用于非侵入性测定皮肤组织胆固醇的方法和设备的制作方法

专利名称：用于非侵入性测定皮肤组织胆固醇的方法和设备的制作方法
技术领域：
本发明涉湖于非侵入性测定皮肤^K组织月旦固醇的方法和设备。尤其是，本发明 涉及,样品内胆固醇的直接分析，通常不利用仪器，并因it隨^T进行自我湖赋。特别 是，本发明一方面掛共了将检测试剂(detectorreagent)施加到舰的被选区的装置。本发明 另一方面提供了一种指^置，以产生一个与结合在皮肤内的检测试剂量相当的视觉变化。
背景技术：
在确定处于患有或正在形成动脉粥样硬化的危险之中的个体以及处于由于高胆固醇 含量而弓胞的對喊其它疾病危险之中的个体时，鉴定具有高^l划旦固醇的人是有用的。
在北美洲和世界的其它许多地方，由动脉粥样硬化弓胞的冠状动脉疾病仍然是发病禾口 死亡的第一原因。预防和干预需要经M算地i湖娜些具有该疾病的个体以及那些正有风 险发生该疾病的个体。因此，人们目前对湖啶肯,预湖恸脉粥样硬化疾病风险的fei己物分 子的含量方面具有很大的兴趣。
血浆总胆固醇的含量测定是,泛使用的用于确定患动脉粥样硬化风险的方法之一。 但是，與虫的血浆总胆固醇含量不能准确预湖讽险，并M3W血浆脂蛋白的测定已经获 取了更好的结果。低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)内的胆固醇的测定显示 出优于总胆固醇含量的测定。所有的这些湖啶都需要在长时间空腹后采血，从而j到善食中 的胆固醇不发生干扰。另外，采样可能会不劍艮，并且带来某些感染的小风险。并且，分 * 常需要 和昂贵的设备。
在美国专利Na5，340，539中示出了旨辦允剤柳者获ML测旦固醇含量的一种装置的 例子。该专利解决了与就i纤医生或诊所相关的一些问题，并且使空腹更便利。但是，仍 然需要用刺血针矛LJ俘指以获得血液样品，对于许多絲说，男阿能是不适宜的。
但是，在许多情况下，血浆胆固醇和脂蛋白的含量与动脉粥样硬化疾病的程度不相关。 因此，需要分析其它反映动脉粥样硬化程度的fei己物分子，并J^共对冠状动脉疾病的风险
i怖。
例如，除了tt浆内发5则旦固醇之外，在组织中也出现了大量胆固醇，并且已乡強示 出组织中增加的含量在动脉粥样硬化的发展中皿至关重要的作用。已经证明组织包括皮 肤内的胆固醇的堆积与在动脉壁沉积物内发现的胆固醇量密切相关。因此，舰内胆固醇 的测定可以反映动脉粥样硬化的程叟。实际上，已会^示出 活检样品内的胆固醇含量
与动脉粥样硬化相关，并为患有^T性心脏病的病AJ^共风险iff古(BouissouH.,DeGraeve J"等人AmiBiol.CliiLVol4C365,1982)。并且，测定从冻干的舰活检样品内提取 的胆固醇与正常人体内和患缺血性心脏病的病人体内的血清脂类比值相关(YP. Nikitin等 人，Kardiologiia^n,48-51，1987)。
获取皮肤活检样品用于鹏旦固,啶以进行动脉粥样硬化风斷刑古的一，点是 在获取劍夫样品时会疼痛。并且，活检部位的感染风险是可能的。获取UM样品一般需要 经过训练的专业人员。另外，这种样品包含皮下脂肪和几层皮肤，其中一些是高度血管化 的。因此，这些样品包含不同的胆固醇来源，并且不能纟^可重复的和可靠的胆固醇分析 结果。
在美国专利No.4,458,686中描述了 一种直接分析皮肤表面下或其表面上的血液内的各 种物质的方法。该专利基于电化学测定产生的氧浓度。但是，对于不舰舰扩散的非挥 发性物质，需要在刻夫下tiA酶以影响M表面的氧变化。该专禾忪开了1顿酶如胆固醇 氧化酶以测定月旦固醇，但是魏来，其测定的题翻旦固醇而不是皮脚旦固醇。
因此，需要一种简单的方法和装置，用于非侵入性地测定舰内的胆固醇，其不受其 它胆固醇来源的影响。
发明推皿
本发明撤共了一种用于非侵入性测定OT旦固醇的方法和设备。尤其是，本发明一方 面掛共了将检测试剂施力倒舰的!鹏区的装置。本发明另一方面掛共了一种f际装置， 以产生一个与结合在皮肤内的检测试剂量相当的视觉变化。对于特定的实施例，本发明的 方法和设备通常不需要fif可仪器，使得本发明适^a行自我测试，例如，但不局限于， 庭环境中。这样，本发明尤其用于允i竹体刑古他们患动脉粥样硬化和相关血管疾病 的风险。
在本发明的一方面中，掛共了测定] |旦固醇的方法，该方、跑括
a) 将检测试剂施加到 的被选区，以便与舰内存在的胆固醇结合；
b) 将 ^器表面施加到皮肤的被选区，该 ^器表面具有一种溶液，当该指示器
表面与该皮l^被选区接触时，该溶液与检测试剂发生反应，该反应产生一个与结合到J^
内胆固醇的检测试剂量相当的可M色变化；并且
C) 分析在J际器表面产生的颜色，以获取iM旦固醇的测定。 可以采用毛细作用将该检测试剂施力倒舰的l雌区。在本发明的一种雌实施例
中，舰至少一个芯吸元件将检测试剂施力倒舰的l腿区。该芯吸元件可以用检测试剂
饱和。在本发明的一个雌实施例中，该芯吸元件由统的涂敷器固定。 并且，该芯吸元件以一，量变形，以释方爐测i式齐(J。
可以选離测试齐啲浓度，使得当舰中雜的胆固醇M:预选阈值时，在步骤b)
中就发生可见的颜色变化。
并且，该方法可以包括舰将对照用的检测试齐诉[]测i湖的检测试齐鹏加到皮肤l鹏 区内的两个分开的区域而施加检测试剂。该对照用的检测试剂具有的浓度高于测试用的检 测试剂的浓度。对于这个方面，选择测i湖的检测试剂浓度，使得当劍夫中存在的胆固醇 超过预选阈值时，在步骤b)中就发生可见的颜色变化。
并且，该方法进一步包括在步骤a)之后并在步骤b)之前去除皮肤内未与胆固醇结 合的倒可多余的检测试剂。可以M31M的吸附性介质去除该多余的检测试剂。
另外，该f际器表面可以包括一种与检测试剂内的f际成分(reportercomponent)作用 的底物溶液。该 际器表丽以是一个用底物溶液饱和的吸附性材料垫片，该底物溶液与 检测试剂内的指示成分发生作用。
并且，该方法可以包Silil^f式分光光度计分析产生的颜色。可选ffi也，采用比色 计分析产生的颜色，例如，诸如，但不局限于，分级的一系列色带。
在本发明的另一方面，ili共了一种将检测试剂施加到舰的被选区的装置，该驢包
括
a) —个主体；和
b) 至少一个涂敷器，在其一末端由主体固定，并具有一个第二末端，以，数虫 的 被选区，涂敷器的第二末端将检测试剂传递到 的被选区。
该涂敷器ttif利用毛细作用将检测试剂施加到赚的被选区。在一方面中，该涂敷器 包括—个芯吸元化
装置的主体可以包括至少一个凹槽，用于在其中容纳芯吸元件的一个末端。该凹槽具 有的深度足以在其中容纳该芯吸元件，使得芯吸元件的第二末端不延伸超出该凹槽的深度。 并且，在本发明的一个，实施例中，1分凹槽的周长(perimetrica]extent)大于芯吸元件 的周长。具W^大周长的凹槽部分环绕芯吸元件的第二末端，tt3^使得在其周围提供一个
11间隙。
在本发明的一个 实施例中，芯吸元件为一种纤纟 。该芯吸元件还可以由惰性聚 烯烃材料制成。
可选掛也，涂敷器可以是一种胶。
涂敷器皿为圆柱形的，但是，在,两个凃敷器的地方，涂敷器可以相互隔开，使 得一个涂敷驗加对照用的检测试剂而第二涂敷娜加测i胡的检测试剂，并且齡涂敷
^t阿以在第二 (^Lh)末端呈现不同的M面。
该涂敷器可以用检测试剂饱和。
在本发明的另一方面中，^i乓了一个 i^置，以产生一个与结合在舰内的检测试 剂量相当的视觉变化。该t繊置包括一个由驢的主^M糊货际器表面，使得该 际 器表面可以与皮肤的被选区撤虫，该指示器表面包含足量的溶液，当该溶液接触与皮肤被 选区内的胆固醇结合的检测试剂时起反应，以便在至少1分 标器表面上产生可见的颜 色变化。
该溶液可以是与检测试剂附际成分起反应的底物溶液。
该 际器表面可以包括一种吸附性材料，优选用该溶液饱和。在一个实施例中，该吸 附性材料为一垫片。该垫片可以是编织而成的，或者，可选^t也，具有压制的纤维薄片结 构，或者由亲水材料制造，或者是基于纤维素的吸附性薄片，或者由玻璃纤维材料制造。
在本发明的另一方面中，掛共了一种用于测定鹏旦固醇的设备，该设备包括
a) —个主体；
b) 至少一个涂敷器，在其一末端由主体固定，并具有一个第二末端，以擬虫皿的 被选区，涂敷器的第二末端将检测试剂传递到舰的被选区；禾口
C) 一个由主#^{共附际器表面，使得该指示器表面可以与刻知勺被选区接触，该 指示器表面包含足量的溶液，当该溶液撤虫与 的被选区内的胆固醇结合的检测试剂时 起反应，以便在至少一部分指示器表面上产生可见的颜色变化。
该涂敷器可以利用毛细作用将检测试剂施加到 的被选区。在一实施例中，该涂敷 器包括一个芯吸元件。
另外，该主体可以包括一个外表面和至少一个凹槽，用于在其中容纳芯吸元件的一个 末端。尤其是，该凹槽具有的深S^以在其中容纳该芯吸元件，使得芯吸元件的第二末端
不延伸超出主体的夕卜表面。并且，1分凹槽的周长大于芯吸元件的周长，由此，使得凹 槽环绕芯吸元件的第二末端，并且，在优选实施例中，在其周围形成一个间隙。
在一个实施例中，芯吸元件为一种纤维塞。可选掛也，该芯吸元件由惰性聚烯烃材料
制成。
在另一个实施例中，涂敷器可以是一种胶。
在H雌实施例中，芯吸元件可以是圆柱形的。对于其中麟两个涂敷器的实施例， 涂敷器可以相互隔开，使得一个涂敷^l加对照用的检测试剂而第二涂敷，动,试用的 检测试剂。对于这种实施例，^涂敷翻阿以在第二^呈现不同的tM面。
该涂敷器可以用检测试剂饱和。
并且，指示器表面上的溶 以是与检测试剂的^^成分起反应的底物溶液。 该 际器表面可以包括一种吸附性材料， 实施例中用该溶液饱和。 该吸附性+才料可以是一垫片，并且该垫片可以是编织而成的，或者，可选掛也，具有
压制的纤维薄片结构，或者由亲水材料制造，或者是基于纤维素的吸附性薄片，或者由玻
璃纤维材料制造。
在本发明的优选实施例中，主体提供至少一个涂敷器，并且 际器表面位于其相对侧。 进一步地，该设备可以包括一种吸附性介质，该吸附性材禾4^立于主体上，并与该至少
一个涂敷器和指示器表面隔开。在一个方面中，该吸附性介质由亲水材料构成。
进一i^t也，该设备可以包括至少一个位于主体表面上的^i己物，该主体J^共至少一个
涂敷器，该至少一个标记物的开沐为在邻近检测试剂已经传递至啲劍夫区域的劍夫被选区
内形成压痕。由此，该设备可以进一步包括至少一个位于t际器表面上的第二^i己物，该 至少一个第二标记物在开mjb对应于至少一个fei己物。
在本发明的另一方面中，樹共了用于观啶鹏旦固醇的试剂盒，该试剂盒包括
a) —个检测试剂来源；
b) —个将检测试剂添加到舰被选区的涂敷器；
C) 一个当与检测试剂撤邮寸起反应的溶 源；和
d) —个接收溶液的指示器表面，使得当谢旨示器表面与舰的丰雌区l錢邮寸，该溶 液与结合到 内的胆固醇的检测试剂起反应，以便在至少1分 标器表面上产生可见 的颜色变化。
试剂盒的涂敷器雌利用毛细作用将检测试剂施力倒舰的被选区。该涂敷器可以包 括一个芯吸元件，其可以为一种纤维塞，或者，可选择地，由惰性聚烯烃材料制成。进一 步地，该涂敷器可以是一种胶。
试剂盒也可以Jli共两个涂敷器，涂敷器相互隔开，使得一个凃敷 加对照用的检测 试剂而第二涂敷飄加测i畑的检测试剂。^^涂敷器者阿以在各自的第二末端呈现不同 的横截面。
进一频，涂敷器可以是检测试剂来源，并且，tti^检测试剂饱和。
并且，戶;M溶、M以是与检测试剂附标成分起反应的底物溶液，其tt^位于f际器
表面上，该t际器表面可以是一种吸附性材料。并且，在雌的实施例中，该吸附性材料 为溶 源。进一步，该吸附性材料可以用该溶液饱和。
在本发明的一方面中，试剂盒的吸附性材料可以是一垫片。该垫片可以是编织而成的， 或者，可选掛也，具有压制的纤维薄片结构，或者由亲7jC材料制造，或者是基于辦隹素的 吸附性薄片，或者由玻璃纤纟tt才料制造。
进一步，该试剂盒可以包括一种吸附性介质，并且该吸附性介质可以由亲水材料构成。
并且，试剂盒的涂敷器和 际器表面可以位于装置的相对侧上。可选掛也，涂敷器、 ^^器表面和吸附性介质可以位于装置上。
该试剂盒可以进一步包括一个反射式分光光度计，以分析产生的颜色，或者，可选择 地，分析产生的颜色的比色计，例如，但不局限于，分级的一系列色带。
进一對也，掛共了一种将检测试剂添加到皮肤被选区以结合皮肤内存在的胆固醇的方 法。该方飽括
a) 提供至少一个包含足量检测试剂的涂敷器，该至少一个涂敷器利用毛细作用将检 测试剂传递到皮肤的被选区；禾口
b) 用涂敷器接触劍夫的被选区，以便用检测试剂润湿舰。
可以舰至少一个芯吸元件将检测试剂添力倒劍夫的被选区。并且，该芯吸元件可以 用检测试剂饱和。
该芯吸元件以一受控量变形，以释放检测试剂。 该芯吸元件可以由合适的涂敷器固定。
另外，添加检测试剂的方飽括将对照用的检测试剂和测i湖的检测试剂施加到舰 被选区内的两个分开的区域。在一方面中，该对照用的检测试剂具有的浓度高于测试用的 检测试剂浓度。
进一步地，本发明还提供了一种方法，以产生与结合到皮肤内胆固醇的检测试剂量对
应的可见颜色变化，以测定 1旦固醇，该方t^括
a) ^射际器表面施加到舰的被选区，该指示器表面具有一种溶液，当该指示器表 面与该皮肤的被选区接触时，该溶液与检测试剂发生反应，该反应产生一个与结合到舰 内胆固醇的检测试剂量相当的可见颜色变化；并且
b) 分析在指示器表面产生的颜色，以获取皮脚旦固醇的测定。 该 际器表丽以包含与检测试剂的指示成分起反应的底物溶液。该t际器表丽以是一种由底物溶液饱和的吸附性材料垫片，繊物溶液与检测试剂内的^^成分起鹏。
产生的颜色可以由础式就光度计分析，或者，可选掛也，禾偶比色计分析，例如 分级的一系列色带。
附图简述
为了更好iWM本发明并且更清楚地显示如何将其实施，现将舰辨啲方式参照显
示本发明H^实施例的附图，其中


图1是将检测试剂添加到iSK被选区的本发明的驢部分的横截面图2是图1的装置的俯视图3是本发明附际装置部分的俯视图4是本发明的设备的透视图，包括图1的装置和图2的t际装置；
图5是图4的设备的俯视图6是图4的设备的底部平面图7至图12描述了利用图4的设备的本发明的一个方法实施例；禾口
图7a是沿图7的线7a—7a得到的横截面图。
具体实施例方式
本发明提供了用于非侵入性地测定皿胆固醇的方法和设备。特别是，本发明一方面 掛共了一种将检测试剂加到舰被选区的體。本发明的另一方面劍共了一指示驢，用 以产生与结合在 中的检测试剂量相当的视觉变化。本发明的方法和设备不需對壬何仪 器，使得本发明适舒自我测试，例如，在家庭环境中，但不限于此。因此，本发明特别 用于容i针人评估其患动脉粥样硬化和相关血管疾病的风险，将在下文中变得清楚。
通常，本发明樹共了一种测定J^旦固醇的方法。该方t跑括施加检测试剂 到皮肤的被选区，以结合到皿中存在的胆固醇上，该检测试剂包括指示组分；必 要时，通过誠的吸附性介质除去过量的检测试剂；施加指示器表面到舰的，鹏 区，该指示器表面具有一种溶液，当指示器表面与舰的l雌区接触时，该溶液与 指示成分发生反应，该反应产生相应于结合到OT旦固醇上的具有指示成分的检测 试齐懂的可见颜色变化；并且分析指示器表面产生的颜色变化，从而获得鹏旦固
应当意识到 的^可区域都可以用于测量，但最M的是来自手掌表面的皮肤。手 掌区域的劍夫没有皮脂腺，其分泌物包含可能影响结果的胆固醇。而且，手掌特别适于通
过本发明的SS简单应用和定位，如将在下，1flf释的。后面的说明将以手掌为参照作
为被领赋的舰区。然而，本领域中的普通技术人员应当意i昭ij，该方法并不局限于i顿
手掌，而是可以应用于 的其它区域。
进一歩池，通过^对胆固醇具有特异性的检测试剂实 P寸M区^h的胆固醇的分
析。而且，检测试剂具有连接的f际成分，其會,在指示成分与誠的底物溶液反应时产 生可测量的信号。
施加检测试剂到舰的!雌区，导致特异性地结合到皮肤中存在的胆固醇组分，并且 伴随着结合^^成分。在一种形式的分析中，检测试剂是A-C-B型化合物；其中，A表示
特异性的胆固醇结合化合物，B表示 际成分，而C^^接组分。该类型的试剂在美国 专利号No.5， 489， 510中作了描述，其整fr&t匕作为参考被并入。
A组分可以是樹可能识另胜结合到舰中的胆固醇上的试剂。誠的试齐啲例子包括 类固醇糖苷、三蔽蹄、疏冰的蛋白质、多烯抗菌素、抛旦固醇抗体，但不限于此。
可以4顿A-C-B型的化合物，其中，B组分是酶。魏的酶的例子包括过氧化物酶、 碱性磷酸酶、尿素酶、半乳M酶、葡萄Hft化酶以及乙酰基胆繊旨酶，但不限于此。
进一對也，将特异性的胆固醇结合组分A连接至胜际成分B的M的连接组分C包 括但不局限于例如零长度的交联剂、同双官能团的交联剂以及异双官能团的交联剂。零长 度的交联剂M在A和B分子之间形j^包含其它原子的键而介导它们之间的连接。同双 官能团的交联剂具有两个相同的反应基团，用于连接A和B肝，并且在它们之间形成连 接，具有可〃 量的原子，取决于所1顿的特定同双官能团试齐啲长度。對以的，异双官 能团的交联剂具有两个的不同官能团，用于连接A和B針，并且在它们之间形^iSt， 具有可〃 量的原子，取决于所1顿的特定异双官能团试剂的长度。C组分也可以是一禾中 聚合交联剂，其具有多个官能团，为同麟型或不同类型，并且能够将多个^T A和B结 合到聚合物骨架上。
A-C-B型的特别有用的试剂，例如，其中A是洋地黄皂苷、B是辣根过氧物酶，并且 C是马来酐一N-乙烯基吡咯烷酮共聚物。
现在将更加详细地对本发明的装置和仪器的不同方面进行描述。随后将是本发明的方 法，其借助于实施例而利用了本文描述的驢和仪器。
图1和2示出了根据本发明一个方面的将检测试剂施加到劍夫的被选区的装置。该装 置10包括主体12和至少一个涂敷器14。根据图1和图2的意图，仅显示了一部分主体12。 应当意识到主体的皿和结构可以改变。而且，主体能够制造^^种把手型(未示出)， 以容许用户容易抓住和使用用于本发明方法的装置。
Mil主体12将涂敷器14固定在一端16 (图1中示出的涂敷器的下端)。涂敷器的
第二端18 (图l中示出的涂敷器的上端)设置成与 的被选区进行,(参见图7a)。 Mii凃敷器14的第二端18使具有检测试剂的^^ 区润湿，如将在下魏行描述的。
在本发明的雌实驗式中，涂敷器14禾拥魏作用将检测试剂传避lj舰的丰雌 区。为了进行自継测，例如，在家庭环境中，需要将检测试剂施加至蝶作者^i:的有 效方法(practical means)，并且不需要测量的和其它的仪器。本发明人已发91ilil利用毛 细作用将检测试剂稳定地施加到劍夫柳艮定区域。在图1和2中示出的实船式中，芯吸 元件20用于发挥毛细作用。
对于所示出的实皿式，主体12包括容纳涂敷器14的槽22。特别是，槽22具有下 部24和上部26。涂敷器14的末端16可以形成并制造成固定在槽22的下部24，例如，通 i3tif擦配合，但不限于此。
槽22的上部26的周长大于涂敷器14的周长。特别是，如所示出的，主体12中的槽 22的上部26围绕着涂敷器14的第二端18，使得在周围^^共了环形的间隙28。
另外，tt^实ffi^式的涂敷器14凹入主体12中，使得涂敷器14的第二端18的接触 面17不会延伸高于主体的表面30。
在,的实施方式中，涂敷器14用检测试剂饱和，以便当接触时将检测试剂4舒俞到 皮月^h。当，数虫时，必须发生检测试剂的传递，从而润湿 ，并且相对3fci:于操作者施 加的压力。尽管 使涂敷器饱和，应当意识到，对于本领域中的普通技术人员来说，涂 敷器不需要进行饱和；然而，它需要包含足量的检测试剂，以便当，魏加中润湿舰区。
在本发明中可以使用不同形式的涂敷器14。例如，涂敷器可以是 或纤纟 ，其通 过毛细作用保持液体。惰性聚烯烃材料制成的塞子是很有用的，因为它们可以以亲水的形 式使用，并且由此容易吸收7j^f友体，如检测试剂。具有增强壁以及具有纵向定向的纤维 成分的塞子是有用的，因为它们具有很好的轴向强度，會,很容易沿其轴向传导液体，并 且当矛魏虫时将液体傲俞到刻夫。
涂敷器14可以具有各种纖面微、宽度和长度。圆柱形塞便于作为涂敷器14 4顿， 这是因为直径确定了#$俞到 的检测试剂的区±或，并且由此在J际器表面上产生了色斑 区±或，如将在下文謝亍说明的。例如，但不限于此，誠的塞可以具有约3mm到约15毫 米的直径，并且更,大约4mm到约10mm直径。此外，塞的长度可以是大约4mm到大 约lOi篇。
如!Ui^及的，涂敷器14优选凹入主体12内，使得涂敷器14的第二端18不会延伸高 于主体12的表面30。其提出了当撤虫手掌和其它的皮肤区域时，需對蹄'油操作者施加
至'餘敷器14的第二端18的压力值。过多的力会除去过量的检测试剂，并且导致待润M^ 肤具有大并且不幾制的区域。相反，太小的力将导致与舰,不良，并且不足以润湿
。因此，需難制施加到涂敷器的压力值，但仍保持与^E有很好的gto。
在优选的实施方式中，该控制^ilil将涂敷器14凹入主体12的凹部22内而进行的， 如图1所示，其中，涂敷器14的第二端18刚好凹入主体12的表面30下。该涂敷器14可 以凹入，但不限于此，例如，大约0,2讓到大约2醒，并且更tti^人大约0.5腿到大约 lmm。以该方式，由手鄉它皮肤区^M加的扭可多余的力通常传递至往体12的周围表面 30，而不是传递到涂敷器14 (参见图7a)。通常，当涂敷器14与舰的被选区接触时， 一部分皮肤以及下层肉多的区敏艮容易变形，并^SiS合于与涂敷器14的第二端18接触。 手掌的小鱼际区域肉多的部分(参见图7)特别适合并且容易变形，以便很好地与涂敷器 14的第二端18 数虫。
间隙28或环形空隙也能够防止当涂敷器14与手掌接触时过量的检测i式剂不，制地 挤出到 上。施加到涂敷器14的第二端18上的任何多余压力可能导致涂敷器向夕卜形变。 这将ilil间隙28进行调节，因为涂敷器14并没有被凹部22的上部26的壁32限制在第二 端18。
没有间隙28时，施加过量的压力至赊敷器上与该涂敷器具有同样直径的凹部中，将 引起过量的检测试剂从涂敷器中不受控制地排出，导M度润M^I夫。事实上，间隙28或 环形空隙提供了一个储液槽，任何从涂敷器挤压出的过量检测试剂肯,得以保持在其中。 间隙28可以是，例如，但不限于，大约0.2,到大约2111111宽，最雌大约0.5111111到1皿 的间隙。
上面给出的涂敷器尺寸仅是说明本发明的一种示例性实施方式，应当 本发明并不 局限于这些尺寸，并且本发明可预期其它的形状、结构以及尺寸。
图3示出了一种^^置50，用以产生相应于结合到,中胆固醇的检测试齐懂的可 JW色变化。谢^^置具有壳体52和由壳体52衛共的指示器表面54。该指示器表面54 设置在壳体52上，使得其可以劍虫皮肤的被选区域。而且，如之后4細述的，该J际器表 面54包含足够量的溶液，当与结合到皮肤中胆固醇的检测试剂t数邮寸发生反应，以便在至 少一部分^t^器表面上产生可视的颜色变化。
在图3示出的实施方式中，t际器表面54践垫片56微的吸收性材料，雌用溶 液饱和，诸如，例如与检测试剂附际成分发生反应的底物溶液。特别是，ffiil^物溶液
或与检测试剂的^^成分反应的产生信号的化，实mx寸特异性结合的检测试剂的检测。
最方便实现检测的是检测试剂附际成分是酶并鹏物溶液就酶显色的底物。辣根过氧
化酶题常用于这離系中的酶，其利用了过氧化物底物，例如过氧化氢，与产顿色的 氧舰原歸成分结合。
在许多临床化验和免疫测定中，酶组分与流动相中的底物反应，以产生有颜色的溶液，
其弓雖可以3I31光谱法进行观啶。任^i也，在謝标成分被固定在固相上的化验中，如免
疫印迹化验，可沉淀的形 色的底物溶液,到固定化酶上。 结合酶的地方产生沉 积的有色产物。
在本发明的方法中，固定化 ^测试剂的特异粗旦固醇结合组分结合到 上，
并且不顺从于常规的检测方法， <顿了如J^M的用于流做目和免疫印迹化验的底物溶液。
在本发明的一W噺方面，我们发测每含有足誠物溶液(并且{腿用该溶舰行饱 和)的吸收材料垫片56与具有结合t际成分的舰区域撤邮寸，导致生繊色。繊色的 生成在本质上是流体相，但引起在底物垫片上生/^色，以类似于在免疫印迹方法中产生 颜色的方法。由酶反应产生的可溶或不可溶的有色 际成分收集在垫片56的间隙空间(未 示出)并且只能侵慢扩散，由此形成显色区域。
产顿色的区i斜目应于固定在所应用的imi:的斷专繊的区域。例如，当检测试剂 被施加到劍夫vi:时，禾拥了涂敷器14，如上参照图1和2所描述的，然后，根据下^X寸方 法的更详细说明将变得清楚，从垫片56上获得相应的圆形色斑58 。
除了产生在区域上相应于特异性结合的检测齐啲色斑58之外，色斑58的强度与所使 用的检测试剂的浓度相关。斑点的颜色3驢能够很容易并且方便地被测量，例如，但不限 于，4顿劍寸式分光光度计，并且记录颜色的量，如色度、反射率或光密度。
几种类型的材料可用于垫片56，适于吸收底物溶液。应当意识到，用于构成垫片的材 料和间隙开放程颇如何吸鹏物錄M"影响，并且这反舰确定如何产生明确的色斑58。
薄的、编织躯制的纤鄉莫材料是M3g合的，并且亲水材料对采用ZKS底物溶液的垫 片56特别有用。基于纤维素的吸附性薄片很容易获得，并且当用作垫片56时，能够产生 很好的色浪王58。用作滤膜的,纤乡封才料薄膜是最有用的。玻璃纤维是高亲7夂性的，Ei莫 级材料制成的致密弯曲的毛细管产生很好确定的斑点58，其显示很少的颜色扩散。另外， 玻璃纤维很白，并m于显动斑58掛共了很好的背景，特别^X寸于那些具有低色度的斑 点。
也希望4顿统的底物溶液浸透垫片56，以产生很好的色斑58。例如，当检测试剂 是A-C-B型时，以辣根过氧化物酶作为酶组分，然后，高灵敏度的、可从市场获得的底物
试剂可以用来作为 际成分。这對际成力^般包含过氧化氢和基于联苯胺的氧^as原指
示剂染料，例如3,3',5,5'-四甲基联苯胺，并且与过氧化氢酶产生显蓝色的反应产物。这魏
于液体的试剂对于浸泡^^S的垫片56特别有用，以便随后产生^^王。
众所周知，包括f际剂染料、具有或不具有过氧化物的干《喿试剂条和塾片l細于检测 过氧化物K^准过氧化物酶的活性。 一种类型的B式剂垫片1OT了过氧化物酶t际成分， 但是不含过氧化物组分，并且用于粪便中血红蛋白(准过氧化物酶)的检测。血红蛋白作 为潜隐血的断己物，并且试剂垫片用于结肠癌的检测。在该体系中，氧4极原f际成分通
常是吸附在多孔St才上的愈创;W脂(guaiac)。将粪便物质施加至哆孔垫片的Hi'J，然后 送去测试。在测i彭贴l;，将过氧化氢溶M加到垫片的第二侧，其i!3M物进行扩散，并 且与ftj可存在的血红蛋白进行反应。随后与愈疫糊脂反应产^M色的反应产物，表明了
血红蛋白的存在。本领域中的普通技术人员应当意识到，除了愈疫tM5朋旨外，用于过氧化 物酶的氧舰原 际成分显然也f,用于该垫片，并且在此^Bi3iT展被包含。
第二种类型的^fi式剂垫片用于检测过氧化物酶的活性，例如尿量液条(dipsticks)， 用于检测血红蛋白。通常，该体系使用有lHil氧化氢(例如，过氧化氢异丙苯、过氧化氢 丁酯自似化合物)以及氧^iaS原f际剂染料(邻一联甲苯銜tolidene),3,3、， 5,5、-四甲基苯 胺麟似的氧^极尉旨示剂)。将这些试剂的溶液与稳定齐U、缓冲液以及其它成分吸附到 多孑L基材上，然后进行千燥，以形戯急定的指示剂垫片。例如参见美国专利No.4,071，318 和No. 5,318, 89 4，其全部在此作为参考引入，其中给出了制备该千燥试剂材料的方法。
在本发明魏一步的方面，上述类型的两种干燥试剂垫片均可以用作t际系统，用于 给出结合到劍刦旦固醇的检测试齐啲过氧化活性信号。在第一个实例中，包含愈创糊脂 或其它过氧化指示齐啲千燥垫片用稀释的过氧化氢溶液进行润湿，并且在本发明的方法中， 将带有结合检测试剂的手掌与润湿的垫片J錢虫。过氧化物酶特异性地结合到皮肤中的胆固 醇上，使得在相应于结合检测器的区域的f际剂垫片上产M色的变化。
在第二个例子中，用7jc润湿包含过氧化穀啦示齐啲千燥垫片。然后，将带有结合检 测试齐啲手掌与润湿的垫片t数虫。检测试剂特异性地与 中的胆固醇结合，导致在相应
于结^i氧化物酶的区域的垫片上产M色的变化。
在所有情况下，依据本发明使用浸润底物的吸附性垫片56，避免了直接将液体底物溶 M加到iJRh，并且这将会招謝艮有限的容量问题。
希望图1和图2中所示的用于施加检测试齐啲装置10和图3中示出的 际装置50能 够很容易地结合在一个设备100中，最好如图4、 5和6中示出的。通il将单个设备100中 的装置10的涂敷器14与tg^置50相结合，本发明容许实现一种相对简单的方法，用于 胆固醇含量的自搬测，特别是，例如，但不限于，在家庭环境中。
涉及的设备100将使用来自图1和图2用于装置10以及来自图3用于f^^置50的同样的参考丰射己，但是在前面加上"l"。例如，在图4中，其中图1中示出的涂敷器14
以114来fei己，而在图6中，其中图3中示出附际器表面54以154来l斜己。对于新引入 的部件，在其前面加"2"，例如，设备100包括壳体202，在一端具有手柄204、并且在 其另一端为撤虫 部分(或端)206，具有涂敷器114和指示器表面154。应当理解，设 备100新将用于施加检测试剂的装置10和t繊置50组合起来的一个说明性的实施方 式。如所示，设备100絲端206的一侧上具有涂敷器114，并且在其相反的Hi具有指 示器表面154。希望对于本领域中的普通技术人员而言显而易见的是其它结构也被本发明 所,。例如，当需要时，该设备100也會的多为其它的吸附性介 {共空间(未示出)， 以吸干过量的检测试剂。吸附性介质可与涂敷器和f际器表面隔开。
相应于图1和图2对用于施加前面提供的检测试剂的装置10的描皿用于描述设备 100，就设备100用于施加检测i式剂而言。特别是，设备100具有至少一个涂敷器114(对于 示例性的实施方式示出了两个)，位于凹部122中(参见图5)。此外，该涂敷器114是凹 入的，使得第二端118不會^ft行招可延伸而高于设备100的壳体202的表面130。
设备100的表面130具有许多定位丰斜己物208a，围^^端206的一部分而间隔设置。 这些^H己物的目的是当施加检测试剂时，留下设备訓与舰f数虫的区域的印记，如将在 下文进行解释的。
在本发明的,实施方式中，设备100具有两个彼此间隔的涂敷器H4，如图5中所 示。其中一个涂敷器将对照用的检测试剂施加到舰区，而第二涂敷器施加测i湖的检测 试剂。虽然如图4和5中戶g的设备100的实施方式显示了涂敷器114具有同样的Mi^面， 但是应当翻早，每一个凃敷驗其第二端倉,具有不同的f纖面，用于，数虫舰。这将容 许决速！Bi也检査哪一个^(寸照用的检测试剂以及哪一个是测试用的检测试剂。
同样，上面衛共的并相应于图3对t际装置50的说明，翻于对设备100的说明， 就设备100用作it^置而言。特别是，设备100具有至少一个指示器表面154 (对于图6 中的说明性实施方式，示出了两个)。只要指示器表面154与切块的被选区接触，指示器 表面154肯,产生可见的颜色变化，对应于结合到舰中胆固醇的检测试剂量。如前戶脱， 关于图3中的J^^置50， fg^g 154是垫片156形式的吸收性材料，并且雌用溶液 饱和，例如， 一种与由设备100的涂敷器114施加的检测试剂附标成分反应的底物溶液。
同样，对于设备100的表面130，末端206的表面210具有许多间隔设置在周围的定 位^H己物208b。这些标记物的目的是当施加检测试剂时，与由fei己物208a留在舰区域 的相应印记匹配，从而该垫片156肯,覆盖 的同样区域，如将在下，行解释的。
在本发明设备100的,实施方式中，具有两个彼此间隔的垫片156，如图6所示。
每一垫片156相当于一个涂敷器114。然而，应当意识到， 一，片的尺寸可包含类似于 为设备腦示出的两个垫片156的面积。垫片的其它靴和结构也會^由本领域中的技术 人员预期。
应当意i顿伪了观赋的目的，舰区域既會,与对照用的检测试剂撤虫，也能和测试 用的检测试剂接触，每一检测试剂由分开的涂敷器114施加。实际上，相同的检测试剂利 用两个涂敷器来i顿；然而，高浓度的检测试齐,于对照中。高浓度的对照用检测试剂是 这样选择的，即在J际器表面154上随后显影后，所有测i錄，不管他们 中的胆固醇 含量如何，糊每产生清晰可见的显色斑。给出容易与对照用检测器区分的色斑确保了测试 者的舰区±或，例如手掌，与检测试剂械足和很好的撤虫。
传递检测用的检测试剂的涂敷器包含较低浓度的作为对照用的检测试剂的同一检测 试剂。测i式用的检测试剂浓度是这样选择的，即在f际器表面上显影后，产生了显色斑， 其强度反映了皮肤中胆固醇的含量。
在本发明的另一方面，检测试剂的浓度是这样选择的，使得具有设定阈值含量的 胆固醇的测试者将不会在^^器表面上产生色斑。,旦固醇含量高于该阈值含量的测试 割各产生斑点，其强度反映了他们的皮l刦旦固醇含量。在该方式中衝共了一种简单的测试， 用以确定皮月刦旦固醇含量高，择值(即，产生可见的色斑)的测试者，并因此被认为高 于预选的阈值，使得他们处于增大了的患动脉粥样硬化和其它相关心血管疾病的危险中。
在本发明的另一方面,检测试齐啲浓度育,这擀皮选择，使得所有测i錄都给出fe^王， 并且其强度与他们的皮脚旦固醇含量成正比。具有高含MI知旦固醇的测i^"在给定的接 触时间中将比具剤氐含量劍知旦固醇的测试者结合到更多的检测试剂，并且产生的颜色与
结合的检测器量成正比。在该类型的化验中，色斑的^S肖,与比色器卡片上的;^f规定
的颜色之一相符合，如将在下鄉行描述的。产生的斑点颜色會,半定影也确定测i储的 自旦固醇，然后分配到几个风隨且之一，例如低风险、正常和高风险组。
可以舰4顿仪器来测量飽量而更精确地测定随这些化验一起出现的色斑弓驢。例 如，倉,i顿简单的反射式^t光度计，并且颜色的属性，例如腿、础率和光密度能 够用于确定颜色量，如在国际专利申请公开号为No.WO01/011359A3中描述的，其全部在 itkMil参考被包含。
现在将参照图7、 7a、 8、 9、 10、 11和12对本发明的方法进衍羊细描述，并且为进 行说明而使用了本发明的设备100。然而，应当理解，同样的方法會獬被实现，例如，使 用单4虫的装置10和指^置50，并m用以下的步骤。
首先，使用设备100将检测试剂施加到,的被选区，例如，手掌300。对于这个例
子，涂敷器114是两个圆形的吸收性聚烯烃滤膜114a和114b，直径为5mm，并且长度为 5訓，它们可以从菲尔特罗纳(Fil加naInc.)公司获得(Richmond, VA)。将该滤離入注 射淑莫的聚丙烯卡盘装置中，容许滤膜MW擦配合固定在卡盘装置中，并且第二端U8 位于该装置表面130下大约0.5mm。另外，每一滤膜的第二端118由约0.75mm宽的环隙 环绕。每一滤OT将洋地黄皂苷(A)和辣^31氧化物酶(B)结合到马来酸酐一N—乙烯 基吡咯烷酮共聚物(C)形成的A-B-C共轭物的检测试剂饱和。 一个滤膜114a指定为阳性 对照，用高浓度的检测试剂饱和，而第二滤膜114b，指定为测iOT滤膜，用低浓度的检测 试剂饱和。通常，阳性对照将含有大约50—100ug/mL的检测试剂，而测i湖的检测试剂 为大约1 —10ug/mL。
选择手掌300的小鱼际区域、洗净、千燥，然后放在设备100的末端206上，使得与 涂敷器114a和114b上的检汲赋剂进行撤虫。这使得检测试剂结合到舰中的胆固醇上， 如图8中的304a和304b戶标，其中，304a表示来自涂敷器114a的对照用检测试剂，而 304b表示来自涂敷器114b的测WS检测试剂。供选地，该装置旨,l戯文置成与手掌300 进行接触。在与涂敷器114a和114b撤虫大约l^H中后，将手掌300和设备100分开，如 图8戶标。同样，如图8戶标，标记物208a在手掌300上留下了印记306，描绘出了已经 施加过检测试剂的舰区域。如果需要的话，fei己物208a可以为印在j^ii的誠的单词 fei己，诸如"对照"或"检测"，将它们分别印在304a和304b旁边，在这里，对照用的 检测试剂和测试用的检测试剂与皮肤中的胆固醇相结合。
如果有任何未结合的检测试剂，那么M3ii即^ffl吸附性介质或如图9戶^的吸收垫 片302除去该i式剂。3i3i将手掌放到纤维素材料的新区域而完成两^4一步的吸收步骤。 所有的吸收步骤^M31施加确定的压力到具有吸收垫片302的手掌300的小鱼际区i^JdS 行的。已经发现尽管对^M加单次吸收几乎除去了所有的非特异性结合的樹则剂， 加三次是最方便的，以去除过量物。多于三次的施加通常是不必要的，并且不会再除去更 多的非特异性结合的检测剂。
如果存在的话，除去过量的未结合检测器是必要的，这是因为只有特异性结合的检测 器才能产生有意义的信号。清洗是可选择的并且等价的除去非特异性结合的检测试剂的手 段，但劍于其后依次有多个步骤并且由装置，诸如该例中的设备100执行的简单快ili也 检测，将更不方便^^。
ffi可类型的吸附性介质302都适合于作为吸收材料。高吸收性的编织而成的亲水性材 料诸如棉花或基于纤维素的组织就特别适合。 一次性的厨房毛巾和其它类似的普通薄板材 为优选的，并且最 不会在手掌上留下棉球残留物的材料。
如前戶腿关于设备100的讨论，吸附性介质302可以是驢的1分，邻近保持涂敷
器114的表面130。在该方式中，在施加检测试剂后，简单的方法是4好掌移到吸附性介 质302，用以除去非特异性结合的检测器。在另一个形式的方法中，并且如图9戶标，吸 附性介质与用来施加检测试齐啲驢分开，并随后a好掌移动到分离的吸附性介质302进 行吸收。
然后，将具有特异性结合的检测试剂的小鱼际手掌区域300放在新准备的垫片156上， 诸如垫片156a和156b，如图10戶g，用底物溶、 行饱和。通常^^ 乡衫隹材料934AH (whatoan公司)和K—Blue Max底物溶液(Neogen公司)。供选他，该设备100會,与手 掌300撤虫。在每一位置，垫片156a和156b必须分别对准检测试剂结合到皮肤中胆固醇 的位置，如图8中的304a和304b所示。因此，在设备100的末端206的一侧210上的标 记物208b用于将末端206 X寸 iMilfei己物208a而留在手掌300上的印记306。
在与垫片156a和156b上的底物溶液接触大约1併中后，^!好掌移开，如图11所示。
^每手掌300从垫片156a和156b移开时，^^一个或两个圆，分别是蓝色斑点158a 和158b，在垫片上具有大约5匪的直径。这些斑点，158a和158b对应于来自涂敷器114a 和114b的检测试齐蹈合至l序掌的位置，分别如304a和304b戶标。
所有的测试者将^t应于阳ftX寸照涂敷器的位置具有蓝色的斑点。在测试涂敷器中， 如果4顿低阈值浓度的检测器，那么第二斑点也许看得见或者也许看不见，取决于测试者 劍知旦固醇的含量。测试者具有低或正常含量的iJl划旦固醇时，将不会会合出第二测试斑点， 而具有高含量劍刦旦固醇的测试者将显影第二斑点。
在第二测试凃敷器中，如果4顿了非阈值含量的检测器，那么所有的测i式者将产生两 个蓝色斑点。除了很强的蓝色阳ttxt照斑点外，将能够看到具有不同弓破的第二蓝色斑点。 第二斑点的弓驢将取决于正在测试的测i储皮肤的胆固醇含量，并且使用比色器卡308测 量强度，如图12中所示。
采用比色器卡308测量测i^m点的色度，卡具有不同强度的蓝色染料带310。在一个 实施方式中，每一个带在其中心具有直径约4mm的孔312。在该实施方式中，比色器卡308 倉濒被定向在垫片156b的测i^g点158b上，使得测试斑点出现在每1带310的中心孔 312中。每~^带310中的孔312依次放置在测试斑点;^±，直到实现测i力斑点和所围绕 的色带310具有相匹配的强度。
每一色带310可以给出一个分值，该分值反映了基于相应的皮，刦旦固醇含量的风险系 数。具有高劇划旦固醇含量的测试者将显影蓝色更深的斑点，获得较高的分值，并具有增 加的患有或产生动脉粥样硬化的风险以及患有可归因于高胆固醇含量的對以的或其它疾病
的风险。
尽管在正常人群和风险人群中的 !旦固醇含量的范围决定了比色器卡308上的带 310的强度，但带310的颜色由使用的底物溶液确定。对于3，3',5,5、-四甲基苯胺底物，显影 的斑点为浅绿蓝。利用鹏物，基于产生的色彩和色度范围，制髓合的且正确的比色卡。 对于其它的底物，产生了不同的颜色，并且需要相应的比色器卡。
在垫片156a和156b中包含背景基色染料倉嫩容许显色范围与强度发生改变。对于干 燥的试剂板，可以将黄色^fe染料与生成蓝色的J际剂混合。处于低含量的底物转换时， 色斑保持黄色^fe，在中间含量时，色斑为浅乡tfe，而在高含量时色斑为蓝绿色。这将 容许实现不同的比色，代替了3虽度的比较，并且可以^f共可选择的和有利的读取色斑。
应当意识到，虽然使用设备100对本发明的方法进行了描述，但是可以使用许多替换 的装置，诸如用于施加检测试剂的與虫装置和^^虫附旨^g。因此，本发明很容易适用 刊式剂盒，其适于自我检测舰的胆固醇，特别是，例如，但不限于，在家庭环境中。
试剂盒将包括检测试剂来源；施加检测试齐倒劍夫被选区的涂敷器；餘棘源，当与 检测试剂擬虫时发生反应；和指示器表面，用以接收溶液，使得当指示器表面与iS^被选 区 数虫时，该溶液与检测试剂反应，该检测试剂结合到舰中的胆固醇上，使得在至少一 部分 际器表面上产生可见的颜色变化。
应当意识到，试剂盒中的涂敷器可以与装置10中或设备100中的相同，如在前所描 述的。特别是，在雌的实施方式中，该涂敷器是检测试剂的来源(即，其预先已经1顿 检测试剂进行饱和)。然而，可以由本发明预期的是，试剂盒可以单独包括检测试剂，并 由此用户将必须润湿该涂敷器。
相對以的，试剂盒中的 际器表面可以与在前描述的装置50和100中见到的相同。 因此，^^器表面可以是溶 源(即，先前用底物溶液浸泡)。然而，再次可以由本发 明预期的是，该试剂盒可以単独包括底物溶液，并由此4OT者将必须浸润 际器表面(垫 片)。
进一步地，本发明的试剂盒在需要时也可以包括吸附性介质，用于进行吸收的步骤。 如前所描述的，例如设备IOO，该涂敷器和指示器表面可以位于相同装置上(例如， 位于其相对侧上)，并_§^样组合而包括在试剂盒中。
而且，试剂盒可以在同1置上樹先凃敷器、J标器表面和吸附性介质。 最后，试剂盒可以樹共相同的装置，当执行该方法时，用以分析产生的颜色。例如， 该试剂盒可以包括比色计，用以分析产生的颜色。该比色计可以是分级的一系列色带，如 前戶腿的。可选择的，该试剂盒可以包括础式絲光度计，用以分析产生的颜色。
以下说明仅为示例性的，并且不限于此。对于本领域中的普通技术人员而言，依据本 文的描述，本发明的其它实M^式将会^M而易见的。
然而，本发明所公开的实M式被认为是雌的，可以进行各种改变和^^，将不会 脱离本发明的范围。本文公开的内容被认为是示例性的，而非穷举。对于本领域中的普通 技术人员而言，该描述将暗示出很多变化和替换物。所有这些替换物和变似斜皮认为包含 在权利要求的范围中。熟悉该领域的人可以认识到，其它与描述的特定实施方式等同的替 代物也意**被权利要求所包含。
权利要求
1.一种测定皮肤胆固醇的方法，该方法包括a)将检测试剂施加到皮肤的被选区，以便与皮肤内存在的胆固醇结合；b)将指示器表面施加到皮肤的被选区，该指示器表面具有一种溶液，当该指示器表面与皮肤的被选区接触时，该溶液与检测试剂发生反应，该反应产生一个与结合到皮肤内胆固醇的检测试剂量相当的可见颜色变化；并且c)分析在指示器表面上产生的颜色，以获取对皮肤胆固醇的测定。
2. 根据权利要求l的方法，其中，采用毛细作用将该检测试剂加到施加到皮肤的被选区。
3. 根据权利要求2的方法，其中，舰至少一个芯吸元件将检测试剂施加到皮肤的 被选区。
4. 根据权利要求3的方法，其中，该芯吸元件用检测试剂饱和。
5. 根据权利要求3或4的方法，其中，该芯吸元件变形一个受控量，以释放检测试剂。
6. 根据权利要求3至5的任何一个的方法，其中，该芯吸元件由合适的涂敷器固定。
7. 根据权利要求1至6的招可一个的方法，其中，选择该检测试剂的浓度，使得当 助块中存在的胆固醇超过皮肤的选择的阈值时，在步骤b)中就发生可见的颜色变化。
8. 根据权利要求1至6的樹可一个的方法，其中，施加检测试齐抱括将对照用的检测 试剂和测i細的检测试剂施力倒劍夫被选区内的两个分开的区域中。
9. 根据权利要求8的方法，其中，对照用的检测试剂的浓度高于测量的检测试剂 的浓度。
10. 根据权利要求5或9的方法，其中，至少选择测i細的检测试剂浓度，使得当皮 肤中存在的胆固醇超过预先选择的阈值时，在步骤b)中就发生可见的颜色变化。
11. 根据权利要求1至10的任何一个的方法，进一步包括在步骤a)之后并在步骤 b)之前，去除未与皮肤内胆固醇结合的招可多余的检测试剂。
12. 根据权利要求ll的方法，其中，舰誠的吸附性介质去除该多余的检测试剂。
13. 根据权利要求1至12的任何一个的方法，其中，指示器表面包括一种与检测试 剂内的指示成分发生作用的底物溶液。
14. 根据权利要求1至12的任何一个的方法，其中，该指示器表面是一个用底物溶 液饱和的吸附性材料垫片，减物溶液与检测试剂内的t际成分发生作用。
15. 根据权利要求1至14的任何一个的方法，其中，通过反射式分光光度计分析产生的颜色。
16. 权利要求1至14的樹可一个的方法，其中，采用比色计分析产生的颜色。
17. 根据权利要求16的方法，其中，比色计是分级的一系列色带。
18. —种将检测试剂施力倒舰l雌区的驢，该装置包括a) —个主体；和b) 至少一个凃敷器，在其一末端由主体固定，并具有一个第二末端，以J数虫皿的 被选区，涂敷器的第二末端将检测试剂传避lji^的被选区。
19. 根据权利要求18中的装置，其中，该涂敷器禾,毛细作用将检测试剂施力倒皮肤的被选区。
20. 根据权利要求18或19中的装置，其中，该涂敷器包括一个芯吸元件。
21. 根据权利要求20中的驢，其中，主体包括至少一个凹槽，用于在其中容纳芯 吸元件的一 个末端。
22. 根据权利要求21中的装置，其中，该凹槽具有的深度足以在其中容纳芯吸元件， 使得芯吸元件的第二末端不延伸超出该凹槽的深度。
23. 根据权利要求21或22中的装置，其中，1分凹槽的周长大于芯吸元件的周长。
24. 根据权利要求23中的装置，其中，具有^周长的凹槽部分环绕芯吸元件的第 二末端。
25. 根据权利要求24中的装置，其中，具有较大周长的凹槽部分环绕芯吸元件的第 二末端，使得在其周围J^共一个间隙。
26. 根据权利要求20至25中招可一个的装置，其中，芯吸元件为一种纤纟瞎。
27. 根据权利要求20至25中ffi可一个的装置，其中，芯吸元件由惰性聚烯烃材料制成。
28. 根据权利要求18至25中招可一个的装置，其中，涂敷器是一种胶。
29. 根据权利要求18至28中ftj可一个的装置，其中，涂敷器为圆柱形的。
30. 根据权利要求18至29中ffi可一个的装置，其中，Jli乓两个涂敷器，涂敷器相互 隔开，使得一个涂敷器添加X寸照用的检测试剂而第二涂敷ll^加测i糊的检测试剂。
31. 根据权利要求30的装置，其中，齡涂敷 ^戶腿第二末端±^现不同的横截面°
32. 根据权利要求18至31中ffi可一个的装置，其中，涂敷器用检观赋剂饱和。
33. —种指^置，以产生一个与 内胆固醇结合的检测试剂量相当的视觉变化， 该^^置包括一个由装置的主体提供的t际器表面，使得该 际器表面可以与切扶的被 选区接触，该f际器表面包含足量的溶液，当该溶液接触与 的被选区内的胆固醇结合 的检测试剂时起反应，以便4M少1分J际器表面上产生可见的颜色变化。
34. 根据权利要求33附繊置，其中，该溶液是与检测试剂附旨示成分起反应的 底物溶液。
35. 根据权利要求33或34的^^置，其中，该指示器表面包括一种吸附性材料。
36. 根据权利要求35的fg^置，其中，该吸附性材料用该溶液饱和。
37. 根据权利要求35至36中倒可一个的指碟置，其中，该吸附性材料为一垫片。
38. 根据权利要求37附^^置，其中，该垫片是编织而成的。
39. 根据权利要求37附^S置，其中，该垫片具有压制的纤维薄片结构。
40. 根据权利要求37附g^置，其中，该垫片由亲水材料制造。
41. 根据权利要求37的，g^置，其中，该垫片是基于纤维素的吸附性材料薄片。
42. 根据权利要求37的Jg置，其中，该垫片由玻璃纤维材料制造。
43. —种用于测定皮J刦旦固醇的装置，该装置包括a) —个主体；b) 至少一个涂敷器，在其一末端由主体固定，并具有一个第二末端，以l劍虫j^的 被选区，涂敷器的第二末端将检测试剂传递到皮肤的被选区；和c) 一个由主#^{共的 际器表面，使得该指示器表面可以与皮肤的l^区接触，该指示器表面包含足量的溶液，当该溶液!数虫与舰的被选区内的胆固醇结合的检测试齐附 起反应，以便在至少一部分 际器表面上产生可见的颜色变化。
44. 根据权利要求43中的驢，其中，该涂敷器利用魏作用将检测试齐鹏加到皮 肤的M^区。
45. 根据权利要求43或44中的装置，其中，该涂敷器包括一个芯吸元件。
46. 根据权利要求45中的装置，其中，主体包括一个外表面和至少一个用于在其中 容纳芯吸元件的一个末端的凹槽。
47. 根据权利要求46中的装置，其中，该凹槽具有的深舰以在其中容纳该芯吸元 件，使得芯吸元件的第二糊不延伸超出主体的夕卜表面。
48. 根据权利要求46或47中的装置，其中， 一部分凹槽的周长大于芯吸元件的周长。
49. 根据权禾腰求48中的體，其中，具有駄周长的凹槽部分环绕芯吸元件的第 二彩瑞。
50. 根据权利要求49中的装置，其中，具有^狄周长的凹槽部分环绕芯吸元件的第 二末端，使^^其周围樹共一个间隙。
51. 根据权利要求45至50中倒可一个的装置，其中，芯吸元件为一种纤纟嫁。
52. 根据权利要求45至50中粗可一个的装置，其中，芯吸元件由惰性聚烯烃材料制成。
53. 根据权利要求43至50中扭可一个的装置，其中，涂敷器是一种胶。
54. 根据权利要求45至50中樹可一个的装置，其中，涂敷器为圆鄉的。
55. 根据权利要求43至54中樹可一个的装置，其中，掛共两个涂敷器，涂敷器相互 隔开，使得一个凃敷器添加对照用的检测试剂而第二涂敷娜加测i細的检测试剂。
56. 根据权利要求55的装置，其中，^涂敷W^戶，第二末端Jl^现不同的横截面。
57. 根据权利要求43至56中fff可一个的装置，其中，涂敷器用检测试剂饱和。
58. 根据权利要求43至57中ffj可一个的装置，其中，该溶液是与检测试剂的J^成 分起反应的底物溶液。
59. 根据权利要求43或58的装置，其中，该t际器表面包括一种吸附性材料。
60. 根据权利要求59的装置，其中，该吸附性材料用该溶液饱和。
61. 根据权利要求59或60的装置，其中，该吸附性材料为一垫片。
62. 根据权利要求61的装置，其中，该垫片是编织而成的。
63. 根据权利要求61的驢，其中，该垫片具有压制的纤维薄片结构。
64. 根据权利要求61的装置，其中，该垫片由亲水材料制造。
65. 根据权利要求61的體，其中，该垫片是基于纤维素的吸附性材料薄片。
66. 根据权利要求61的装置，其中，该垫片由玻璃纤维材料制造。
67. 根据权利要求43至66中ftj可一个的装置，其中，主体Jlf共至少一个涂敷器，并且 标器表面位于其相对侧上。
68. 根据权利要求43至67中倒可一个的装置，进一步包括一种吸附性介质，该吸附 性介质位于主体上，并与该至少一个涂敷器和t^器表面隔开。
69. 根据权利要求68的装置，其中，该吸附性介质由亲水材料构成。
70. 根据权利要求67、 68或69中ffi可一个的装置，其进一步包括至少一个位于主体 表面上的1SH己物，该主{ 1共了至少一个涂敷器，该至少一个*斜己物,，成为在邻近检测 试剂已经传递至啲舰区域的皮肤被选区内形舰痕。
71. 根据权利要求70的，，进一步包括至少一^M立于矛际器^M上的第二禾射己物， 该至少一个第二1^i己物在^tJt对应于该至少一个^H己物。
72. —种用于测定劍刦旦固醇的试剂盒，该试剂盒包括 a) —个检测试剂来源；b) —个将检测试剂添加到iSK鹏区的涂敷器；c) 一个当与检测试剂撤虫时起反应的溶^^源；和d) —个接收溶液附际器表面，使得当该f际器表面与舰的!雌区Sto时，该溶 液与结合到皮肤内的胆固醇的检测试剂起反应，以便在至少一部分指示器表面上产生可见 的颜色变化。
73. 根据权利要求72的试剂盒，其中，涂敷器利用毛细作用将检测试剂施加到 的丰必选区。
74. 根据权禾腰求72或73的试剂盒，其中，该涂敷器包括一个芯吸元件。
75. 根据权利要求74的试剂盒，其中，芯吸元件为一种纤台瞎。
76. 根据权利要求74的试剂盒，其中，芯吸元件由惰性聚烯烃材料制成。
77. 根据权利要求72、 73或74的试剂盒，其中，涂敷器是一种胶。
78. 根据权利要求72至77中倒可一个的试剂盒，其中，衝共两个涂敷器，涂敷器相 互隔开，使得一个涂敷鄉加对照用的检测试剂而第二涂敷器添加测i湖的检测试剂。
79. 根据权利要求78的试剂盒，其中，針涂敷翻赃戶腿第二末端呈现不同的横截面。
80.根据权利要求72至79中fij可一个的试剂盒，其中，涂敷器是检测试剂来源。
81. 根据权禾腰求80的试剂盒，其中，涂敷器用检测试剂饱和。
82. 根据权利要求72至81中招可一个的试剂盒，其中，戶;M溶液是与检测试剂的指 示成分起反应的底物溶液。
83. 根据权利要求72至82中招可一个的试剂盒，其中，t际器表面包含一种吸附性材料。
84. 根据权利要求83的试剂盒，其中，该吸附性材料为激棘源。
85. 根据权利要求84的试剂盒，其中，该吸附性材料用该溶液饱和。
86. 根据权利要求83、 84或85的试剂盒，其中，该吸附性材料为一垫片。
87. 根据权利要求86的试剂盒，其中，i翅片是编织而成的。
88. 根据权利要求86的试剂盒，其中，i翅片具有压制的纤维薄片结构。
89. 根据权利要求86的试剂盒，其中，趟片由亲水材料制造。
90. 根据权利要求86的试剂盒，其中，爐片是基于纤维素的吸附剂薄片。
91. 根据权利要求86的试剂盒，其中，该垫片由鹏纟B隹材料制造。
92. 根据权利要求72至91中招可一个的试剂盒，进一步包括一种吸附性介质。
93. 根据权利要求92的试剂盒，其中，该吸附性介质由亲7K^料制造。
94. 根据权利要求72至93中樹可一个的试剂盒，其中，涂敷器和^^器表面位于装 置的相对侧上。
95. 根据权利要求92或93的试剂盒，其中，涂敷器、J际器表面和吸附性介质都位 瑰置上。
96. 根据权利要求72至95中倒可一个的试剂盒，进一步包括一个鄉式錢光度计， 以分析产生的颜色。
97. 根据权利要求72至95中招可一个的试剂盒，进一步包括一个比色计，以分析产 生的颜色。
98. 根据权利要求97的试剂盒，其中，比色计为分级的一系列色带。
99. 一种每检测试剂添加到舰，雌区以结合到舰内存在的胆固醇上的方法，该方 跑括a) 提供至少一个包含足量检测试剂的涂敷器，该至少一个凃敷器利用毛细作用将检 测试剂传递到刻夫的被选区；和b) 用涂敷驗触舰的被选区，以鹏检测试齐鹏湿劍夫。
100. 根据权利要求99的方法，其中，Mil至少一个芯吸元件将检测试剂添加到舰 的被选区。
101. 根据权利要求100的方法，其中，该芯吸元件用检测试剂饱和。
102. 根据权利要求100或101的方法，其中，该芯吸元件以一幾量 ，以释放 检测试剂。
103. 根据权利要求99至102中招可一个的方法，其中，该芯吸元件由誠的涂敷器固定。
104. 根据权利要求99至103中倒可一个的方法，其中，添加检测试剂包括将对照用 的检测试剂和测i湖的检测试剂施力倒舰被选区内的两个分开的区域。
105. 根据权利要求104的方法，其中，对照用的检测试剂的浓度高于测i湖的检测 试剂的浓度。
106. —种产生一个与结合到皮肤内胆固醇的检测试剂量对应的可见颜色变化以测定 自旦固醇的方法，该方^括a)裕际器表面施力倒舰的被选区，该 际器表面具有一种溶液，当该指示器表 面与该劍知勺被选区接触时，该溶液与检测试剂反应，该反应产生一个与结合到iSI夫内胆 固醇的检测试剂量相当的可见颜色变化；并且b)分析在f际器表面产生的颜色，以获取自旦固醇的测定。
107. 根据权利要求106的方法，其中，该指示器表面包含与检则试剂的 际成分起 反应的底物溶液。
108. 根据权利要求106或107的方法，其中，该J标器表面是一种用底物溶液饱和 的吸附性材料垫片，该底物溶液与检测试剂内的t际成分起反应。
109. 根据权利要求106至108中ffi可一个的方法，其中，利用湖式錢光度计分 析产生的颜色。
110. 根据权利要求106至108中招可一个的方法，其中，利用比色计分析产生的颜色。
111. 根据权利要求110的方法，其中，比色计为分级的一系列色带。
全文摘要
本发明提供了用于非侵入性测定皮肤胆固醇的方法和装置设备。特别是，本发明一方面提供了用于将检测器试剂施加到皮肤的被选区的装置。本发明另一方面提供了一种指示装置，以产生与结合在皮肤内的检测器试剂量相当的视觉变化。对于特定的实施例，本发明的方法和装置通常不需要任何仪器，允许本发明适合于进行自我测试，例如，但不局限于，在家庭环境中。为此，本发明尤其用于允许个体评估他们患动脉粥样硬化和相关血管疾病的风险。
文档编号A61B5/00GK101193584SQ200680006258
公开日2008年6月4日 申请日期2006年2月28日 优先权日2005年2月28日
发明者P·豪斯伍德 申请人:普雷姆德股份有限公司