专利名称：抗破伤风免疫血浆及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种生物制品原料及其制备方法。具体涉及一种用于生产注射用人破伤风免疫球蛋白的特异性免疫血浆及其制备方法。
背景技术：
破伤风主要是由于破伤风杆菌通过破损的皮肤和黏膜(如伤口、骨折、烧伤、木刺或锈针刺伤等)而侵入人体，并在伤口深部缺氧环境中生长繁殖，产生大量破伤风杆菌外毒素作用于神经系统，引起的全身特异性感染。此类破伤风也叫伤后破伤风，其潜伏期不规律，一般5～10天，个别达20天以上，通常创伤部位越靠近神经中枢，潜伏期愈短，病情也愈重；此外还有一种特殊的破伤风——新生儿破伤风，是由于新生儿断脐所致，俗称脐风、撮口，因其常在断脐后7日左右发病，故又称“七日风”。
破伤风杆菌是一种革兰氏阳性厌氧芽孢杆菌，广泛存在于土壤和草食动物的粪便中，对环境有很强的抵抗力。与其他病原菌不同，破伤风杆菌或其产生的外毒素在伤口均不产生明显的病理改变，它是通过分泌外毒素并扩散至全身而导致发病，其外毒素对神经有特别的亲和力，经吸收后分布于脊髓、脑干等处。因其产生的外毒素毒力强，发作快而易危及生命，因此必须及时治疗。马血清破伤风抗毒素(Tetanus Antitoxin，TAT)和人破伤风免疫球蛋白(Human TetanusImmunglobulin，TIG)能预防创伤后破伤风的发生，在给患者注射后，患者体内立即获得了抗破伤风的抗体，能特异的中和破伤风毒素，使其失去毒性作用。
马血清破伤风抗毒素是采集经破伤风类毒素免疫马所得的血浆，经胃酶消化后纯化制成的液体抗毒素球蛋白制剂。人类应用马血清抗毒素防治破伤风历史已近百年，在我国使用也长达半个多世纪，该方法成功挽救了无数人的生命，但马血清蛋白对人体有很强的过敏原性，故马血清抗毒素常常引起下列两类过敏反应一是过敏性休克，即注射过程或注射后数分钟至一小时内，患者突然感到胸闷、气急、脉搏细速、血压下降，发冷，直至神志昏迷。重者抢救不及，可迅速死亡。此系I型过敏反应，即人体曾注射或接触过马血清；二是血清病(Serum Sikness)，即注射TAT后1-2周出现荨麻疹、发热、淋巴结肿大，脸部浮肿，偶有蛋白尿、呕吐及关节疼痛等。有的可延时很长，可能发展成过敏性脑炎及其他神经炎。此系III型过敏反应。因此使用TAT时必须作皮试，皮试阴性者，注射时仍有可能发生过敏反应。大量临床资料表明，TAT引起过敏反应率为5％-30％，其中约1/10万的致死率。为此，上世纪60年代欧美各国相继研制出TIG用于临床，并逐渐取代TAT。
人破伤风免疫球蛋白是采集经乙肝疫苗免疫后再经破伤风类毒素(Tetanus Toxoid，Td)免疫的供血浆者中具有高效价破伤风抗体的血浆，经低温乙醇分离法提纯，并经病毒灭活处理的特异免疫球蛋白，用于防治破伤风。目前，人破伤风免疫球蛋白已广乏应用于临床并逐渐取代TAT。由于TIG是人源性产品，人体接种后不会发生超敏反应，作用安全，在体内留存时间长，预防和治疗效果都优于马血清。该类产品尤其适用于对马血清严重过敏者。
作为人破伤风免疫球蛋白生产原料的破伤风免疫血浆，尤其是高效价的免疫血浆无疑处于举足轻重的地位。由于免疫程序不尽合理、病毒灭活工艺落后加上血源安全性得不到保障等原因，导致国内破伤风免疫血浆大多存在效价低、安全性难以保证等诸多不足，优质破伤风免疫血浆的生产能力十分有限，已成为了制约破伤风人免疫球蛋白产量的主要瓶颈。
在血浆的病毒灭活方面，目前国内血液制品厂家大多采用以下几种，然而单一灭活法均不能得到令人满意的效果比如BMM膜法能有效除去绝大部分病毒，但其在处理大分子量样品时易堵塞，并且不能保证完全去除B19病毒，缺乏经济实用性；干热处理法能有效灭活脂包膜和非脂包膜病毒，但对B19病毒无效，并且在温度控制和产品质量方面有很高要求；酸孵放法也仅适用于丙种球蛋白。S/D法对脂包膜病毒的灭活很有效，相对来说灭活病毒效果较彻底，但近年有报道只用S/D方法进行病毒灭活处理的血液制品可传播甲型肝炎，因该法对非包膜病毒无效。而紫外照射法能有效灭活非脂包膜病毒，我们将S/D法与紫外照射法进行有机结合，取得了十分满意的效果。
发明内容
本发明的目的是针对国内现有抗破伤风免疫血浆效价低、非脂包膜病毒难以完全除去等不足提供一种效价高、安全性好的抗破伤风免疫血浆，及该血浆的制备方法。
本发明的技术方案是一种用于生产人破伤风免疫球蛋白的免疫血浆抗破伤风抗体效价≥12国际单位/毫升(IU/ml)；丙氨酸氨基转移酶(ALT赖氏法)≤25单位；破伤风表面抗原(使用敏感度为1ng/ml以下的试剂盒检测)阴性；梅毒检查阴性；HIV-1、HIV-2抗体测定阴性；HCV抗体测定阴性；血浆蛋白含量≥6％(g/ml)。
一种抗破伤风免疫血浆的制备方法，按单采血浆技术规程进行，选择身体健康、符合国家单采血浆献浆标准的献血员，经乙型肝炎疫苗免疫后，再以破伤风类毒素进行免疫，其免疫程序为首次注射破伤风类毒素0.5ml，间歇6-8周再进行第二次注射0.5ml，待被免疫献血员体内抗抗破伤风抗体达12IU/ml以上时，按照卫生部颁发的“单采血浆术规程”对献血员实行血浆单采术。采用S/D病毒灭活法与紫外照射法相结合的方式对血浆进行灭菌，无菌塑料血袋分装，采集6小时内-20℃以下速冻，并在-10℃下储存。按照2005版药典三部中对血液制品原料血浆规程对上述产品进行各项指标的检测。所有指标全部合格后才在规定温度下运往生产厂家。
所使用的破伤风类毒素的效价≥2.5IU/支。
本发明的抗破伤风免疫血浆具有如下优点1.对血源信息全部采用计算机管理，公司与单采血浆站进行了微机联网，在掌握各个献血员具体情况的基础上制定出合理的免疫程序及血浆采集周期，与国内外同类产品比较，该原料血浆中具有免疫球蛋白效价高，单个献浆员可献浆时间长，总体献浆量大等特点，免疫群体90％以上破伤风免疫球蛋白效价高于12IU/ml，持续时间超过18个月，其混合破伤风特免血浆的效价平均可达到20IU/ml以上。
2.单采血浆站均采用全套进口的美国HAEMONETICS公司的PCS全自动单采血浆机和先进检测仪器。原料血浆经过严格的检测程序后进行无菌分装，能很好地保证血浆质量。
3.我们在比较了S/D病毒灭活法、BMM膜法、干热处理法与紫外线/光敏物质灭活法的优缺点后，制定出了改良S/D病毒灭活方法，采用有机溶剂和表面活性剂进行协同处理，并结合紫外线照射法，能有效除去有传染HIV，HBV和HCV等脂包膜病毒及HAV和B19等非脂包膜病毒。此方法具有温和、生产程序较简单、技术容易掌握的优点，而且对血浆制品不会产生任何不良影响，保持了血浆成份的天然属性。多次小试及中试证明该工艺基本稳定，S/D残留量达到国际标准，产品的各项技术指标已达到甚至超过OctapharmaAG公司同类产品。
4、该发明生产工艺简单，便于推广应用。
具体实施例方式
1、按单采血浆技术规程进行，选择身体健康、符合国家单采血浆献浆标准的献血员，经乙型肝炎疫苗免疫后，再以破伤风类毒素进行免疫，其免疫程序为首次注射破伤风类毒素0.5ml，隔5周后再注射0.5ml。
2、待被免疫献血员体内抗破伤风抗体达12IU/ml以上时，采用美国HAEMONETICS公司的PCS全自动单采血浆机完成采浆，每次每人份采浆500-600ml，在此过程中加入4％注射用枸橼酸钠(C6H5Na3O7·2H2O)作抗凝剂，所用抗凝剂无菌无热源且不含防腐剂的，pH7.2-7.6。在10～20℃进行离心分出血浆，将红细胞还输给献血员。由此得到抗破伤风免疫血浆，献血员体内破伤风抗体的含量越高，所采集的免疫血浆质量越好。
3、在无菌净化室内采用改良S/D病毒灭活法对血浆进行灭菌采用有机溶剂和表面活性剂进行协同处理，用于灭活血浆制品中的脂包膜病毒如HIV，HBV和HCV等，结合紫外照射法以灭活血浆制品中的非脂包膜病毒如HAV，B19等4、采用无菌、无热原塑料血袋分装，采集6小时内-20℃以下速冻，并在-10℃下储存。按照2005版药典三部中对血液制品原料血浆规程对上述产品进行检测，本发明的原料血浆能达到以下指标外观淡黄色或黄色，无纤维蛋白析出，丙氨酸氨基转移酶(ALT赖氏法)≤25单位；破伤风表面抗原(使用敏感度为1ng/ml以下的试剂盒检测)阴性；梅毒检查阴性；HIV-1、HIV-2抗体测定阴性；HCV抗体测定阴性。血浆蛋白含量≥6％(g/ml)；抗破伤风抗体效价≥12IU/ml，液体血浆在2-8℃运输，冰冻血浆于-15℃下运输。
权利要求
1.一种从健康献浆员体内采得的抗破伤风免疫血浆，其特征在于所述血浆中抗破伤风抗体含量在12国际单位/毫升以上。
2.一种抗破伤风免疫血浆的制备方法，其特征在于用破伤风类毒素免疫健康献浆员，待献浆员体内抗破伤风抗体达到12国际单位/毫升以上时对献浆员实行血浆单采术，采用S/D病毒灭活法与紫外照射法相结合的方式对血浆进行灭菌，无菌塑料血袋分装，采集6小时内-20℃下速冻，并在-10℃下储存。
3.根据权利要求2所述的抗破伤风免疫血浆的制备方法，其特征在于破伤风类毒素的免疫程序为首次注射破伤风类毒素0.5ml，隔4周后再注射0.5ml。
4.根据权利要求2所述的抗破伤风免疫血浆的制备方法，其特征在于所采用的病毒灭活方法为S/D病毒灭活法与紫外照射法相结合，该方法能有效除去HIV、HBV及HCV等脂包膜病毒和HAV、B19等非脂包膜病毒。此方法对血浆制品不会产生任何不良影响，保持了血浆成份的天然属性。
全文摘要
本发明涉及一种抗破伤风免疫血浆及其该免疫血浆的制备方法。通过对健康献浆员进行破伤风类毒素免疫，待献血员体内抗体达每毫升12国际单位以上时，对献浆员施行血浆单采术。采得的免疫血浆经常规检测后冻存。用本发明方法制得的免疫血浆具有高效价、高特异性、高度安全以及在人体内持续时间长等优势，延长了伤者的被保护期，增加了免疫预防效果。
文档编号A61P31/04GK1748710SQ200510032060
公开日2006年3月22日 申请日期2005年8月29日 优先权日2005年8月29日
发明者郑程远, 周祖岳, 李少波, 周松华 申请人:湖南绿十字景达生物原料有限公司