专利名称：一种具有协同作用的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及包含银杏内酯及麝香的药物组合物，具体地说是涉及增强银杏内酯有益效果的药物组合物。
背景技术：
银杏内酯为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶(银杏叶主要成分为黄酮类化合物、萜类化合物。其中萜类化合物以银杏内酯为主。)的提取物，银杏性味甘、苦、涩，平。归心、肺经。功能为敛肺，平喘，活血化淤，止痛。用于肺虚咳喘，冠心病，心绞痛，高血脂。现代药理研究表明，银杏内酯为目前天然抗血小板激活因子(PAF)受体拮抗剂中最有临床应用前景的药物，其中银杏内酯B拮抗PAF受体的选择性和活性最强。银杏内酯可以抑制血小板聚集，降低血液粘度，改善缺血病人的微循环，减少血栓形成，对脑部缺血引起的损伤起到保护作用；同时稳定细胞膜，减少血管紧张素的渗透；具有抗过敏、抗炎、抗休克作用，对缺血损伤及器官移植的排斥反应亦有保护作用。
银杏内酯的药用历史悠久，具有很好的开发前景。在现有技术中，银杏内酯一般单独使用，这在很大程度上限制了其在临床上的广泛应用，因此，本领域技术人员很容易理解、也迫切地希望开发出这样的复配型药物组合物；它能针对性地协同银杏内酯降血脂、抗血栓等主要功效，同时能够在冠心病危症、心绞痛发作、脑血管意外时，或肺性脑病缺氧，产生脑水肿，脑细胞变性坏死或酒精及一氧化碳中毒处于昏厥休克时作强心剂兴奋剂，改善心脑供血、供氧，增强脑细胞活力功能。且施用方便，无不良反应。
发明内容
我们对银杏内酯及其作用机理进行了深入的研究，特别是通过对具有作强心剂兴奋剂作用的特定活性成分的筛选和组方，有效地解决上述问题，在此基础上的进一步研究即完成了本发明。
经过大量实验筛选，本发明人发现，麝香能显著增强银杏内酯的有益效果，同时包含银杏内酯和麝香的药物组合比目前市售产品有显著的治疗优点。麝香，为鹿科动物麝的雄性香腺囊中的分泌物干燥而成，麝香是十分名贵的药材，含有丰富的营养成份。含水22.66％、灰分8.62％(其中含钾、钠、钙、镁、氯、硫酸根、磷酸根等)、含氯化合物(中含碳酸铵1.1％、铵盐中的氨1.89％。尿素0.4％、氨基酸氮1.077％，总氮量6.16％)、胆甾醇2.19％、粗纤维0.59％、脂肪酸5.15％、麝香酮1.2％。麝香性辛、温、无毒、味苦。入心、脾、肝经，有开窍、辟秽、通络、散淤之功能。主治中风、痰厥、惊痫、中恶烦闷、心腹暴痛、跌打损伤、痈疽肿毒。许多临床材料表明，冠心病患者心绞痛发作时，或处于昏厥休克时，服用以麝香为主要成分的苏合丸，病情可以得到缓解。古书《医学入门》中谈″麝香，通关透窍，上达肌肉。内入骨髓......″。《本草纲目》云″......盖麝香走窜，能通诸窍之不利，开经络之壅遏″。其意是说麝香可很快进入肌肉及骨髓，能充分发挥药性。治疗疮毒时，药中适量加点麝香，药效特别明显。西药用麝香作强心剂兴奋剂等急救药。至今尚未见有人阐述银杏内酯和麝香联合应用在临床上的效应。
先导性试验表明，银杏内酯与麝香的联用表现出协同作用，显著强于单独施用这两种单味药物所产生的效力。同时，本发明人还发现，二者不同配比(例如1∶10-10∶1)与效应之间的关系是非线性的。例如，在预期银杏内酯为主效应的范围内(例如抗凝，抗血栓形成作用)，药效并不总是随着银杏内酯含量的增加而表现出更强的态势；同样地，在预期麝香为主效应的范围内(例如麝香作强心剂兴奋剂作用)，药效也不总是随着麝香含量的增加而增强。尤其值得注意的是，在所有先导性药理实验中均发现了上述现象，这明显不同于现有技术的教导。经过深入研究，进一步确定了本发明中银杏内酯与麝香的重量比例为1∶10-10∶1，优选为1∶5-5∶1。
因此，本发明的一个目的是提供银杏内酯与麝香联用在预防或治疗冠心病、心绞痛、瘀血阻滞所致的中风、半身不遂，口眼歪斜，胸痹心痛，脑梗塞相关疾病中的应用。本发明首次创建性地提出联合给予银杏内酯与麝香能有效地治疗和控制由于许多复杂原因造成的上述疾病，提供了一种新的治疗方案作为现有技术的替代，这种疗法将是医生高度认可并着力推荐的。所述疾病包括但不限于银杏内酯已知能治疗或预防的疾病种类，例如所述疾病包括所述疾病进一步包括减少胆固醇在血管壁的沉积，防治高血压、高脂血症、动脉粥样硬化、冠心病、心绞痛及中风偏瘫后遗症。治疗脑动脉硬化症、脑萎缩、中风后遗症引起的神志不清、健忘、痴呆等。抗动脉血管壁坏死、脱落，防止血栓形成，预防动脉粥样硬化、脑血栓、心肌梗塞的发生。
在上下文中，所述银杏内酯包括银杏内酯的原粉或提取物，其中提取物包括水和/或醇提取的有效部位或其中单一或几种活性成分的组合包括银杏内酯黄色素(Safflor yellow)及银杏内酯甙(Carthamin)，所述麝香是指麝香及其提取物，包括水和/或醇提取的有效部位或单一或几种活性成分的组合包括麝香酮从工业化和经济方面考虑，可采用以下提取工艺(1)银杏内酯提取取银杏内酯，干燥后粉碎成银杏内酯粗粉，用3倍量的纯化水煎煮提取3次，每次三十分钟，合并提取液，趁热滤过，浓缩成稠膏，加入4倍量的95％乙醇，充分搅拌，趁热滤过，减压回收乙醇，真空干燥，粉碎后过80目筛备用。
(2)麝香提取取麝香用3倍量的95％乙醇浸泡提取3次，合并乙醇提取液，蒸出乙醇，加适量纯化水溶解并过滤。真空干燥，粉碎后过80目筛备用。
可将本发明药物组合物制成口服、静脉给药的剂型，例如颗粒剂、片剂、胶囊剂、滴丸、小丸剂或注射剂。
药效学试验例1.材料1.1动物昆明种小鼠，18～22g，27～32g，雄性；大鼠，Wistar种，体重280～320g，均由湖北省医学动物中心提供，合格证号小鼠19-076；大鼠19-098，猫，体重2.0～3.0kg，雌雄兼用，市购.
1.2药品与试剂银杏内酯麝香注射液(YSH，海南国瑞堂制药有限公司提供，规格50mg5mg/5ml)；脉络宁注射液(MLN，南京金陵制药有限公司生产，批号0401011)；盐酸肾上腺素注射液(上海禾丰制药有限公司，批号040401)。
1.3器材BS634型血小板聚集仪(北京生化制药厂)；MVIS-2000型全自动血液流变分析仪(进口)；UV-VIS2半自动生化测定仪(法国莫里埃公司)。
2.方法与结果2.1对胶原蛋白-肾上腺素诱发的小鼠体内血栓形成的影响将体重27～32g的雄性小鼠分为5组，分别为空白对照组、YSH高、中、低3个剂量组(300、150、75mg/kg)和MLN组(7.4mL/kg)，分别腹腔注射各种药物，每天给药1次，连续4d，末次给药后30min，尾静脉注射胶原蛋白(84.4μg/只)、肾上腺素(3.38μg/只)的混合诱导剂，注射后即刻观察15min内小鼠偏瘫未恢复数，进行χ2检验，计算药物对脑血栓的保护率，结果见表1。
Tab.1 The effects of YSH on mice thrombosis induced bycollage-adrenalin in vivo
***P＜0.01 compared with NS；▲▲▲P＜0.01 compared with MLN结果显示，YSH(300mg/kg)对胶原蛋白-肾上腺素诱导的小鼠体内血栓形成有明显的抑制作用，与对照组比差别有显著意义(P＜0.01＝，与MLN组(7.4ml/kg)比差别也有显著意义(P＜0.01)。
2.2对急性血淤模型大鼠血液流变学的影响将大鼠分为6组，分别腹腔注射YSH高、中、低3个剂量组(72、36、18mg/kg)和MLN组(71.8mL/kg)，对照组和模型组给同体积生理盐水，分别腹腔注射各种药物，每天给药1次，连续7d.模型组与给药组于第7d皮下注射肾上腺素0.08mL/100g体重，共两次，间隔4h，两次中间将大鼠浸入冰水内5min，处置后停食，次晨戊巴比妥钠麻醉后颈动脉采血，MVIS-2000型全自动血液流变分析仪测定各项指标，结果见表2。
Tab.2 The effects of YSH on hemorrhedogy in rats(x±s)
***P＜0.01；**P＜0.05 compared with NS；▲▲▲P＜0.01；▲▲P＜0.05compared with MLN结果表明，模型组与正常对照组比，各项指标均明显增加，血淤模型成立；YSH对血液流变学各项指标均有明显的降低作用，与对照组比差别有显著意义(P＜0.01)。
2.3对大鼠体外血小板聚集功能的影响取禁食12～18h的雄性大鼠，麻醉后颈动脉采血，放入预先加好抗凝剂的试管中，混匀，离心5min(1000r/min)，取上清液为富血小板血浆(PRP)。然后离心10min(2000r/min)，取上清液为贫小板血浆(PPP)。取PRP和PPP各200μL，以0.1mol/L磷酸盐缓冲液作对照，每次加入不同浓度的药液20μL，以ADP作诱导剂，在BS634型血小板聚集仪上测定5min的聚集曲线，以最大聚集率进行t检验，并求出各浓度聚集抑制百分率，结果见表3。
聚集抑制率＝〔(缓冲液最大聚集率-药物最大聚集率)/缓冲液最大聚集率〕×100％。
Tab.3 The effects of YSH on rat platelet aggregation by ADP invitro(x±s)
***P＜0.01 compared with NS；▲▲▲P＜0.01；▲▲P＜0.05 compared withMLN结果表明XST对ADP诱导的血小板聚集有明显的抑制作用，与对照组比差别有非常显著意义(P＜0.01)，高中剂量的作用明显优于MLN注射液(P＜0.05，P＜0.01)。
2.4对猫脑血管阻力的影响取健康猫4只，麻醉后背位固定，分离一侧颈总动脉，将颈内动脉以外的分支全部结扎，将恒流泵输入端连于颈总动脉离心端，血液经恒流泵流入脑内，在恒流泵输入及输出端上分别连一三通管，侧管分别连两个检压计，前者记录血压，后者记录脑血管阻力，调节恒流泵速度，使血压和脑血管阻力稳定后，按不完全拉丁方设计动脉给药，0.2mL/kg，记录给药5min内脑血管阻力下降的最低值，以降低百分率进行t检验，结果见表4。
Tab.4 The effects of YSH on cerebrovascular resistance incats/(x±s)
***P＜0.01 compared with NS；▲▲P＜0.05 compared with MLN结果显示，YSH可以降低猫的脑血管阻力，与对照组比差别有显著意义(P＜0.01)，高剂量与MLN比差别也有显著意义(P＜0.05)。
2.5对高脂血症小鼠的影响将雄性小鼠分为6组，除正常对照外，其余各组每日喂饲高脂饲料，同时按不同剂量组分别腹腔注射YSH(150、75、37.5mg/kg)和MLN(7.4mL/kg)，每天给药1次，连续7d，末次给药30min后眼眶采血，用半自动生化测定仪测定血清胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白胆固醇含量，结果见表5。
Tab.5 The effects of YSH on bloodfat mice(x±s)
***P＜0.01；**P＜0.05 compared with NS；▲▲▲P＜0.01；▲▲P＜0.05compared with MLN结果显示，模型组与对照组比，差别有显著意义，高脂模型成立.与模型组比较，YSH 3个剂量均能明显降低甘油三脂的含量(P＜0.05)，高中剂量的作用明显优于MLN(P＜0.01)；高中剂量还能明显降低胆固醇含量，作用明显优于MLN(P＜0.01)；中剂量可使高密度脂蛋白含量明显增加(P＜0.05＝。
药效学试验例21.材料1.1动物Sprague-Dawley大鼠，体重(275±45)g，雌雄各半，由湖北省医学动物中心提供，合格证号大鼠19-058，1.2药品与试剂银杏内酯麝香注射液(YSH，海南国瑞堂制药有限公司提供，规格50mg5mg/5ml)；尼莫地平(nimodipine，Nim)为山东新华制药厂产品，用聚乙二醇400(PEG400)、甘油、蒸馏水按3∶1∶1配制；放射性51铬酸钠由中国科学院原子能研究所提供。
1.3器材γ-计数器FH-484北京综合仪器厂产品。原子吸收光谱仪(Varian，USA)。
2.方法按文献(Young W，Rappaport ZH，Chalf DJ，et al.Regionalbrain sodium，potassium and water changes in the rat middlecerebral artery occlusion of ischemia.Stroke，1987，18(4)751.)制备RBMS，储冰箱备用，临用前稀释成80 000 counts·min-1.mL-1RBMS。取SD大鼠80只，随机分10组，即假手术2组(生理盐水组和YSH组)；缺血30min再灌注5min(I30/R5)4组(溶剂对照组2组Saline和PEG400组；YSH、Nim各1组)；缺血30min再灌注60min(I30/R60)4组，分组同上。于缺血前20min，I/R+YSH组iv YSH 15mg·kg-1，I/R+Nim组iv Nim 5μg·kg-1；溶剂对照组iv相应等容积的溶剂。而后用乌拉坦1.2g·kg-1ip麻醉、固定、气管插管、人工呼吸。按改良的四血管结扎法[4]分离并结扎双侧颈总动脉(common carotid arteries，CCA)和双侧锁骨下动脉(subclavia arteries，SA)，造成急性完全性脑缺血。30min松开四根血管扎线，造成缺血再灌注损伤，分别再灌注5min、60min。正中切开下腹部，右髂总动脉与自动抽注机相连，自心尖搏动最明显处开胸，暴露心脏，用5号注射针头刺入左室，将1mL RBMS在1min内匀速注入左室，注射同时打开抽注机，以1mL·min-1速度抽血，注毕RBMS后5s内关抽注机。将动物断颅处死，取出大脑，分离皮层(cerebral cortex，CC)、海马(hippocampus，HC)、纹状体(corpus striatum，CS)，滤纸吸干表面血液，在精密天平上称重。用自动定标器分别测其放射性强度，然后取少许烘干的脑组织用硝酸消化，用去离子水稀释待测，用原子吸收光谱测脑组织钙、钾、钠含量。用下列公式计算各组织相对血流量、水含量及钙、钾、钠含量等。
CBF(mL·min-1.g-1)＝[组织放射性强度×血液抽出量(mL·min-1)]/[血样品放射性强度×组织重量(g)]水含量(％)＝(组织湿重-干重)/湿重×100离子含量(μmol·g-1脑组织干重)＝测定浓度(μg·mL-1)×稀释的容积(mL)/[原子量×组织的干重(g)]各组数据均以均数±标准差(x±s)表示，两组资料组间t检验判断 均数差异显著性。
一、YSH对正常及缺血再灌注大鼠CBF的影响YSH假手术组CC、HC、CS的CBF测得结果分别为0.98、0.83、0.77mL·min-1.g-1，与假手术生理盐水组相比依次增加了36％、24％、24％。I/R组CBF明显低于假手术组，但I/R+YSH和I/R+Nim组的CBF显著高于I/R对照组，结果见表1。
表1 YSH对正常及缺血再灌注大鼠脑CBF的影响Tab 1 Influence of YSH on the regional CBF in normal andischemia-reperfusion rat brains (x±5，n＝8)
*P＜0.05，**P＜0.01，vs related control group；▲▲P＜0.01，vs normal saline二、YSH对脑组织钙、水、钾、钠含量的影响I30/R5时，脑CC、HC、CS组织钙累积、水钠含量明显增加，而钾含量减少，CC处尤甚。随灌注时间延长，此结果加剧。YSH能有效逆转该现象。Nim能明显降低钙含量，略降水含量，有效提高钾浓度。结果见表2、3。
表2 YSH对脑组织钙、钾含量的影响Tab 2 Effect of YSH on the Ca2+and K+contents in rats brains(x±s，n＝8)
*P＜0.05，**P＜0.01，vs related control group；▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，vs normal group表3 YSH对脑组织水、钠含量的影响Tab 3 Effect of YSH on the water and Na+contents in rats brains(x±s，n＝8)
*P＜0.05，**P＜0.01，vs related control group；▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，vs normal group制剂实施例实施例1 片剂
示例工艺取活性成分和乳糖置于V型混合器中混匀，过筛后加适量60％乙醇制粒，60℃干燥，加入硬脂酸镁，充分混匀，压片。所得片剂包衣。
实施例2 胶囊剂处方银杏内酯 100.0g麝香 10.0g淀粉 100.0g示例工艺取活性成分和淀粉置于V型混合器中混匀，过筛后加适量75％酒精制粒，60℃干燥，整粒，灌装2号胶囊1000粒，即得。
实施例3注射剂
示例工艺取麝香提取物加到注射用水中，调节PH约为6.8-8.0，搅拌完全溶解。用注射用水溶解银杏内酯提取物，然后加至麝香提取物溶液中。加入适量活性炭，加热微沸30分钟，除炭、精滤、灌封、灭菌，即得。
实施例4 注射用粉针处方银杏内酯 10.0g麝香提取物1.0g
示例工艺取银杏内酯提取物10.0g，加注射用水适量用碳酸钠调节PH至8.0使溶解，取麝香提取物1.0g加注射用水溶解制成溶液，将紫珠草提取物水溶液加入麝香提取物溶液中加注射用水至1000ml，加入0.5％针用活性炭，加热微沸30min，冷却，除菌过滤，分装1000支，即得。
实施例5 滴丸剂处方银杏内酯 50mg麝香 5mg聚乙二醇6000 200mg泊洛沙姆 30mg硬脂酸 70mg工艺示例取PEG6000加热熔融，加入银杏内酯提取物、泊洛沙姆和硬脂酸，待完全熔融后，搅拌下加入麝香提取物。将混合物滴入液体石蜡冷凝液中成丸。
权利要求
1.一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，包括活性组分和适量的药用赋形剂，所述活性组分由银杏内酯和麝香组成。
2.根据权利要求1所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，所述银杏内酯包括银杏内酯的原粉、水和/或醇提取提取的有效部位或其中单一或几种活性成分的组合；所述麝香包括麝香水和/或醇提取提取的有效部位或单一或几种活性成分的组合。
3.根据权利要求2所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，其中活性组分的含量为1-85％重量。
4根据权利要求2所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，其中活性组分的含量为20-65％重量。
5.根据权利要求1-4之一所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，其中银杏内酯和与麝香重量比例为1∶10-10∶1。
6.根据权利要求5所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，其中银杏内酯和与麝香重量比例为1∶5-5∶1。
7.根据权利要求1或2所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，是经口服、静脉给药、经皮或粘膜给药的剂型，具体剂型包括银杏内酯麝香片、银杏内酯麝香缓释片、银杏内酯麝香胶囊、银杏内酯麝香缓释胶囊、银杏内酯麝香注射液、银杏内酯麝香注射用粉针及冻干粉针、银杏内酯麝香滴丸等。
8.一种具有协同作用的药物组合物，在制备用于预防或治疗心脑血管相关疾病的药物中的应用，其特征在于，所说的药物组合物包括活性组分和适量的药用赋形剂，所述活性组分由银杏内酯和麝香组成。
9.根据权利要求8所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，应用于下列疾病瘀血阻滞所致的中风、中经络，半身不遂，口眼歪斜，胸痹心痛。脑梗塞，冠心病，心绞痛及高脂血症、酒精及一氧化碳中毒昏厥休克。
10.根据权利要求8或9所述的一种具有协同作用的药物组合物，其特征在于，所述疾病进一步包括减少胆固醇在血管壁的沉积，防治高脂血症、动脉粥样硬化、冠心病、心绞痛及中风偏瘫后遗症。治疗脑动脉硬化症、脑萎缩、中风后遗症引起的神志不清、健忘、痴呆、心、脑组织缺血、缺氧病症等。防止血栓形成，预防动脉粥样硬化、脑血栓、心肌梗塞的发生。
全文摘要
本发明涉及增强银杏内酯有益效果的药物组合物，其中包含治疗有效量的银杏内酯和麝香。
文档编号A61P25/28GK1650891SQ20051000199
公开日2005年8月10日 申请日期2005年1月17日 优先权日2005年1月17日
发明者闫彬 申请人:闫彬