一种预防和治疗骨科疾病的药物组合物的制作方法

专利名称：一种预防和治疗骨科疾病的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种预防和治疗骨科疾病的药物组合物，具体地说是接骨木提取物和骨碎补提取物组成的药物组合物。
背景技术：
骨科疾病是一个世界范围的、越来越引起人们重视的健康问题。例如，目前全世界约2亿人患有骨质疏松，其发病率已跃居常见病、多发病的第七位。最新研究表明，在我国一直被认为是老年人特有疾病的骨质疏松症，实际上在儿童时期就已存在。随着人口老龄化日趋明显，作为中老年多发的退行性疾病--骨质疏松症及其并发症，已成为一个社会性的健康问题而备受老年病学者的关注，并引起了社会的高度重视。目前医学上还未有安全而有效的根治方法，帮助已疏松的骨骼恢复原状。骨科方面还有关节炎、骨质增生等疾病的发病率也越来越高，严重影响了人们的生活质量的提高。因此，开发一种能有效预防和治疗骨科疾病的药物有重要的医学和社会意义。
接骨木属Sambucus L.系忍冬科Caprofoliaceae，植物，全世界约20种，分布于温带和亚热带地区，我国约有5种忍冬科接骨木属，分别为血满草、接骨草、接骨木、西伯利亚接骨木、西洋接骨木，南北各省、区均有分布。据《中华本草》记载，接骨木有祛风利湿，舒筋活血之功效，在我国明显广泛应用于治疗风湿痹痛、跌打损伤、骨折、黄疸、荨麻疹和水肿。现代研究发现，接骨木的主要化学成分为接骨木黄酮和黄酮苷类、氰苷类和木脂素类。药理学研究发现，接骨木小鼠尾静脉试验和慢性甲醛致痛模型中抗炎、镇痛的效果明显优于水杨酸，其作用机制可能是中枢性镇痛；研究还发现接骨木甲醇提取物在器官培养中能抑制骨的吸收，新生小鼠口服进一步分离得到的醋酸乙脂提取物能抑制甲状旁腺激素诱导的骨吸收，显著抑制切除卵巢小鼠的腰椎骨密度的降低，且低钙饮食小鼠能明显降低血钙水平。以上研究表明接骨木提取物有较明确的抗炎、镇痛和抗骨质疏松活性。
中药骨碎补为水龙骨科植物槲蕨Drynaria fortmei(kunze)J.Sm.的干燥根茎，始载于《本草拾遗》，为历代常用中药，具补肾、活血、止血、续伤之功用。现代药理学研究发现，它具有一定的改善软骨细胞的功能，推迟细胞退行性变，降低骨关节病变率的作用。骨碎补提取液对小鸡骨发育生长有显著的促进作用，能显著抑制醋酸可的松引起的骨丢失，防治激素引起的大鼠骨质疏松。45Ca同位素示踪法证明它有促进骨对钙化的吸收作用，提高血钙和血磷水平，有利于骨钙化和骨盐形成。另外，骨碎补尚能显著抑制醋酸可的松引起的骨丢失，防治糖皮质激素引起的大鼠骨质疏松；其对骨质疏松症治疗作用也在去卵巢大鼠骨质疏松模型上得到验证。骨细胞培养及生测显示骨碎补能显著增加细胞内的ALP量，同时培养基中ACP和PGE2显著增加，使多核破骨细胞形成更活跃，但未发现巨量破骨细胞形成，其对骨细胞的作用可能是通过调节破骨细胞活性而起作用。其水提物对鼠成骨细胞有抗氧化作用，防止过氧化氢诱导的鼠成骨细胞死亡，且无细胞毒性作用；对UMR106成骨细胞的增殖有促进作用。
三七为五加科人参属多年生草本植物，《本草纲目》记载“味微甘而苦，颇似人参之味。”“凡杖扑伤损，瘀血淋漓者，随即嚼烂罨之即止，青肿者即消散。若受杖时，先服一、二钱，则血不冲心，杖后尤宜服之，产后服亦良。大抵此药气温，味甘微苦，及阳明、厥阴血分之药，故能治一切血病”。现代药理学研究表面三七在治疗心血管疾病，调节新成代谢方面有比较明显的药理作用，三七的主要有效成分为三七皂甙，药理实验表面其有显著的镇静和增强体力的作用。
红花为血中气药。中医理论认为胸痹心痛证多属本虚标实证，胸痹心痛证疼痛期的治疗多以止痛活血、祛淤理气药治标为主；疼痛缓解后则以调整阴阳脏腑气血为主。所以，红花可用于本虚证者，又能活血、散淤而止痛、用治标实证者。
现代医学中治疗骨科疾病的药物通常是含雌激素的化学药物，临床使用时药物副作用大，中药因其疗效独特和副作用小而深得医生和患者的青睐。国内外各研究机构和制药公司一直在研究希望能够找到一种有效的中药治疗骨科疾病的现代制剂的药物。经过我们研究证明，尽管接骨木提取物和三七提取物本身单独使用就有预防和治疗骨科疾病的作用，但药理和临床试验表明接骨木提取物与三七提取物的组合物比它们单独使用时有更强的预防和治疗骨科疾病的作用，它们的之间的协同作用有效的提高了药效，临床上表现更为明显。药理试验证明，在这种药物组合物的基础上加入三七提取物或者红花提取物后药理效果相当。适应现代医学需要，我们将这种药物组合物制成胶囊剂、注射剂和冻干粉针剂，为临床预防与治疗骨科疾病提供了一种新的有效的药物组合。

发明内容
经过我们大量的科学研究和临床试验，发现了接骨木提取物与三七提取物的组合物有很强的预防和治疗骨科疾病的作用，并对此发明做了进一步的完善，将这种组合物制成便于临床实施应用的药物制剂。
本发明的一个目的是提供一种能有效预防和治疗骨科疾病的接骨木提取物和三七提取物的药物组合物，经药理和临床试验证明其作用比单独使用以上任何一种组分更为有效。在这种组合物的基础上加入三七提取物或者红花提取物后药理效果相当。
本发明的另一个目的是提供一种制备以上组合物的生产工艺。
取接骨木干燥茎枝共25kg，以95％乙醇加热回流提取4次。提取液浓缩得浸膏，加硅藻土拌和，然后依次用石油醚、氯仿、甲醇和水渗漉提取。石油醚部分经硅胶低压柱层析反复分离，得到接骨木提取物。
取骨碎补药材，60℃干燥8小时，粉碎成粗粉(24目)，称取1kg，加入60％乙醇10L，回流1小时，过滤，药渣再加入60％乙醇10L，回流1小时，合并滤液，减压蒸馏去醇，过滤，得水溶液，用NaOH溶液调节PH值至9，等量乙酸乙酯萃取除去脂熔性杂质。取水相，在水相中加入0.1mol/L HCL，调节PH至5，等量乙酸乙酯萃取4次，收集乙酸乙酯相，浓缩，调节PH值至9，等量水萃取3次，浓缩，水相调节PH至5，等量乙酸乙酯萃取4次，60℃回收乙酸乙酯，70℃减压干燥8小时，研磨成粉，得骨碎补提取物。
本发明的药物组合物的配方如下接骨木提取物1-99重量比 骨碎补提取物1-99重量比采用现有的医药工业领域的制剂技术，可以将上述配方的药物组合物制成各种适合临床使用的胶囊、注射剂和冻干粉针等药物剂型。
以下内容为验证本发明药物组合物的药理学试验结果(1)本品对实验性骨质疏松症的影响试验动物Wistar大鼠80只，雌性，16周龄，体重220~240g。
实验仪器双能X线骨密度检测量仪美国Nodand公司生产，仪器型号XR226.
实验方法大鼠实验性骨质疏松症实验各组大鼠分笼饲养于不锈钢金属笼内，每笼5只，室温调节在22-26℃，湿度控制在50％~70％，自由饮食和摄水。动物称重，采用分层随机法将大鼠80只分为8组，即空白对照组0.9％氯化钠注射液(10ml/kg)；模型对照组0.9％氯化钠注射液(10ml/kg)；本品胶囊大剂量组(500mg/Kg)；本品胶囊中剂量组(250mg/kg)；本品胶囊小剂量组(102mg生药/Kg)；接骨木提取物组250mg/Kg；三七提取物组250mg/Kg；治疗骨质疏松药物对照组骨松宝颗粒剂(2.7g/Kg)。
实验过程中每组称重一次，根据大鼠体重调节给药量。空白组在整个实验过程中只给等量生理盐水，模型组、骨松宝颗粒剂组、本品胶囊各剂量组于实验第1~15天均给予维甲酸(70mg·g-1Dd-1)灌胃，同时骨松宝颗粒组加服骨松宝颗粒，本品组加服本品各相应的剂量，14d后各组停用维甲酸，空白组、模型组给于等量生理盐水，给药组继续给予所试药物，剂量不变，第29天，麻醉动物并腹主动脉取血，分离血清用全自动生化仪测定血钙、血磷，处死动物，分离了两侧完整的股骨、第2~4腰椎进行骨密度的检测。
试验结果表1本品胶囊对大鼠骨密度变化的影响(x±s，n＝10)

注与模型对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01本品对大鼠骨密度的影响本品高、中、低剂量组对实验性大鼠骨质疏松症导致的骨密度降低有明显抑制作用，可升高大鼠股骨和腰椎骨密度的作用(P＜0.05~0.001)，比单用接骨木、三七作用显著；且明显优于阳性对照药骨松宝。
表2本品胶囊对大鼠血钙、血磷的影响(x±s，n＝10)

本品对大鼠血钙、血磷的影响本品三个剂量组对维甲酸性导致骨质疏松症大鼠的血钙、血磷水平有显著的升高作用，和模型组比较有显著差异(P＜0.05)，明显优于单味接骨木、三七，也明显优于阳性对照药骨松宝。
(2)镇痛作用2.1小鼠化学刺激法引起拟痛反应(扭体法)实验一级ICR小鼠84只，体重18～22g，随机分为7组，每组12只，雌雄各半，分组及给药情况见表3。
表3对醋酸致小鼠扭体反应的影响试验给药及分组情况


各组动物按上表给药，除阳性组于注射醋酸前15min一次性腹腔注射给药，其它各组每天给药1次，连续7天，于末次给药后45min，各鼠腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，观察15min内各动物扭体反应次数。计算药物镇痛百分率。
结果见表4表4对醋酸致小鼠扭体反应的影响

注与空白对照组比较，***p＜0.001； **p＜0.01。
表4结果表明，本品对醋酸致小鼠扭体反应具有明显抑制作用，与空白对照组比较，高剂量组p＜0.001，中剂量组p＜0.01，且明显优于接骨木、三七组，提示本品对醋酸致痛具有明显止痛作用，且接骨木与三七合用具有协同作用。
2.2热传导引起小鼠拟痛反应(热板法)实验一级ICR小鼠，体重18～22g，雌性；RB-200智能热板仪，程控温度55±0.5℃，以小鼠舔后足为致痛指标，出现舔后足时所用的时间即为其痛阈值，测量各鼠正常痛阈值，选泽正常痛阈值在5～30s之间的小鼠70只，随机分为7组，每组10只，分组及给药情况见表5。
表5对小鼠热板致痛的影响试验给药及分组情况


测定正常痛阈值后，各组动物按上表给药，给药后30、60、90min(度冷丁组为15、60、90min)分别测定各鼠给药后痛阈值，计算痛阈提高百分率统计学处理采用SPSS10.0软件单因素方差分析进行统计，数据结果用均数加减标准差(x±s)表示。结果见表6。
表6对小鼠热板致痛的影响

与空白对照组比较，***p＜0.001；**p＜0.01；*p＜0.05。
表6结果表明，本世纪品能明显提高热板致痛小鼠的痛阈值，与空白对照组比较，60min时高中低剂量组p＜0.01，90min时高、中剂量组p＜0.05。提示本品种对热板致痛小鼠有明显的止痛作用。
(3)本品胶囊抗炎症实验研究3.1对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响雄性SD大鼠70只，按体重随机分为模型对照组、阳性对照组，本品胶囊高、中、低剂量组，共7组，每组10只。高、中、低剂量组大鼠分别灌胃给予本品胶囊500、250、120mg生药/kg，阳性对照组灌胃给予醋酸地塞米松片1.0mg/kg，接骨木提取物组250mg/Kg；三七提取物组250mg/Kg；模型组给予等体积生理盐水，每天1次，连续7天，于末次给药后30min，以自制装置测量每只大鼠致炎前右后足趾的容积，于右后足趾皮内注射1％角叉菜胶溶液0.1ml，于注射后1h，2h，3h，4h，5h，6h，测量右后足趾容积，与致炎前足容积比较，以肿胀度反映药物抗炎作用强度。
实验结果用SPSS 11.5软件包进行统计分析。
结果见表7表7对大鼠足趾肿胀的影响((x±s，n＝10)

与模型对照组比较*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001上表结果表明，本品胶囊对角叉菜胶致大鼠足肿胀有明显抑制作用，其中高剂量组在致炎后1、2、3、4、5、6h与模型对照组比较有极显著差异；中剂量组在致炎后2、3h有显著差异，致炎后4、5、6h与模型组比较有极显著差异；小剂量组在致炎后4、5、6h与模型组比较有显著差异。
3.2对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响雄性ICR小鼠60只，按体重随机分为模型对照组、阳性对照组，本品胶囊高、中、低剂量组，共5组，每组12只。高中低剂量组大鼠分别灌胃给予本品胶囊500、250、120mg/kg，阳性对照组灌胃给予醋酸地塞米松片1.0mg/kg，模型组给予等体积生理盐水，每天1次，连续7天，末次给药后1小时，将50μl二甲苯涂于每只小鼠右耳前后两面。4小时后脱颈处死，剪下双耳，用直径为8mm不锈钢冲子冲下左右耳片，称重，以两耳片重量之差作为衡量肿胀程度的指标，抗炎作用强度以抑制率(％)表示，用SPSS11.5软件包进行统计分析。结果见表8。
表8对小鼠耳肿胀的影响(x±s)

与模型对照组比较*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001实验结果表明，本品胶囊对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有明显抑制作用，其高剂量组与模型组比较有极显著差异。
3.3对小鼠腹腔毛细血管通透性升高的抑制作用雄性ICR小鼠60只，按体重随机分为模型对照组、阳性对照组，本品胶囊高、中、低剂量组，共5组，每组12只。高中低剂量组大鼠分别灌胃给予本品胶囊500、250、1.2g生药/kg，阳性对照组灌胃给予醋酸地塞米松片1.0mg/kg，模型组给予等体积生理盐水，每天1次，连续7天，于末次给药后30min，尾静脉注射0.5％伊文思蓝溶液0.1ml/10g体重，立即腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只。20min后，剪开腹腔皮肤，用5ml生理盐水冲洗腹腔，吸出全部腹腔洗液，于751型分光光度计上测量其吸光值。以OD值反映其腹腔毛细血管通透性情况。结果见表9。
表9对小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响(x±s)

与模型对照组比较*p＜0.05，**p＜0.01。
注表中动物数为注射成功、纳入统计分析的小鼠数。
上表结果表明，本品胶囊对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加具有明显的抑制作用，高剂量组与模型对照组比较有显著差异。
具体实施例以下为结合具体实施方式
对本发明所作的进一步的详细描述实施例1胶囊处方及工艺处方 (按1000粒计)接骨木提取物 20g骨碎补提取物 20g淀粉 150ml微粉硅胶10g制成 1000粒取接骨木干燥茎枝共25kg，以95％乙醇加热回流提取4次。提取液浓缩得浸膏，加硅藻土拌和，然后依次用石油醚、氯仿、甲醇和水渗漉提取。石油醚部分经硅胶低压柱层析反复分离，得到接骨木提取物。
取骨碎补药材，60℃干燥8小时，粉碎成粗粉(24目)，称取1kg，加入60％乙醇10L，回流1小时，过滤，药渣再加入60％乙醇10L，回流1小时，合并滤液，减压蒸馏去醇，过滤，得水溶液，用NaOH溶液调节PH值至9，等量乙酸乙酯萃取除去脂熔性杂质。取水相，在水相中加入0.1mol/L HCL，调节PH至5，等量乙酸乙酯萃取4次，收集乙酸乙酯相，浓缩，调节PH值至9，等量水萃取3次，浓缩，水相调节PH至5，等量乙酸乙酯萃取4次，60℃回收乙酸乙酯，70℃减压干燥8小时，研磨成粉，得骨碎补提取物。
取处方量接骨木提取物、骨碎补提取物、淀粉，微粉硅胶混均，装胶囊。
实施例2粉针处方及工艺处方 (按1000瓶计)接骨木提取物 10g骨碎补提取物 5g甘露醇250g注射用水 10g
制成 1000瓶提取方法同上。成型工艺为取处方量接骨木提取物、骨碎补提取物、甘露醇、聚乙二醇400、80％处方量注射用水溶解；初滤后再用0.2um微孔滤膜精滤；补足注射用水至全量；分装；冻干；包装。
实例3注射液处方及工艺处方 (按1000瓶计)接骨木提取物 10g骨碎补提取物 5g注射用水加至2000ml制成 1000瓶提取方法同上。成型工艺为取处方量接骨木提取物、骨碎补提取物、50％处方量注射用水溶解；活性炭初滤后再用0.2um微孔滤膜精滤；补足注射用水至全量；测定含量；分装；灭菌；灯检；包装。
实例4片剂处方及工艺处方 (按1000片计)接骨木提取物 20g骨碎补提取物 20g淀粉 150g羟丙基纤维素 7g羟甲基淀粉钠 7g微粉硅胶10g制成 1000片提取方法同上。成型工艺为取处方量接骨木提取物、骨碎补提取物、淀粉，羧甲基淀粉钠，用5％羟丙基纤维素作黏合剂，制软材，20目筛制粒，60℃干燥，加入微粉硅胶整粒，压片。
实例5滴丸处方及工艺处方 (按1000粒计)接骨木提取物 20g骨碎补提取物 20g
聚乙二醇6000200g制成 1000粒提取方法同上。成型工艺为取聚乙二醇6000于油浴上加热至90-100℃，待全部溶解后，加入接骨木提取物和骨碎补提取物搅拌至溶解，转移至贮液瓶中，密闭并保温再80-90℃，调节滴液定量阀门，滴入10-15℃的液体石蜡中，将形成的滴丸沥干并擦除液体石蜡，干燥。
权利要求
1.一种预防和治疗骨科疾病的药物组合物，其特征在于该药物组合物的配方为接骨木1-99重量比，骨碎补提取物1-99重量比。
2.一种预防和治疗骨科疾病的药物组合物，其特征在于该药物组合物的配方为接骨木35-60重量比，骨碎补提取物40-65重量比。
3.按照权利要求1所述的预防和治疗骨科疾病的药物组合物，其特征在于接骨木提取物可用接骨木原药材代替，骨碎补提取物可用骨碎补原药材代替。
4.按照权利要求1所述的预防和治疗骨科疾病的药物组合物，其特征在于这种药物组合物还可以加入0-98重量比的三七提取物。
5.按照权利要求4所述的预防和治疗骨科疾病的药物组合物，其特征在于三七提取物可用三七原药材代替。
6.按照权利要求1所述的预防和治疗骨科疾病的药物组合物，其特征在于这种药物组合物还可以加入0-98重量比的红花提取物。
7.按照权利要求4所述的预防和治疗骨科疾病的药物组合物，其特征在于红花提取物可用红花原药材代替。
8.按照权利要求1所述的预防和治疗骨科疾病的药物组合物，其特征在于接骨木提取物中接骨木总黄酮重量比为10-100，骨碎补提取物中骨碎补总黄酮重量比为10-100。
9.按照权利要求4所述的预防和治疗骨科疾病的药物组合物，其特征在于三七提取物中三七皂甙重量比为10-100。
10.按照权利要求6所述的预防和治疗骨科疾病的药物组合物，其特征在于红花提取物中红花总黄酮重量比为10-100。
11.按照权利要求1所述的预防和治疗骨科疾病的药物组合物，其特征在于其临床上适用于治疗骨质疏松症、关节疾病、骨质增生，骨髓炎和筋骨伤痛等骨科疾病。
12.按照权利要求1所述预防和治疗骨质疏松症和抗炎的药物组合物，其特征在于它的剂型是适合临床应用的注射液(包括输液、冻干粉针)、丸剂、滴丸、片剂(包括分散片、口崩片等)、缓释片、胶囊、软胶囊、颗粒剂、散剂、锭剂、煎膏剂、口服液(合剂)、糖浆剂、软膏剂、搽剂、涂膜剂等药剂学上可以接受的剂型中的任何一种药物剂型。
13.一种预防和治疗骨科疾病的药物组合物的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤(1)取接骨木干燥茎枝共25kg，以95％乙醇加热回流提取4次。提取液浓缩得浸膏，加硅藻土拌和，然后依次用石油醚、氯仿、甲醇和水渗漉提取。石油醚部分经硅胶低压柱层析反复分离，得到接骨木提取物；(2)取骨碎补药材，60℃干燥8小时，粉碎成粗粉(24目)，称取1kg，加入60％乙醇10L，回流1小时，过滤，药渣再加入60％乙醇10L，回流1小时，合并滤液，减压蒸馏去醇，过滤，得水溶液，用NaOH溶液调节PH值至9，等量乙酸乙酯萃取除去脂熔性杂质。取水相，在水相中加入0.1mol/L HCL，调节PH至5，等量乙酸乙酯萃取4次，收集乙酸乙酯相，浓缩，调节PH值至9，等量水萃取3次，浓缩，水相调节PH至5，等量乙酸乙酯萃取4次，60℃回收乙酸乙酯，70℃减压干燥8小时，研磨成粉，得骨碎补提取物；(3)取10g接骨木提取物、5g骨碎补提取物、50％处方量注射用水溶解；活性炭初滤后再用0.2um微孔滤膜精滤；补足注射用水至全量；测定含量；分装；灭菌；灯检；包装；制成本发明中药注射剂1000瓶。
全文摘要
本发明提供了一种能有效的预防和治疗骨科疾病的中药组合物，即接骨木提取物和骨碎补提取物组成的药物组合物。它们的组合应用在预防和治疗骨科疾病方面有很好的协同作用，治疗效果明显，强于以上各组分单独应用。
文档编号A61P19/10GK1742775SQ200510088788
公开日2006年3月8日 申请日期2005年8月2日 优先权日2005年8月2日
发明者孙毅 申请人:孙毅