降钙素和甲状旁腺素治疗功效的生物标志的制作方法

专利名称：降钙素和甲状旁腺素治疗功效的生物标志的制作方法
技术领域：
本发明一般涉及组织样品的体外分析性检验，并且更特别地涉及钙调节的基因表达谱分析。
背景技术：
钙是体内众多细胞过程所必需的并且尤其对骨代谢具有重要作用。体内钙水平由内分泌控制系统细致地维持。降钙素和甲状旁腺素是这种内分泌控制系统激素中的两种。
降钙素为大约32个氨基酸的多肽激素，是钙体内稳态的内源性调节物并且可作为抗再吸收剂用于治疗低血钙症相关性紊乱。降钙素产生于甲状腺滤泡旁腺细胞(C细胞)。多种降钙素(包括例如鲑鱼降钙素和鳗鱼降钙素)可商业性获得，并且通常在例如骨佩吉特病、恶性低血钙症和绝经后骨质疏松症治疗中使用。Pondel M，Intl.J.Exp.Pathol.，81(6)405-22(2000)。一种形式的降钙素(Miacalcin)可作为鼻腔喷雾剂获得。
甲状旁腺素(PTH)为84个氨基酸的多肽。甲状旁腺素调节骨重建和Ca2+体内稳态。甲状旁腺素还是已知的破骨细胞分化和活性旁分泌激活物。PTS893[SDZ PTS 893；Leu8，Asp10，Lys11，Ala16，Gln18，Thr33，Ala34人PTH1-34[hPTH(1-34)]]是34个氨基酸的甲状旁腺素类似物，可提高骨量和生物机械特性。Kneissel M等，Bone 28237-50(2001年3月)；Stewart AF等，J.Bone.Miner.Res.，15(8)1517-25(2000年8月)；Thomsen JS等，Bone，25(5)561-9(1999年11月)。
已知降钙素和甲状旁腺素在复合体中以相互依赖方式相互作用，但对降钙素和甲状旁腺素如何相互作用的理解仍不完全。已经详细记载了降钙素对破骨细胞再吸收活性和肾小管钙再吸收的抑制效应。然而，对于降钙素对成骨细胞的潜在影响及其与任何其他的骨骼代谢相关因子的相互作用仍存在争论。
多器官基因谱分析将更好地描述整个生物体中化合物诱导的变化并且还提供了理解激素药理学的新视角。基因组技术是目前赋予生物医学研究者产生新假设能力的源泉。在药物开发背景下，它们提供了理解药物药理学的新视角。因此，本领域需要从器官的尺度理解降钙素和甲状旁腺素的活性。
发明简述
本发明满足本领域的需求。多器官基因谱分析全景描述了整个生物体中化合物诱导的变化，并且提供理解药物药理学的新视角。在一个方面，本发明通过基因谱分析首次描述了通过鲑鱼降钙素的激素介导骨重建分子作用机制。可在分子水平重构降钙素作为抗再吸收剂的已知作用机制。还观察到对连接骨重建活性的效应物和途径(BMP、IGF、胞外基质成分和VEGF)的影响。这些结果支持降钙素作为合成代谢剂的作用。在另一个方面，通过评估鲑鱼降钙素或甲状旁腺素类似物PTS893在食蟹猴骨中所诱导的基因表达变化，本发明首次在完好的灵长类动物模型中重构了药剂对一种靶组织的分子作用机制，以阐明介导其效应的分子作用机制。基因谱分析允许对通过G蛋白偶联受体刺激所启动的降钙素信号传导所涉及途径以及这些途径对细胞周期的影响进行重建，如通过所观察到的细胞周期蛋白变化所示。体内(In vivo)基因谱表达研究允许对构成药物效应基础的分子机制进行鉴定。
在一个实施方案中，本发明提供降钙素在制造用于治疗需要用合成代谢剂进行治疗的疾病的药物中的用途。在一个实施方案，所述疾病是动脉粥样硬化。
本发明还提供降钙素在制造用于在选定患者群中治疗钙代谢紊乱的药物中的用途，其中所述患者群的选择基于已施用降钙素的患者中的指示降钙素功效的基因表达谱。在一个实施方案中，降钙素是鲑鱼降钙素。本发明还提供甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物在制造用于在选定患者群中治疗钙代谢紊乱的药物中的用途，其中所述患者群的选择基于已施用甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物的患者中指示甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物功效的基因表达谱。在一个实施方案中，激素类似物是PTS893。在一个实施方案中，药物在确定患者基因表达谱之前以治疗剂量施用。在另一个实施方案中，药物在确定患者基因表达谱之前以亚治疗剂量施用。
本发明还提供治疗受试者疾病的方法，其中疾病是需要施用降钙素、甲状旁腺素、甲状旁腺素类似物或其组合的一种疾病。该方法包括首先向受试者(例如灵长类动物受试者)施用目的化合物，然后获得施用化合物后该受试者的基因表达谱。将该受试者的基因表达谱与生物标志基因表达谱比较。生物标志基因表达谱指示着降钙素、甲状旁腺素、甲状旁腺素类似物或其组合的治疗功效。在一个实施方案中，生物标志基因表达谱是在施用化合物之前的受试者的基线基因表达谱。在另一个实施方案中，生物标志基因表达谱是已施用降钙素(例如鲑鱼降钙素)或甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物(例如PTS893)的脊椎动物的基因表达谱或平均基因表达谱。已施用化合物的受试者的基因表达谱与生物标志基因表达谱的相似性指示该化合物的治疗功效。
因此，本发明提供评估需要施用降钙素、甲状旁腺素或其组合的疾病的治疗功效的生物标志。其中生物标志为Y-盒结合蛋白、骨形态发生蛋白(BMP)、成纤维细胞生长因子(FGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、α-2-HS糖蛋白(AHSG)、破骨细胞刺激因子(OSF)、核受体(类固醇/甲状腺家族)基因以及其他基因的基因表达谱。
本发明提供确定受试者是否入选临床试验的方法，该方法基于对待治疗受试者中表达的生物标志的分析。将待测试化合物施与受试者。在一个实施方案中，待测试化合物以亚治疗剂量施用。然后获得已施用化合物的受试者的基因表达谱。当已施用该化合物的受试者的基因表达谱类似于指示降钙素、甲状旁腺素、甲状旁腺素类似物或其组合的治疗功效的生物标志基因表达谱时，该受试者可入选临床试验。当受试者的基因表达谱不同于指示治疗功效的生物标志基因表达谱时，该受试者可排除于临床试验之外。此类相似性或相异性对本领域技术人员而言是可观察到的。
本发明还提供用于测定需要施用降钙素、甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物的疾病的治疗功效的临床测试法、试剂盒和试剂。在一个实施方案中，试剂盒包含用于通过杂交确定生物标志基因表达的试剂。在另一个实施方案中，试剂盒包含用于通过聚合酶链式反应确定生物标志基因表达的试剂。
优选实施方案描述
本发明基于对受试者施用降钙素(例如鲑鱼降钙素；SEQ ID NO1)或甲状旁腺素(SEQ ID NO2)或其类似物(例如PTS893；SEQ ID NO3)的效应的理解。对施用鲑鱼降钙素或甲状旁腺素类似物的受试者进行多器官基因谱分析的结果提供了降钙素治疗功效和甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物治疗功效的生物标志。如此处所使用，受试者是脊椎动物。在一个实施方案中，脊椎动物是哺乳动物。在更特别的实施方案中，受试者是灵长类动物，例如食蟹猴或人。
这里提供的分析通过在灵长类动物中的多器官基因谱分析全面描述鲑鱼降钙素和PTS893在改变不同器官的核糖核酸(RNA)内容中的分子作用机制。细胞的RNA内容(即“转录组”)是细胞功能和状态的反映。在单个细胞或器官内，转录组中不同组分的表达并非独立。表达水平的改变可启动一系列事件，这将最终导致对该转录组的另一种改变。这些相互依赖的事件按照“途径”来描述。因为细胞内不同功能的改变相互紧密联系，所以此类变化在生物的不同器官内相互关联。对接受相同处理的不同器官进行基因谱分析促进了对生理状态影响和改变的了解。如此处所示，当对多效化合物如降钙素的多器官基因谱进行分析时尤其如此。实际上，对于降钙素所描述的综合的标记特征不仅反映在主要靶器官(即骨)中而且还反映在此处分析的其它器官中。
在该多器官基因谱分析中，作为抗再吸收剂的降钙素以及作为破骨细胞分化和活性的旁分泌激活物的甲状旁腺素PTS893的已知作用机制可在分子水平重构。降钙素对破骨细胞的抑制效应可重构，除了其他变化外还伴有影响PU.1(SPI1；Spi B；SEQ ID NO4)、集落刺激因子(CSF-1(SEQID NO6)；分化和存活)、碳酸酐酶(SEQ ID NO8)、H+-ATP酶、组织蛋白酶K(再吸收活性)、微管蛋白、PAK4(运动性)基因的变化。还观察到对连接骨重建活性(骨形态发生蛋白(BMP)、成纤维细胞生长因子(FGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、细胞外基质成分、类固醇激素、血管内皮生长因子(VEGF)和α-2-HS糖蛋白(AHSG))的效应物和途径的影响，其中所述影响在多数情况下为鲑鱼降钙素和PTS893共有。有趣的是，鲑鱼降钙素还调节编码破骨细胞刺激因子(OSF)和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的基因的表达。更有趣的是，PTS893也调节参与破骨细胞分化和存活的基因(SPI1、CSF-1、单核细胞向巨噬细胞分化相关蛋白(MMD))。PTS893还引起核受体(类固醇/甲状腺素家族)的强烈上调。因此，这些结果支持降钙素作为合成代谢剂的功能。
目前降钙素用于治疗以高骨量为特征的全身性骨骼疾病，其中高骨量是骨形成(合成代谢)和骨再吸收之间不平衡(骨形成占优势)的结果。降钙素促进合成骨形态发生蛋白-2(BMP-2)，已知该蛋白是强效合成代谢剂。骨细胞在接触到降钙素时通过增加BMP-2的产生而表现合成效应的证据是确凿的。因此降钙素可用于处理个体以调节受试者骨矿物质密度的方法。
这是首个在体内模型中通过基因表达谱分析表征降钙素影响骨代谢的方法。可重构降钙素对破骨细胞的抑制效应，其中伴有影响碳酸酐酶，H+-ATP酶和组织蛋白酶K基因的改变。鲑鱼降钙素似乎还调节编码抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的基因的表达，该效应在这里首次描述。鲑鱼降钙素对影响间充质细胞功能的直接调节、自分泌调节、旁分泌调节和内分泌调节的基因如多效营养因子、periostin、成纤维细胞生长因子、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子/结合蛋白(IGF/IGFBP)、骨形态发生蛋白(BMP)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子(TNF)、神经软骨胶(neurochondrin)、卵泡抑素样3(follistatin-like 3)或甲状旁腺素受体基因具有调节效应。鲑鱼降钙素还调节细胞外基质成分(胶原、骨桥蛋白、骨钙蛋白、皮肤桥蛋白(dermatopontin)、软骨粘附素、磷脂酰肌醇聚糖或粘结蛋白聚糖)和酶的合成与降解。由于观察到牙质的变化，故鲑鱼降钙素还影响骨矿化作用的一些方面。
如此处所提供，降钙素还可作为合成代谢剂用于治疗其他的在治疗中需要合成代谢或组织生长的疾病。此种疾病是动脉粥样硬化，即一种动脉粥样斑块并发纤维化和钙化的动脉粥样疾病。
而且，本发明提供降钙素或甲状旁腺素治疗功效的生物标志。如此处所使用，当施用化合物后增加或降低的基因表达是对于基线基因表达(即生物标志基因表达谱是受试者在施用化合物前的基线基因表达谱)的增加或降低(例如至少1.5倍差异)时，该基因表达谱可用于确定治疗功效的判断。备选地或者此外，当已受治疗的受试者的基因表达谱与标准的生物标志基因表达谱可比时，与降钙素(例如鲑鱼降钙素)或甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物(例如PTS893)治疗相比，该基因表达谱可用于确定治疗功效的判断。在一个实施方案中，标准生物标志基因表达谱是已施用降钙素、甲状旁腺素、甲状旁腺素类似物或其组合的脊椎动物的基因表达谱或平均基因表达谱，该基因表达谱或基因表达谱成为与来自施用后受试者的结果相比的标准。本领域众多技术人员称此种包括了治疗和诊断方面的方法为“诊疗(theranostic)”。
在一个实施方案中，受试者是脊椎动物。在一个特别的实施方案中，脊椎动物是哺乳动物。在一个更特别的实施方案中，哺乳动物是灵长类动物，如食蟹猴或人。如此处所使用，向受试者或患者施用药剂或药物包括自我施用或由他人施用。
如此处所使用，当施用降钙素或者甲状旁腺素或类似物后增加或降低的基因表达是对于基线基因表达的增加或降低(例如至少1.5倍差异)时，该基因表达谱用于判断降钙素或甲状旁腺素的治疗功效。如此处所使用，当与基线样品相比基因表达(例如已治疗受试者的样品)在表达水平上显示具有1.5倍差异(即更高)时，该基因表达模式“高于正常”。当与基线样品相比基因表达(例如已治疗受试者的样品)在表达水平上显示具有1.5倍差异(即更低)时，该基因表达模式“低于正常”。
检测本发明所述基因表达的技术包括但不限于Northern印迹、RT-PCT、实时PCR、引物延伸、RNA酶保护、RNA表达谱和相关技术。通过检测本发明所述基因编码的蛋白质产物来检测基因表达的的技术包括但不限于识别蛋白质产物的抗体、Western印迹、免疫荧光、免疫沉淀、ELISA和相关技术。这些技术为本领域技术人员众所周知。Sambrook J等，Molecular CloningA Laboratory Manual，第3版(Cold Spring HarborPress，Cold Spring Harbor，2000)。在一个实施方案中，检测基因表达的技术包括基因芯片的使用。基因芯片的构建和使用为本领域众所周知。参见美国专利号5,202,231；5,445,934；5,525,464；5,695,940；5,744,305；5,795,716和5,800,992。也参见Johnston，M.，Curr Biol，8R171-174(1998)；Iyer VR等，Science，28383-87(1999)和Elias P，“New human genome‘chip’is a revolution in the offing”Los Angeles Daily News(2003年10月3日)。
所述的基因表达谱可包括选自下列的一种或多种基因酸性磷酸酶1同工型a；II型激活蛋白A受体样1；IIB型激活蛋白A受体前体；激活蛋白βC链；α2 HS糖蛋白；珐琅蛋白；膜联蛋白V；芳基硫酸酯酶E前体；液泡H(+)ATP酶；液泡H(+)ATP酶亚基；溶酶体H+转运ATP酶；溶酶体H+转运ATP酶；溶酶体H+转运ATP酶；双糖链蛋白聚糖；骨形态发生蛋白1；骨形态发生蛋白10；骨形态发生蛋白2A；骨形态发生蛋白5；骨形态发生蛋白6前体；钙结合蛋白1(calbrain)；钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaM激酶)IIγ；钙网蛋白；cAMP应答元件调节物(CREM)；碳酸酐酶I；碳酸酐酶II；软骨寡聚基质蛋白前体；组织蛋白酶K；组织蛋白酶W；CDC样激酶1；CDC样激酶2同工型hclk2/139；硫酸软骨素蛋白聚糖2(多能聚糖)；硫酸软骨素蛋白聚糖3(神经聚糖)；绒膜生长催乳激素1；胰凝乳蛋白酶C(降钙蛋白)；胶原I型与PDGFB融合转录物；胶原II型α1；胶原III型α1；胶原IV型α2；胶原IX型α1；胶原VI型α1；胶原VI型α2(AA 570 998)；胶原XI型α1；胶原XI型α2；胶原XI型α2；胶原，I型，α2；胶原，IV型，α1；胶原，IX型，α2；胶原，V型，α2；胶原，VI型，α1；胶原，VI型，α1前体；胶原，XVI型，α1；胶原，XVI型，α1；胶原酶3(基质金属蛋白酶13)；结缔组织生长因子；细胞周期蛋白A2；细胞周期蛋白B1；细胞周期蛋白D2；细胞周期蛋白E2；细胞周期蛋白依赖性激酶5；细胞周期蛋白依赖性激酶5，调节亚基1(p35)；细胞周期蛋白依赖性激酶6；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物1A(p21，Cip1)；抑半胱氨酸蛋白酶蛋白B(stefin B)；细胞因子诱导的激酶；死亡相关蛋白激酶1；死亡相关蛋白激酶3；牙质基质酸性磷蛋白1(DMP1)；双特异性磷酸酶9；强直性肌营养不良蛋白激酶；外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1；外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1；内皮分化G蛋白偶联受体6前体；雌激素受体；雌激素受体；雌激素受体相关蛋白；雌激素应答B盒蛋白(EBBP)；成纤维细胞激活蛋白；成纤维细胞生长因子1(酸性)；成纤维细胞生长因子18；成纤维细胞生长因子4；成纤维细胞生长因子受体；卵泡抑素样1；卵泡抑素样1；代谢型谷氨酸受体1；GPI1 N-乙酰葡糖胺转移酶组分Gpi1；粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(CSF1)；生长停滞与DNA损伤诱导蛋白α；生长因子受体结合蛋白10；硫酸肝素蛋白聚糖2(基底膜聚糖)；肌醇1，4，5三磷酸受体，1型；肌醇1，4，5三磷酸受体，1型；肌醇1，4，5三磷酸受体，2型；肌醇1，4，5三磷酸3激酶同工酶；肌醇多磷酸4磷酸酶I型β；肌醇多磷酸5磷酸酶；肌醇(肌型)1(或4)单磷酸酶1；肌醇(肌型)1(或4)单磷酸酶2；胰岛素样生长因子(IGF II)；胰岛素样生长因子2(生长调节素A)；胰岛素样生长因子结合蛋白；胰岛素样生长因子结合蛋白2；胰岛素样生长因子结合蛋白3；胰岛素样生长因子结合蛋白5；胰岛素样生长因子结合蛋白2；胰岛素样生长因子II前体；胰岛素样生长因子II前体；整合素α10亚基；白细胞介素1受体相关激酶；Janus激酶3；LIM蛋白(类似于大鼠蛋白激酶C结合的enigma)；赖氨酰氧化酶样蛋白；MAD，mothers againstdecapentaplegic同系物3；MAGUK(膜相关鸟苷酸激酶同系物)；MAP激酶激酶激酶(MTK1)；MAPK13促分裂原活化蛋白激酶13；MAPK8IP1促分裂原活化蛋白激酶8相互作用蛋白1；MEK激酶；金属蛋白酶；促分裂原活化蛋白激酶1；促分裂原活化蛋白激酶8；促分裂原活化蛋白激酶激酶1；促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶4；促分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2；促分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3；MMD单核细胞至巨噬细胞分化相关；神经软骨胶；胞质中钙依赖磷酸酶依赖性的活化T细胞的细胞核因子1；OS 4蛋白(OS 4)；OSF 2os成骨细胞特异性因子2(periostin)；破骨细胞刺激因子(OSF)；PAK4；PDGF相关蛋白；磷脂酰肌醇4激酶，催化性β多肽；磷脂酰肌醇聚糖，L类；磷脂酰肌醇多磷酸5磷酸酶，同工型b；磷脂酰肌醇4磷酸5激酶同工型C(1)；磷脂酰肌醇4磷酸5激酶，I型，β；磷脂酰肌醇4磷酸5激酶，II型，β；磷脂酰肌醇聚糖C类(PIG C)；cAMP特异性磷酸二酯酶4A；cAMP特异性磷酸二酯酶4D (dunce(果蝇)同系物磷酸二酯酶E3)；钙调蛋白依赖性磷酸二酯酶IB；磷酸肌醇3激酶；磷酸肌醇3激酶，催化性γ多肽；磷酸肌醇3激酶，3类；磷脂酶Cb3；磷脂酶C，β4；磷脂酶D；磷脂酰肌醇转移蛋白；PKD2蛋白激酶D2；前原胶原I型α2；前原胶原I型α1；前胶原α1 II型；前胶原赖氨酸5双加氧酶；前胶原脯氨酸，2酮戊二酸4双加氧酶(脯氨酸4羟化酶)，α多肽I；孕酮相关子宫内膜蛋白(胎盘蛋白14，妊娠相关子宫内膜α2球蛋白，α子宫蛋白)；氨酰基脯氨酸二肽酶(亚氨二肽酶)PEPD；增殖细胞核抗原；脯氨酰4羟化酶β；丝氨酸蛋白酶11(IGF结合)；蛋白酶体(prosome，macropain)亚基，β型，10；活化STAT蛋白质抑制物X；蛋白激酶1PCTAIRE；蛋白激酶C底物80K H；蛋白激酶C，α；cAMP依赖性蛋白激酶，催化亚基γ；cAMP依赖性蛋白激酶，调节亚基，I型，β；cAMP依赖性蛋白激酶，调节亚基，II型，α；G蛋白偶联的嘌呤能受体P2Y，11；RAC2 Ras相关的C3肉毒杆菌毒素底物2(rho家族，小GTP结合蛋白Rac2)；受体酪氨酸激酶DDR；类视黄醇X受体γ；核糖体蛋白S6激酶；核糖体蛋白S6激酶，90kD，多肽3；SCAMP1分泌性载体膜蛋白1(囊泡运输)；分泌磷蛋白1(骨桥蛋白，骨唾液酸蛋白I，早期T淋巴细胞激活因子1)；丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制物，进化枝H(热休克蛋白47)，成员2；丝氨酸/苏氨酸激酶38；丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶；SF1类固醇生成因子1；信号转导及转录激活蛋白1；信号转导及转录激活蛋白2，113kD；信号转导及转录激活蛋白5A；信号转导及转录激活蛋白5A；信号转导及转录激活蛋白6(STAT6)；Smad 3；Smad锚定受体激活物，同工型1；Smad5；SMAD6(抑制BMP/Smad1(MADH1))；SNF1相关激酶；Spi B转录因子(SPI 1/PU.1相关)；Stat5b(stat5b)；Ste20相关丝氨酸/苏氨酸激酶；TEIG；TGFB可诱导的早期生长应答；TGFB可诱导的早期生长应答；TIEG；TGFB1诱导的抗凋亡因子1；TGFβ诱导的凋亡蛋白12；TGFβ前体；TGFβ超家族蛋白；Tob；tousled样激酶1；转化生长因子，β受体III(β聚糖，300kD)；转化生长因子β3(TGFβ3)；TRIO三重功能结构域(PTPRF相互作用)；微管蛋白α1；微管蛋白α3；微管蛋白α同种型H2α；微管蛋白β2；微管蛋白β3；微管蛋白β4；微管蛋白β，辅助因子D；VI型胶原α2链前体；遍在蛋白载体蛋白E2C；血管内皮生长因子；血管内皮生长因子；血管内皮生长因子B和Y盒结合蛋白1。
如此处所使用，向受试者或患者施用药剂或药物包括自我施用和他人施用。
降钙素
术语“降钙素”不仅包括天然存在的降钙素，还包括它们的药用活性衍生物和类似物，例如其中在天然存在产物中出现的一个或多个肽残基被替换或其中N-末端或C-末端被修饰。根据本发明优选使用的降钙素是鲑鱼、人和猪降钙素和依降钙素。所有这些化合物均可商业性获得，并且在文献中充分描述了这些化合物及其药用特性。见美国专利号第5,733,569和5,759,565，其内容被引用作为参考。
根据本发明方法待施用的降钙素的量及因此本发明组合物中的活性成分的量取决于所选择的特定降钙素、待治疗疾病、所期望的施用频率和所期望效果。
如经过血浆浓度测定可见，鼻腔施用后降钙素(具体而言为鲑鱼降钙素)的生物利用度通常高于肌内注射所达到水平的约50％的数量级。因此，可以实现根据本发明的适宜施用，以至于得到为壁内如肌内施用治疗所达到的剂量率的两倍或更多倍(例如2倍至4倍)级别的剂量率。关于施用Miacalcin(降钙素-鲑鱼)鼻腔喷雾剂的信息可在Miacalcin处方信息(Novartis，2002年11月)中获得。
对于肌内注射，以约每日一次至约每周三次的频率使用约50至100MRC单位的个体剂量。对根据本发明的鼻腔施用，治疗由此适宜地包括以每日大约一次至每周大约三次的频率施用从大约50至大约400MRC单位、更优选从大约100至大约200MRC单位的剂量。前述剂量将方便地在单次使用中施用，即治疗将包含施用含有大约50至大约400MRC单位、优选大约100至大约200MRC单位降钙素的单一鼻腔剂量。备选地，该剂量可在一天内分成一系列次数例如2-4次间隔施用，因此每次使用的剂量包含大约10至大约200MRC单位，优选地是大约25至大约100MRC单位。
每次鼻腔施用的组合物总量适当包含大约0.05至0.15ml，一般大约0.1ml，例如0.09ml。因此，使用的组合物在每毫升中适当包含大约150至大约8,000、优选大约500至大约4,000、更优选大约500至大约2,500且最优选大约1,000至大约2,000MRC单位降钙素，如鲑鱼降钙素。
术语“降钙素”还包括例如在美国专利号5,719,122、5,175,146和5,698,6721中描述的活性肽类似物和模拟物。见美国专利申请号2003015815。“降钙素超家族”由降钙素、降钙素基因相关肽(CGRP)和胰淀粉样肽组成。降钙素和CGRP来自人CT/CGRP基因。初级RNA转录物的可变剪接导致CGRP和CT肽以组织特异性方式翻译。CGRP(37个氨基酸的神经肽)及其受体在体内广泛分布。胰淀粉样肽(37个氨基酸的肽)由位于第12号染色体(据认为该染色体是第11号染色体的演化性复制品)的基因产生并且与CGRP和人降钙素分别具有46％和20％的氨基酸序列同源性。术语“降钙素基因相关肽”或“CGRP”包括天然CGRP(优选人CGRP)及其活性类似物。已知CGRP在骨形成中具有多种功能。术语“胰淀粉样肽”包括天然胰淀粉样肽(一般为人源)以及其药用活性类似物。已知该激素通过多种机制诱导骨量形成。“降钙素样剂”包括“降钙素”、“CGRP”和“胰淀粉样肽”。见美国专利申请号2003015815。
甲状旁腺素
术语“甲状旁腺素”指甲状旁腺素、可刺激骨形成和增加骨量的其片段或代谢物以及其结构类似物。还包括甲状旁腺素相关肽和甲状旁腺素相关肽的活性片段及类似物。见美国专利号4,086,196、5,001,223、6,541,450和6,649,657以及公布的PCT专利申请WO 94/01460和WO 93/06845。本领技术员可根据标准测定法迅速确定甲状旁腺素的功能性活性。众多这些化合物如下描述并参考，然而，其他甲状旁腺素将为本领技术人员所知。示范性甲状旁腺素在美国专利号6,541,450和6,649,657所引用的参考文献中公开，所述专利的完整内容被引用作为参考。通过在常规测定法中测定的甲状旁腺素的活性证明了甲状旁腺素作为药剂在治疗哺乳动物的低骨量疾病(例如骨质疏松症)中的效用，其中常规测定法包括体内测定法、受体结合测定法、环AMP测定法和骨折愈合测定法。
PTS893是内源性甲状旁腺素的类似物，其中在该类似物中通过在甲状旁腺素片段N末端内的特定残基处进行适宜的氨基酸置换消除某些化学不稳定位点，产生稳定和具有生物学活性的人甲状旁腺素片段。人甲状旁腺素的N-末端片段包括hPTH(1-34)OH突变蛋白和hPTH(1-38)OH突变蛋白。PTS893包含甲状旁腺素N-末端至少前27个氨基酸单位。优选的甲状旁腺素衍生物是那些在甲状旁腺素序列如下位置中的一个或多个位置包含至少一个已替换氨基酸单位的衍生物8-11、13、16-19、21、22、29至34，尤其是8-11、16-19、33和/或34。这些化合物在体内和体外均表现出所期望的骨形成特性，其中所述的骨形成特性等于或高于天然PTH或其N-末端片段的水平。见欧洲专利号EP 0 672 057；公布的PCT专利申请WO 94/02510；Kneissel M等，Bone，28237-50(2001年3月)；StewartAF等，J Bone Miner Res，15(8)1517-25(2000年8月)；Thomsen JS等，Bone，25(5)561-9(1999年11月).
试剂盒
本发明的试剂盒可含有在试剂盒容器表面或内部的书面产品。该书面产品描述如何使用该试剂盒内所包含的试剂以便例如测定患者是否对治疗需要使用降钙素、甲状旁腺素、甲状旁腺素类似物或其组合的疾病的化合物有效应答或能够有效应答。在几个实施方案中，试剂的使用可按照本发明方法进行。在一个实施方案中，试剂是用于确定相关基因表达的基因芯片。
提供如下实施例以便更充分地阐明本发明的优选实施方案。该实施例无论如何不得解释为对如后附权利要求书所限定的本发明的范围的限制。
实施例
鲑鱼降钙素和PTS893，在猴子中进行的药物基因组学探索性研究；微芯片基因表达分析
前言和简述
本实施例的目的是评估以50μg/只动物/日的鲑鱼降钙素(sCT)和5μg/只动物/日的PTS893皮下治疗两周后食蟹猴的基因表达变化，以阐明介导其效应的作用机制以及鉴定具有治疗性指示作用的生物标志。相信本实施例是首个通过在灵长类动物中进行多器官基因谱分析全面描述鲑鱼降钙素和甲状旁腺素类似物的分子作用机制的分析。还相信本实施例是首个描述由鲑鱼降钙素和PTS893所致的激素介性导骨重建的分子作用机制的基因谱分析。
在本实施例中，发现鲑鱼降钙素和PTS893均对影响间充质细胞功能的直接、自分泌、旁分泌和内分泌性调节的基因如转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子(IGF)、骨形态发生蛋白(BMP)和血管内皮生长因子(VEGF)基因具有调节效应。两种化合物还调节细胞外基质成分的合成和降解。鲑鱼降钙素还调节雌激素受体和类固醇生成因子，而PTS893引起类固醇/甲状腺受体家族的核受体强烈上调。因此这些数据支持降钙素作为合成代谢剂的功能。
此外，由于观察到珐琅蛋白、牙质和外核苷酸焦磷酸酶的变化，故鲑鱼降钙素和PTS893还影响细胞外基质矿化的某些方面。
此外，PTS893通过细胞因子和RANK配体影响对破骨细胞分化和活性的旁分泌性激活的介导。
至于单一治疗，基因表达谱中的非显著性差异归因于组合施用了鲑鱼降钙素和PTS893这一事实。
因此，本实施例中的基因谱分析允许对涉及降钙素和甲状旁腺素信号转导(由G蛋白偶联受体刺激所启动)的途径以及它们对细胞周期的影响(如通过观察到的细胞周期蛋白变化所示)进行重建。
动物
用鲑鱼降钙素(sCT)、PTS893或两者的组合皮下治疗两周，其中鲑鱼降钙素和PTS893均溶于含9％自体血清的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。溶剂用作对照组的媒介物。
本分析中所用动物是食蟹猴(Macaca fascicularis)，由灵长目动物动物研究中心(Centre de Recherches Primatologiques，Port Louis，毛里求斯)提供。每组和每一性别使用两只动物。治疗期开始时，动物至少24月龄，体重约3千克。将动物在符合动物福利的标准条件下饲养。每日检查动物死亡率、食物消耗和临床观察。每周记录体重一次。剂量为0μg/只动物/日(作为对照)、50μg/只动物/日的鲑鱼降钙素和5μg/只动物/日的PTS893。
如下所示，在本实施例中开展的临床观察和分析以及组织病理学检查显示食蟹猴对50μg/只动物/日剂量的鲑鱼降钙素皮下施用良好耐受。
体内检查
未见显著的组织病理学变化。除了在鲑鱼降钙素组中观察到8至12％的体重下降以外，未见相关变化。还观察到食物消耗下降，虽然其并非总与体重下降一致。
表1
施用鲑鱼降钙素的动物体重下降8％至12％，这可归因于食物消耗下降。以前曾描述鲑鱼降钙素通过作用胰淀粉样肽受体引起厌食效应。EidenS等，J.Physiol.，541(pt3)1041-1048(2002)；Lutz TA等，Peptides，21(2)233-8(2000)。然而，在这里未见中毒迹象。本实施例中所观察到的激素和脂类变化最有可能与随之发生的代谢适应有关。
未见心电图或血压的相关变化。
表2
血液采样
将动物在收集血液前禁食过夜但可自由饮水。从外周静脉获得血样。在预测试期间和治疗期结束时各开展一次标准血液学和临床化学分析。以所述的相同间隔从每一动物中收集血样用于临床化学检查。将血清样品深度冷冻(约-80℃)直至用于激素测定分析。
临床化学和激素测定
在所研究的所有动物内(包括对照组)均见轻微贫血。这归因于反复的血液采样并且被认为是不相关的。
表3
d-6、d7和d13指相对于给药开始日的第-6日、第7日和第13日
表3
d-6、d7和d13指相对于给药开始日的第-6日、第7日和第13日
表4
d-8、d7和d13指相对于给药开始日的第-8日、第7日和第13日
表4
d-8、d7和d13指相对于给药开始日的第-8日、第7日和第13日
所开展的标准临床化学测试中，在已施用鲑鱼降钙素和PTS893的组内可见到磷和/或镁的轻微至中度下降和三酰甘油的中度至显著下降。
表5
d-6、d7和d13指相对于给药开始日的第-6日、第7日和第13日
表5
d-6、d7和d13指相对于给药开始日的第-6日、第7日和第13日
表5
d-6、d7和d13指相对于给药开始日的第-6日、第7日和第13日
表6
d-8、d7和d13指相对于给药开始日的第-8日、第7日和第13日
表6
d-8、d7和d13指相对于给药开始日的第-8日、第7日和第13日
表6
d-8、d7和d13指相对于给药开始日的第-8日、第7日和第13日
表7
d-6、d-5和d13指相对于给药开始日的第-6日、第-5日和第13日
表7
d-6、d-5和d13指相对于给药开始日的第-6日、第-5日和第13日
表7
d-6、d-5和d13指相对于给药开始日的第-6日、第-5日和第13日
表8
d-8、d-7和d13指相对于给药开始日的第-8日、第-7日和第13日
表8
d-8、d-7和d13指相对于给药开始日的第-8日、第-7日和第13日
表8
d-8、d-7和d13指相对于给药开始日的第-8日、第-7日和第13日
鲑鱼降钙素组表现为血清生长调节素中度下降(S.MED，见表9和10)。
表9
d-6、d7和d13指相对于给药开始日的第-6日、第7日和第13日
表9
d-6、d7和d13指相对于给药开始日的第-6日、第7日和第13日
表9
d-6、d7和d13指相对于给药开始日的第-6日、第7日和第13日
表10
d-8、d7和d13指相对于给药开始日的第-8日、第7日和第13日
表10
d-8、d7和d13指相对于给药开始日的第-8日、第7日和第13日
表10
d-8、d7和d13指相对于给药开始日的第-8日、第7日和第13日
组织采样
通过静脉内注射Pentothal引起的深度麻醉处死动物，然后放血。采集所有相关组织用于组织病理学和基因表达谱分析。将如下织样品进行加工以便分析肝、肾、垂体、肌肉、骨、十二指肠、脾和气管。用于组织病理学的样品在经磷酸盐缓冲的10％福尔马林中固定。骨的脱矿化在10％甲酸中进行。组织样品在Paraplast中包埋并切成4微米切片用于苏木精和伊红染色。用于基因表达谱分析的样品在切下后立即在液氮中迅速冷冻，在干冰上保存随即在约-80℃的深冷冰箱内保存直至使用。选择用于基因表达谱分析的所有样品均经组织病理学检查。
组织病理学
对选择用于基因表达谱分析的组织样品进行的组织病理学检查表现出正常范围的偶然性损害，就严重程度和分布而言，其与所有治疗组中的对照无差异。
观察到炎性变化和再生性变化的发生率在已施用鲑鱼降钙素的雌性肾内略微较高。因为在治疗性使用降钙素40年后未见肾毒性记载，故并不认为这些变化是相关的。
对骨切片做骨粘连蛋白、骨桥蛋白和骨钙蛋白染色并且做组织病理学评估。对骨组织的组织形态学作骨再吸收和合成(类骨质形成)参数测量。
胫骨的骨粘连蛋白、骨桥蛋白和骨钙蛋白染色显示组一(对照)和组二(鲑鱼降钙素)之间的无差异。对骨粘连蛋白的染色显示，编号2553动物由于处于重度非治疗相关病理学状态(重度、亚急性骺脱离)而导致骺生长板严重增大和退化。
对骨组织进行组织形态计量以便确定与骨再吸收和合成(类骨质形成)有关的参数。
结果(见表11和12)显示鲑鱼降钙素提高胫骨内的小梁体积和厚度约17％，但是在脊椎中未见提高。PTS893降低胫骨内(T)的皮质厚度(18％)并且提高皮质孔隙率(54％)，但是在脊椎(V)内未见变化。与此相反，PTS893分别诱导胫骨和脊椎中类骨质体积(37％T，213％V)和表面(49％T，37％V)以及成骨细胞表面(40％T，24％V)的增加。
表11
sCT鲑鱼降钙素；SD标准差
BV/TV小梁骨体积；Tb.Th.小梁厚度；Tb.N.小梁数量；Tb.Sp.小梁分离度；Ct.
Por.皮质孔隙率；Ct，Th.皮质厚度；OS/BS类骨质表面；OV/BV类骨质体积；
ES/BS侵蚀表面；Obs/BS成骨细胞表面。
表12
sCT鲑鱼降钙素；SD标准差
BV/TV小梁骨体积；Tb.Th.小梁厚度；Tb.N.小梁数量；Tb.Sp.小梁分离度；Ct.Por.
皮质孔隙率；Ct，Th.皮质厚度；OS/BS类骨质表面；OV/BV类骨质体积；ES/BS侵蚀
表面；Obs/BS成骨细胞表面。
组织形态计量显示除PTS893诱导类骨质合成增加以外，胫骨和脊椎骨间的结果不一致。对于不连续方式施用的甲状旁腺素已经很好地证明了该效应。
RNA提取和纯化
选择一套组织用于基因表达谱分析。这些组织包括来自肾、骨、肌肉、十二指肠、垂体和肝的样品。尤其将来自股骨和胫骨的骨干骨进行处理用于基因表达谱分析。简而言之，通过酸性硫氰酸胍-酚-氯仿抽提(Trizol，Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，Calif.，美国)从每份冷冻组织切片获得总RNA，然后使用亲和树脂(RNeasy，Qiagen)并根据制造商的说明书纯化总RNA。经λ＝260nm吸光度(A260nm)定量总RNA，并以A260nm/A280nm比率推测纯度。通过非变性琼脂糖凝胶电泳证实RNA分子的完整性。将RNA储存于约-80℃直至分析。将每种单独RNA样品的一部分保存用于通过实时PCR方法分析关键基因。
杂交测定法
按照GeneChip系统(GeneChip Expression Analysis TechnicalManual，Affymetrix Inc.，Santa Clara，Calif.，美国)制造商推荐，在Genomics Factory EU实验室通过GeneChip表达探针芯片进行转录谱分析。使用HG-U95Av2 GeneChip表达探针芯片(Affymetrix，Santa ClaraCalif.，美国)。以大约5μg全长总RNA为起始量，使用Superscript Choice系统(Invitrogen Life Technologies)和T7-(dT)24 DNA寡核苷酸引物合成双链cDNA。合成后，通过酚/氯仿/异戊醇抽提及乙醇沉淀纯化cDNA。然后使用BioArray高效RNA转录物标记试剂盒(ENZO)在生物素化核糖核苷酸存在下将纯化的cDNA体外转录形成生物素标记的cRNA。将标记的cRNA在亲和树脂(Rneasy，Qiagen)上纯化、定量和分装。将大约10μg量的标记cRNA与表达探针芯片在45℃杂交约16小时。然后使用GeneChip Fluidics Workstation 400(Affymetrix)洗涤芯片并用链霉抗生物素-藻红蛋白(Molecular Probes)染色两次。然后用共聚焦激光扫描器(GeneArrayScanner，Agilent)扫描芯片两次，产生一幅扫描图像。使用微芯片分析程序包第4版(MAS4)程序(Affymetrix)将得到的“.data-file”处理成“.cel-file”。将“.cel file”保存并加载至Affymetrix GeneChip实验室信息管理系统(LIMS)。LIMS数据库通过网络文件系统与UNIX SunSolaris服务器连接，从而允许将所有探针单元的平均强度(CEL file)下载至Oracle数据库。将原始数据转换成使用150的“目标密度”的表达水平。所显示数值是对于特定转录物序列的探针集合内所包含探针对的信号强度的加权平均值(AvgDiff值)。检查数据质量并加载至GeneSpring软件4.2.4和5版(Silicon Genetics，Calif.，美国)用于分析。
数据分析
用Silicon Genetics软件包GeneSpring 4.2.4和5版开展数据分析。将低于20的平均差异值设置为20。使用这些程序中的多种过滤和聚类工具探索数据集合，并鉴定出揭示改变的细胞和组织功能以及可用于建立化合物作用模式工作假设的转录物水平变化。
在本实施例的生物学解释的上下文中确定认为是上调或下调的阈值范围。
这些数据集合的信息内容是数值变化和生物学信息的结合。基于通过比较性和统计学算法所鉴定的数值变化和与其他被调节的基因(指向共同生物学主题)的相互关系的联合作出认为是特异性基因相关的决定。所述联系的重要性通过分析人员回顾相关科学文献来评估。
除非特别声明，这里所报告的提高和降低指转录物丰度。
基因表达谱分析
在已施用50μg/只动物/日的降钙素的组中开展多器官比较性基因谱分析。所选则用于分析的器官是肝、肾、垂体、骨骼肌、骨、十二指肠、脾和气管。
表13
表13
表13
表13
表13
表13
表13
表13
此外，评估了PTS893在骨内的效应。
表14
表14
表14
表14
表14
表14
表14
表14
-数字＝下调倍数
+数字＝上调倍数
实时PCR
基于DNA微芯片信息，选择一套转录物用于通过实时PCR(RT-PCT)定量分析。
简而言之，该方法利用嵌入双链DNA的SyBr绿色染料。通过监测SyBr绿色染料荧光的增加直接检测PCR产物的积累。反应以循环期间首先检测到PCR产物扩增的时间点为特征，而不是以经过固定轮次循环后积累的PCR产物量为特征。核酸靶标的最初拷贝数越高，观察到荧光显著性增加的时间越短。
使用Applied Biosystem试剂盒(Applied Biosystems#N808-0234)按照制造商推荐从每份RNA样品产生cDNA。如下使用SyBr GreenUniversal PCR Master混合物(Applied Biosystems#4309155)制备PCR混合物5μl cDNA模板、400nM每种引物、0.2mM脱氧核苷酸三磷酸、1mM MgCl2和0.5U Taq DNA聚合酶、5μl SyBr Green PCR缓冲液和无RNA酶水至终体积50μl。使用ABI Prism 7700序列检测系统进行进行PCR，在95℃、10分钟的步骤后，如下进行40个循环95℃，30秒；60℃，1分钟。同时进行阴性对照即在PCR反应混合物中以水替代cDNA样品。
基于循环阈值决定起始模板浓度。循环阈值是最初探测到高于背景的荧光的PCR循环，并且已经证实其与样品中存在的目标拷贝数成反比。通过计算未知靶标相对于绝对标准物的浓度并通过针对有效内源性对照如看家基因(β-肌动蛋白)进行归一化进行定量。因为已经计算出目的基因的分子数除以β-肌动蛋白基因分子数的比率，所以结果表示为对照的百分数。
基于DNA微芯片数据，选择如下转录物集合用于通过RT-PCR进行定量分析粘附受体CD44、血管生成素、骨形态发生蛋白5、碳酸酐酶II、软骨寡聚基质蛋白、组织蛋白酶K、骨桥蛋白、α-2I前原型胶原、Spi-B和Y-盒结合蛋白。
表15
n.a.不可用
在大多数情况下RT-PCR证实了在基因谱分析中所观察到的变化，如在骨形态发生蛋白5、碳酸酐酶II、组织蛋白酶K、软骨寡聚基质蛋白、α-2I型前原胶原、Spi-B和Y盒结合蛋白的例子中即如此。然而未检测到粘附受体CD44、血管生成素-1和骨桥蛋白表达水平的变化。
分析
已知降钙素影响破骨细胞的分化、存活和再吸收活性，引起破骨细胞活性的下降。Pondel M，Intl.J.Exp.Pathol.，81(6)405-22(2000)。这些效应可通过多器官基因谱分析重构(表16)。
表16
经鲑鱼降钙素治疗动物内的多器官基因表达谱分析。显示了表达变化可见的器官。B＝骨；K＝肾；M＝肌肉；P＝垂体；L＝肝；T＝气管。
鲑鱼降钙素似乎通过调节成骨细胞中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白表达而旁分泌性地调节破骨细胞再吸收活性，如表17所示。
表17
PU.1参与破骨细胞生成起始阶段。Tondravi MM等，Nature，386(6620)81-4(1997)。CSF-1对巨噬细胞成熟为必需；CSF-1与早期破骨细胞前体的其受体c-fms结合，提供早期破骨细胞前体存活和增殖所必需的信号。Teitelbaum SL，Science，289(5484)1504-1508(2000)。
有趣的是，PTS893还调节参与破骨细胞分化和存活的基因SPI1，CSF-1和MMD。此前未见此种破骨细胞的调节。
鲑鱼降钙素显示可调节编码破骨细胞刺激因子(OSF)的基因的表达，其中破骨细胞刺激因子是由破骨细胞产生的间接诱导破骨细胞形成和骨再吸收的细胞内蛋白质。Reddy S等，J.Cell Physiol.，177(4)636-45(1998)。这可能提示鲑鱼降钙素在调节破骨细胞功能中的自分泌效应，在这里其为首次描述。
此外，鲑鱼降钙素似乎通过调节成骨细胞中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的表达对破骨细胞再吸收活性进行旁分泌性调节。碳酸酐酶I，II，H+-ATP酶和组织蛋白酶K是主要的溶解骨矿质和基质降解的效应物。Blair HC等，Biochem.，(2002)。微管蛋白和PAK4基因的调节可能与降钙素对破骨细胞运动性PAK 4有关。Zaidi M等，Bone，30(5)655-63(2002)；Jaffer ZM和Chernoff J，Intl.J.Biochem.Cell Biol.，34(7)713-7(2002)。
这些结果显示了降钙素对影响成骨细胞功能直接、自分泌性、旁分泌性和内分泌性调节的基因的调节效应(表18)。这些数据支持骨合成代谢效应归因于降钙素的假说。
表18
经鲑鱼降钙素治疗动物内的多器官基因表达谱分析。显示了表达变化可见的器官。B＝骨；K＝肾；M＝肌肉；P＝垂体；L＝肝；T＝气管。
本实施例的结果显示，降钙素对影响成骨细胞功能直接、自分泌、旁分泌和内分泌性调节的基因具有调节效应。这些数据支持骨合成代谢效应归因于降钙素的假说。
据认为，生长因子的三个家族即转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子(IGF)和骨形态发生蛋白(BMP)是骨发生的主要局部调节物。骨形态发生蛋白被认为是主要影响早期前体骨细胞复制和成骨细胞定型。相反，TGB-β被认为是定型的骨细胞复制和成骨细胞基质产生的最有效诱导物，而IGF似乎整合和扩展了这两种因子的效应。McCarthy TL等，Crit.Rev.Oral Biol.Med.，11(4)409-22(2000)。这些结果支持如此事实，即鲑鱼降钙素和PTS893均能够调节参与骨代谢的这些局部性和全身性因子。
鲑鱼降钙素调节α2-HS糖蛋白(AHSG)(阻断成骨细胞中的TGF-β依赖性信号)的事实也支持这种作用。缺乏AHSG的小鼠显示生长板缺陷、随年龄增长而增加的骨形成和增加的细胞因子依赖性骨发生。Szweras M等，J.Biol.Chem.，277(22)19991-19997(2002)。
鲑鱼降钙素和PTS893还显示可调节编码血管内皮生长因子(VEGF)的基因的表达。已知VEGF在正常和病理性血管生成中具有关键作用。血管形成对于软骨内成骨过程中成功骨发生的关键作用已详细记载。VEGF通过刺激内皮细胞产生骨合成代谢生长因子而间接地诱导成骨细胞的增殖和分化。Wang DS等，Endocrinology，138(7)2953-62(1997)。此外，VEGF刺激初级的人成骨细胞趋化性迁移，提示其在骨形成和重建中的功能性作用。Mayr-Wohlfahrt U等，Bone，30(3)472-7(2002)。
甲状旁腺素介导成骨细胞骨再吸收和形成的效应已经广泛描述。Swarthout JT等，Gene，282(1-2)1-17(2002)。在这里可以证实PTS893对介导破骨细胞分化和活性的旁分泌性活化的细胞因子如白介素6(IL-6)的效应。Greenfield EM等，Life Sci.，651087-102(1999)。PTS893还使核受体(类固醇/甲状腺素家族)强烈上调。
表19
降钙素和甲状旁腺素受体均属于G蛋白受体超家族。在受体刺激后，在降钙素的情况下信号转导通过腺苷酸环化酶/cAMP/蛋白激酶、磷脂酶C、磷脂酶D和MAPK(作为晚期效应者)途径介导，而在甲状旁腺素的情况下信号转导通过腺苷酸环化酶和磷脂酶C介导。基因谱分析允许重构这些途径，显示了通过治疗所调节的并且位于信号转导途径不同水平的基因。
表20
经鲑鱼降钙素治疗动物内的多器官基因表达谱分析。显示了表达变化可见的器官B＝骨；K＝肾；M＝肌肉；P＝垂体；L＝肝；T＝气管。
因为还观察到细胞周期蛋白和细胞周期蛋白相关蛋白的变化，故鲑鱼降钙素似乎还直接影响细胞周期，如表21中所示。
表21
骨形态发生蛋白(BMP)通过Smad蛋白控制成骨细胞增殖和分化。新出现的抗增殖蛋白家族中的成员Tob是成骨细胞中BMP/Smad信号的负调节物。经鉴定，Smad途径和作为其调节物之一的Tob也是受sCT和PTS893治疗所调节的基因，与这两种化合物对骨重建的BMP调节的假设效应吻合。因为还观察到细胞周期蛋白和细胞周期蛋白相关蛋白的变化，故在本文中两种化合物似乎直接影响细胞周期。
两种化合物还调节细胞外基质成分的合成和降解(表22)。
表22
经鲑鱼降钙素治疗动物内的多器官基因表达谱分析。显示了表达变化可见的器官。B＝骨；K＝肾；M＝肌肉；P＝垂体；L＝肝；T＝气管
鲑鱼降钙素还调节细胞外基质成分的合成和降解，如表23所示。
表23
特别有趣的是对Y-盒结合蛋白(YB-1)的调节，在所分析的两种治疗和在鲑鱼降钙素组内的6个器官中的4个器官内出现这种调节。YB-1是与胶
表20
经鲑鱼降钙素治疗动物内的多器官基因表达谱分析。显示了表达变化可见的器官。B＝骨；K＝肾；M＝肌肉；P＝垂体；L＝肝；T＝气管
文中引用的所有参考文献在文中整体引用作为参考，并且为了全部目的以这样一种程度引用作为参考，即如同将每个单独的公开或专利或专利申请被特别地和单独地指明为了全部目的整体引用作为参考。此外，文中引用的所有GenBank登录号、Unigene Cluster编号和蛋白质登录号在文中整体引用作为参考，并且为了全部目的以这样一种程度引用作为参考，即如同将每一个此种编号被特别地和单独地指明为了全部目的整体引用作为参考。
本发明将不受该申请中特定实施方案的限制，其中特定实施方案旨在作为本发明的单个方面的独立说明。对于本领技术人员而言显而易见，可在不脱离本发明思路和范围的情况下对本发明进行众多修改和变化。处于本发明范围内的功能等同的方法和装置，以及文中所列举的那些对于本领技术人员而言从前面的描述和附图
中显而易见。此类修改和变化将处于所附权利要求的范围内。本发明将仅仅受到所述附加权利要求书以及由该权利要求书授权的等同物的全部范围的限制。
权利要求
1.降钙素在制造用于治疗需要合成代谢剂治疗的疾病的药物中的用途。
2.权利要求1的用途，其中疾病是动脉粥样硬化。
3.权利要求1或2的用途，其中降钙素是鲑鱼降钙素。
4.降钙素在制造用于治疗选定患者群体中钙代谢紊乱的药物中的用途，其中对患者群体的选择是基于在施用降钙素的患者中的指示降钙素功效的基因表达谱。
5.权利要求4的用途，其中降钙素是鲑鱼降钙素。
6.权利要求4或5的用途，其中在确定患者基因表达谱之前将降钙素以治疗剂量施用。
7.权利要求4或5的用途，其中在确定患者基因表达谱之前将降钙素以亚治疗剂量施用。
8.甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物在制造用于治疗选定患者群体中钙代谢紊乱的药物中的用途，其中对患者群体的选择是基于在施用甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物的患者中的指示甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物功效的基因表达谱。
9.权利要求8的用途，其中甲状旁腺素类似物是PTS893。
10.权利要求8或9的用途，其中在确定患者的基因表达谱之前将甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物以治疗剂量施用。
11.权利要求8或9的用途，其中在确定患者的基因表达谱之前将甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物以亚治疗剂量施用。
12.治疗受试者中疾病的方法，其中疾病是需要施用降钙素、甲状旁腺素、甲状旁腺素类似物或其组合的一种疾病，所述方法包括如下步骤
(a)向受试者施用化合物；
(b)获得受试者的基因表达谱，其中基因表达谱包含一个或多个基因的基因表达模式，其中一个或多个基因的基因表达模式是施用化合物的结果；
(c)将已施用化合物的受试者的基因表达谱与指示降钙素、甲状旁腺素、甲状旁腺素类似物或其组合治疗功效的生物标志的基因表达谱进行比较；其中已施用化合物的受试者的基因表达谱与生物标志基因表达谱的相似性指示着用化合物治疗的功效。
13.权利要求12的方法，其中疾病是需要鲑鱼降钙素治疗的一种疾病。
14.权利要求12的方法，其中疾病是需要PTS893治疗的一种疾病。
15.权利要求12至14中任意一项所述的方法，其中所施用的化合物是降钙素、甲状旁腺素、甲状旁腺素类似物或其组合。
16.权利要求15的方法，其中降钙素是鲑鱼降钙素。
17.权利要求15的方法，其中甲状旁腺素类似物是PTS893。
18.权利要求12至17中任意一项所述的方法，其中受试者是哺乳动物。
19.权利要求18的方法，其中哺乳动物是灵长类动物。
20.权利要求19的方法，其中灵长类动物是食蟹猴或人。
21.权利要求12至20中任意一项所述的方法，其中生物标志基因表达谱是施用化合物之前受试者的基线基因表达谱。
22.权利要求12至20中任意一项所述的方法，其中生物标志基因表达谱是已施用降钙素、甲状旁腺素、甲状旁腺素类似物或其组合的脊椎动物的基因表达谱或平均基因表达谱。
23.权利要求12至22中任意一项所述的方法，其中基因表达谱包含选自下列的一个或多个基因酸性磷酸酶1同工型a；II型激活蛋白A受体样1；IIB型激活蛋白A受体前体；激活蛋白βC链；α2HS糖蛋白；珐琅蛋白；膜联蛋白V；芳基硫酸酯酶E前体；液泡H(+)ATP酶；液泡H(+)ATP酶亚基；ATP酶，H+转运，溶酶体；ATP酶，H+转运，溶酶体；ATP酶，H+转运，溶酶体；双糖链蛋白聚糖；骨形态发生蛋白1；骨形态发生蛋白10；骨形态发生蛋白2A；骨形态发生蛋白5；骨形态发生蛋白6前体；钙结合蛋白1(calbrain)；钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaM激酶)IIγ；钙网蛋白；cAMP应答元件调节物(CREM)；碳酸酐酶I；碳酸酐酶II；软骨寡聚基质蛋白前体；组织蛋白酶K；组织蛋白酶W；CDC样激酶1；CDC样激酶2同工型hclk2/139；硫酸软骨素蛋白聚糖2(多能聚糖)；硫酸软骨素蛋白聚糖3(神经聚糖)；绒膜生长催乳激素1；胰凝乳蛋白酶C(降钙蛋白)；胶原I型与PDGFB融合转录物；胶原II型α1；胶原III型α1；胶原IV型α2；胶原IX型α1；胶原VI型α1；胶原VI型α2(AA 570998)；胶原XI型α1；胶原XI型α2；胶原XI型α2；胶原I型α2；胶原IV型α1；胶原IX型α2；胶原V型α2；胶原VI型α1；胶原VI型α1前体；胶原XVI型α1；胶原XVI型α1；胶原酶3(基质金属蛋白酶13)；结缔组织生长因子；细胞周期蛋白A2；细胞周期蛋白B1；细胞周期蛋白D2；细胞周期蛋白E2；细胞周期蛋白依赖性激酶5；细胞周期蛋白依赖性激酶5，调节亚基1(p35)；细胞周期蛋白依赖性激酶6；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物1A(p21，Cip1)；抑半胱氨酸蛋白酶蛋白B(stefin B)；细胞因子诱导的激酶；死亡相关蛋白激酶1；死亡相关蛋白激酶3；牙质基质酸性磷蛋白1(DMP1)；双特异性磷酸酶9；强直性肌营养不良蛋白激酶；外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1；外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1；内皮分化G蛋白偶联受体6前体；雌激素受体；雌激素受体；雌激素受体相关蛋白；雌激素应答B盒蛋白(EBBP)；成纤维细胞激活蛋白；成纤维细胞生长因子1(酸性)；成纤维细胞生长因子18；成纤维细胞生长因子4；成纤维细胞生长因子受体；卵泡抑素样1；卵泡抑素样1；代谢型谷氨酸受体1；GPI1 N-乙酰葡糖胺转移酶组分Gpi1；粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(CSF1)；生长停滞与DNA损伤诱导蛋白α；生长因子受体结合蛋白10；硫酸肝素蛋白聚糖2(基底膜聚糖)；肌醇1，4，5三磷酸受体，1型；肌醇1，4，5三磷酸受体，1型；肌醇1，4，5三磷酸受体，2型；肌醇1，4，5三磷酸3激酶同工酶；肌醇多磷酸4磷酸酶I型β；肌醇多磷酸5磷酸酶；肌醇(肌型)1(或4)单磷酸酶1；肌醇(肌型)1(或4)单磷酸酶2；胰岛素样生长因子(IGF II)；胰岛素样生长因子2(生长调节素A)；胰岛素样生长因子结合蛋白；胰岛素样生长因子结合蛋白2；胰岛素样生长因子结合蛋白3；胰岛素样生长因子结合蛋白5；胰岛素样生长因子结合蛋白2；胰岛素样生长因子II前体；胰岛素样生长因子II前体；整合素α10亚基；白细胞介素1受体相关激酶；Janus激酶3；LIM蛋白(类似于大鼠蛋白激酶C结合的enigma)；赖氨酰氧化酶样蛋白；MAD，mothers against decapentaplegic同系物3；MAGUK(膜相关鸟苷酸激酶同系物)；MAP激酶激酶激酶(MTK1)；MAPK13促分裂原活化蛋白激酶13；MAPK8IP1促分裂原活化蛋白激酶8相互作用蛋白1；MEK激酶；金属蛋白酶；促分裂原活化蛋白激酶1；促分裂原活化蛋白激酶8；促分裂原活化蛋白激酶激酶1；促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶4；促分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2；促分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3；MMD单核细胞至巨噬细胞分化相关；神经软骨胶；胞质中钙依赖磷酸酶依赖性的活化T细胞的细胞核因子1；OS 4蛋白(OS4)；OSF 2os成骨细胞特异性因子2(periostin)；破骨细胞刺激因子(OSF)；PAK4；PDGF相关蛋白；磷脂酰肌醇4激酶，催化性β多肽；磷脂酰肌醇聚糖，L类；磷脂酰肌醇多磷酸5磷酸酶，同工型b；磷脂酰肌醇4磷酸5激酶同工型C(1)；磷脂酰肌醇4磷酸5激酶，I型，β；磷脂酰肌醇4磷酸5激酶，II型，β；磷脂酰肌醇聚糖C类(PIG C)；cAMP特异性磷酸二酯酶4A；cAMP特异性磷酸二酯酶4D(dunce(果蝇)同系物磷酸二酯酶E3)；钙调蛋白依赖性磷酸二酯酶IB；磷酸肌醇3激酶；磷酸肌醇3激酶，催化性γ多肽；磷酸肌醇3激酶，3类；磷脂酶Cb3；磷脂酶C，β4；磷脂酶D；磷脂酰肌醇转移蛋白；PKD2蛋白激酶D2；前原胶原I型α2；前原胶原I型α1；前胶原α1 II型；前胶原赖氨酸5双加氧酶；前胶原脯氨酸，2酮戊二酸4双加氧酶(脯氨酸4羟化酶)，α多肽I；孕酮相关子宫内膜蛋白(胎盘蛋白14，妊娠相关子宫内膜α2球蛋白，α子宫蛋白)；氨酰基脯氨酸二肽酶(亚氨二肽酶)PEPD；增殖细胞核抗原；脯氨酰4羟化酶β；丝氨酸蛋白酶11(IGF结合)；蛋白酶体(prosome，macropain)亚基，β型，10；活化STAT蛋白质抑制物X；蛋白激酶1PCTAIRE；蛋白激酶C底物80K H；蛋白激酶C，α；cAMP依赖性蛋白激酶，催化亚基γ；cAMP依赖性蛋白激酶，调节亚基，I型，β；cAMP依赖性蛋白激酶，调节亚基，II型，α；G蛋白偶联的嘌呤能受体P2Y，11；RAC2Ras相关的C3肉毒杆菌毒素底物2(rho家族，小GTP结合蛋白Rac2)；受体酪氨酸激酶DDR；类视黄醇X受体γ；核糖体蛋白S6激酶；核糖体蛋白S6激酶，90kD，多肽3；SCAMP1分泌性载体膜蛋白1(囊泡运输)；分泌磷蛋白1(骨桥蛋白，骨唾液酸蛋白I，早期T淋巴细胞激活因子1)；丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制物，进化枝H(热休克蛋白47)，成员2；丝氨酸/苏氨酸激酶38；丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶；SF1类固醇生成因子1；信号转导及转录激活蛋白1；信号转导及转录激活蛋白2，113kD；信号转导及转录激活蛋白5A；信号转导及转录激活蛋白5A；信号转导及转录激活蛋白6(STAT6)；Smad 3；Smad锚定受体激活物，同工型1；Smad5；SMAD6(抑制BMP/Smad1(MADH1))；SNF1相关激酶；Spi B转录因子(Spi 1/PU.1相关)；Stat5b(stat5b)；Ste20相关丝氨酸/苏氨酸激酶；TEIG；TGFB可诱导的早期生长应答；TGFB可诱导的早期生长应答；TIEG；TGFB1诱导的抗凋亡因子1；TGFβ诱导的凋亡蛋白12；TGFβ前体；TGFβ超家族蛋白；Tob；tousled样激酶1；转化生长因子，β受体III(β聚糖，300kD)；转化生长因子β3(TGFβ3)；TRIO三重功能结构域(PTPRF相互作用)；微管蛋白α1；微管蛋白α3；微管蛋白α同种型H2α；微管蛋白β2；微管蛋白β3；微管蛋白β4；微管蛋白β，辅助因子D；VI型胶原α2链前体；遍在蛋白载体蛋白E2C；血管内皮生长因子；血管内皮生长因子；血管内皮生长因子B和Y盒结合蛋白1。
24.权利要求23的方法，其中基因表达谱包含选自下列的一个或多个基因表达的增加骨形态发生蛋白5；软骨寡聚基质蛋白；组织蛋白酶K；α-2I型前原胶原和Y盒结合蛋白(骨和肾)。
25.权利要求23的方法，其中骨内基因表达谱包含选自下列的一个或多个基因表达的降低碳酸酐酶II；Spi-B和Y盒结合蛋白(肌肉)。
26.权利要求23的方法，其中骨内基因表达谱包含选自下列的一个或多个基因PU.1(SPI1；Spi-B)；粒细胞至巨噬细胞集落刺激因子(CSF1)和单核细胞至巨噬细胞分化相关蛋白(MMD)。
27.权利要求23的方法，其中骨内基因表达谱包含破骨细胞刺激因子(OSF)表达的变化。
28.权利要求23的方法，其中骨内基因表达谱包含血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化。
29.权利要求23的方法，其中骨内基因表达谱包含选自下列的基因表达的变化整合素；胶原酶；基质金属蛋白酶I和II；前胶原内肽酶/蛋白酶；赖氨酰羟化酶；聚集蛋白聚糖；软骨寡聚基质蛋白前体；胶原I型、II型、III型、IV型、V型、VI型、IX型、X型、XI型、XIII型、XIV型、XV型和XVI型；硫酸软骨素蛋白聚糖；皮肤桥蛋白；硫酸肝素蛋白聚糖和粘结蛋白聚糖。
30.权利要求23的方法，其中骨内基因表达谱包含选自下列的基因的表达变化珐琅蛋白；牙质；外核苷酸焦磷酸酶和VEGF。
31.选择受试者入选临床试验的方法，该临床试验用于确定化合物在治疗需要施用降钙素、甲状旁腺素、甲状旁腺素类似物或其组合的疾病中的功效，所述方法包括如下步骤
(a)向受试者施用化合物；
(b)获得受试者的基因表达谱，其中基因表达谱包含一个或多个基因的基因表达模式，其中一个或多个基因的基因表达模式是施用化合物的结果；
(c)将已施用化合物的受试者的基因表达谱与生物标志基因表达谱比较；以及
(d)然后
(i)当已施用化合物的受试者的基因表达谱类似于指示降钙素、甲状旁腺素、甲状旁腺素类似物或其组合治疗功效的生物标志基因表达谱时，该受试者被入选进入临床试验；或
(ii)当已施用化合物的受试者的基因表达谱不同于指示降钙素、甲状旁腺素、甲状旁腺素类似物或其组合治疗功效的生物标志基因表达谱时，该受试者被排除于临床试验之外。
32.权利要求31的方法，其中化合物以亚治疗剂量向受试者施用。
33.用于确定化合物是否具有类似于降钙素治疗功效的治疗功效的方法，其包括如下步骤
(a)向受试者施用化合物；
(b)获得受试者的基因表达谱，其中基因表达谱包含一个或多个基因的基因表达模式，其中一个或多个基因的基因表达模式是施用化合物的结果。
(c)将已施用化合物的受试者的基因表达谱与指示降钙素治疗功效的生物标志基因表达谱比较；以及
(d)然后
(i)当已施用化合物的受试者的基因表达谱类似于已施用降钙素的受试者的生物标志基因表达谱时，则确定化合物具有类似于降钙素治疗功效的治疗功效；或
(ii)当已施用化合物的受试者的基因表达谱不同于已施用降钙素的受试者的生物标志基因表达谱时，则确定化合物具有不同于降钙素治疗功效的治疗功效。
34.权利要求33的方法，其中降钙素是鲑鱼降钙素。
35.权利要求33或34的方法，其中受试者是哺乳动物。
36.权利要求35的方法，其中哺乳动物是灵长类动物。
37.权利要求36的方法，其中灵长类动物是食蟹猴或人。
38.权利要求33至37中任一项所述的方法，其中化合物以亚治疗剂量向受试者施用。
39.用于确定化合物是否具有类似于甲状旁腺素类似物治疗功效的治疗功效的方法，其包括如下步骤
(a)向受试者施用化合物；
(b)获得受试者的基因表达谱，其中基因表达谱包含一个或多个基因的基因表达模式，其中一个或多个基因的基因表达模式是施用化合物的结果。
(c)将已施用化合物的受试者的基因表达谱与指示甲状旁腺素类似物治疗功效的生物标志基因表达谱比较；以及
(d)然后
(i)当已施用化合物的受试者的基因表达谱类似于已施用甲状旁腺素类似物的受试者的生物标志基因表达谱时，则确定化合物具有类似于甲状旁腺素类似物治疗功效的治疗功效；或
(ii)当已施用化合物的受试者的基因表达谱不同于已施用甲状旁腺素类似物的受试者的生物标志基因表达谱时，则确定化合物具有不同于甲状旁腺素类似物的治疗功效的治疗功效。
40.权利要求39的方法，其中甲状旁腺素类似物是PTS893。
41.权利要求39或40的方法，其中受试者是哺乳动物。
42.权利要求41的方法，其中哺乳动物是灵长类动物。
43.权利要求42的方法，其中灵长类动物是食蟹猴或人。
44.权利要求39的方法，其中化合物以亚治疗剂量向受试者施用。
45.用于确定需要施用降钙素、甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物的疾病的治疗功效的试剂盒，其包含
(a)检测需要施用降钙素、甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物的疾病的治疗功效生物标志的试剂；
(b)盛放试剂的容器；以及
(c)在容器表面或内部的书面产品，其描述生物标志在确定疾病治疗策略中的用途。
46.权利要求45的试剂盒，其中试剂是基因芯片。
47.权利要求45的试剂盒，其中试剂是杂交探针。
48.权利要求45的试剂盒，其中试剂是基因扩增试剂。
49.权利要求45至48中任一项所述的试剂盒，其中生物标志包含选自下列的一个或多个基因酸性磷酸酶1同工型a；II型激活蛋白A受体样1；IIB型激活蛋白A受体前体；激活蛋白βC链；α2HS糖蛋白；珐琅蛋白；膜联蛋白V；芳基硫酸酯酶E前体；液泡H(+)ATP酶；液泡H(+)ATP酶亚基；ATP酶，H+转运，溶酶体；ATP酶，H+转运，溶酶体；ATP酶，H+转运，溶酶体；双糖链蛋白聚糖；骨形态发生蛋白1；骨形态发生蛋白10；骨形态发生蛋白2A；骨形态发生蛋白5；骨形态发生蛋白6前体；钙结合蛋白1(calbrain)；钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaM激酶)IIγ；钙网蛋白；cAMP应答元件调节物(CREM)；碳酸酐酶I；碳酸酐酶II；软骨寡聚基质蛋白前体；组织蛋白酶K；组织蛋白酶W；CDC样激酶1；CDC样激酶2同工型hclk2/139；硫酸软骨素蛋白聚糖2(多能聚糖)；硫酸软骨素蛋白聚糖3(神经聚糖)；绒膜生长催乳激素1；胰凝乳蛋白酶C(降钙蛋白)；胶原I型与PDGFB融合转录物；胶原II型α1；胶原III型α1；胶原IV型α2；胶原IX型α1；胶原VI型α1；胶原VI型α2(AA 570998)；胶原XI型α1；胶原XI型α2；胶原XI型α2；胶原，I型，α2；胶原，IV型，α1；胶原，IX型，α2；胶原，V型，α2；胶原，VI型，α1；胶原，VI型，α1前体；胶原，XVI型，α1；胶原，XVI型，α1；胶原酶3(基质金属蛋白酶13)；结缔组织生长因子；细胞周期蛋白A2；细胞周期蛋白B1；细胞周期蛋白D2；细胞周期蛋白E2；细胞周期蛋白依赖性激酶5；细胞周期蛋白依赖性激酶5，调节亚基1(p35)；细胞周期蛋白依赖性激酶6；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物1A(p21，Cip1)；抑半胱氨酸蛋白酶蛋白B(stefin B)；细胞因子诱导的激酶；死亡相关蛋白激酶1；死亡相关蛋白激酶3；牙质基质酸性磷蛋白1(DMP1)；双特异性磷酸酶9；强直性肌营养不良蛋白激酶；外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1；外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1；内皮分化G蛋白偶联受体6前体；雌激素受体；雌激素受体；雌激素受体相关蛋白；雌激素应答B盒蛋白(EBBP)；成纤维细胞激活蛋白；成纤维细胞生长因子1(酸性)；成纤维细胞生长因子18；成纤维细胞生长因子4；成纤维细胞生长因子受体；卵泡抑素样1；卵泡抑素样1；代谢型谷氨酸受体1；GPI1 N-乙酰葡糖胺转移酶组分Gpi1；粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(CSF1)；生长停滞与DNA损伤诱导蛋白α；生长因子受体结合蛋白10；硫酸肝素蛋白聚糖2(基底膜聚糖)；肌醇1，4，5三磷酸受体，1型；肌醇1，4，5三磷酸受体，1型；肌醇1，4，5三磷酸受体，2型；肌醇1，4，5三磷酸3激酶同工酶；肌醇多磷酸4磷酸酶I型β；肌醇多磷酸5磷酸酶；肌醇(肌型)1(或4)单磷酸酶1；肌醇(肌型)1(或4)单磷酸酶2；胰岛素样生长因子(IGF II)；胰岛素样生长因子2(生长调节素A)；胰岛素样生长因子结合蛋白；胰岛素样生长因子结合蛋白2；胰岛素样生长因子结合蛋白3；胰岛素样生长因子结合蛋白5；胰岛素样生长因子结合蛋白2；胰岛素样生长因子II前体；胰岛素样生长因子II前体；整合素α10亚基；白细胞介素1受体相关激酶；Janus激酶3；LIM蛋白(类似于大鼠蛋白激酶C结合的enigma)；赖氨酰氧化酶样蛋白；MAD，mothers against decapentaplegic同系物3；MAGUK(膜相关鸟苷酸激酶同系物)；MAP激酶激酶激酶(MTK1)；MAPK13促分裂原活化蛋白激酶13；MAPK8IP1促分裂原活化蛋白激酶8相互作用蛋白1；MEK激酶；金属蛋白酶；促分裂原活化蛋白激酶1；促分裂原活化蛋白激酶8；促分裂原活化蛋白激酶激酶1；促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶4；促分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2；促分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3；MMD单核细胞至巨噬细胞分化相关；神经软骨胶；胞质中钙依赖磷酸酶依赖性的活化T细胞的细胞核因子1；OS 4蛋白(OS 4)；OSF 2os成骨细胞特异性因子2(periostin)；破骨细胞刺激因子(OSF)；PAK4；PDGF相关蛋白；磷脂酰肌醇4激酶，催化性β多肽；磷脂酰肌醇聚糖，L类；磷脂酰肌醇多磷酸5磷酸酶，同工型b；磷脂酰肌醇4磷酸5激酶同工型C(1)；磷脂酰肌醇4磷酸5激酶，I型，β；磷脂酰肌醇4磷酸5激酶，II型，β；磷脂酰肌醇聚糖C类(PIG C)；cAMP特异性磷酸二酯酶4A；cAMP特异性磷酸二酯酶4D(dunce(果蝇)同系物磷酸二酯酶E3)；钙调蛋白依赖性磷酸二酯酶IB；磷酸肌醇3激酶；磷酸肌醇3激酶，催化性γ多肽；磷酸肌醇3激酶，3类；磷脂酶Cb3；磷脂酶C，β4；磷脂酶D；磷脂酰肌醇转移蛋白；PKD2蛋白激酶D2；前原胶原I型α2；前原胶原I型α1；前胶原α1 II型；前胶原赖氨酸5双加氧酶；前胶原脯氨酸，2酮戊二酸4双加氧酶(脯氨酸4羟化酶)，α多肽I；孕酮相关子宫内膜蛋白(胎盘蛋白14，妊娠相关子宫内膜α2球蛋白，α子宫蛋白)；氨酰基脯氨酸二肽酶(亚氨二肽酶)PEPD；增殖细胞核抗原；脯氨酰4羟化酶β；丝氨酸蛋白酶11(IGF结合)；蛋白酶体(prosome，macropain)亚基，β型，10；活化STAT蛋白质抑制物X；蛋白激酶1PCTAIRE；蛋白激酶C底物80K H；蛋白激酶C，α；cAMP依赖性蛋白激酶，催化亚基γ；cAMP依赖性蛋白激酶，调节亚基，I型，β；cAMP依赖性蛋白激酶，调节亚基，II型，α；G蛋白偶联的嘌呤能受体P2Y，11；RAC2 Ras相关的C3肉毒杆菌毒素底物2(rho家族，小GTP结合蛋白Rac2)；受体酪氨酸激酶DDR；类视黄醇X受体γ；核糖体蛋白S6激酶；核糖体蛋白S6激酶，90kD，多肽3；SCAMP1分泌性载体膜蛋白1(囊泡运输)；分泌磷蛋白1(骨桥蛋白，骨唾液酸蛋白I，早期T淋巴细胞激活因子1)；丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制物，进化枝H(热休克蛋白47)，成员2；丝氨酸/苏氨酸激酶38；丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶；SF1类固醇生成因子1；信号转导及转录激活蛋白1；信号转导及转录激活蛋白2，113kD；信号转导及转录激活蛋白5A；信号转导及转录激活蛋白5A；信号转导及转录激活蛋白6(STAT6)；Smad 3；Smad锚定受体激活物，同工型1；Smad5；SMAD6(抑制BMP/Smad1(MADH1))；SNF1相关激酶；Spi B转录因子(Spi 1/PU.1相关)；Stat5b(stat5b)；Ste20相关丝氨酸/苏氨酸激酶；TEIG；TGFB可诱导的早期生长应答；TGFB可诱导的早期生长应答；TIEG；TGFB1诱导的抗凋亡因子1；TGFβ诱导的凋亡蛋白12；TGFβ前体；TGFβ超家族蛋白；Tob；tousled样激酶1；转化生长因子，β受体III(β聚糖，300kD)；转化生长因子β3(TGFβ3)；TRIO三重功能结构域(PTPRF相互作用)；微管蛋白α1；微管蛋白α3；微管蛋白α同种型H2α；微管蛋白β2；微管蛋白β3；微管蛋白β4；微管蛋白β，辅助因子D；VI型胶原α2链前体；遍在蛋白载体蛋白E2C；血管内皮生长因子；血管内皮生长因子；血管内皮生长因子B和Y盒结合蛋白1。
全文摘要
对施用鲑鱼降钙素或甲状旁腺素类似物的受试者进行的多器官基因谱分析结果提供了降钙素治疗功效以及甲状旁腺素或甲状旁腺素类似物治疗功效的生物标志。其中生物标志是Y－盒结合蛋白、BMP、FGF、IGF、VEGF、α－2－HS糖蛋白(AHSG)、OSF核受体(类固醇/甲状腺素家族)基因和其它基因的表达谱。所得到的结果支持鲑鱼降钙素对骨代谢的合成代谢效应。
文档编号A61P19/08GK1905894SQ20048004091
公开日2007年1月31日 申请日期2004年11月24日 优先权日2003年11月25日
发明者M·博巴迪拉 申请人:诺瓦提斯公司