡ/P28免疫的大鼠的血清的研究
抗体的来源 血清的最终稀释 接种以后48个小时的细胞毒性%
被CⅡ/P28免疫的大鼠的
血清(取样)
第8天 1/16 60.5±2.5
1/32 55.5±5
1/64 6.5±6.5
第10天 1/16 85.5±0.5
1/32 76±3.5
1/64 57±4.7
第16天 1/16 85.5±0.5
1/32 78±6
1/64 52±3
第23天 1/16 88±3.5
1/32 92±0
1/64 52±11.5
被S.mansoni感 1/16 97±1
染的大鼠的血清
健康大鼠的血清 1/16 0
表Ⅱ
依赖嗜曙红细胞的细胞
毒性对加入补体的研究
被在E.Coli生产的蛋白质CⅡ/P28免疫 接种以后48小
的大鼠的血清免疫以后16天(最终稀释1/16) 时的细胞毒性%
未加热的血清 85.5±0.5
加热的血清 26.5±5.5
加热血清+豚鼠的补体 38.5±0.5
加热血清+加热的豚鼠的补体 21.5±1.5
表Ⅲ
依赖嗜曙红细胞的细胞毒性对
加入同型物IgE的抗体的研究
抗体的来源 接种以后48小时的细胞毒性%
被在E.Coli中生产的CⅡ/P28
免疫的大鼠的血清(取样)
第16天 48.5
第23天 40
健康大鼠的血清 0
抗-IgE菌落的流出物
第16天 0
第23天 0
健康大鼠的血清 0
等人所公开出版的工艺)。在分光光度计的盘盆中把40-100μl的未加工提取物，10μl的100mM CDNB试剂(在100%乙醇中的1氯-2，4-二硝基苯的溶液)和1ml的100mM KH2PO4(PH6.5)/2.5mM谷胱甘肽一起混合。
把其最终浓度是9μg和6μg的大鼠的谷胱甘肽-S-转移酶(以σ(Sigma))用作为正的对照。
把带有不包含顺序P28的载体的E.Coli提取物TGE901/PTG959和带有不包含顺序P28的载体的啤酒酵母的提取物TGy2SP13b和TGy2Sp13b/PTG848用作为负的对照。
把所有的细菌和酵母的提取物都调成这样的浓度，即总蛋白质含量是0.33mg/ml。
在包含有谷胱甘肽-转移酶的上述盘盆中显示了黄色。在15分钟中的每分钟，用340nm分度光度计测定D.O.的变化。
在图15中显示的结果表明含有重组蛋白质P28的E.Coli和啤酒酵母(S.Cerevisiae)的提取物具有很强的谷胱甘肽-S-转移酶活性。
例7 库的筛选和挑选物λTG07的选择
在例1中所述的CADN库，λgt11的筛选能够揭示各种类型的挑选物。
通过用大鼠的多克隆(Polyclonal)抗体的免疫检测(通过注射从血吸虫提纯的P28诱导的)可以选择新的挑选物，λTG07，它不能被合成探针所识别。而这些探针如在例1中所述，是被用于选择挑选物λTG10和λTG11，而且其中的顺序是不同的。由于该蛋白质能被相同的抗体，抗-P28所识别，该新的蛋白质就被称作P28Ⅱ(而原先已被鉴别的是叫P28Ⅰ)。
例8 由噬菌体携带的CADN的顺序λTG07的测定
把CADN的各种限制片段在M13中重克隆，以便被序列化。
CADN的完整顺序和我们可以推断的氨基酸的初级结构(在本文的三个相中)如图16a和16b所表示。
例9 由CADN顺序开始的BamHⅠ部位的创立
为了方便于CADN在适当的表达载体中的插入，人们通过操纵致突变，创立了由密码顺序开始的BamHⅠ部位。
该致突变实施于在M13的被克隆的ADN上，接着进行低(寡)聚物合成，它是如图1a所示的顺序的核苷酸18-38的互补的21-部分，除了要调动的一些核苷酸之外
因此，可以以BamHⅠ片段的形式回收CADN的顺序，第二个BamHⅠ部位出现在M13的多连锁，在密码顺序的下游位置。
例10 在E.Coli中蛋白质P28Ⅱ的表达
以BamHⅠ的形式回收为P28Ⅱ密码的CADN顺序，而且引入到表达载体PTG908中，在BamHⅠ部位中。
所得的重组体的结构与图2中所图示的相同。
该载体含有一个复制原点，λ噬菌体的启动子PL和包括基因CⅡ的N-端末端的CⅡ的核糖体的固定顺序，还有一个在转移的起始部位的下游的39pb的BamHⅠ限制部位。
相中的基因CⅡ的N-端末端上还出现CADN-P28Ⅱ的插入。
选择了在其正确方向上携带插入的重组质粒PTG56，其结构已为顺序分析仪所鉴定。
在介质LB中培养了被质粒所转化的E.Coli培养物TGE901，直至DO600是0.2;接着用8个小时，在42℃温度下诱导了蛋白质CⅡ-P28Ⅱ的合成。
培养结束后，用超声波处理之，以回收细胞提取物，而且在丙烯酰胺-SDS上电泳和用Coomassie染成兰色以后，对其进行分析(图17)。
在TGE901/PTG56提取物中可清楚见到清晰的28K的分子量的带(图17A、B、C、D带)。
用“Western blot”对E.Coli的蛋白质提取物的提纯制备物的分析显示出它能被用于抗从寄生虫中提纯的天然P28的大鼠抗体所识别。
一直在寻找可能存在的谷胱甘肽-S-转移酶的酶活性，然而该试验是阴性的。所得的阴性结果表明在2个蛋白质P28的顺序之间不存在同系物。
例11 用E.Coli生产的抗原P28Ⅱ接种的大鼠
据例5所述的方法给大鼠进行接种，然后用依赖嗜曙红细胞的细胞毒性试验测试它们的血清。
列于表Ⅳ中的结果表明，这些血清的细胞毒能力可以与被第一抗原P28Ⅰ或天然P28所免疫的大鼠的细胞毒能力相匹敌。
表Ⅳ
依赖嗜曙红细胞的细胞毒性试验对用在E.Coli
中生产的天然蛋白质P28，CⅡ-P28和
CⅡ-P28Ⅱ所免疫的大鼠的血清的研究
用在E.Coli中生产的蛋白质P28Ⅱ所免疫的老鼠的抗体没有识别蛋白质P28Ⅰ。同样地，用在E.Coli中生产的蛋白质P28Ⅰ所免疫的大鼠的抗体没有识别蛋白质P28Ⅱ。然而，这两类抗体能识别从血吸虫提纯的天然P28的制品，而且这些用于抗天然P28的抗体能识别这两个蛋白质的重组体。
这种结果被理解为由于从血吸虫提纯的天然蛋白质P28的制备的不均一性的缘故。在天然蛋白质P28在凝胶上的两个方面的移动以后或者在活体外的血吸虫在ARNm上的转译以后的令人注意的免疫沉淀现象，显示出较小带的存在，它把28K的带分成两半(由J.M.Balloul，R.J.Pierce，J.M.Grzych和A.Capron所出版的图片。出现在1985年Mol.Biochem.Parasitology17期，105-114页)。这个较小的带应该是P28Ⅱ。
菌株的储存保藏
下列菌株都保藏于法国、巴黎。28rue du Docteur Roux-75724PARIS，的国家微生物培养物保藏中心(Collection Nationale de Culture de Microorganismes)。
在例2中所述的被质粒PTG44所转化的Ecoli的菌株N4830的保藏号码是1986年6月6日Ⅰ562。
菌株TGE901/PTG56被保藏于法国，巴黎。25rue du Docteur Roux的全国微生物培养物保藏中心，其保藏号是1987年4月3日的Ⅰ656。
Capron，A.et Dessaint，J.P.(1985)Ann.Rev.Immunol.3，455-476
Balloul，J.M.，Pierce，R.J.，Grzych，J.M.et Capron，A.(1985)Mol.Biochem.Parasitol.17，105-114
Balloul，J.M.，Grzych，J.M.，Pierce，R.J.et Capron，A.(1986)soumis pour publication
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Smith，D.B.，Davern，R.M.，Board，P.G.，Tiu，W.U.，Garcia，E.G.& Mitchell，G.F.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83，8703(1986).
权利要求
1、一种含有被用于抗天然蛋白质P28的抗体所识别的蛋白质P28的抗原决定基的蛋白质。
2、据权利要求
1的蛋白质，其特征在于涉及到一个包含一部分非来源于血吸虫蚴体的蛋白质的杂种蛋白质。
3、据权利要求
1-2中之一的蛋白质，其特征在于含有蛋白质P28的完整顺序。
4、据权利要求
1的蛋白质，其特征在于它是一个其合成是被图16中的CADN所操纵的蛋白质或是这CADN的一个片段，该蛋白质是被用于抗天然蛋白质P28的抗体所识别。
5、据权利要求
1-4中任一的蛋白质，其特征在于它是由细菌所制得的。
6、据权利要求
1-5中任一的蛋白质，其特征在于它是由酵母或细胞培养所制得的。
7、并入据权利要求
1-6中任一蛋白质的表达载体或阻断的细胞。
8、据权利要求
7的细胞，其特征在于涉及一个细菌，该细菌在细菌启动子的操纵下，被包含为据权利要求
1-5中任一的蛋白质密码的基因的质粒所转化。
9、据权利要求
7的细胞，其特征是涉及一个酵母，该酵母在酵母启动子的操纵下，被包含为据权利要求
1-4或6中任一蛋白质密码的基因的质粒所转化。
10、据权利要求
8或9中之一的细胞，其特征是可进行密码的基因是由图16中的CADN的整个顺序或部分顺序所组成。
11、痘病病毒，其特征是它包含一个为据权利要求
1-4中任一个蛋白质密码的，并在能够表达基因的成分的控制下被痘病病毒安插的基因。
12、据权利要求
11的痘病病毒，其特征在于该痘病病毒是疫苗的病毒。
13、据权利要求
12的痘病病毒，其特征是能够表达基因的这些成分包括疫苗的7.5K基因的病毒性启动子。
14、据权利要求
13的痘病病毒，其特征是能够表达基因的这些成分包括一个能为信号顺序和兔子的糖蛋白质的跨膜区域进行密码的顺序。
15、被据权利要求
11-14中任一个痘病病毒感染的哺乳动物的细胞。
16、据权利要求
1-6中任一个蛋白质的制备方法，其特征是在适当的介质中培养据权利要求
7-10或15中任一个细胞，而且随后回收该蛋白质。
17、为据权利要求
1-6中任一个蛋白质P28进行密码的ADN的顺序。
18、据图1的ADN的顺序。
19、据图16的ADN的顺序。
20、特别用于预防血吸虫病的药剂组合物，其特征是它至少包括据权利要求
1-6中任一个蛋白质或者据权利要求
11-14中任一个痘病病毒作为活性剂。
21、据权利要求
20的药用组合物，其特征是它包括据权利要求
11-14中任一个活的痘病病毒作为活性剂。
22、据权利要求
20的药用组合物，其特征是它包括据权利要求
11-14中任一个死的痘病病毒作为活性剂。
23、据权利要求
20-22中任一个的药用组合物，其特征是以可供给人体或动物打针的形式存在。
24、可用于抗据权利要求
1-6中任一个蛋白质的，或可被据权利要求
11-14中任一个痘病病毒诱导的抗体。
25、据权利要求
24的抗体或据权利要求
1-6中任一个蛋白质的用途，即作为诊断血吸虫病的制剂。
26、据权利要求
1-6中任一个蛋白质的用途，即作为谷胱甘肽-S-转移酶的活性的显示剂。
27、据权利要求
26的用途，其特征在于它涉及蛋白质P28I。
28、据权利要求
7-10或15中任一个细胞的用途，即作为谷胱甘肽-S-转移酶的活性的显示剂。
29、实施谷胱甘肽-S-转移酶活性的微生物转化方法，其特征在于使用一个可用作据权利要求
26或27中任一的用途的蛋白质或者一个可用作据权利要求
28的用途的细胞，作为转化剂。
专利摘要
本发明旨在制备抗血吸虫病的疫苗，它涉及一个包括蛋白质P28的抗原决定基的蛋白质，一个包括为该蛋白质进行密码的基因的痘病病毒，一个并入该蛋白质的表达载体的细胞，该蛋白质的制备方法，一个为蛋白质P28密码的ADN的顺序，药剂组合物，抗该蛋白质的抗体及其作为诊断血吸虫病的药剂的用途。
本发明还涉及该蛋白质作为谷胱甘肽—S—转移酶活性的显示剂的用途。
文档编号C07K19/00GK87106696SQ87106696
公开日1988年4月27日 申请日期1987年8月22日
发明者保罗·桑德米耶尔, 简·马克·巴鲁尔, 雷蒙德·彼尔斯, 简马里·格茨奇, 马里·保罗·基尼, 格拉德·洛森, 安德里·卡普罗恩, 简·彼里·利科 申请人:特朗斯吉恩有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan