专利名称：银杏内酯的制备方法
技术领域：
本发明涉及银杏内酯的制备方法。
背景技术：
银杏内酯和银杏黄酮为共存于银杏叶中的主要生物活性物质。银杏内酯为特殊结构的二萜内酯和倍半萜内酯，是当今医药界所公认的一种最有应用前景的特异有效的血小板激活因子(PAF)受体拮抗剂，其专一性高，对于缺血损伤和中枢神经系统具有保护作用，此外还有抗过敏、休克、抗器官移植排斥反应等作用；上世纪30年代，国外科学家从银杏叶中分离得到了银杏内酯并对其进行了研究，证实了银杏萜内酯具有复杂的立体结构，人工合成难度极大，所以银杏叶成为提取银杏内酯化合物的主要工业生产原料；上世纪60年代以来，银杏内酯的分离提取方法已有文献报道，但由于银杏叶中它的含量特别低，且具有特定结构，目前国外一般采用有机溶剂多级萃取与硅藻土、硅胶吸附-洗脱或活性碳吸附-洗脱与醋酸铅沉淀法相结合的提取方法，步骤繁杂、成品率低，纯度较低。提取分离的成本高，纯度较低；国内也有采用浸提、柱纯化、萃取、分离、结晶方法制备银杏内酯，但纯度仍然较低，因此，银杏内酯的提取纯化方法需要进一步改进。
技术内容本发明的目的是提供一种成品获得率高、纯度高的银杏内酯工艺方法。
本发明通过下述技术方案予以实施。
本发明的银杏内酯制备方法按顺序包括如下步骤(1)取银杏叶粗提物(GBE)，粉碎，加醋酸乙酯搅拌萃取，滤过，滤液回收醋酸乙酯至尽，干燥，得银杏内酯粗提物；(2)取银杏内酯粗提物，粉碎，用乙醇充分溶解，溶液上酸性氧化铝柱，收集流出液，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，合并流出液和洗脱液，减压浓缩，结晶，得银杏内酯A、B的晶体混合物；(3)将银杏内酯A、B的晶体混合物用少量乙醇洗涤，滤过，再重结晶1～3次，即得银杏内酯A、B的混合晶体；该银杏内酯A、B混合晶体的纯度为97.0％～99.9％。银杏内酯A和银杏内酯B的含量测定参见文献(中药材，2004年1月，27(1)19)所述步骤(1)中，醋酸乙酯的用量为银杏叶粗提物用量的8～20倍，优选用量为13～17倍。
所述步骤(2)中，溶解银杏内酯粗提物乙醇的用量以能充分溶解银杏内酯粗提物为限；进行洗脱的乙醇用量为0.3～2倍柱体积，优选为0.7～1.2倍柱体积。
上述银杏叶粗提物(GBE)可从市场上获得，也可用本发明的特定方法制得。
本发明的银杏叶粗提物的制备方法为取干燥银杏叶，粉碎，用50％～95％乙醇提取2～4次，合并提取液，向其中加入0.5％～2％的维生素C，混匀，减压回收乙醇，得浓缩液；取浓缩液，加入1～3倍体积的水，静置，离心或过滤，得上清液或滤液；取上清液或滤液，分别用分子量为8万～12万和0.8万～1.5万的超滤膜进行超滤，得超滤液；取超滤液，加入0.5％～2％的维生素C，减压浓缩，浓缩物干燥，即得银杏叶粗提物。
与现有技术相比，本发明方法的工艺路线合理，成品获得率高，不会破坏有效成分，可获得高纯度的银杏内酯A和银杏内酯B混合晶体，纯度达97％以上。
具体实施例方式
参考下列实施例将更易于理解本发明，给出实施例是为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
实施例一取干燥银杏叶，粉碎，过20目筛，用80％乙醇浸提两次，第一次加9倍原料量的80％乙醇于70℃搅拌浸提2小时，第二次用7倍量80％乙醇于70℃下搅拌浸提1.5小时。合并两次醇提液，向其中加入1％的维生素C，混匀，减压回收乙醇至1.05～1.10(60℃)，浓缩液冷却，向其中加入2倍体积量的水，静置沉淀24小时，取清液离心。将离心液分别用分子量为10万和1万的超滤膜进行超滤，超滤液中加0.8％的维生素C，减压浓缩至1.10～1.15(60℃)，得浓缩液。将浓缩液真空干燥(60℃)，得银杏叶粗提物(GBE)。
取上述银杏叶粗提物，粉碎，过80目筛，加入15倍量醋酸乙酯，搅拌萃取2次，每次1小时，过滤。取滤液回收醋酸乙酯至尽，得浓缩液，真空干燥(60℃)，得银杏内酯粗提物干品。将其粉碎过80目筛，用乙醇充分溶解后过酸性氧化铝柱，收集流出液，再用1倍柱体积的乙醇洗脱，收集洗脱液。合并流出液和洗脱液，减压浓缩至1.10～1.15(60℃)得浓缩液，然后结晶，抽滤，得银杏内酯A、B晶体混合物。将银杏内酯A、B晶体混合物用少量乙醇洗涤，过滤，再重结晶，即得银杏内酯A、B混合晶体，其纯度为98.5％。
实施例二取干燥银杏叶，粉碎，过20目筛，用60％乙醇超声提取两次，每次1小时，第一次加10倍原料量的60％乙醇，第二次用8倍原料量60％乙醇。合并两次醇提液，向其中加入1.2％的维生素C，混匀，减压回收乙醇至1.05～1.10(60℃)，浓缩液冷却，向其中加入1.5倍体积量的水，静置沉淀24小时，滤过。滤液分别用分子量为12万和1.5万的超滤膜进行超滤，超滤液中加1％的维生素C，减压浓缩至1.10～1.15(60℃)，得浓缩液。将浓缩液真空干燥(60℃)，得银杏叶粗提物(GBE)。
取上述银杏叶粗提物，粉碎，过80目筛，加入13倍量醋酸乙酯，搅拌萃取2次，每次1小时，过滤。取滤液回收醋酸乙酯至尽，得浓缩液，真空干燥(60℃)，得银杏内酯粗提物干品。将其粉碎过80目筛，用乙醇充分溶解后过酸性氧化铝柱，收集流出液，再用1.5倍柱体积的乙醇洗脱，收集洗脱液。合并流出液和洗脱液，减压浓缩至1.10～1.15(60℃)得浓缩液，然后结晶，抽滤，得银杏内酯A、B晶体混合物。将银杏内酯A、B晶体混合物用少量乙醇洗涤，过滤，再重结晶，即得银杏内酯A、B混合晶体，其纯度为98.2％。
实施例三取干燥银杏叶，粉碎，过20目筛，用85％乙醇浸提两次，第一次加10倍原料量的85％乙醇于70℃搅拌浸提2小时，第二次用7倍量85％乙醇于70℃下搅拌浸提1.5小时。合并两次醇提液，向其中加入1％的维生素C，混匀，减压回收乙醇至1.05～1.10(60℃)，浓缩液冷却，向其中加入2.5倍体积量的水，静置沉淀24小时，取清液离心。将离心液分别用分子量为10万和0.8万的超滤膜进行超滤，超滤液中加0.8％的维生素C，减压浓缩至1.10～1.15(60℃)，得浓缩液。将浓缩液真空干燥(60℃)，得银杏叶粗提物(GBE)。
取上述银杏叶粗提物，粉碎，过80目筛，加入16倍量醋酸乙酯，搅拌萃取2次，每次1小时，过滤。取滤液回收醋酸乙酯至尽，得浓缩液，真空干燥(60℃)，得银杏内酯粗提物干品。将其粉碎过80目筛，用乙醇充分溶解后过酸性氧化铝柱，收集流出液，再用1.2倍柱体积的乙醇洗脱，收集洗脱液。合并流出液和洗脱液，减压浓缩至1.10～1.15(60℃)得浓缩液，然后结晶，抽滤，得银杏内酯A、B晶体混合物。将银杏内酯A、B晶体混合物用少量乙醇洗涤，过滤，再重结晶2次，即得银杏内酯A、B混合晶体，其纯度为99.6％。
实施例四取市售银杏叶粗提物(GBE)，粉碎，过80目筛，加入15倍量醋酸乙酯，搅拌萃取2次，每次1小时，过滤。取滤液回收醋酸乙酯至尽，得浓缩液，真空干燥(60℃)，得银杏内酯粗提物干品。将其粉碎过80目筛，用乙醇充分溶解后过酸性氧化铝柱，收集流出液，再用1倍柱体积的乙醇洗脱，收集洗脱液。合并流出液和洗脱液，减压浓缩至1.10～1.15(60℃)得浓缩液，然后结晶，抽滤，得银杏内酯A、B晶体混合物。将银杏内酯A、B晶体混合物用少量乙醇洗涤，过滤，再重结晶，即得银杏内酯A、B混合晶体，其纯度为97.3％。
实施例五取市售银杏叶粗提物(GBE)，粉碎，过80目筛，加入17倍量醋酸乙酯，搅拌萃取2次，每次1小时，过滤。取滤液回收醋酸乙酯至尽，得浓缩液，真空干燥(60℃)，得银杏内酯粗提物干品。将其粉碎过80目筛，用乙醇充分溶解后过酸性氧化铝柱，收集流出液，再用1.5倍柱体积的乙醇洗脱，收集洗脱液。合并流出液和洗脱液，减压浓缩至1.10～1.15(60℃)得浓缩液，然后结晶，抽滤，得银杏内酯A、B晶体混合物。将银杏内酯A、B晶体混合物用少量乙醇洗涤，过滤，再重结晶，即得银杏内酯A、B混合晶体，其纯度为97.6％。
权利要求
1.一种银杏内酯的制备方法，按顺序包括如下步骤(1)取银杏叶粗提物，粉碎，加醋酸乙酯搅拌萃取，滤过，滤液回收醋酸乙酯至尽，干燥，得银杏内酯粗提物；(2)取银杏内酯粗提物，粉碎，用乙醇充分溶解，溶液上酸性氧化铝柱，收集流出液，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，合并流出液和洗脱液，减压浓缩，结晶，得银杏内酯晶体混合物；(3)将银杏内酯晶体混合物用少量乙醇洗涤，滤过，再重结晶，即得银杏内酯混合晶体。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，醋酸乙酯的用量为银杏叶粗提物用量的8～20倍；所述步骤(2)中，溶解银杏内酯粗提物乙醇的用量以能充分溶解银杏内酯粗提物为限，进行洗脱的乙醇用量为0.3～2倍柱体积。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，醋酸乙酯的用量为银杏叶粗提物用量的13～17倍；所述步骤(2)中，进行洗脱的乙醇用量为0.7～1.2倍柱体积。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的重结晶为1～3次。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的银杏内酯混合晶体为银杏内酯A和银杏内酯B的混合晶体。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述银杏叶粗提物的制备方法为取干燥银杏叶，粉碎，用50％～95％乙醇提取2～4次，合并提取液，向其中加入0.5％～2％的维生素C，混匀，减压回收乙醇，得浓缩液；取浓缩液，加入1～3倍体积的水，静置，离心或过滤，得上清液或滤液；取上清液或滤液，分别用分子量为8万～12万和0.8万～1.5万的超滤膜进行超滤，得超滤液；取超滤液，加入0.5％～2％的维生素C，减压浓缩，浓缩物干燥，即得。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述方法按顺序包括如下步骤取干燥银杏叶，粉碎，用80％乙醇浸提两次，合并两次醇提液，向其中加入1％的维生素C，混匀，减压回收乙醇至1.05～1.10，浓缩液冷却，向其中加入2倍体积量的水，静置沉淀24小时，取清液离心；将离心液分别用分子量为10万和1万的超滤膜进行超滤，超滤液中加0.8％的维生素C，减压浓缩至1.10～1.15，得浓缩液；浓缩液真空干燥，得银杏叶粗提物；取上述银杏叶粗提物，粉碎，加入15倍量醋酸乙酯，搅拌萃取2次，每次1小时，过滤；滤液回收醋酸乙酯至尽，得浓缩液，真空干燥，得银杏内酯粗提物干品；将银杏内酯粗提物干品粉碎，用乙醇充分溶解后过酸性氧化铝柱，收集流出液，再用1倍柱体积的乙醇洗脱，收集洗脱液；合并流出液和洗脱液，减压浓缩至1.10～1.15得浓缩液，然后结晶，抽滤，得银杏内酯A、B晶体混合物；将银杏内酯A、B晶体混合物用少量乙醇洗涤，过滤，再重结晶1～2次，即得银杏内酯A、B混合晶体。根据权利要求1～7任一权利要求所述方法制备的银杏内酯，其特征在于，所述银杏内酯混合晶体的纯度为97.0％～99.9％。
全文摘要
本发明公开了一种银杏内酯的制备方法，按顺序包括如下步骤(1)取银杏叶粗提物，粉碎，加醋酸乙酯搅拌萃取，滤过，滤液回收醋酸乙酯至尽，干燥，得银杏内酯粗提物；(2)取银杏内酯粗提物，粉碎，用乙醇充分溶解，溶液上酸性氧化铝柱，收集流出液，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，合并流出液和洗脱液，减压浓缩，结晶，得银杏内酯晶体混合物；(3)将银杏内酯晶体混合物用少量乙醇洗涤，滤过，再重结晶，即得银杏内酯混合晶体。本发明方法的工艺路线合理，成品获得率高，不会破坏有效成分，可获得高纯度的银杏内酯A和银杏内酯B混合晶体。
文档编号A61K36/16GK101085780SQ20061001420
公开日2007年12月12日 申请日期2006年6月8日 优先权日2006年6月8日
发明者叶正良, 郑永锋, 李旭, 周大铮 申请人:天津天士力之骄药业有限公司