专利名称：一种制备高纯银杏内酯的方法
技术领域：
本发明涉及一种获得高纯天然产物有效成分的方法，确切地说是一种自银杏叶粗提物中分离纯化高纯银杏萜内酯的新方法。
背景技术：
银杏叶提取物(GBE)已列入中华人民共和国药典(2005年版)。按该标准生产的药用GBE，银杏总黄酮纯度> 对％、银杏总内酯纯度> 6%。银杏萜内酯包括银杏内酯A(以下简称GA)、银杏内酯B(以下简称GB)、银杏内酯 C (以下简称GC)、银杏内酯J、银杏内酯M和白果内酯等，属银杏特有成分。银杏萜内酯，如 GA、GB、GC等对治疗心脑血管疾病具有显著疗效。为开发高效、靶点明确的新药或保健食品， 有必要对银杏萜内酯进行高纯分离。见诸于文献报道的有银杏萜内酯分离方法主要有醇类提取-溶剂萃取-柱色谱分离法、醇类提取-溶剂萃取-反相色谱分离法、色谱分离-重结晶法、超临界流体萃取法 (SCFE)等。经由国家知识产权局网站检索，截至2011年10月25日，与银杏萜内酯分离/制备
方法直接相关的授权发明专利或申请主要有1、ZL98111546. 2(发明人潘见、|朱剑中|，《物
质成分的超临界流体结晶分离方法》)该发明是将超临界流体萃取与结晶分离技术方法集成为一体；在超临界流体、夹带剂和结晶器的共同作用下，在结晶釜内完成萃取、吸附、结晶和干燥，使混合物料中的有效成分一步实现梯度结晶分离。该法可用于分离银杏总内酯。 2、ZL200310104958.7(《模拟移动床色谱分离提纯银杏内酯B的方法》)该发明是一种用模拟移动床色谱分离提纯银杏内酯B的方法。以银杏叶为原料，经过水煮，乙酸乙酯萃取、 模拟移动床纯化、乙醇重结晶、甲醇重结晶得到纯度大于90%银杏内酯B单体。该发明基于模拟移动床色谱分离GB。3、ZL00117758.3(《由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯A、 B的方法》)该发明是一种由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯A、B的方法。该方法是向银杏叶或其浸膏加入乙醇等浸取剂，得到的浸取液经过滤、分层，取出有机相去杂，然后经浓缩、干燥获得富集GA和GB，采用制备型液相色谱再分离A与B。该发明的特征在于加入浸取液的同时加入氯化物盐析剂，及去杂过程加入钾盐或钠盐；液相色谱的分离柱流动相为乙酸乙酯和石油醚混合液，固定相为硅胶。该发明的单体纯化依赖于制备色谱。4、 CN101085780A(申请号200610014207. X，《银杏内酯的制备方法》)该发明公开了本发明公开了一种银杏内酯的制备方法，按顺序包括如下步骤(1)取银杏叶粗提物，粉碎，加醋酸乙酯搅拌萃取，滤过，滤液回收醋酸乙酯至尽，干燥，得银杏内酯粗提物；( 取银杏内酯粗提物，粉碎，用乙醇充分溶解，溶液上酸性氧化铝柱，收集流出液，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，合并流出液和洗脱液，减压浓缩，结晶，得银杏内酯晶体混合物；C3)将银杏内酯晶体混合物用少量乙醇洗涤，滤过，再重结晶，即得银杏内酯混合晶体。该发明的目标产物是银杏内酯A和银杏内酯B的混合晶体。5、CN101134758A(申请号=200710050242. 1，《从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法》)该发明公开了一种从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，即以银杏叶为原料，采用乙醇提取，乙酸乙酯萃取，极性无孔吸附树脂柱吸附，乙醇结晶得银杏总内酯，再经过硅胶柱层析，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，分段收集洗脱液，依次分别得到白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯 B、银杏内酯C和银杏内酯，再用不同浓度乙醇结晶分别得到白果内酯、银杏内酯A(60-80% 乙醇结晶)、银杏内酯B (30-70 %乙醇结晶)、银杏内酯C和银杏内酯J单体，纯度99 %以上。 此方法采用硅胶柱层析方法预分离各单体。6、CN1680392A(申请号200510023164. 7，《一种高纯度银杏内酯的制备方法》)该发明公开了采用高速逆流色谱法(HSCCC)从银杏叶中分离一种高纯度银杏内酯的制备方法。用三个溶剂体系，分别经过两次HSCCC分离后，可得到银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯J和白果内酯，纯度均达到99 %以上。该方法涉及三个溶剂体系，二次分离。7、CN1844125A(申请号200510063407. X，《一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的新方法》)该发明特征在于，采用了液-液萃取后再进行精制的方法；萃取的溶剂为正丁醇或其他与正丁醇溶解性与极性相似的溶剂；其提取方法包含以下步骤(1)取银杏叶或银杏叶提取物，加水煮沸，冷藏，取上清液，过滤，收集滤液；( 滤液中加入正丁醇或其他与正丁醇相似溶解性、相似极性的溶剂萃取，分出水层；C3)萃取液经减压回收正丁醇作为萃取液，并蒸干，收集干燥物；(4)干燥物中加入乙醇溶液煮沸使溶解，冷藏，抽滤，并洗涤得晶体；( 晶体中加入乙醇使溶解，冷藏，抽滤，得银杏内酯B晶体；(6)银杏内酯B晶体经真空干燥后得纯度为90%以上的银杏内酯B单体。 该方法中正丁醇萃取的浸膏内含有较多GA、GC、白果内酯和黄酮类成分，难以直接结晶获得GB。8、CN1424315A(申请号02128965. 4，《银杏内酯化合物及其制备方法和含有该化合物的药物组合物》)该发明公开了一种从银杏内酯总提取物当中分离获得新化合物——银杏内酯K的方法。即取银杏内酯粗品3g置索氏提取器中，加乙酸乙酯或丙酮2500mL回流 M小时，回收乙酸乙酯至浸膏状，用硅藻土拌样，烘干，研细，用石油醚乙酸乙酯=9 1 湿法装于低压硅胶柱，压力0. 2 0. 3kPa/cm3,以石油醚乙酸乙酯梯度递增洗脱，当石油醚乙酸乙酯=6 4时，97 121流份，经TCL检查，甲苯乙酸乙酯丙酮甲醇= 5 2 2.5 0.3，4% NaAc硅胶H板，与银杏内酯对照品比较出现银杏内酯斑点，将其合并浓缩，放置出现沉淀，母液留用，将沉淀以丙酮溶解，以制备型高效液相纯化，即得该化合物。该发明的目标产物是银杏内酯K，纯化依赖于制备型高效液相。9、CN1594319A(申请号 200410041120. 2，《银杏内酯提取工艺和银杏内酯注射液及其制备方法》)该发明公开了一种银杏内酯提取工艺和银杏内酯注射液及其制备方法。该提取工艺为称取一定量银杏叶粉碎，加数倍量的稀丙酮液温浸提取，回收丙酮，除杂，醋酸乙酯萃取纯化，醋酸钠再除杂，回收醋酸乙酯，40 % 95 %乙醇或甲醇中重结晶，过滤，400C 80°C干燥。此法使用乙醇水或甲醇结晶，产品脱水困难亦可能有甲醇残留。10、CN1733768A(申请号200510041266. 1，《银杏内酯提取和纯化工艺》)该发明公开了一种银杏内酯提取和纯化工艺，该工艺包含下列步骤称取银杏干叶，粉碎，按药材重量加2 10倍的5% 95%乙醇或甲醇提取，提取液回收醇后用脱脂溶剂除杂，萃取，再除杂，得粗制品，用5% 95%乙醇重结晶，过滤，干燥得银杏总内酯精制品。该发明的目标产物是银杏总内酯。等等。
发明内容
本发明旨在为中药新药或高档保健食品开发提供高纯度的原料药银杏萜内酯，所要解决的技术问题是自银杏叶粗提物中分离并纯化银杏萜内酯。本发明技术方案是以银杏叶粗提物为起始原料，采用溶剂浸提+重结晶+超临界 CO2体萃除、干燥组合工艺制备高纯的银杏萜内酯。所述的银杏叶粗提物符合中国药典规定标准，其中，银杏总内酯的纯度>6%。所涉及的溶剂浸提是用丙酸乙酯进行浸提，浸提液浓缩干燥后采用无水乙酸乙酯进行多次结晶处理；浸提过程液固比5 1 6 1(V/W)，温度控制在50-80°C，时间2-3 小时，浸提2-3次；结晶过程液固比为3 1 5 1(V/W)，经过2次以上结晶处理可获得纯度> 95%高纯银杏萜内酯，再经过1次超临界CO2萃除、干燥处理可获得纯度> 98%高纯银杏萜内酯。本发明的主要的优点在于①、利用银杏萜内酯与银杏黄酮等杂质在极性、分子量等存在一定差异，直接进行浸提分离、结晶纯化，省去了色谱分离过程。②、使用无水乙酸乙酯结晶，可以有效减轻产品最终的脱水负荷。③、本工艺所制备的银杏萜内酯的最高纯度可达99%以上。
具体实施例方式实施例1 取纯度高于6%的银杏叶粗提物lOOOg，干燥后用丙酸乙酯浸提，丙酸乙酯的用量为5L，浸提温度为55°C，时间3小时，浸提3次；浸提液真空干燥后，得固体固体粉末88g， 再用无水乙酸乙酯进行重结晶，用量为300ml，结晶2次；将上述结晶产物进行超临界0)2萃除溶剂、干燥处理，设置压力9MPa，温度在60°C，时间在60min ；得纯度98. 8%的银杏萜内酯 38. 9g。实施例2:取纯度高于6%的银杏叶粗提物lOOOg，干燥后用丙酸乙酯浸提，丙酸乙酯的用量为6L重结晶，浸提温度为75°C，时间2小时，浸提3次；浸提液真空干燥后，得固体粉末92g， 再用无水乙酸乙酯进行重结晶，用量为450ml，结晶2次；将上述结晶产物进行超临界0)2萃除溶剂、干燥处理，设置工作压力12MPa，温度在50°C，时间在45min ；得纯度大于99. 的银杏萜内酯40. 3g。
权利要求
1.一种高纯银杏萜内酯的分离纯化方法，其特征是(1)取银杏叶粗提物浸提，浸提中液固比5 1 6 1(V/W)，温度控制在50-80°C，时间2-3小时，浸提2-3次；(2)将浸提液浓缩干燥后采用无水乙酸乙酯进行多次结晶处理，结晶过程液固比为 3 1 5 1 (V/W)；(3)经过2次以上结晶处理可获得纯度>95%高纯银杏萜内酯，再经过1次超临界CO2 萃除、干燥处理可获得纯度> 98%高纯银杏萜内酯。
2.根据权利要求1所述的一种高纯银杏萜内酯的分离纯化方法，其特征是步骤(1) 中所述的银杏叶粗体物，银杏总内酯的纯度> 6%。
全文摘要
一种高纯银杏萜内酯的分离纯化方法，它采用溶剂浸提+重结晶+超临界CO2萃除、干燥组合工艺，制取高纯银杏萜内酯。浸提溶剂为丙酸乙酯；重结晶溶剂采用无水乙酸乙酯；采用超临界CO2萃除溶剂、干燥。产品纯度最高可达99％以上。该分离纯化工艺，方法简便、成本低、易于工业生产应用。
文档编号C07D493/22GK102491983SQ20111042836
公开日2012年6月13日 申请日期2011年12月20日 优先权日2011年12月20日
发明者刘鹏程, 张文成, 樊恩生 申请人:徐州康泰生物制品有限公司