专利名称：一种稳定的重组α型干扰素固体组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种不含人血清白蛋白的干扰素固体组合物，更具体的说是一种稳定的重组α型干扰素固体组合物的配方及其制备方法。
背景技术：
干扰素(interferon，INF)是动物细胞在诱生剂的刺激作用下产生的一种高活性多功能的细胞因子，具有抗病毒、抗肿瘤和调节机体免疫力等各种作用。根据抗原特性和分子结构，干扰素通常可分为三种类型α或白细胞干扰素、β或成纤维细胞干扰素、γ或免疫干扰素。目前市场上应用最多的是α型干扰素，其广谱抗病毒作用是通过诱导宿主细胞产生多种酶，来干扰病毒复制过程的各个环节，而且一种干扰素能够抑制多种病毒的增殖，它还能激活NK细胞、巨噬细胞、CTL细胞来杀伤病毒感染的靶细胞。
α型干扰素可治疗乙型肝炎、丙型肝炎、尖锐湿疣、慢性宫颈炎、宫颈糜烂、呼吸道感染、疱状性角膜炎、病毒性皮肤病、流行性感冒等常见病毒性疾病，也有抗癌细胞增殖的作用，并已应用于乳腺癌、骨髓癌等多种癌症的治疗。
α型干扰素肌肉或静脉注射给药疗效虽然值得肯定，但是存在病人耐受性差、价格昂贵、副作用大等缺点，并且还存在针头感染的危险。鉴于上述缺点，人们开始尝试其它替代给药途径，如口服、鼻腔、舌下、吸入、腔道内给药等。
作为一种生物活性蛋白，目前存在的问题是，纯的α型干扰素在储存期间的稳定性较差，尤其是在无其它保护剂的情况下，其生物活性的衰减速度很快，因此在制备α型干扰素各种剂型中，通常需要借助于稳定剂和低温存放来延长α型干扰素的生物活性，但低温保护成本太高，使用也不方便。
目前，随着人们对采用人血清白蛋白作为稳定剂，有可能对患者造成病毒感染的潜在危险的认识，业界人士相继开发一系列非生物制品，作为干扰素的稳定剂，如右旋糖酐、明胶与二糖的混合物、羟乙基淀粉和葡聚糖的混合物、多乙氧基、醚吐温80等等，另外，考虑到一般情况下，蛋白质在固体形态中比在溶液中更稳定，我们力图寻求一种不含人血白蛋白的、常温下稳定的干扰素固态形式，本发明人经过多年、长时间、反复实验，终于发现采用大豆卵磷脂、吐温20或吐温80、羟丙基-β-环糊精、分子量为10000～20000的聚乙二醇、十二烷基硫酸钠、赖氨酸、分子量为10000～30000的羟丙基甲基纤维素，作为重组α型干扰素固体组合物的稳定剂是成功的。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种不含人血清白蛋白的稳定的干扰素固体组合物。
本发明的另一个目的是提供一种在室温条件、甚至是高温条件下制备的稳定的干扰素固体组合物，从而避免冷冻干燥周期长、成本高、工艺复杂等缺点。
本发明的再一个目的是提供一种不需低温存放、而在室温条件下就可以保持活性的干扰素固体组合物。
为解决上述任务，本发明采用的技术方案是一种稳定的重组α型干扰素固体组合物，其特征在于，由下列成分按重量百分比组成重组α型干扰素 0.0000001％-0.02％；活性保护剂 0.1％-29％；赋型剂 70％-98.9％；保持pH值4-9范围的缓冲盐体系。
其中的活性保护剂为大豆卵磷脂、吐温包括吐温-20或吐温-80、羟丙基-β-环糊精、分子量为10000～20000的聚乙二醇、十二烷基硫酸钠、赖氨酸、分子量为10000～30000的羟丙基甲基纤维素。赋型剂，主要指的是一些碳水化合物，如甘露醇、木糖醇、乳糖、海藻糖、棉籽糖等，这些赋型剂的加入，不但可起到填充或稀释作用，同时对干扰素的稳定性发挥积极作用。固体组合物中，进一步还含有保持pH值4-9范围的缓冲盐体系，如枸橼酸—枸橼酸钠、磷酸二氢钠—磷酸氢二钠、枸橼酸—磷酸氢二钠、磷酸二氢钠—枸橼酸钠、抗坏血酸—抗坏血酸钠。优选的是含枸橼酸或枸橼酸钠的pH调节剂。该缓冲体系的pH值应控制在4-9之间，优选的是5-8之间。
一种稳定的重组α型干扰素固体组合物的制备方法，其特征在于包括下列步骤(1)按一定配比将缓冲盐、赋型剂、活性保护剂加入到适量水中，配制成固体浓度为0.5％-80％的水相组成；(2)按配比加入干扰素，使之均匀分散于水相体系中；(3)通过适当方法挥去水分，使成干燥的固体。将液状组成通过适宜的方法如喷雾干燥、自然放置、减压干燥、冷冻干燥、旋转蒸发等方法进行干燥；也可以将(2)中得到的水相体系先喷洒于干燥的药用粉末或颗粒上，然后加热烘干。
本发明公开的干扰素活性保护剂或干扰素稳定剂，使干扰素在室温甚至是高温条件下也可保持较高的生物活性。这种稳定的α型干扰素固体组合物可进一步制成各种不同的剂型，比如口服片剂及胶囊、口含片、口腔贴片、阴道给药片、分散片、直肠或阴道栓剂、凝胶剂、软膏，混悬液等。根据具体剂型的需要可相继加入不同的各种药用辅料，如在制备成膏剂时可加入一定的乳化剂；制备成片剂时加入适当的填充剂等等。对于任何一个药学工作者来说，将我们发明的稳定的干扰素固体组合物做成各种制剂，都是轻而易举的事情。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明做进一步的描述，但这些实施例并非对本发明的限制。
实施例1-5主要是介绍几种稳定剂对干扰素在喷雾干燥中的活性保护作用；实施例6-10主要介绍了用另一种赋型剂甘露醇替代乳糖以改善粉末吸湿性问题；实施例11-12主要讲述用旋转蒸发的方法制备高活性的干扰素固体组合物；实施例13-15进一步列举了将干扰素固体组合物制备成固体制剂。
实施例1本实施例阐述一种加入卵磷脂作为活性保护剂制备高活性的干扰素喷雾干燥粉末方法。
用作喷雾干燥的液相，其组成是枸橼酸0.38mg/ml、磷酸氢二钠3.8mg/ml、大豆卵磷脂1.34mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升乳状液含干扰素α-2a约3.7万国际单位，测得溶液pH值为7.05。
所的乳状液用Buchi mini spray dryer B-191进行喷雾干燥(下同，不再提及)，喷雾条件如下溶液温度6℃-8℃进口温度110℃出口温度70℃-80℃喷嘴空气流速500ml/min喷液速度1.8ml/min一旦溶液喷完，降低进口温度，使出口温度维持在60℃-70℃左右约10分钟，对干扰素喷雾干燥粉末进行二次干燥，进一步降低含水量。
用细胞病变抑制法测定干扰素的活性。采用Hep-2/VSV系统检测干扰素的生物学活性，由标准品计算出样品的效价。喷雾干燥后，干扰素的活性与喷雾干燥前比为108％。表明大豆卵磷脂对干扰素具有很好的稳定作用。
实施例2本实施例阐述一种加入羟丙基-β-环糊精(HPCD)作为活性保护剂制备高活性的干扰素喷雾干燥粉末方法。
用作喷雾干燥的溶液，其组成是枸橼酸0.076mg/ml、磷酸氢二钠0.76mg/ml、HPCD0.67mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升溶液含干扰素α-2b约18.7万国际单位。
喷雾条件如下溶液温度4℃-6℃进口温度110℃出口温度60℃-70℃喷嘴氮气流速570ml/min喷液速度2.1ml/min
喷枪冷凝系统 开一旦溶液喷完，降低进口温度，使出口温度维持在60℃-70℃左右约10分钟，对干扰素喷雾干燥粉末进行二次干燥，进一步降低含水量。
用细胞病变抑制法测定干扰素的活性。采用Hep-2/VSV系统检测干扰素的生物学活性，由标准品计算出样品的效价。喷雾干燥后，干扰素的活性与喷雾干燥前比为128％。表明HPCD对干扰素具有很好的稳定作用。
实施例3本实施例阐述一种以赖氨酸作为稳定剂制备高活性的干扰素喷雾干燥粉末方法用作喷雾干燥的溶液，其组成是枸橼酸0.38mg/ml、磷酸氢二钠3.8mg/ml、赖氨酸0.67mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升溶液含干扰素α-2b约100万国际单位，测得溶液pH值为7.05。
喷雾条件如下溶液温度7℃-9℃进口温度110℃出口温度60℃-70℃喷嘴空气流速500ml/min喷液速度1.8ml/min一旦溶液喷完，降低进口温度，使出口温度维持在60℃-70℃左右约10分钟，对干扰素喷雾干燥粉末进行二次干燥，进一步降低含水量。
用细胞病变抑制法测定干扰素的活性。采用Hep-2/VSV系统检测干扰素的生物学活性，由标准品计算出样品的效价。喷雾干燥后，干扰素的活性与喷雾干燥前比为120％。表明赖氨酸对干扰素具有很好的稳定作用。
实施例4本实施例阐述一种以羟丙基甲基纤维素为活性保护剂制备高活性的干扰素喷雾干燥粉末方法。
用作喷雾干燥的液相，其组成是枸橼酸0.38mg/ml、磷酸氢二钠3.8mg/ml、羟丙基甲基纤维素1.33mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升溶液含干扰素α-2a约3.7万国际单位。
喷雾条件如下溶液温度6℃-8℃进口温度110℃出口温度70℃-80℃喷嘴空气流速500ml/min喷液速度1.8ml/min一旦溶液喷完，降低进口温度，使出口温度维持在60℃-70℃左右约10分钟，对干扰素喷雾干燥粉末进行二次干燥，进一步降低含水量。
用细胞病变抑制法测定干扰素的活性。采用Hep-2/VSV系统检测干扰素的生物学活性，由标准品计算出样品的效价。喷雾干燥后，干扰素的活性与喷雾干燥前比为116％。表明羟丙基甲基纤维素对干扰素具有很好的稳定作用。
实施例5本实施例阐述一种以十二烷基硫酸钠为稳定剂制备高活性的干扰素喷雾干燥粉末方法。用作喷雾干燥的液相，其组成是枸橼酸0.38mg/ml、磷酸氢二钠3.8mg/ml、十二烷基硫酸钠0.13mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升溶液含干扰素α-2b约3.7万国际单位。
喷雾条件如下溶液温度6℃-8℃进口温度110℃出口温度70℃-80℃喷嘴空气流速500ml/min喷液速度1.8ml/min一旦溶液喷完，降低进口温度，使出口温度维持在60℃-70℃左右约10分钟，对干扰素喷雾干燥粉末进行二次干燥，进一步降低含水量。
用细胞病变抑制法测定干扰素的活性。采用Hep-2/VSV系统检测干扰素的生物学活性，由标准品计算出样品的效价。喷雾干燥后，干扰素的活性与喷雾干燥前比为95％。表明十二烷基硫酸钠对干扰素具有很好的稳定作用。
实施例1-5所述的喷雾干燥粉末都具有较强的吸湿性，这有可能影响干扰素的长期稳定性，因而考虑用另一种填充剂甘露醇替代乳糖，对比二者的吸湿性能。
实施例6-10，与实施例1-5相对应，只是用另一种填充剂甘露醇替代乳糖进行喷雾干燥，结果干扰素的活性保持率有所下降，但是仍然高达90％以上。表明所选稳定剂具有高度的活性保护作用。
吸湿性试验精密称取实施例1-10样品约0.3克，平铺于一敞口玻璃瓶底部，于相对湿度75％条件下放置，并于72小时后取出观察粉末外观，精密称重，算出吸湿百分比。结果表明，实施例1-5样品吸湿量为9％-15％，而实施例6-10的吸湿量降低为1％-4％，粉末的抗吸湿性能得以大幅度提高。
实施例11本实施例阐述一种以吐温-20为保护剂，用减压、旋转蒸发来干燥，以制备高活性的干扰素固体组合物的方法。
用作旋转蒸发干燥的液相，其组成是枸橼酸0.38mg/ml、磷酸二氢钠2.59mg/ml、乳糖142mg/ml、吐温-20 0.07mg/ml，每毫升溶液含干扰素α-2b约3万国际单位。
将上述液相体系在40℃、真空度进行减压旋转蒸发，除去水分，得到干燥固体，用酶联免疫法测定干扰素的效价，结果表明干扰素溶液在减压旋转蒸发变成干燥固体后，其效价仍然高达110％实施例12本实施例阐述一种以聚乙二醇-20000为保护剂，用减压、旋转蒸发来干燥，以制备高活性的干扰素固体组合物的方法。
用作旋转蒸发干燥的液相，其组成是枸橼酸0.22mg/ml、磷酸二氢钠2.51mg/ml、乳糖27.1mg/ml、聚乙二醇-20000 1.4mg/ml，每毫升溶液含干扰素α-2b约15万国际单位。
将上述液相体系在40℃、真空度进行减压旋转蒸发，除去水分，得到干燥固体，用酶联免疫法测定干扰素的效价，结果表明干扰素溶液在减压旋转蒸发变成干燥固体后，其效价仍然高达106％。
实施例13本实施例阐述一种以羟丙基甲基纤维素为保护剂，用减压、旋转蒸发来干燥后，再制备成干扰素口腔粘膜贴附片的方法。
用作旋转蒸发干燥的液相，其组成是枸橼酸0.22mg/ml、磷酸二氢钠2.51mg/ml、乳糖27.1mg/ml、羟丙基甲基纤维素1.4mg/ml，每毫升溶液含干扰素α-2b约15万国际单位。
将上述液相体系在40℃、真空度进行减压旋转蒸发，除去水分，得到干燥固体，用酶联免疫法测定干扰素的效价，结果表明干扰素溶液在减压旋转蒸发变成干燥固体后，其效价仍然高达116％。
将所得干燥固体过100目筛，然后以等量稀释法与适当乳糖混合均匀后，再加入少量卡波谱-934、微粉硅胶等辅料混合，压制成重约60毫克、直径为6毫米的圆型片，每片含干扰素500IU(国际单位)。
上述口腔粘膜片的加速试验和长期留样试验表明，该干扰素制剂长期稳定性很好，一年后干扰素的效价仍然保留90％以上；但是在高湿条件下稳定性较差，相对湿度75％条件放置6个月，干扰素的效价保留低于60％，提示干扰素的该制剂需要防潮保存，应采用塑料泡罩包装。
实施例14本实施例阐述一种通过稳定干扰素固体制备的腔道给药制剂。
采用实施例13中得到的干扰素固体粉末，通过100目筛，备用；取适量聚乙二醇1000和聚乙二醇4000(比例为3∶1)，高压灭菌后，冷却到50～55度，加入上述干扰素固体粉末，使最终成品每只含干扰素5000IU(国际单位)。研磨均匀，保温灌模即得，可用于直肠或阴道。上述栓剂在长期留样试验表明，该干扰素制剂稳定性很好，一年后干效价仍然保留85％以上。
实施例15本实施例阐述一种通过稳定干扰素固体制备的胃肠道给药制剂。
采用实施例3中得到的干扰素固体粉末，加入适量微晶纤维素和乳糖，少量微粉硅胶，采用等量递加法混匀，直接装2号肠溶胶囊，每粒胶囊含干扰素100万IU(国际单位)。
上述肠溶胶囊在40度、75％相对湿度条件下的3个月加速试验试验表明，该干扰素制剂稳定性很好，效价仍然保留93％以上。
权利要求
1.一种稳定的重组α型干扰素固体组合物，其特征在于，由下列成分按重量百分比组成重组α型干扰素 0.0000001％-0.02％；活性保护剂 0.1％-29％；赋型剂 70％-98.9％；保持pH值4-9范围的缓冲盐体系。
2.根据权利要求1所述的固体组合物，其中，活性保护剂为大豆卵磷脂、吐温、羟丙基-β-环糊精、聚乙二醇、十二烷基硫酸钠、赖氨酸、羟丙基甲基纤维素。
3.根据权利要求2所述的固体组合物，其中，吐温为吐温-20或吐温-80；聚乙二醇的分子量为10000～20000；羟丙基甲基纤维素的分子量为10000～30000。
4.根据权利要求1所述的固体组合物，其中，赋型剂为甘露醇、木糖醇、乳糖、每藻糖、棉籽糖。
5.根据权利要求1所述的固体组合物，其中，缓冲盐体系为枸橼酸-枸橼酸钠、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠、枸橼酸-磷酸氢二钠、磷酸二氢钠-枸橼酸钠、抗坏血酸-抗坏血酸钠。
6.根据权利要求1所述的固体组合物，其特征在于，可进一步制成口腔贴片、口含片、腔道用栓剂、口服片剂或胶囊。
全文摘要
本发明公开了一种稳定的重组α型干扰素固体组合物，包含0.0000001％－0.02％重组α型干扰素和0.1％－29％的活性保护剂在内的各种药用辅料，其中的活性保护剂，保证了重组α型干扰素在室温甚至是高温制备过程中的稳定性。将常温下稳定的干扰素固状物可进一步制成各种不同的剂型，如片剂及胶囊、口腔贴片、阴道给药片、分散片、直肠或阴道栓剂等。
文档编号A61K38/21GK1672732SQ20041001879
公开日2005年9月28日 申请日期2004年3月26日 优先权日2004年3月26日
发明者江荣高, 刘衡, 王春龙, 杨颖 申请人:天津药物研究院