一种用于治疗呼吸系统疾患的中药提取物和其组合物及其制备方法

专利名称：一种用于治疗呼吸系统疾患的中药提取物和其组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种用于治疗呼吸系统疾患的中药提取物，尤其涉及一种用于上呼吸道感染、咽喉部炎症、肺炎或其相关病症的中药提取物和其组合物及其制备方法，所述提取物具有解毒镇痛，止咳祛痰，清肺利咽的功效，并可用于咳嗽、粘痰难咯、声音嘶哑、咽喉部干涩或咽喉肿痛等病症。
背景技术：
上呼吸道感染、咽喉部炎症及肺炎在呼吸道疾病中占有很大的比重，一年四季皆可发生，特别是天气变化及季节交替的时间，发病率非常高。目前，医院一般应用抗生素输液对其进行治疗，而致呼吸道细菌的耐药性非常普遍，如很多病人表现出耐药性金黄色葡萄球菌等。为了克服耐药性的问题，通常采取对患者增加使用抗生素的种类或者增加抗生素的剂量，因而，导致进一步的细菌耐药性，这威仅跟患者造成很大的痛苦，也加重了患者治病的经济负担。
而具有抗菌抗炎活性的中成药在治疗上呼吸道感染、咽喉部炎症及肺炎或其相关病症等病症上，不仅疗效确切，并且具有标本兼治、很好控制复发、减少耐药性等特点，因此，这类中成药的市场份额越来越大。据权威机构对2002年春季广州市场止咳化痰平喘药的市场调查表明中成药销售额占总体市场的75％左右。因此，研究开发对这些疾病具有良好治疗效果的新的中成药具有非常重要的意义。

发明内容
本发明的目的一是提供一种用于治疗呼吸疾系统疾患的中药提取物，其特征在于，将木蝴蝶粗粉进行杀酶处理，再将过滤所得滤渣用醇溶剂提取木蝴蝶中的有效部位，提取液再经过滤、浓缩、干燥即得。
所述杀酶处理是采用高温、高热、炮制或辐射灭活木蝴蝶药材中的苷类分解酶，以减少或降低有效成分的降解，大大提高提取得到的有效部位中总黄酮的含量。本发明所述的杀酶处理方法可为本领域熟知的煎煮杀酶法、炒法杀酶法、蒸法杀酶法、湿热杀酶法、干热杀酶法、辐射杀酶法或气体杀酶法；优选煎煮杀酶法。
所述煎煮杀酶法是将木蝴蝶药材投入到50℃以上的1-50倍重量/体积的水中煎煮；优选水量2-40倍重量/体积，水温为60℃以上；更优选水量15-35倍重量/体积，水温为70℃以上；最优选水量20-30倍重量/体积，水温为80℃以上。
所述湿热杀酶法是将药材置于高压饱和蒸汽、过热水喷淋等环境下一段时间，以使药材中的酶灭活。该方法为最有效、应用最广泛的杀酶方法。其常用参数为121℃*15min；121℃*30min；116℃*40min。
所述的干热杀酶法是指将药材置于干热空气条件下，以达到杀酶的效果。常用参数160～180℃*120min以上。
所述的辐射杀酶法是指将药材置于适宜的放射源辐射条件下，采用r射线或适宜的电子加速器发生的电子束中进行电离辐射而达到杀酶的作用。常用参数60Co-r射线辐射灭菌，吸收剂量为2～100kGy，优选25kGy。
所述的气体杀酶法是指用化学消毒剂形成的气体以达到杀酶的效果。常用的化学消毒剂有环氧乙烷、气态过氧化氢、甲醛、臭氧等。常用的杀酶条件为温度(54±10)℃，相对湿度(60±10)％，1*105Pa以上，灭菌时间5min以上；优选灭菌压力8*105Pa，灭菌时间90min。
此外，炒法或蒸法等药材炮制方法也可以杀灭药材中的酶，具体参数要依据药材的特性而定。
优选提取物中总黄酮(黄芩苷类)的含量不低于45％(w/w)，更优选不低于50％(w/w)，最优选不低于55％(w/w)。
优选所述的醇溶剂为乙醇、甲醇、丙二醇或本领域熟知的与其性质类似的溶剂；优选醇溶剂的体积为木蝴蝶粗粉重量的10-30倍，更优选15-25倍，最优选20倍；优选醇溶剂的浓度为50-90％(v/v)，更优选60-80％(v/v)，最优选为70％(v/v)；优选回流提取的次数为1-5次，更优选2-4次，最优选2-3次；优选回流提取时间为0.5-3小时，更优选为1-2小时，最优选为1小时；优选浓缩液的相对密度为1.10-1.30(60℃)，更优选为1.15-1.20(60℃)；所述干燥浓缩液的方法选自减压干燥、喷雾干燥或真空干燥。
本发明的提取物具有抗菌抗炎、止咳祛痰、清肺利咽、解毒镇痛等功效，可用于上呼吸道感染、咽喉部炎症及肺炎或其相关病症，以及症见咳嗽，粘痰难咯，声音嘶哑，咽喉部干涩及肿痛等病症。
本发明的另一目的在于提供一种制备提取物的方法，包括如下步骤在木蝴蝶粉粗粉中加入醇溶剂回流提取，提取液再经过滤、浓缩、干燥即得。优选木蝴蝶提取物中总黄酮的含量不低于45％(w/w)，更优选不低于50％(w/w)，最优选不低于55％(w/w)。
优选所述的醇溶剂为乙醇、甲醇、丙二醇或本领域熟知的与其性质类似的溶剂；优选醇溶剂的体积为木蝴蝶粗粉重量的10-30倍，更优选15-25倍，最优选20倍；优选醇溶剂的浓度为50-90％(v/v)，更优选60-80％(v/v)，最优选为70％(v/v)；优选回流提取次数为1-5次，更优选2-4次，最优选2-3次；优选回流提取时间为0.5-3小时，更优选为1-2小时，最优选为1小时；优选浓缩液的相对密度为1.10-1.30(60℃)，更优选为1.15-1.20(60℃)；所述干燥浓缩液的方法选自减压干燥、喷雾干燥或真空干燥。
本发明的另一目的在于提供一种用于治疗呼吸系统疾患的中药组合物，所述组合物由木蝴蝶提取物和药学上可接受的载体组成。优选木蝴蝶提取物中总黄酮(黄芩苷类)的含量不低于45％(w/w)，更优选不低于50％(w/w)，最优选不低于55％(w/w)。
可采用薄层色谱方法对提取物中的黄芩苷进行鉴别，并采用HPLC法，控制木蝴蝶提取物中的总黄酮(黄芩苷类)的含量，并控制组合物的质量。
本发明的组合物可为本领域熟知的各种剂型。所述的适合于本发明的剂型可以为口服制剂、外用制剂及注射剂。口服制剂可选自片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、散剂、滴丸、糖浆剂、合剂、露剂或茶剂等；外用制剂可选自胶剂、贴膏剂、膏药、软膏剂、搽剂、洗剂、涂抹剂或凝膏剂等；注射剂可选自针剂、输液及冻干粉针等。可采用本领域熟知的制剂技术手段来制备完成本发明组合物的制备。
所述的药学上可接受的载体为本领域熟知用于制备上述制剂的常用赋形剂或辅料，口服制剂或外用制剂常用的赋形剂或辅料包括但不仅限于填充剂或稀释剂、润滑剂或助流剂或抗粘着剂、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂等。粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮，优选的纤维素衍生物为微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、羟丙甲基纤维素；填充剂，例如乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐、山梨醇或甘氨酸，优选无机钙盐为硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙；润滑剂，例如微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇；崩解剂，例如淀粉及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素，优选的淀粉衍生物为羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉；湿润剂，例如十二烷基硫酸钠、水或醇等；优选口服制剂的药学上可接受的载体为微晶纤维素、硬脂酸镁或乙醇等。
所述注射剂常用的赋形剂或辅料包括但不仅限于抗氧剂，例如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠和焦亚硫酸钠；抑菌剂，例如0.5％苯酚、0.3％甲酚、0.5％三氯叔丁醇；调节剂，例如盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)、枸橼酸钠及缓冲剂磷酸二氧钠和磷酸氢二钠；乳化剂，例如聚山梨酯-80、油酸山梨坦、普流罗尼克F-68，卵磷酯、豆磷脂；抗氧剂，例如亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等；增溶剂，例如吐温-80、胆汁、甘油等。
另外，还可将活性成分与药学上可接受的缓控释载体按其制备要求加以混合，再按照本领域熟知的缓控释制剂的制备方法，如加入阻滞剂包衣或将活性成分微囊化后再制成微丸，如缓释微丸或控释微丸；所述的缓控释载体包括但不仅限于油脂性掺入剂、亲水胶体或包衣阻滞剂等，所述的油脂性掺入剂为单硬脂酸甘油酯、氢化蓖麻油、矿油、聚硅氧烷、二甲基硅氧烷；所述的亲水胶体为羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等纤维素衍生物，或PVP、阿拉伯胶、西黄耆胶或卡波普等；所述的包衣阻滞剂为乙基纤维素(EC)、羟丙甲基纤维素(HMPC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)、丙烯酸类树脂等。
本发明的提取物具有抗菌抗炎、止咳祛痰、清肺利咽、解毒镇痛等功效，可用于治疗上呼吸道感染、咽喉部发炎及肺炎或其相关病症，以及症见咳嗽，粘痰难咯，声音嘶哑，咽喉部干涩及肿痛等病症。因此，本发明的另一目的在于提供本发明的提取物及其组合物在制备治疗呼吸系统疾患的药物中的应用。所述的呼吸系统疾患包括但不仅限于上呼吸道感染、咽喉部炎症、肺炎或其相关疾病或其并发症或其后遗症；所述的上呼吸道感染包括但不仅限于急、慢性支气管炎、鼻窦炎等病症及其后遗症或其相关疾病等，优选对急、慢性支气管炎及其后遗症或其相关疾病的治疗；所述的咽喉部炎症疾病包括但不仅限于急慢性咽炎、喉炎、扁桃体炎等病症及其后遗症或其相关疾病等，优选对急慢性咽炎、喉炎病症的治疗；所述的肺炎疾病包括但不仅限于细菌性、霉菌性、病毒性或支原体性肺炎等病症及其后遗症或其相关疾病等，优选对细菌性肺炎病症的治疗；所述的相关疾病包括但不仅限于发热、支气管哮喘等病症及其后遗症，优选对支气管哮喘病症的治疗。
本发明组合物的常用剂量范围为含生药量1747.2g/1000单位剂量，每日给予0.5-40单位剂量；更优选每日给予1-20单位剂量；最优选每日给予10单位剂量。
本发明组合物具有疗效独特，无毒副作用，生物利用度高，稳定性好，外形美观，携带和服用方便等特点。
具体实施例方式
以下将结合实施例具体说明本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质。
实施例1 木蝴蝶提取物的制备将木蝴蝶药材粗粉投入20倍重量/体积75-80℃水中，继续煎煮5min，过滤；在滤渣中加入20倍量70％(v/v)的乙醇回流提取2次，第一次1小时，第二次0.5小时，合并提取液，滤过，减压浓缩滤液至相对密度为1.15-1.20(60℃)，真空干燥，粉碎即得。
提取物中总黄酮的含量测定参照《中国药典》2000年版一部附录VI D高效液相色谱法测定。测得提取物中总黄酮的含量为48.5％。
实施例2 木蝴蝶提取物的制备将木蝴蝶药材投入到15倍重量/体积的85-90℃水中，继续煎煮10min，过滤；在滤渣中加入25倍量65％(v/v)的乙醇回流提取2次，第一次1小时，第二次0.5小时，合并提取液，滤过，减压浓缩滤液至相对密度为1.20-1.28(60℃)，减压干燥，粉碎即得。
提取物中总黄酮的含量测定同实施例1，测得提取物中总黄酮的含量为51.3％。
实施例3 木蝴蝶提取物的制备将木蝴蝶药材投入到15倍重量/体积的90-95℃水中，继续煎煮8min，过滤；在滤渣中加入15倍量75％(v/v)的乙醇回流提取2次，第一次1小时，第二次0.5小时，合并提取液，滤过，减压浓缩滤液至相对密度为1.15-1.25(60℃)，喷雾干燥，粉碎即得。
提取物中总黄酮的含量测定同实施例1，测得提取物中总黄酮的含量为55.3％。
实施例4 片剂的制备木蝴蝶浸膏 0.16kg微晶纤维素 0.16kg硬脂酸镁 适量制成1000片制备方法将浸膏粉和微晶纤维素分别过80目筛，称取处方量的浸膏粉和微晶纤维素，混合均匀，用95％乙醇制软材，16目筛制粒，60℃干燥，16目筛整粒，加适量硬脂酸镁，混匀，压片，即得。
实施例5 片剂的制备木蝴蝶浸膏 0.16kg微晶纤维素 0.32kg硬脂酸镁 适量制成1000片制备方法取木蝴蝶提取物约160g，加微晶纤维素至320g，混匀，用乙醇制成一定目数颗粒，干燥，整粒，加1％的硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，即得。
以下通过药效试验例或毒性试验例来以验证本发明药物组合物对上呼吸道感染、咽喉部炎症、肺炎或其相关疾病的治疗效果。试验例所用的药物为本发明提取物制备得到的组合物的干粉，试验时用0.5％CMC-Na将组合物干粉配成所需浓度的混悬液供试，其中1g干粉相当于9.1g生药。除非另有说明，本发明试验例的给药剂量标准均以生药计。
试验例1 本发明提取物或组合物的急性毒性研究参照国家药品监督管理局1999年颁发的《中药新药药理毒理研究的技术要求》和徐淑云主编的《药理实验方法学》，进行本发明提取物或组合物的急性毒性研究。以最大给药浓度、最大给药体积一次性给药后测定本发明的提取物或组合物的LD50，结果小鼠无一死亡，测不出LD50。以最大给药浓度、最大给药体积一日内给药二次，测得本发明的提取物或组合物的最大给药量为250.0g生药/kg，相当于体重为60kg病人临床日用量的862倍。
试验例2 本发明提取物或组合物的长期毒性研究试验周期为1个月，设置本发明提取物或组合物的高、中、低三个剂量组，高剂量组为临床剂量的70倍(20.4g生药/kg)，中剂量组为临床剂量的35倍(10.2g生药/kg)、低剂量组为临床剂量的17.5倍(5.0g生药/kg)，对大鼠灌胃给药；并设不给药组为对照组。
观察项目饮食、体重、外观体征和行为活动、粪便性状等。
检查项目血液学指标、血液生化指标、系统尸解和病理组织学检查。
研究结果参见表1-表7。可见，给药4周及停药2周后大鼠行为活动、皮毛均正常。各组体重均稳定增长，摄食量亦无明显差异。给药组大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、肾上腺、睾丸、前列腺、子宫、卵巢等脏器系数与对照组比较，均未见明显差异。
血液学和生化指标对各给药组数据进行统计并与对照组比较，结果显示各血液学和生化指标均未见明显异常变化。
给药1个月和恢复期分别对各组大鼠进行了系统尸检，肉眼观察全部动物脏器均无异常变化。组织学检查对照组和高剂量组大鼠各系统组织结构和功能均无中毒后的退变、坏死、炎症反应或异常增生等病理改变。
结论在大鼠1个月长期毒性试验中，未发现本发明的提取物或组合物对大鼠有明显毒性作用。
表1 本发明组合物对大鼠体重的影响(雄)(g，X±SD)

注0∽4周动物数为10只；5∽6周动物数为5只。
与对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01。(下同)。
表2 本发明组合物对大鼠体重的影响(雌)(g，X±SD)

表3 本发明组合物对大鼠摄食量的影响(雄)(g/100g体重，X±SD)


表4 本发明组合物对大鼠摄食量的影响(雌)(g/100g体重，X±SD)

注1∽4周动物数为10只；5∽6周动物数为5只。
表5 本发明组合物对大鼠血液常规指标的影响(X±SD)


表6 本发明组合物对大鼠血液生化指标的影响(X±SD)

表7 本发明组合物对大鼠脏器重量系数的影响(g/100g，X±SD)

试验例3 本发明的提取物或组合物的体内抗病毒试验实验动物为清洁级ICR小鼠，体重20±2g，雌雄各半。实验药物为规格为9.1g生药/g的本发明的提取物或组合物，成人每日用量1.92g(生药量为17.472)，分为高(4.54g生药/kg)、中(2.27g生药/kg)、低(1.14g生药/kg)剂量组，用0.5％CMC-Na配制成高(2.495％)、中(1.25g％)、低(0.625％)3个浓度的混悬液，4℃冰箱保存备用。对照药物为利巴韦林片四川美大康药业股份有限公司生产，用0.5％CMC-Na配成2.925mg/ml。
试验病毒为流感病毒鼠适应株FM1，南京中医药大学温病研究所保存，血凝效价为1∶640，LD50为10-4.68；副粘病毒仙台株，南京中医药大学温病研究所保存，血凝效价为1∶1280。
1.本发明的提取物或组合物对流感病毒感染小鼠死亡率的影响实验结果表明本发明的提取物或组合物的各剂量对流感病毒感染引起的小鼠死亡率保护作用不明显，高剂量组虽然能减少小鼠死亡数，但与病毒模型组比较差异无显著性。如果按存活天数统计，则本发明的提取物或组合物的三个剂量均有延长模型小鼠存活时间的作用，与模型组比较差异均有显著性。见表8。
表8 本发明的提取物或组合物对流感病毒感染小鼠死亡保护率及存活天数的影响

注与病毒模型组比较**P＜0.01。
2.本发明的提取物或组合物对流感病毒感染小鼠肺部病变的影响实验结果表明本发明的提取物或组合物的三个剂量均能降低小鼠感染流感病毒后引起的肺指数增高，与病毒模型组比较具有显著性差异。提示该药对抑制流感病毒所致肺病变的发展有一定的作用。见表9。
表9 本发明的提取物或组合物对流感病毒感染小鼠肺指数的影响(X±SD)

注与病毒模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01。
3.本发明的提取物或组合物对仙台病毒感染小鼠的影响
3.1.本发明的提取物或组合物对仙台病毒感染小鼠死亡保护率的影响实验结果表明本发明的提取物或组合物能降低仙台病毒致死性感染引起的小鼠死亡，其中高、中剂量组作用较明显，与病毒模型组比较有统计学差异。见表10。
表10 本发明的提取物或组合物对仙台病毒感染小鼠死亡保护率及存活天数的影响

与病毒模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01。
3.2.本发明的提取物或组合物对仙台病毒感染小鼠肺部病变的影响实验结果表明本发明的提取物或组合物的三个剂量均能降低病毒感染小鼠的肺指数值，并随药物剂量的增加，肺指数相应减少，量效间有相关性，本发明的提取物或组合物高、中剂量与模型组比较，差异有显著性。提示该药能抑制仙台病毒引起的肺病变的发展。见表11。
表11 本发明的提取物或组合物对仙台病毒感染小鼠肺指数的影响(X±SD)

注与病毒模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01。
结论本发明的提取物或组合物的高、中剂量可明显降低仙台病毒感染小鼠死亡率，增加存活只数，对流感病毒引起的小鼠死亡率未见明显保护作用，但对二种病毒感染小鼠的存活时间均有延长作用；且还能不同程度的减轻二种病毒感染小鼠肺部病变，降低肺指数。实验结果提示本发明的提取物或组合物有一定的抗病毒作用。
试验例4 本发明的提取物或组合物的抑菌作用体重161-180g的清洁级ICR大鼠，雌雄各半。实验药物为规格为9.1g生药/g的本发明的提取物或组合物，分为高(4.54g生药/kg)、中(2.27g生药/kg)、低(1.14g生药/kg)剂量组。对照药物为规格为125mg/粒的头孢氨苄胶囊，由上海衡山药业有限公司提供。
菌种为溶血性乙型链球菌、金黄色葡萄球菌，由江苏省人民医院微生物室临床分离培养提供。
1.本发明的提取物或组合物对腹腔感染溶血性乙型链球菌小鼠死亡率的影响结果表明本发明的提取物或组合物三个剂量和阳性药均能减少腹腔注射溶血性乙型链球菌引起的小鼠死亡只数，其死亡率较对照组明显下降，差异均有高度显著性，结果见表12。
表12 本发明的提取物或组合物对腹腔感染溶血性乙型链球菌小鼠死亡率的影响

注与空白对照组比较*P＜0.05；**P＜0.012.本发明的提取物或组合物对腹腔感染金黄色葡萄球菌小鼠死亡率的影响结果表明头孢氨苄胶囊和本发明的提取物或组合物三个剂量均能减少金黄色葡萄球菌引起的小鼠死亡只数，其死亡率较对照组明显下降，差异有高度显著性，结果见表13。
表13 本发明的提取物或组合物对腹腔感染金黄色葡萄球菌小鼠死亡率的影响


注与空白对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01结论本发明的提取物或组合物对腹腔感染溶血性乙型链球菌和金黄色葡萄球菌小鼠均有保护作用，可明显降低其死亡率，增加存活只数，与对照组比较差异均有显著性。提示本发明的提取物或组合物有一定的抑菌作用。
试验例5 本发明的提取物或组合物的解热作用试验动物为体重180-220g的清洁级雄性SD大鼠。试验药物为规格9.1g生药/g的本发明的提取物或组合物，分为高(3.15g生药/kg)、中(1.57g生药/kg)、低(0.79g生药/kg)三个剂量组；对照药物为规格为0.5g/片对乙酰氨基酚片，又称扑热息痛片，江苏盐城制药有限公司提供。
酵母菌湖北安琪酵母股份有限公司，批号20040611。
结果表明本发明的提取物或组合物的三个剂量对于干酵母所致发热大鼠的肛温升高均没有明显抑制作用，除中剂4.0h外，各时间点的肛温与模型组比较差异均无显著性，结果见表14-15。
表14 本发明的提取物或组合物对干酵母所致大鼠发热模型的影响(X±SD)

注与模型对照组相比较，*P＜0.05；**P＜0.01表15 本发明的提取物或组合物对干酵母所致大鼠发热模型肛温净增值的影响(X±SD)


注与模型对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01结论本发明的提取物或组合物高剂量、中剂量、低剂量对酵母菌致大鼠发热模型的体温升高均无明显抑制作用。
试验例6 本发明的提取物或组合物的镇痛作用试验动物为体重18-22g的清洁级ICR小鼠100只，雌性75只，雄性25只。试验药物为规格9.1g生药/g的本发明的提取物或组合物，分为高(4.54g/kg)、中(2.27g/kg)、低(1.14g/kg)三个剂量组；对照药物为规格25mg/片的消炎痛，山西临汾云鹏药业有限公司提供。
1.本发明提取物或组合物对小鼠痛阈值的影响结果表明，本发明的提取物或组合物的高、中、低三个剂量组均能在给药后60、90、120min延长小鼠的疼痛阈值，与对照组比较差异有显著性，结果见表16。
表16 本发明的提取物或组合物对热板所致小鼠疼痛潜伏期的影响(X±SD)

注与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01(下同)。
2.本发明提取物或组合物小鼠醋酸扭体法镇痛试验的影响本发明的提取物或组合物高、中、低三个剂量组均能延长扭体发生的时间，减少醋酸所致小鼠扭体的次数，与模型组比较差异有显著性，且高剂量镇痛效果又明显优于低剂量，二者比较差异也有高度显著性，结果见表17。
表17 本发明的提取物或组合物对醋酸所致小鼠扭体次数的影响(X±SD)

注与低剂量组比较#P＜0.01。
结论本发明的提取物或组合物的三个剂量均能不同程度的提高热板法小鼠的痛阈值，延长醋酸法小鼠扭体产生的时间，减少扭体次数，结果表明本发明的提取物或组合物有一定的镇痛作用。
试验例7 本发明的提取物或组合物的化痰作用试验试验动物为体重16-18g清洁级ICR小鼠雌雄各半；体重180-220g雄性清洁级的SD大鼠。试验药物为规格9.1g生药/g的本发明的提取物或组合物，分为高(4.54g/kg)、中(2.27g/kg)、低(1.14g/kg)三个剂量组；对照药物为氯化铵，南京化学试剂厂提供。
1.本发明的提取物或组合物对小鼠气管酚红排痰量的影响结果表明本发明的提取物或组合物三个剂量组均能明显增加小鼠气管酚红排出量，与对照组比较差异均有显著性(P＜0.01)，结果见表18。
表18 本发明的提取物或组合物对小鼠气管酚红排痰量的影响(X±SD)

注与空白对照组比较*P＜0.05；**P＜0.012.本发明的提取物或组合物对大鼠毛细管法排痰量的影响结果表明本发明的提取物或组合物高、中剂量均能明显增加大鼠毛细管排痰量，与对照组比较差异均有显著性，结果见表19。
表19 本发明的提取物或组合物对大鼠毛细管法排痰量的影响(X±SD)

注与空白对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01。
结论本发明的提取物或组合物能有效增加小鼠气管粘液分泌，使酚红排出量明显增加。并能增加毛细管吸取气管分泌物的液柱长度。提示本发明的提取物或组合物具有化痰作用，对改善痰粘难咯的症状有一定的帮助。
试验例8 本发明的提取物或组合物的镇咳作用试验试验动物为体重200～300g的豚鼠，雌雄各半。试验药物为规格9.1g生药/g的本发明的提取物或组合物，分为高(2.33g生药/kg)、中(0.78g生药/kg)、低(0.26g生药/kg)三个剂量组；对照药物为规格500ml/瓶、1.598g生药/ml的金欣口服液和规格25mg/片的枸橼酸喷托维林片(咳必清)，分别由南京中医药大学植物药研究与新药开发中心和苏州医药集团有限公司提供。
结果表明本发明的提取物或组合物高、中两个剂量组能够使枸橼酸喷雾所致豚鼠5min内的咳嗽次数明显减少，但对咳嗽的潜伏期仅高剂量有延长作用，与模型组比较有显著差异(P＜0.05或P＜0.01)，结果见表20。
表20 本发明的提取物或组合物对枸橼酸喷雾所致豚鼠咳嗽的影响(X±SD)

注与模型组相比较，*P＜0.05；**P＜0.01结论本发明的提取物或组合物三个剂量均能减少枸橼酸致豚鼠咳嗽模型的咳嗽次数，与模型组比较差异均有显著性，但对豚鼠咳嗽潜伏期仅高剂量有延长作用，与模型组比较差异有显著性。
试验例9 本发明的提取物或组合物的抗炎作用试验试验动物为体重16-18g清洁级ICR小鼠，雌雄各半；体重180-220g的雄性清洁级SD大鼠。试验药物为规格9.1g生药/g的本发明的提取物或组合物，分为高(4.54g生药/kg)、中(2.27g生药/kg)、低(1.14g/生药kg)三个剂量组；对照药物为消炎痛片和强的松，分别由江苏林海药业有限公司制造分公司和天津药业集团新郑股份有限公司提供。
1.本发明的提取物或组合物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响本发明的提取物或组合物高、中剂量组和阳性药消炎痛组均有明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的作用，与模型组比较差异都有显著性，结果见表21。
表21 本发明的提取物或组合物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀率的影响(X±SD)

注与模型组相比较，*P＜0.05；**P＜0.01，下同。
2.本发明的提取物或组合物对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀的影响本发明的提取物或组合物高、中剂量和阳性药均能不同程度地抑制角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀率，减轻肿胀程度，与模型组比较差异有显著性(表22-24)。
表22 本发明的提取物或组合物对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀容积的影响(X±SD)


表23 本发明的提取物或组合物对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀模型前后差值的影响(X±SD)

表24 本发明的提取物或组合物对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀率的影响(X±SD)

注与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01，下同。
3.本发明的提取物或组合物对小鼠实验性慢性肉芽肿的影响本发明的提取物或组合物高、中、低三个剂量组和强的松组均可减轻小鼠纸片肉芽肿的湿重和干重，与模型对照组比较有显著性差异(见表25)。
表25 本发明的提取物或组合物对小鼠实验性慢性肉芽肿的影响(X±SD)

注与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01，下同。
4.本发明的提取物或组合物对大鼠实验性慢性肉芽肿的影响本发明的提取物或组合物高、中、低三个剂量组和强的松组均可减轻大鼠钮扣肉芽肿的湿重和干重，与模型对照组比较差异均有显著性(见表26)。
表26 本发明的提取物或组合物对大鼠实验性慢性肉芽肿的影响(X±SD)

注与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01。
结论本发明的提取物或组合物高、中两个剂量对小鼠急性炎症模型有不同程度的拮抗作用，使二甲苯致小鼠耳廓肿胀率明显下降；对于大鼠急性炎症模型，本发明的提取物或组合物高、中、低三个剂量在各时间点(除低剂量组1.0h外)均能抑制角叉菜胶所致的大鼠足跖肿胀率。说明本发明的提取物或组合物对炎症早期毛细血管通透性增加、炎性物质渗出及组织水肿有一定的拮抗作用，表明该药有一定的抗急性炎症作用。本发明的提取物或组合物三个剂量对小鼠和大鼠慢性炎症肉芽肿的增生均有明显的抑制作用，说明该药对慢性炎症亦有较好的治疗效果。总之，本发明的提取物或组合物对急、慢性炎症均有拮抗作用。
试验例10 本发明的提取物或组合物对免疫功能影响的试验试验动物为清洁级ICR小鼠，雌雄各半，体重18-20g。试验药物为规格9.1g生药/g的本发明的提取物或组合物，分为高(4.75g生药/kg)、中(2.27g生药/kg)、低(1.14g生药/kg)三个剂量组；对照药物为左旋咪唑。
采用溶菌酶试剂盒溶菌酶检测，由南京建成生物工程研究所提供。
1.本发明的提取物或组合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响本发明的提取物或组合物高、中剂量和阳性对照药均能提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，与对照组比较有显著性差异(见表27)。
表27 本发明的提取物或组合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(X±SD)

注与空白对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01，下同。
2.本发明的提取物或组合物对溶菌酶含量的影响本发明的提取物或组合物三个剂量组和阳性药物组均能提高正常小鼠血清溶菌酶含量，与对照组比较差异有显著性(见表28)。
表28 本发明的提取物或组合物对小鼠血清溶菌酶含量的影响(X±SD)

结论本发明的提取物或组合物高、中剂量能提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力及小鼠血清溶菌酶的活性，提示该药对机体非特异性免疫功能有一定的调节作用。
综上所述，本发明的提取物或其组合物具有抗菌抗炎、止咳祛痰、清肺利咽、解毒镇痛等作用，可用于上呼吸道感染、咽喉部发炎及肺炎或其相关病症，以及症见咳嗽，粘痰难咯，声音嘶哑，咽喉部干涩及肿痛等病症的有效治疗，且无毒副作用。
权利要求
1.一种用于治疗呼吸疾系统疾患的中药提取物，其特征在于，将木蝴蝶粗粉进行杀酶处理，再将过滤所得滤渣用醇溶剂提取木蝴蝶中的有效部位，提取液再经过滤、浓缩、干燥即得。
2.根据权利要求1所述的提取物，所述提取物中总黄酮的含量不低于45w/w％，更优选不低于50w/w％，最优选不低于55w/w％。
3.根据权利要求1所述的提取物，所述的醇溶剂为乙醇、甲醇或丙二醇。
4.根据权利要求1所述的提取物，所述醇溶剂的体积为木蝴蝶粗粉重量的10-30倍，更优选15-25倍，最优选20倍；醇溶剂的浓度为50-90v/v％，更优选60-80v/v％，最优选为70v/v％；回流提取次数为1-5次，更优选2-4次，最优选2-3次；回流提取时间为0.5-3小时，更优选为1-2小时，最优选为1小时。
5.根据权利要求1所述的提取物，所述浓缩液的相对密度为1.1-1.3(60℃)，更优选为1.15-1.20(60℃)；所述干燥方法选自减压干燥、喷雾干燥或真空干燥。
6.根据权利要求1所述的提取物，杀酶处理方法选自煎煮杀酶法、炒法杀酶法、蒸法杀酶法、湿热杀酶法、干热杀酶法、辐射杀酶法或气体杀酶法；优选煎煮杀酶法。
7.根据权利要求6所述的提取物，所述煎煮杀酶法是将木蝴蝶药材投入到50℃以上的5-50倍重量/体积的水中煎煮；优选水量10-40倍重量/体积，水温为60℃以上；更优选水量15-35倍重量/体积，水温为70℃以上；最优选水量20-30倍重量/体积，水温为80℃以上。
8.根据权利要求1所述的提取物，所述呼吸系统疾患选自上呼吸道感染、咽喉部炎症、肺炎或其相关疾病或其并发症或其后遗症。
9.根据权利要求8所述的提取物，所述上呼吸道感染选自急、慢性支气管炎、鼻窦炎等病症及其后遗症或其相关疾病，优选对急、慢性支气管炎病症的治疗；咽喉部炎症选自急慢性咽炎、喉炎、扁桃体炎等病症及其后遗症或其相关疾病，优选对急慢性咽炎、喉炎病症的治疗；所述的肺炎疾病选自细菌性、霉菌性、病毒性或支原体性肺炎等病症及其后遗症或其相关疾病，优选对细菌性肺炎病症的治疗；所述的相关疾病包括发热、支气管哮喘、胃炎等病症及其后遗症，优选对支气管哮喘病症的治疗，所述的胃炎选自急性胃炎或慢性胃炎，所述的急性胃炎选自单纯性胃炎或糜烂性胃炎；所述的慢性胃炎选自浅表性胃炎、萎缩性胃炎或肥厚性胃炎。
10.一种制备权利要求1-9任一所述提取物的方法，包括如下步骤将木蝴蝶粗粉进行杀酶处理，再将过滤所得滤渣用醇溶剂提取木蝴蝶中的有效部位，提取液再经过滤、浓缩、干燥即得。
11.根据权利要求10所述的提取物，所述提取物中总黄酮的含量不低于45w/w％，更优选不低于50w/w％，最优选不低于55w/w％。
12.根据权利要求10所述的提取物，所述的醇溶剂为乙醇、甲醇或丙二醇。
13.根据权利要求10所述的提取物，所述醇溶剂的体积为木蝴蝶粗粉重量的10-30倍，更优选15-25倍，最优选20倍；醇溶剂的浓度为50-90v/v％，更优选60-80v/v％，最优选为70v/v％；回流提取次数为1-5次，更优选2-4次，最优选2-3次；回流提取时间为0.5-3小时，更优选为1-2小时，最优选为1小时。
14.根据权利要求10所述的提取物，所述浓缩液的相对密度为1.1-1.3(60℃)，更优选为1.15-1.20(60℃)；所述干燥方法选自减压干燥、喷雾干燥或真空干燥。
15.根据权利要求10所述的提取物，杀酶处理方法选自煎煮杀酶法、炒法杀酶法、蒸法杀酶法、湿热杀酶法、干热杀酶法、辐射杀酶法或气体杀酶法；优选煎煮杀酶法。
16.根据权利要求15所述的提取物，所述煎煮杀酶法是将木蝴蝶药材投入到50℃以上的5-50倍重量/体积的水中煎煮；优选水量10-40倍重量/体积，水温为60℃以上；更优选水量15-35倍重量/体积，水温为70℃以上；最优选水量20-30倍重量/体积，水温为80℃以上。
17.一种用于治疗呼吸系统疾患的中药组合物，由权利要求1-9任一所述的提取物和药学上可接受的载体组成。
18.根据权利要求17所述的中药组合物，所述组合物中含生药量1747.2g/1000单位剂量，每日给予0.5-40单位剂量；更优选每日给予2-20单位剂量；最优选每日给予10单位剂量。
19.根据权利要求20所述的中药组合物，所述组合物的制剂形式选自口服制剂、外用制剂或注射剂；所述口服制剂选自片剂、胶囊剂、分散片、滴丸、注射剂、颗粒剂、丸剂、散剂或其相应的缓控释制剂；所述外用制剂选自胶剂、贴膏剂、膏药、软膏剂、搽剂、洗剂、涂抹剂或凝膏剂；所述注射剂选自针剂、输液及冻干粉针。
20.权利要求1-9任一所述的提取物或权利要求17-18任一所述的组合物在制备治疗呼吸系统疾患的药物中的应用。
21.根据权利要求20所述的应用，所述呼吸系统疾患选自上呼吸道感染、咽喉部炎症、肺炎或其相关疾病或其并发症或其后遗症；所述的上呼吸道感染选自急、慢性支气管炎、鼻窦炎及其后遗症或其相关疾病，优选对急、慢性支气管炎病症的治疗；咽喉部炎症选自急慢性咽炎、喉炎、扁桃体炎等病症及其后遗症或其相关疾病，优选对急慢性咽炎、喉炎病症的治疗；所述的肺炎疾病选自细菌性、霉菌性、病毒性或支原体性肺炎及其并发症或其相关疾病，优选对细菌性肺炎病症的治疗；所述的相关疾病包括发热、支气管哮喘、胃炎等病症及其后遗症，优选对支气管哮喘病症的治疗，所述的胃炎选自急性胃炎或慢性胃炎，所述的急性胃炎选自单纯性胃炎或糜烂性胃炎；所述的慢性胃炎选自浅表性胃炎、萎缩性胃炎或肥厚性胃炎。
全文摘要
本发明涉及一种用于治疗呼吸系统疾患的提取物及其制备方法，以及含有该提取物的组合物。所述中药提取物的制备方法为木蝴蝶进行杀酶处理，再用醇溶剂回流提取，提取液再经浓缩、干燥、粉碎即得。所述组合物由木蝴蝶提取物和药学上可接受的载体组成。本发明的提取物具有解毒镇痛，止咳祛痰，润喉利咽的功效，主要用于治疗上呼吸道感染及咽喉部炎症，且安全有效、起效迅速、疗程短，携带和使用方便等特点。
文档编号A61P11/00GK1943604SQ200510094668
公开日2007年4月11日 申请日期2005年10月7日 优先权日2005年10月7日
发明者王殿广, 时贞平, 郭蓁 申请人:南京生物工程与医药科技发展有限公司