专利名称：一种预防和治疗心脑血管疾病的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种冻干药物组合物，具体地说，是涉及含有人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干药物组合物及其制备方法。
背景技术：
人参为补益药，其补气强身、延年益寿的药理作用被全世界认同，按“气血同源”、“气行则血行”、“气旺则人寿”的中医理论，人参早已被用于心脑血管疾病。现代医学认为，人参除补益作用外，作用于心脑血管疾病最关键的作用是清除体内自由基，从源头上瓦解心脑血管病变的基础。现代药理研究表明，银杏及其有效成分有着广泛的药理作用，具有降血脂、抗动脉粥样硬化、改善心脑微循环等作用(卓斌等，中国药业2001年11期67-69页；唐灵等，华夏医学2001年第3期)。同时，人们也对银杏叶提取物与其他活性物质的联用进行了深入研究，并取得了一定的进展(例如，林金华等，时珍国医国药药2001年第9期；和CN1262103A等)。动物实验表明，银杏叶提取物对动脉有轻度扩张作用，并能减少红细胞聚集，抗血小板聚集，降低全血黏度，增加红细胞变形能力，增加细胞壁弹性，从而改善缺血组织的灌注。两药复方具有补气复脉，活血化瘀之功效，对脑血管疾病(包括脑中风、中风后遗症、脑缺血、脑栓塞、脑血管痉挛等)和心血管疾病(如冠心病、心绞痛、缺血性休克等)均有极佳的疗效，清除自由基和活化细胞同步进行，在解决心脑血管疾患的同时，给人体注入了抗氧化、抗衰老、抗疲劳、延年益寿的生命活力。
国外有商品名为Gincosan的含银杏叶提报物50mg与红参提取物100mg制成的的胶囊剂上市，国内有银杏达莫注射液，其每个剂量单位含银杏叶提取物40mg和双嘧达莫4mg。药效学试验证明由单一银杏叶提取物或银杏叶提取物与化学药剂制成的药剂活性低于红参与银杏叶提取物的复方药物活性。然而，国外的Gincosan银杏红参提取物口服胶囊，却具有生物利用度低、血药浓度低、药效发挥作用慢、药物浪费多等缺点，只适用于轻度和慢性病人，不适宜用于重度和急性发作病人。为有效的解决这个问题，制剂专家研究开发了注射液(例如CN200410040007.2和CN200410034050)，提供了一种生物利用度高、血药浓度高、药效发挥作用快、具有更强活性、疗效更好的人参银杏注射液。但是，其提供的制备方法制备的人参、银杏冻干制剂存在如稳定性不佳、溶剂对病人的刺激性和副作用较大、色泽易变化等问题。
实验证明银杏黄酮类化合物一般能溶于水、稀乙醇、乙酸乙酯等极性溶剂中，难溶于乙醚、氯仿和苯中。黄酮类分子中甲氧基、甲基、不饱和烃基增多时，则降低其在极性溶剂中的溶解度。分子中含有酚性烃基，故一般显弱酸性，在碱性溶液中，类黄酮易开环生成查耳酮型结构而多呈黄色或橙色、褐色，在酸性条性下，查耳酮又恢复为闭环结构，于是呈原色或颜色消失。如土豆、甘蓝、芦笋在碱性溶液中烹煮会变黄。其性质表现为溶于强碱时颜色加深，加酸后又析出沉淀。类黄酮分子中酚性羟基愈多，酸性愈强。7，4’位上有羟基的黄酮，酸性较强，能溶于碳酸钠或饱和石灰水中，有的能溶于碳酸氢钠溶液。银杏内酯难溶于水。人参皂苷易溶于甲醇、乙醇、正丁醇等，在酸性条件下易水解。
银杏叶提取物、人参提取物用现有的冻干制剂处方不能很好地解决澄明度的问题。冻干过程中要求不能使用乙醇等有机溶剂。对一般技术人员而言，人参和银杏合用为注射用的制剂的质量问题很难控制，而且已有的文献和专利技术也未公布有效的解决方案。所以，将人参提取物和银杏提取物制成具有良好稳定性和溶解性的复方注射用药物具有重要意义。
发明内容
经过我们对制药工艺的深入的研究，发现采用一种新型的冷冻干燥工艺可以有效的解决注射用人参、银杏提取物的澄明度和稳定性问题。并经过大量实验进一步完善了本发明。
本发明的一个目的是提供一种含有表面活性剂的人参、银杏提取物的冻干药物组合。经我们研究表面不含有表面活性剂的人参、银杏提取物的冻干药物组合在用注射用水稀释时得到黄色混浊液体，但加入大约3％的表面活性剂，经冷冻干燥可得稳定的冻干制品，在使用时加入注射用水稀释即可促进活性成分溶解而迅速得到棕黄色液体，大大提高了药物的澄明度。
本发明适用的表面活性剂包括但不限于吐温-20、吐温-80、聚乙二醇、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚乙烯吡咯烷酮、司盘、卵磷脂、泊洛沙姆以及它们组成的混合体系。优选为聚乙二醇400、泊洛沙姆、司盘、卵磷脂以及它们组成的混合体系。
本发明药物组合物中还可以加入药用冷冻干燥赋形剂。所加入的赋形剂选自甘露醇、山梨醇、氯化钠、葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖醇、乳糖以及它们组成的混合物，优选为甘露醇。本发明冻干制剂中还可以加入稳定剂，如烟酰胺。
本发明的一个优选实施方案中各种成分的重量分数配比如下银杏叶提取物2-100mg人参提取物 0.4-40mg表面活性剂 1-30mg稳定剂 0-50mg冻干赋形剂 10-1000mg本发明的另一个目的是提供一种制备上述人参、银杏提取物冻干组合物的方法，其中包括以下步骤(1)人参提取物的制备取人参粗粉500g，加5000ml 70％乙醇回流提取三次(第一次浸泡过夜)，每次1小时，合并三次提取液，滤过，滤液回收乙醇，并浓缩至稠膏每1ml相当于原生药2g的溶液，用10％氢氧化钠溶液调节pH值至9.5，加乙醇溶液使含醇量达90％，取上清液，减压回收乙醇，浓缩至相当于生药材1∶1，加水稀释至1000ml，用10％盐酸溶液调pH值7左右，冷藏12小时，滤过，滤液上已处理好的D101大孔吸附树脂柱(树脂用量与药材比为1∶5)，依次用4000ml水和25％乙醇4000ml洗脱，弃去洗脱液，再用70％乙醇溶液4000ml洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇，浓缩至每1ml相当于原生药5g的稠膏，用正丁醇100ml萃取三次，注射用水100ml洗二次，转移到洁净环境下，于100℃减压干燥除去正丁醇，即得人参提取物，备用。
(2)银杏叶提取物的制备取银杏叶粗粉1kg，加10L50％乙醇溶液回流提取三次，每次1小时(第一次先浸泡12小时)，合并提取液，回收乙醇，浓缩至稠膏，加乙醇溶液使含醇量达90％，取上清液，回收乙醇，浓缩至稠膏，70℃减压干燥，粉碎过100目筛，加2.5L正己烷回流2小时，回收正己烷，残渣加水0.8L，用10％盐酸溶液调pH值至2，煮沸30分钟，冷藏过夜，过滤，滤液用10％氢氧化钠溶液调节pH值至3.5，上已处理好的ADS-17大孔吸附树脂柱(树脂用量与药材比为1∶8)吸附，分别用注射用水和5％乙醇溶液12L洗脱，弃去洗脱液，再用40％乙醇溶液12L洗脱，洗脱速度为134ml/min，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至稠膏，转移到洁净环境下，70℃减压干燥，得银杏叶提取物备用。
(3)成品制备工艺取处方量银杏提取物、人参提取物、甘露醇、聚乙二醇400、80％处方量注射用水溶解；初滤后再用0.2μm微孔滤膜精滤；补足注射用水至全量，测定含量；分装；冻干；包装。
为了检测上述工艺所得的冻干制剂受环境的影响，取样品分别放置在60℃高温和4500LX的光照条件下作影响因素试验，于5天和10天取样检测，并于0天相比较，结果见表。
表 影响因素考察结果
由以上结果可知，本工艺稳定。
依据临床需要，本品采用市售包装(7ml管制抗生素玻璃瓶，20-D3型药用丁基橡胶塞，抗生素瓶用铝塑组合盖)，采用室温留样、加速稳定性试验考察的方法，考于室温条件下及温度40℃±2℃，相对湿度75±5％的条件进行考察，除生产当月取样考察一次外，分别于1、2、3、6、12月考察一次(其中加速稳定性试验考查3个月)，共取样五次，按中药新药稳定性考察项目进行考察(其中无菌、溶血、热原试验仅在0、3、12月进行)。考察12个月。稳定性试验结果表明，三批样品在考察期限内性状、鉴别、检查、含量及无菌检查均符合规定。
下述内容为验证本发明冻干制剂药效的主要药理和毒理学试验研究结果(1)对神经系统的影响人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干在较大剂量时对中枢神经系统具有抑制作用，可抑制小鼠自发活动，对戊巴比妥钠阈下催眠剂量有协同作用，但对戊巴比妥钠催眠时间无明显影响。
(2)对心血管系统的影响人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干在较大剂量时对麻醉大鼠心率和平均血压均无明显影响。
(3)对呼吸系统的影响人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干在较大剂量时对麻醉大鼠呼吸频率和呼吸幅度(深度)亦均无明显影响。结果表明人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干在较大剂量时，对心血管系统、呼吸系统均无显著的毒性影响，但对中枢神经系统具有一定的抑制作用。
急性毒性试验人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干对小鼠以静脉注射(5g/kg，454倍临床剂量)、肌肉注射(10g/kg，909倍临床剂量)、腹腔注射(6.25g/kg，568倍临床剂量)、口服给药(25g/kg，2273倍临床剂量)等给药途径的急性毒性试验，结果表明在观察7天内各组动物未见明显毒性反应症状，动物无死亡。实验结束时其体重增长较空白对照组迅速，静注、肌注、腹腔、口服等四种给药途径组动物体重，较空白对照组分别增加14.29％(P＞0.05)、30.65％(P＜0.05)、55.58％(P＜0.05)、-3.90％(P＞0.05)。以上急性毒性试验结果表明，受试药物人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干大剂量多种途径给药后，均无明显毒性作用，静注、肌注和腹腔三种途径给药还具有促进动物生长，增加体重的补益作用。
大鼠长期毒性试验大鼠长期毒性试验结果表明，以人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干高、中、低三种剂量(550、275、137.5mg/kg，分别为成年人临床每日拟用剂量的50倍、25倍和12.5倍)对大鼠连续腹腔注射3个月，停药观察2周，对大鼠的外观行为、摄食量(饲料消耗量)和体重增长均未见明显毒性影响。对血液学检查结果显示对大鼠的造血功能不但无明显损伤性毒性影响，而且对大鼠造血功能还具有一定的兴奋作用，尤其是增加淋巴细胞数较明显。对血液生化学未见明显毒性影响。大鼠的病理组织学检查结果显示给药对动物各种器官不会导致病理损害性变化。实验结果显示人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干较大剂量(550、275、137.5mg/kg)及较长疗程(3个月)腹腔注射给药对动物(大鼠)的长期毒性较低，长期注射用药安全。
犬90天长期毒性试验32只6月龄Beagle犬，按体重、性别分层随机分为人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干大、中、小(660mg/kg、330mg/kg、165mg/kg，分别相当于临床拟定用量的60、30、15倍)剂量组及对照组，每组8只，雌雄各半。连续静脉滴注给药180天，停药后观察21天，90天阶段报告结果如下人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干大、中、小剂量给犬静脉滴注给药后，全程试验中各犬外观正常，被毛光泽，活泼，未见异常。给药前2次，给药45天，90天，犬小便常规10项检查未见异常；外周血象数据在正常范围内波动，组间比较无显著差异；对心电图P、QRS、T等波宽和振幅均无明显影响，心律均为窦性；P波、QRS波与主波方向一致，心电图的波形描记也无明显异常；血液生化学检测各项指标未见异常。组织病理学检查结果显示各犬各组织均无形态结构异常。所以，人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干具有较大的安全性。
过敏性、溶血性和局部刺激性试验通过动物试验，研究了受试药物人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干的致敏性、溶血性和局部(血管、肌肉)刺激性，结果表明(1)经过豚鼠主动全身过敏试验(ASA)和大鼠同种被动皮肤过敏试验(PCA)，结果表明人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干无致敏作用；(2)人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干在较高浓度时，即在3.30、2.64、1.98、1.32、0.66mg/ml时，无溶血作用；(3)家兔耳缘静脉连续3天注射受试药物人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干的0.9％氯化钠溶液(高浓度，为33mg/ml)后，未见对静脉血管内壁病理性损伤变化；对家兔股四头肌内注入人参提取物和银杏叶提取物的注射用冻干的0.9％氯化钠溶液(浓度为16.5mg/ml)后，未见对肌肉组织有病理性损伤变化。
以下实施例旨在进一步说明本发明，并不对本发明的范围加以限制。
实例1处方(按1000瓶计)银杏叶 1000g人参500g甘露醇 250g普洛沙姆188 20ml注射用水加至2000ml制成1000瓶(1)人参提取物的制备取人参粗粉500g，加5000ml70％乙醇回流提取三次(第一次浸泡过夜)，每次1小时，合并三次提取液，滤过，滤液回收乙醇，并浓缩至稠膏每1ml相当于原生药2g的溶液，用10％氢氧化钠溶液调节pH值至9.5，加乙醇溶液使含醇量达90％，取上清液，减压回收乙醇，浓缩至相当于生药材1∶1，加水稀释至1000ml，用10％盐酸溶液调pH值7左右，冷藏12小时，滤过，滤液上已处理好的D101大孔吸附树脂柱(树脂用量与药材比为1∶5)，依次用4000ml水和25％乙醇4000ml洗脱，弃去洗脱液，再用70％乙醇溶液4000ml洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇，浓缩至每1ml相当于原生药5g的稠膏，用正丁醇100ml萃取三次，注射用水100ml洗二次，转移到洁净环境下，于100℃减压干燥除去正丁醇，即得人参提取物，备用。
(2)银杏叶提取物的制备取银杏叶粗粉1kg，加10L50％乙醇溶液回流提取三次，每次1小时(第一次先浸泡12小时)，合并提取液，回收乙醇，浓缩至稠膏，加乙醇溶液使含醇量达90％，取上清液，回收乙醇，浓缩至稠膏，70℃减压干燥，粉碎过100目筛，加2.5L正己烷回流2小时，回收正己烷，残渣加水0.8L，用10％盐酸溶液调pH值至2，煮沸30分钟，冷藏过夜，过滤，滤液用10％氢氧化钠溶液调节pH值至3.5，上已处理好的ADS-17大孔吸附树脂柱(树脂用量与药材比为1∶8)吸附，分别用注射用水和5％乙醇溶液12L洗脱，弃去洗脱液，再用40％乙醇溶液12L洗脱，洗脱速度为134ml/min，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至稠膏，转移到洁净环境下，70℃减压干燥，得银杏叶提取物备用。
(3)成品制备工艺在符合GMP生产条件下，取处方量银杏提取物、人参提取物、甘露醇、泊洛沙姆188、80％处方量注射用水溶解；活性炭脱色，初滤后再用0.2μm微孔滤膜精滤；补足注射用水至全量，测定含量；分装；冻干；包装。
实例2处方 (按1000瓶计)银杏叶1000g人参 500g泊洛沙姆188 20ml羟丙基倍他环糊精 200g注射用水 加至2000ml制成 1000瓶制备方法同上实例3处方 (按1000瓶计)银杏叶1000g人参 500g葡萄糖200g泊洛沙姆188 20ml注射用水 加至2000ml制成 1000瓶制备方法同上。
权利要求
1.一种冻干药物组合物，其中包括人参提取物、银杏叶提取物以及表面活性剂。
2.如权利要求1的组合物，其中表面活性剂选自吐温-20、吐温-80、聚乙二醇、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、司盘、卵磷脂以及它们组成的混合体系。
3.权利要求1的组合物，其中表面活性剂选自聚乙二醇400、泊洛沙姆以及它们组成的混合体系。
4.如权利要求1的组合物，还包括稳定剂和冻干赋形剂。
5.如权利要求1-4之一的组合物，其中包括以下重量配比的组分银杏叶提取物 2-100mg人参提取物0.4-40mg表面活性剂1-30mg稳定剂0-50mg冻干赋形剂10-1000mg。
6.如权利要求5的组合物，银杏提取物为银杏黄酮＞24％、银杏总内酯＞6％，银杏总内酯中白果内酯＞1％、银杏内酯B＞1％，人参提取物为人参皂甙Rg1和Re的总和＞25％。
7.如权利要求1-5之一的组合物，为注射用冻干制品。
全文摘要
本发明提供了一种人参、银杏叶有效部位的冻干药物组合物及其制备方法。本发明冻干组合物具有良好的溶解性和稳定性，适用于作安全、稳定的注射剂型。
文档编号A61P9/00GK1730008SQ20051008883
公开日2006年2月8日 申请日期2005年8月2日 优先权日2005年8月2日
发明者孙毅 申请人:孙毅