专利名称：改性的β胸腺肽的制作方法
技术领域：
本发明涉及P胸腺肽、其同工型(isoform)及其片段的领域。
技术背景胸腺素(34最初被鉴定为一种在体外当内皮细胞迁移和分化时被上调的蛋白 质。胸腺素P4最初是由胸腺中分离出来的，是在多种组织中鉴别出的43个氨基 酸、4.9kDa的广泛存在的多肽。已知该蛋白具有多种作用，包括内皮细胞的分 化和迁移中发挥作用、在T细胞分化中发挥作用、在肌动蛋白结合和血管化作 用中发挥作用。T卩4的氨基酸序列在美国专利No.4,297,276中有所公开，在此将其以引用的 方式并入至本文。T[34在进化过程中高度保守。实际上，小鼠(murine)、大鼠和 人的TP4之间具有完全的同源性。已经发现TP4存在于哺乳动物的多种组织类型中，并涉及多种细胞和生理 学过程，其中包括诱导骨髓细胞的末端脱氧核糖核酸转移酶活性、刺激下丘脑 促黄体激素释放激素和黄体激素的分泌、抑制巨嗜细胞的迁移及促进巨嗜细胞 的抗原呈递、以及体外诱导T细胞系的表型变化等。PCT国际公开No.W099/49883中公开了胸腺素(34亚砜。目前在改良的P胸腺肽方面仍有需求。发明概述在一个实施方式中，公开了一种组合物，其含有经氧化或过氧化改性的本 身(normally)含有甲硫氨酸的p胸腺肽、其同工型、其片段、其经分离的R-对映
体或经分离的S-对映体，而不含有外消旋的胸腺素P4亚砜；或公开了一种组合 物，其含有改性的具有非甲硫氨酸的氨基酸取代基的卩胸腺肽、其同工型或其 片段，所述非甲硫氨酸的氨基酸取代基取代了本身含有甲硫氨酸的P胸腺肽、 其同工型或其片段的氨基酸序列中的至少一个甲硫氨酸。还公开了形成本发明 所述组合物的方法。发明详述多数卩胸腺肽的氨基酸序列中具有甲硫氨酸这种氨基酸，该氨基酸在体内 和体外易于氧化。这种P胸腺肽在本文中有时被称为"本身含有甲硫氮酸的卩胸腺肽"。在许多己知的(3胸腺素中，甲硫氨酸位于6位。在本身含有甲硫氨酸的P胸腺素中，当甲硫氨酸(CsHuN02S)这一氨基酸氧 化为甲硫氨酸亚砜(C5HnN03S)时，会导致P胸腺素亚砜(beta thymosin sulfoxides)的生成。该氧化可利用任意适宜的方法来完成。例如，可通过使含 甲硫氨酸的(3胸腺素与过氧化氢相接触从而将含甲硫氨酸的P胸腺素氧化为亚 砜。W099/4988中公开了可将胸腺素p4用50体积的过氧化氢进行氧化，将该 内容以引用的方式并入本文。由此，在W099/49883中描述了可利用稀释的过 氧化氢将胸腺素(34氧化以形成胸腺素(34亚砜。甲硫氨酸(C5HnN02S)这一氨基酸向甲硫氨酸亚砜(C5HuN03S)的氧化也可 以代表Tp4等含甲硫氨酸的p胸腺素在体内以及体外的一条主要降解路径。己经鉴定出许多P胸腺素及同工型与已知的TP4氨基酸序列具有约70。/。、或 约75%、或约80%或更高的同源性。该类(3胸腺素及同工型例如包括Tp4a13、 T(39、 T(310、 T(311、 T|312、 T卩13、 Tpl4和Tpi5。在6位具有甲硫氨酸的示例性l3胸腺素包括Tp4、 Tp4ala、 Tp4xen、 Tp9met、 T{310 和Tpi3。本发明适用于已知的P胸腺素、其同工型及其片段，例如上述列出的P胸腺 素、其同工型及其片段，还适用于尚未鉴别出的本身含有甲硫氨酸的P胸腺素和 TI34同工型及其片段。此外，本发明还适用于己知的以及尚未鉴别出的(3胸腺素、其同工型及其片 段，这些P胸腺素、其同工型及其片段通常在肽的6位以外的位置具有一个或多 个甲硫氨酸。
在某些实施方式中，取代甲硫氨酸的氨基酸是中性的、非极性的、疏水性 和域非氧化性的。与含有甲硫氨酸的P胸腺素相比，该类组合物具有稳定性更强 的优点，同时该组合物与相应的P胸腺素具有实质上相同的活性或不同的活性。在某些实施方式中，取代甲硫氨酸的氨基酸抑制P胸腺素的氧化，最优选地， 取代的P胸腺素与相应的含有甲硫氨酸的P胸腺素实质上具有相同的生物活性。含有甲硫氨酸的P胸腺肽中甲硫氨酸的取代可能导致肽的稳定性特征有所 改变。此外，该取代导致肽具有不可预测的新特性和不可预测的未发生变化的特性。作为非限制性实施例，用于取代含有甲硫氨酸的(3胸腺素中的甲硫氨酸的氨 基酸为缬氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸或亮氨酸。 在另一个实施方式中，T(34中的甲硫氨酸被亮氨酸所取代。 根据一个实施方式，当甲硫氨酸被亮氨酸所取代时，所述P胸腺肽不是TP4。 根据本发明的一个方面，在含有甲硫氨酸的P胸腺素中用于取代甲硫氨酸的 氨基酸不是亮氨酸。在该方面的某些实施方式中，在含有甲硫氨酸的(3胸腺素中 用于取代甲硫氨酸的氨基酸为缬氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸或脯氨酸。 根据本发明的一个实施方式，用于取代甲硫氨酸的优选氨基酸为缬氨酸或 异亮氨酸。根据本发明的另一实施方式，用于取代甲硫氨酸的优选氨基酸为丙氨酸。 根据本发明又一实施方式，用于取代甲硫氨酸的优选氨基酸为缬氨酸。 本发明中，经氨基酸取代的改性P胸腺肽、其同工型及其片段可利用任意适 宜的方法获得，例如可通过固相肽合成来获得，该方法的一个例子在美国专利 No.5,512,656中有所公开。本发明还公开了形成经氮基酸取代的改性的P胸腺肽的方法，其中将含有甲 硫氨酸的(3胸腺肽、其同工型或其片段的氨基酸序列通过下述方法进行改性使 卩胸腺肽、其同工型或其片段中的至少一个甲硫氨酸被非甲硫氨酸进行取代。所 述方法涉及将含有甲硫氨酸的P胸腺肽序列、其同工型或其片段中的至少一个甲 硫氨酸以非甲硫氨酸的氨基酸进行取代以形成改性的p胸腺肽、其同工型或其片 段。如上所述，胸腺素(34可以具有亮氨酸取代基以取代其6位的甲硫氨酸，从而
具有TP41611。取代甲硫氨酸的亮氨酸抑制Tp4的氧化。与TP4相比，Tp4^具有稳定性更好 的优点，并且意外地具有实质上的肌动蛋白结合活性。以亮氨酸取代T(34中的甲硫氨酸还可意外地使肽具有新的未曾预料的活性。公开了形成Tp4b的方法，其中对TP4进行下述方式的改性将Tp4中6位的 甲硫氨酸取代为亮氨酸。该方法涉及将TP4序列中6位的甲硫氨酸取代为亮氨酸， 从而形成Tp4h。本发明的肽可以实质上具有肌动蛋白结合活性。所述组合物可与其它物质一起用作抗炎剂。根据本发明的一个实施方式，提供了氧化的含有甲硫氨酸的P胸腺肽、其同 工型或其片段，但除胸腺素卩4亚砜之外。本发明还提供了形成改性的(3胸腺素亚砜的方法，所述方法包括使本身含 有甲硫氨酸的P胸腺肽、其同工型或其片段与稀释的过氧化氢等氧化剂相接触， 从而形成P胸腺素亚砜肽。另一实施方式为形成卩胸腺素亚砜肽的方法，所述方法包括使除胸腺素卩4 之外的本身含有甲硫氨酸的P胸腺肽、其同工型或其片段与氧化剂，例如过氧化 氢相接触，从而形成相应的(3胸腺素亚砜肽。对于本文所述的组合物来说，与未被氧化的含有甲硫氨酸的P胸腺素相比， 其具有稳定性更强的优点，同时该组合物与相应的P胸腺素具有实质上相同的活 性或不同的活性。将含有甲硫氨酸的(3胸腺肽氧化为亚砜会导致肽的稳定性特征有所变化。此 外，除具有一些未发生变化的特性外，该取代还可导致肽具有某些新的特性。本身含有甲硫氨酸的P胸腺肽中甲硫氨酸的过氧化会导致肽的稳定性特征 发生变化。此外，除具有一些未发生变化的特性外，该取代还可导致肽具有某 些新的特性。根据一个实施方式，用于过氧化的P胸腺肽不是T(34。含有甲硫氨酸的P胸腺肽(包括P胸腺素亚砜)可利用过甲酸或过乙酸来进行 过氧化从而生成相应的P胸腺素砜肽(beta thymosin sulfone peptide),其中受到 过氧化的甲硫氨酸中的硫原子被两个氧完全氧化(过氧化)。根据一个实施方式，提供了一种组合物，其含有经改性的除T卩4砜之外的含
甲硫氨酸的P胸腺素砜。本发明包括形成P胸腺素砜的方法，所述方法包括使含有甲硫氨酸的卩胸 腺肽、其亚砜、其同工型或其片段与酸，例如过甲酸和/或过乙酸相接触，从而 形成相应的P胸腺素砜肽。根据本发明的另一个实施方式，本发明还包括一种形成P胸腺素砜肽的方法，所述方法包括使除胸腺素(34或胸腺素P4亚砜之外的含有甲硫氨酸的P胸腺肽、其亚砜、其同工型或其片段与酸，例如过甲酸和/或过乙酸相接触，从而形 成相应的卩胸腺素砜肽。在另一个实施方式中，利用过甲酸或过乙酸将胸腺素(34和/或胸腺素p4亚砜 进行氧化以生成胸腺素p4砜，其中胸腺素(34中6位的甲硫氨酸的硫原子被两个氧 完全氧化(过氧化)。胸腺素卩4砜可用作抗炎剂。由于TP4的甲硫氨酰残基中的硫醚为前手性的，因而利用非手性试剂进行氧 化(或过氧化)会形成被称作S-型和R-型("对映体")的亚砜(砜)。由于作为氧化的胸 腺素(34的潜在伴侣的每一生物分子均为手性的，因而与S-型和R-型的亚砜(或砜) 所形成的复合体是不同的(非对映体)。胸腺素[34亚砜(或砜)的不同形式可以具有 不同的药效学和药代动力学特征以及生物活性。因此，S-型和R-型的胸腺素p4 亚砜(或砜)会具有不同的生物学效应。可使用氨基酸分析系统来区分氧化的胸腺素P4亚砜(或砜)水解后的L-甲硫 氨酸(S)-型禾n(R)-型的亚砜(或砜)。例如，可使用两种方法分离氧化或过氧化后的 两种形式的胸腺素p4亚砜(或砜)。虽然不同形式的甲硫氨酸亚砜(或砜)表现为镜 和镜像关系，但是所产生的胸腺素P4亚砜(或砜)并未构成成对的像和镜像关系， 这是由于肽中的其它氨基酸残基产生不对称环境。因此，可通过HPLC技术对各 种单独形式进行分离。另一种对所述形式进行分离的方法可使用特定的甲硫氨 酸亚砜(或砜)还原酶，该还原酶对一种形式的胸腺素P4亚砜(或砜)进行还原而对 另一种却没有作用。可利用HPLC将非还原型的胸腺素卩4亚砜(或砜)与酶还原型 的胸腺素P4亚砜(或砜)进行分离。本文公开了一种形成含有经分离的R-胸腺素卩4亚砜(或砜)的组合物的方法， 其通过将R-胸腺素P4亚砜(或砜)从含有R-胸腺素卩4亚砜(或砜)和S-胸腺素(34亚砜 (或砜)的混合物中进行分离而完成。本文公开了一种形成含有经分离的S-胸腺素P4亚砜(或砜)的组合物的方法， 其通过将S-胸腺素卩4亚砜(或砜)从含有S-胸腺素卩4亚砜(或砜)和R-胸腺素(34亚砜 (或砜)的混合物中进行分离而完成。如上所述，已经鉴别出许多P胸腺素及其同工型与己知的TP4氨基酸序列具 有约70%、或约75%、或约80%或更高的同源性。该P胸腺素及其同工型例如包 括Tp4ala、 TP9、 T|310、 T卩ll、 T卩12、 Tpi3、 T卩14和Tpi5。如上所述，示例性的在6位具有甲硫氨酸的p胸腺素包括T(34、 T|34ala、 Tp4xen、 T(39met、 Tj310和Tpi3。如上所述，本发明包括已知的p胸腺素及同工型，例如上述列出的P胸腺素 及同工型，还包括尚未鉴别出的含有甲硫氨酸的p胸腺素、其同工型及其片段。如上所述，本发明还包括己知的及尚未鉴别出的P胸腺素、其同工型及其片 段，这些J3胸腺素、其同工型及其片段在肽的6位以外的位置具有一个或多个甲 硫氨酸。如同TP4，由于含有甲硫氨酸的P胸腺素的甲硫氨酰残基中的硫醚为前手性 的，因而利用非手性试剂进行氧化(或过氧化)会形成包括被称作S-型和R-型("对 映体")的至少两种类型的亚砜(砜)。由于作为氧化的含有甲硫氨酸的P胸腺素的 潜在伴侣的每一生物分子均为手性的，因而其与S-型和R-型的亚砜(或砜)所形成 的复合体是不同的(非对映体)。p胸腺素亚砜(或砜)的不同形式可以具有不同的药 效学和药代动力学行为以及生物活性。因此，S-型和R-型的(3胸腺素亚砜(或砜) 会具有不同的生物学效应。如同Tp4，可使用氨基酸分析系统来区分氧化的p胸腺素亚砜(或砜)水解后的 L-甲硫氨酸(S)-和(R)-的亚砜(或砜)。例如，可使用至少两种方法分离氧化(或过 氧化)后的不同形式的P胸腺素亚砜(或砜)。虽然不同形式的甲硫氨酸亚砜(或砜) 表现为镜和镜像关系，但是所产生的p胸腺素亚砜(或砜)并未构成成对的像和镜 像关系，这是由于肽中的其它氨基酸残基产生了不对称环境。因此，可通过已 知的HPLC技术对各种形式进行分离。另一种对不同形式进行分离的方法可使用 特定的甲硫氨酸亚砜(或砜)还原酶，该还原酶对一种形式的P胸腺素亚砜(或砜) 进行还原而对另一种却没有作用。可利用HPLC将非还原型的p胸腺素亚砜(或砜) 与酶还原型的(3胸腺素亚砜(或砜)进行分离。本文公开了一种形成含有经分离的R-(3胸腺素亚砜(或砜)的组合物的方法， 其通过将R-卩胸腺素亚砜(或砜)从含有R-卩胸腺素亚砜(或砜)和S-卩胸腺素亚砜(或 砜)的混合物中进行分离而完成。本文进一步公开了一种形成含有经分离的S-卩胸腺素亚砜(或砜)的组合物的 方法，其通过将S-卩胸腺素亚砜(或砜)从含有S-卩胸腺素亚砜(或砜)和R-p胸腺素亚 砜(或砜)的混合物中进行分离而完成。在一个实施方式中，本发明提供一种对受试对象或受试对象的组织的疾病、 损伤、伤害和/或创伤进行治疗、预防、抑制或减轻的方法，所述方法是通过施 用有效量的包含本发明肽的组合物而完成的。所述施用可为直接施用或全身施 用。直接施用的例子例如包括通过直接敷用或吸入使组织与包含溶液、洗液、 药膏、凝胶、霜剂、糊剂、喷雾剂、悬浮剂、分散体、水凝胶、油膏或油的载 体相接触，所述溶液、洗液、药膏、凝胶、霜剂、糊剂、喷雾剂、悬浮剂、分散体、水凝胶、油膏或油中含有本文所描述的肽。全身施用的例子例如包括 将含有本文所描述的肽的组合物进行静脉内、腹膜内、肌肉内注射，所述组合 物被置于水等适于进行注射的药学可接受载体中。受试对象优选为哺乳动物， 最优选为人。本文所描述的组合物可以任意适宜的有效量进行施用。例如，本文所述的组合物可在0.0001-1,000,000微克剂量范围内进行施用，更优选在0.1-5，000微克的剂量范围内进行施用，最优选在1 -30微克的剂量范围内进行施用。本文所描述的组合物可以每天施用、隔天施用、隔周施用、隔月施用等，在进行施用的每一天可以进行单次或多次施用，例如可在进行施用的每一天进行2、 3、 4或更多次的施用。本发明还包括药物组合物或化妆品组合物，所述组合物在药学或化妆品可接受载体中包括治疗有效量的本文所述的组合物。所述载体包括任意适宜的载体，其包括本文所列出载体。本文所描述的给药方法涉及本文所述的组合物的施用或递送的多种路径，其包括对受试对象进行施用的任意常规施用技术(例如为直接施用、局部注射、吸入或全身施用，但并不限于这些)。使用或包含本文所述组合物的方法和组合物可以通过与药学可接受或化妆品可接受的非毒性赋形剂、添加剂或载体混合来配制为药物组合物或化妆品组合物。
具体实施方式
实施例1利用常规的固相肽合成法(例如，根据美国专利No.5,512,656中公开的方法)， 以缬氨酸取代6位的甲硫氨酸从而制得Tp4va1，由此得到具有未曾预料和不可预 知的特性的肽。实施例2利用常规的固相肽合成法，以异亮氨酸取代6位的甲硫氨酸从而制得Tp4^， 由此得到具有未曾预料和不可预知的特性的肽。 实施例3例如根据美国专利No.5,512,656中公开的方法，利用常规的固相肽合成法， 以丙氨酸取代6位的甲硫氨酸从而制得TP4 M6A，由此得到具有未曾预料和不可 预知的特性的肽。实施例4例如根据美国专利No.5，512,656中公开的方法，利用常规的固相肽合成法， 以苯丙氨酸取代6位的甲硫氨酸从而制得Tp4Phe，由此得到具有未曾预料和不可 预知的特性的肽。实施例5例如根据美国专利No.5,512，656中公开的方法，利用常规的固相肽合成法， 以脯氨酸取代6位的甲硫氨酸从而制得Tp4，，由此得到具有未曾预料和不可预 知的特性的肽。实施例6例如根据美国专利No.5,512，656中公开的方法，利用常规的固相肽合成法， 以亮氨酸取代6位的甲硫氨酸从而制得TI34'eu，由此得到具有未曾预料和不可预 知的特性的肽。实施例7T(3^u采用本文所述的固相肽合成法进行制备。通过实验进行如下测定，即与天然TP4相比，T(34^的G-肌动蛋白结合亲和 性。所述实验重复两次，每次进行三份平行，所述结果如下所述(来自三份实验 的平均值)
第一次测定T{34Kd=1.28mM; Tp4leuKd=1.36mM 第二次测定Tp4Kd=0.54mM; T(34leuKd=0.99mMTP4情况下的较低值是由其亚砜所致的。Tp4和Tf34-亚砜的混合是通过氨基 酸分析而确定的。制备物中约10%为亚砜，其与G-肌动蛋白仅有较弱的结合。因 而与非氧化的TP4相比，测试中的T(34的真实浓度要更低，游离TP4降低得更多。 对游离T(34的降低进行了测定。利用超滤来分离结合G-肌动蛋白的TP4与游离 TP4，并利用HPLC来测定超滤液中T(34的浓度。所用方法在Huff et al.,F五/^ Ze"era,414:39-44(1997)中有描述。上述数据令人吃惊地显示出，将(3胸腺肽中的甲硫氨酸进行氨基酸取代时， 实质上并不会影响P胸腺肽的G-肌动蛋白结合能力。实施例8将Tp4以浓H2O2(30。/。)进行处理，对Met残基进行完全氧化，由此来制备Tp4TP4砜的化学性质已经得到确定。该确定所用的技术手段为HPLC、 MALDI-TOFMS和氨基酸分析。MALDI-TOF分析显示出32Da的肽的分子量增 加，这是由于02掺入至所述肽中所致。已经确定TI34-砜具有与G-肌动蛋白结合的性质。T(34-砜与G-肌动蛋白形成 复合体，该复合体的Kd值约为10uM。因而与Tp4和G-肌动蛋白所形成的复合体 (luM滩比，T(34-砜与G-肌动蛋白形成的复合体的稳定性要低，但令人吃惊的是， 该复合体的稳定性远强于Tp4-亚砜与G-肌动蛋白形成的复合体(20uM)的稳定 性。实施例9如本文所述，通过使包括TP4^、 Tp4xen、 T|39met、 Tpi0和Tpi3的P胸腺素与稀释的过氧化氢相接触，将其转化为亚砜，从而形成相应的卩胸腺素亚砜。 实施例10如本文所述，通过使包括TP4^、 T|34xen、 Tp9met、 TplO和T(313的P胸腺素与 与过甲酸和/或过乙酸相接触，将其转化为(3胸腺素砜肽，从而形成相应的(3胸腺 素砜肽。实施例11TJ34亚砜为S-型和R-型的一对一 的混合物，将其以特异的甲硫氨酸亚砜还原 酶(MSR-A和MSR-B)进行还原。通过该方法将S-型或R-型中的一种还原，而使另 一种仍为亚砜。该方法提供两种试样 一种试样含有TP4和R-T(34亚砜的混合物， 而另一种试样含有Tp4和S-Tp4亚砜的混合物。将两种试样以HPLC进行分离，并 分离出S-TP4亚砜纯品和R-Tp4亚砜纯品。测定它们与G-肌动蛋白的复合体的解 离常数。令人吃惊的是，它们的复合体的解离常数是相同的。G-肌动蛋白与 (R/S)-TP4亚砜或与R-TP4亚砜或与S-TP4亚砜的复合体的稳定性是相同的 (Kd 20uM)。肌动蛋白-Tp4亚砜的Kd约为luM。通过与G-肌动蛋白的结合，R-T(34 亚砜可能转化为S-Tp4亚砜(S-TI34亚砜可能转化为R-TP4亚砜)。这种外消旋作用 可能使Kd值的差别消失。 实施例12分离实施例8制备的T(34-砜、实施例9制备的p胸腺素亚砜、实施例10制备的 卩胸腺素砜，得到它们各自的经分离的S-对映体和R-对映体。
权利要求
1.一种组合物，该组合物含有经氧化或过氧化改性的本身含有甲硫氨酸的β胸腺肽、其同工型、其片段、其经分离的R-对映体或经分离的S-对映体，而不含有外消旋的胸腺素β4亚砜；或者该组合物含有改性的具有非甲硫氨酸的氨基酸取代基的β胸腺肽、其同工型或其片段，所述非甲硫氨酸的氨基酸取代基取代了本身含有甲硫氨酸的β胸腺肽、其同工型或其片段的氨基酸序列中的至少一个甲硫氨酸。
2. 如权利要求1所述的组合物，其中所述含有甲硫氨酸的卩胸腺肽为Tp4、 Tp4ala、 Tp4xen、 Tp9met、 T卩10或TP13。
3. 如权利要求1所述的组合物，其中所述氨基酸取代基为亮氨酸、缬氨酸、 异亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸或脯氨酸。
4. 如权利要求1所述的组合物，其中所述含有甲硫氨酸的P胸腺肽为Tp4。
5. 如权利要求1所述的组合物，其中所述氨基酸取代基为亮氨酸、缬氨酸、 异亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸或脯氨酸。
6. 如权利要求1所述的组合物，其中所述氨基酸取代基至少是以下之一 中性的、非极性的、疏水的或非氧化性的。
7. 如权利要求1所述的组合物，其中所述氨基酸取代基抑制所述肽的氧化。
8. 如权利要求1所述的组合物，该组合物含有改性的具有非甲硫氨酸的氨 基酸取代基的P胸腺肽、其同工型或其片段，所述非甲硫氨酸的氨基酸取代基 取代了除T(34以外的含有甲硫氨酸的P胸腺肽、其同工型或其片段的氨基酸序 列中的至少一个甲硫氨酸，所述氨基酸取代基不是亮氨酸。
9. 一种含有T(34^肽的组合物，其含有经改性的TP4氨基酸序列，该序列 中6位的甲硫氨酸被亮氨酸取代。
10. 如权利要求1所述的组合物，其中所述经改性的含有甲硫氨酸的p胸 腺肽、其同工型或其片段为亚砜。
11. 如权利要求1所述的组合物，其中所述经改性的含有甲硫氨酸的卩胸 腺肽、其同工型或其片段为砜。
12. 如权利要求1所述的组合物，其含有胸腺素p4砜。
13. 如权利要求1所述的组合物，其含有TP4^砜、T(34xen砜、T(34""t砜、 TP10砜或Tpl3砜。
14. 如权利要求1所述的组合物，其含有经分离的R-对映体。
15. 如权利要求1所述的组合物，其含有经分离的S-对映体。
16. 如权利要求1所述的组合物，其含有经分离的胸腺素p4亚砜的R-对映体。
17. 如权利要求1所述的组合物，其含有经分离的胸腺素p4亚砜的S-对映体。
18. —种形成权利要求1的p胸腺素砜肽的方法，该方法包括使本身含 有甲硫氨酸的I3胸腺肽与酸接触，从而形成(3胸腺素砜肽。
19. 如权利要求18所述的方法，其中所述酸包括过甲酸或过乙酸中的至少一种。
20. 形成权利要求1所述的含有经分离的R-p胸腺素亚砜或砜的组合物的 方法，该方法包括从相应的R-卩胸腺素亚砜或砜和S-卩胸腺素亚砜或砜的混合 物中分离R-p胸腺素亚砜或砜。
21. 形成权利要求1所述的含有经分离的S-卩胸腺素亚砜或砜的组合物的方 法，该方法包括从含有相应的S-(3胸腺素亚砜或砜和R-p胸腺素亚砜或砜的混 合物中分离S-(3胸腺素亚砜或砜。
22. 形成权利要求1所定义的改性的p胸腺肽、其同工型或其片段的方法， 该方法包括使本身含有甲硫氨酸的卩胸腺肽、其同工型或其片段的氨基酸序 列中的至少一个甲硫氨酸被非甲硫氨酸的氨基酸取代基所取代，从而形成改性 的(3胸腺肽、其同工型或其片段。
23. 如权利要求22所述的方法，其中所述氨基酸取代基为亮氨酸、缬氨酸、 异亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸和脯氨酸。
24. 形成权利要求9所定义的T(34^肽的方法，该方法包括使Tf34的6 位的甲硫氨酸被亮氨酸所取代，从而形成T(34^肽。
全文摘要
本发明公开了一种组合物，其含有经氧化或过氧化改性的含甲硫氨酸的β胸腺肽、其同工型、其片段、其经分离的R-对映体或经分离的S-对映体，而不含有外消旋的胸腺素β4亚砜；或公开了一种组合物，其含有改良的β胸腺肽、其同工型或其片段，该组合物具有氨基酸取代基，用以本身取代含有甲硫氨酸的β胸腺肽、其同工型或其片段的氨基酸序列中的至少一个甲硫氨酸；本发明还公开了形成所述组合物的方法。
文档编号A61K38/00GK101119741SQ200680002164
公开日2008年2月6日 申请日期2006年1月17日 优先权日2005年1月14日
发明者埃瓦尔德·汉纳佩尔, 大卫·克罗克福德, 托马斯·赫夫, 阿兰·L.·戈尔茨坦 申请人:雷金纳克斯生物制药公司;埃朗根-纽伦堡大学