替加环素的结晶固体形式及其制备方法

专利名称：：替加环素的结晶固体形式及其制备方法替加环素的结晶固体形式及其制备方法本申请要求了于2005年5月27日提交的美国临时申请No.60/684,955的权益，将其内容引入本文作为参考。本发明涉及替加环素(tigecycline)的结晶固体形式、其组合物和制备它们的方法。替加环素是四环素家族的抗生素，并且是米诺环素的化学类似物。其已经被用作对抗耐药性细菌的治疗，并且在其它抗生素无效的情况下已经显示出有作用。例如，其具有对抗耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌(5^r/;/y;/ococc"sfl"re"s)、耐青審素肺炎链球菌(5Vfe/i紐acc"s/weii/wo/i/flre)、耐万古霉素肠球菌(ewteiwoccf)(D.J.Beidenbach等人，DiagnosticMicrobiologyandInfectiousDisease40:173-177(2001);H.W.Boucher等人，AntimicrobialAgents&Chemotherapy44:2225-2229(2000);P.A.BradfordClin.Microbiol.Newslett.26:163-168(2004);D.Milatovic等人，Antimicrob.AgentsChemother.47:400-404(2003);R.Patel等人，DiagnosticMicrobiologyandInfectiousDisease38:177-179(2000);P.J.Petersen等人，Antimicrob.AgentsChemother.46:2595-2601(2002);和P.J.Petersen等人，Antimicrob.AgentsChemother.43:738-744(1999))和携带四环素耐药性的两种主要形式一外流和核糖体保护一之一的生物体(C.Betriu等人，Antimicrob.AgentsChemother.48:323-325(2004);T.Hirata等人,Antimicrob.AgentsChemother.48:2179-2184(2004);和P.J.Petersen等人，Antimicrob.AgentsChemother.43:738-744(1999))的活性。过去替加环素被静脉内施用，因为其口服给予时一般显示出差的生物利用度。可以通过用无菌水、USP0.9。/。氯化钠注射液或USP5。/。葡萄糖注射液重构无定形粉末来制备静脉内溶液。通常替加环素在没有用于灭菌目的的赋形剂存在的情况下通过冷冻干燥变为无定形粉末。但是由于替加环素的降解特性，这些粉末需在低氧和低温条件下进行制备和加工。此类加工成本昂贵，因为其需要特殊的设备和操作。另外，一般无定形物质比同一4t合物的结晶形式稳、定性差(PolymorphisminPharmaceuticalSolids,H.G.Brittain(编辑)，1999，第208页)。因此，如果能够使用和制造无需特殊操作系统的替加环素的结晶固体形式将是有利的。结晶化合物是分子有序排列的固体，而无定形化合物由无序的分子构成。这些排列也称为晶格，由称为晶胞的重复结构片段组成。当相同的分子例如有机分子在固体中能够以一种以上的方式自我排列时，该分子表现出同质多晶现象。例如，元素碳表现出同质多晶现象(在元素中其被称为同素异形现象)。固体碳以三种已知的结晶固体形式存在石墨、金刚石和富勒烯(fullerenes)。虽然每种结晶固体形式均是碳，但是各自具有不同的性质，因为各形式的固态结构不同。例如，金刚石是已知最硬的物质之一，而石墨却非常软。许多有机化合物已知也是多晶的，因为它们的结构在它们如何群集在一起形成结晶固体方面不同(参见，例如，Stephenson,G.A;Stowell，J.G;Toma，P.H;Dorman，D.E.;Greene,J.R.;Byrne,S.R.;"Solidstateanalysisofpolymorphic,isomorphicandsolvatedformsofDirithromycin"，J.Am.Chem.Soc，1994，116,5766.)。基于化学结构(其是形成分子的原子的化学连接性)，很难在任何确定程度上预测化合物是否结晶、在什么条件下结晶、该化合物可能存在多少种结晶固体形式或者这些形式中任何一种的固态结构。本文所用的术语"固态结构"意指当分子群集在一起形成固体时所获得的结构。有时溶剂或水分子会结合入结晶固体的晶格中。这类结晶固体可以分别被称为溶剂合物或水合物。溶剂合物、7JC合物和多晶型物经常被称作结晶固体形式。在此，与在大多数固态化学领域中一样，结晶固体形式也包括弱结合的溶剂合物和水合物，其中溶剂或水分子在沟道中或未结合入晶格中。无定形形式经常被称作固体形式，但它们并不是结晶固体形式。同一化合物的不同结晶固体形式经常具有不同的固态性质，例如熔点、溶解性、操作性和稳定性。因此，一旦鉴别了同一化合物的不同结晶固体形式，就可确定任何给定的系列加工和制造条件下的最佳结晶固体形式以及各结晶固体形式的不同固态性质分析。本文所用的术语"分析"意指获得有关固体形式的固态结构的信息。例如，x-射线粉末衍射是适合用于区别无定形固体形式与结晶固体形式以及用于表征和鉴别化合物的结晶固体形式的技术。x-射线粉末衍射还适合用于对混合物中的一种或多种结晶固体形式进行定量。在x-射线粉末衍射中，x-射线直射到晶体上，所测量的被衍射x-射线的强度为x-射线源和被样品衍射的光束之间角度的2倍的函数。这些被衍射的X-射线的强度可以以峰的形式被绘制在图上，x-轴是X-射线源和被衍射的X-射线之间角度的2倍(被成为"2e"角)，y-轴是被衍射的X-射线的峰强度。该图被称为X-射线粉末衍射图谱或粉末图谱。不同的结晶固体形式显示出不同的粉末图谦，因为峰在x-轴上的位置是晶体固态结构的特性。可以将这类粉末图镨或其部分作为结晶固体形式的鉴别指紋图镨。因此，可以获得未知样品的粉末图镨并将该图镨与参比粉末图镨进行比较。阳性匹配意味着未知样品是与参比物相同的结晶固体形式。还可以通过加上和减去已知化合物的粉末图镨对含有未知样品的固体形式混合物进行分析。当选择粉末图镨中的峰来对结晶固体形式进行表征时或当使用参比粉末图镨来鉴别一种形式时，可鉴别一种形式的在其它固体形式中不存在的峰或峰的集合。本文所用的术语"表征"意指选择一组适合的能够将一种固体形式与其它固体形式区别开的数据。在X-射线粉末衍射中该组数据是一个或多个峰的位置。选择那些替加环素X-射线衍射峰来定义特定形式被称为对该形式进行表征。本文所用的术语"鉴别"意指选择固体形式的特征性数据并使用这些数据确定样品中是否存在该形式。在x-射线粉末衍射中，这些数据是如上所讨论的表征所述形式的一个或多个峰在X-轴上的位置。例如，一旦确定选取数量的X-射线衍射峰表征替加环素的特定固体形式，就可使用这些峰来确定在含有替加环素的样品中是否存在该形式。当用X-射线粉末衍射对同一化合物的结晶固体形式进行表征和/或鉴别时，经常不必使用完整的粉末图镨。经常可使用完整粉末图镨的更小子集来进行表征和/或鉴别。通过选择能区别该结晶固体形式与该化合物的其它结晶固体形式的峰的集合就能够依靠这些峰来表征该形式和鉴别该形式，例如未知混合物中的该形式。可以加入另外的数据例如由另一种分析技术获得的数据或另外的粉末图镨峰来表征和/或鉴别该形式，例如以后被鉴别的另外的多晶型物。由于4义器、样品和样品制备的差异，报告峰值时在峰值前使用修饰语"约"。鉴于峰值的固有变化，这是固态化学领域的惯常做法。粉末图镨峰的29x-轴值的通常准确度在士O.2。20级别上。因此，以"约9.2。29"出现的粉末衍射峰意指当在大多数条件下在大多数X-射线衍射仪上测量时峰可能在9.2。20与9.4。29之间。峰强度的变化是各晶体在样品容器中相对于外部X-射线源如何取向的结果(称为"择优取向")。取向作用不提供关于晶体的结构信息。X-射线粉末衍射仅仅是可用于表征/鉴别结晶固体形式的若干种分析技术之一。光镨技术例如拉曼光镨(包括显微拉曼光镨)、红外光镨和固态NMR光语可用于表征和/或鉴别结晶固体形式。这些技术也可用于对混合物中的一种或多种结晶固体形式进行定量。热技术例如熔点自身不一定能表征和/或鉴别化合物的不同结晶固体形式，因为同一化合物的不同结晶固体形式可能具有难以区别的熔点。然而，在这类情况下，可使用熔点和其它分析方法例如X-射线衍射法一^征和/或鉴别结晶固体形式。本发明涉及鉴别为I型、II型、III型、IV型和V型的替加环素的结晶固体形式。本发明还涉及组合物，包括药物组合物，其含有一种或多种替加环素的结晶固体形式。本发明进一步涉及制备替加环素的结晶固体形附图简述图1是I型替加环素的x-射线粉末衍射图傳和峰列表。图2是II型替加环素的X-射线粉末衍射图谱和峰列表。图3是III型替加环素的X-射线粉末衍射图镨和峰列表。图4是IV型替加环素的X-射线粉末衍射图镨和峰列表。图5是V型替加环素的X-射线粉末衍射图i普和峰列表。图6是I-V型替加环素的X-射线粉末衍射图镨的叠加。图7是I-V型替加环素的X-射线粉末衍射叠加的放大版本。图8是II型替加环素的热重分析("TGA")。图9是II型替加环素的TGA加热-冷却循环。发明详述在产生本发明的工作中使用了两种X-射线衍射仪。图l和图2中的数据;l^吏用RigakuMiniflexDiffractionSystem(RigakuMSCInc.,Tokyo,日本)采集的。将粉末样品置于零背景抛光的硅样品架(sampleholder)上。在30kv和15mA下对一般聚焦铜X-射线管进行操作，该仪器配备有MKot过滤器。以0.02。的步进从3.00至40.00。2e进行样品扫描。使用Jade6.0软件(MolecularDataSystemsInc"Livermore,CA)进行数据处理。图3和图4、图5中的数据是使用配备有石英样品架的ScintagAdvancedDiffractionSystemModelX2(Scintag，Inc.Cupertino,CA)采集的。在45kv和40mA下对铜X-射线发生器进行操作，以0.02°的步进从3至40。2e进行扫描。使用Jade6.0软件(MolecularDataSystems)进行数据处理。图1-5各自包括两个部分精选峰(peak-picked)的X-射线粉末衍射图和峰列表。峰列表是^f吏用标准参数和商业软件产生的。当固态化学领域的普通技术人员对粉末图镨进行分析以辨别外观上不同的图谱是否实际上代表不同的结晶固体形式时，他们经常在例如看片灯(lightbox)上或在计算机屏幕上将粉末图镨进行叠加。在图6中能够找到此类叠加的实例，图6是^L4征和鉴别的五种替加环素结晶固体形式的叠加。图7是该叠加的放大版本。虽然可使用完整的X-射线粉末衍射对替加环素的各结晶固体形式进行表征，但是可以选择各图镨中更小的峰子集来对替加环素的各结晶固体形式进行表征。然后可以使用所选择的那些峰来鉴别在未知样品中或含有替加环素的样品中是否存在特定的替加环素结晶固体形式。为了进行举例说明，表l列举了I型和II型的衍射图的前6个峰。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>根据对这些数据的比较并且仅考虑替加环素的这两种形式，明显地能够根据所列出的6个I型的峰来表征I型，因为这6个峰的集合在II型中+0.2。20的范围内不存在。但是并不必需根据所有6个峰来得出I型与II型不同的结论。实际上，图I中位于约5.2。2e的单峰可独特地表征I型，因为离约5.2°26最近的11型的峰位于约9.2°20，相距4。2e。4°29的差异显著大于通过组合任何两个峰的变异(0.2。2e)而获得的0.4。2e。换言之，只要一种样品中的峰与另一种样品中的任何峰相距0.4。20以上，那么这些峰就代表不同的结晶固体形式，因为由于样品的不同和/或仪器的不同而使结晶固体形式的任何给定峰的变化大于0.4。29的可能性极小。因此，在仅含有I型和II型的系统中，含有位于约5.2°29处的峰的替加环素粉末图镨可表征I型替加环素，该峰的存在也可用于鉴别I型。类似地，当表征II型时，恰恰可使用位于约9.2。2e的峰，因为在该峰的0.4。2e范围内没有I型的峰。并不是表1中所有的峰均能用来表征I型。例如，I型的位于约13.2°26的峰自身不能用来表征I型，因为11型具有位于约13.3°20的峰，与其仅相多巨o.r2e。按照本发明，采集了五种替加环素形式、即i型、n型、III型、IV型和V型的X-射线粉末衍射数据，大约26。2e以下的峰如表2所示。可以确定更高强度的峰更易受择优取向作用的影响。而且，表2中所列出的峰是考虑了图1-5的峰列表而选择的。因此，可以使用表2中的数据寻找表征和/或鉴别为本发明主题的替加环素的结晶固体形式的峰的子集。表2形式(峰以。M列出)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>按照本发明，由于所列出的I型的峰中没有任何峰与II型、III型、IV型和V型的所有其它峰相距0.4。20以上，因此没有单个I型的峰可将I型与II型、III型、IV型和V型区别开。例如，1型的位于约5.2°20的峰可用于区别i型与ii型，但是其不能单独用来区别i型与ni型，因为ni型也具有位于5.2。26的峰。但是，I型的位于约5.2°20和约11.1°20的峰的子集可用于区别i型与ii型和iii型，因为位于约n.i。2e的峰与m型的任何峰均相距0.4。26以上。由于同样的原因，位于约5.2°29的峰也可用于区别I型与IV型和V型。因此，位于约5.2°20和约11.1。29的X-射线衍射峰是I型的特征，可用于鉴别样品中的I型。在表征和鉴别I型时，还可依靠图1的I型的粉末图镨峰列表的一些或全部其它峰。可对II型、III型、IV型和v型进行类似分析，以构建能用于表征和鉴别本发明的替加环素的不同结晶固体形式的特征性x-射线粉末衍射峰组。按照本发明，就n型而言，位于约9.2°2e的峰可区别n型与i型和v型。但是该峰自身不能将n型与in型或iv型区别开。位于约9.7°2e的峰可将其与iv型区别开，但是与ni型的峰相距o.4。2e。n型的位于约20.4°20的峰可将其与iii型区别开。因此，ii型的位于约9.2°2e、约9.7°20和约20.4°29的峰可将II型与I型、III型、IV型和V型区别开，因此可表征样品中的II型。此外，可使用这些峰鉴别II型。在表征和鉴别II型时，还可依靠图2的II型的粉末图镨峰列表的一些或全部其它峰。按照本发明，ni型的位于约6.o。2e的峰可将in型与i型、ii型、iv型和v型区别开，进一步地可表征m型。此外，可使用该峰鉴别样品中的III型。在表征和鉴别III型时，还可依靠图3的III型的粉末图镨峰列表的一些或全部其它峰。按照本发明，IV型的位于约4.6°20的峰可将IV型与I型、II型和III型区别开，位于约9.2。29的峰与V型的峰相距0.4。28以上。因此，位于约4.6°26和约9.2°29的峰可将IV型与I型、II型、III型和V型区别开，因此可表征IV型。此外，这些峰可用于鉴别样品中的IV型。在表征和鉴别IV型时，还可依靠图4的IV型的粉末图语峰列表的一些或全部其它峰。按照本发明，就V型而言，位于约4.3°2e的峰可将V型与i型、ii型和III型区别开。此外，V型的位于11.4。29的峰可将V型与IV型区别开。因此，位于约4.3°2e和约11.4。29的峰可将V型与I型、II型、III型和iv型区別开，因此可表征v型。此外，这些峰可用于鉴别样品中的V型。在表征和鉴别V型时，还可依靠图5的V型的粉末图语峰列表的一些或全部其它峰。也可使用其它分析技术分析替加环素的结晶固体形式。光镨技术例如拉曼光谱(包括显微拉曼光镨)、红外光镨和固态NMR光镨可用于表征和/或鉴别结晶固体形式。这些技术也可以用于对混合物中的一种或多种结晶固体形式进行定量。表3列出的数据显示了通过热台显微术(hotstagemicroscopy)测得的本发明的I型、II型、III型、IV型和V型的若干样品的熔点起点。根据表3中所给出的数据，热技术例如通过热台显^l术测得的熔点起点自身并一定能表征或鉴别替加环素的不同结晶固体形式。例如，通过热台显微术测量的I型和IV型的熔点起点各自均为约170C因此不能通过这种技术将它们彼此区别开。不同的是，使用这种技术能将III型与V型区别开，因为通过热台显^:术测得的V型的熔点起点为约174t:，而III型的熔点起点为约167t:。可将通过热台显微术测得的熔点起点与其它分析方法例如X-射线粉末衍射一起使用来表征和/或鉴别替加环素的结晶固体形式。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>在热台显孩i术测量中，用CreativeDevices,lnc(NeshanicStation,NJ)，Model50-600Controller控制热台显微镜的载台温度。样品加热速率为10"C/分。所使用的显微镜为Nikon(Tokyo,日本)DIAPHOT300系统。使用Image-ProPlus软件对图像进行处理。用修饰语"约"对熔点起点值进行报告，这是固态化学领域的标准措辞，旨在说明由于存在水、溶剂或化学杂质而引起的熔点改变，以及由所使用的分析仪器和方法《1入到熔点测量中的变化。用TAInstruments(NewCastle，DE)热重分析("TGA")进行的热学测量表明II型是7jC合物。在图7中，当将II型样品以10n/分钟从约25。C至约IOO"C开始加热时，II型显示出约5.3%的重量损失。图8中的加热-冷却循环TGA实验进一步表明该重量损失的大部分可能是由水引起的。在这类循环中，首先将样品加热至约55r，然后冷却至约37t:，再加热，冷却，再加热。在第一个加热-冷却循环中观察到约4.4%的重量损失，在随后的循环中观察到的重量损失很小。在加热-冷却循环中的该重量损失行为(其中在第一个循环后基本上观察不到进一步的重量损失)与样品是水合物是一致的。因此，认为II型是水合物，7JC合水平为约4.4。/0。替加环素结晶成五种不同的结晶固体形式无法根据替加环素的化学式进行预测。也不可能预测任何结晶固体形式的结构或性质。通过确定能使这些形式结晶的适宜的系列M制备了本发明的替加环素的五种结晶固体形式。本发明还提供了制备替加环素的结晶固体形式的方法。通过在不同条件下将I型在有机溶剂中制成浆液可制备II-V型。在浆液中，用一种或多种有机溶剂处理I型，所述溶剂的量4吏得I型固体不能完全溶解，以浆液的形式混合在溶剂或溶剂混合物中达一段时间。有时，将浆液加热，在其它情况下将浆液用另一种溶剂处理。在进行分析前，将浆液过滤以分离出固体，随后真空干燥。然后可通过许多分析技术对所得固体进行分析。在确定溶剂能帮助起始形式转化为另一种形式的情况下，该溶剂在本文中被称为用于该转化的"适合溶剂"。例如，确定通过将I型在二氯曱烷中制成浆液可将I型转化为III型。因此，二氯曱烷是用于该转化的适合溶剂。也可通过用四氢呋喃(THF)结晶并与二氯甲烷一起进行搅拌将I型转化为III型。可通过将I型在甲醇中制成浆液来产生II型。因此，曱醇是用于该转化的适合溶剂。任选地，可通过将I型在甲醇/二氯甲烷中制成浆液来产生II型，其中甲醇含量大于10%。同样地，通过将I型在乙腈中制成浆液可将I型转化为IV型。因此，乙腈是用于该转化的适合溶剂。此外，将I型在乙腈/正庚烷中制成浆液可产生IV型。另外，将I型在四氢呋喃中制成浆液使I型转化为v型。因此，四氢呋喃是用于该转化的适合溶剂。将I型在丙酮/曱醇(l:lv/v)中制成浆液可产生I型，如同I型从丙酮/甲醇中结晶一样。除了制成浆液外，使用适合溶剂进行的其它处理也能提供一种形式向另一种形式的转化。例如，可通过从甲醇中结晶替加环素来制备II型替加环素。另外，可通过向替加环素水溶液中緩慢加入甲醇来制备II型替加环素，产生的1I型颗粒〉20nm。此外，通过向甲醇中加入替加环素水溶液可产生〈20nm的II型颗粒。因此，甲醇、甲醇/水或7JC/甲醇适合用于于通过结晶替加环素形成II型。由替加环素颗粒的光学图像收集颗粒长度数据。使用能够放大5x至100x的、配备有数码相机(NikonDXM1200)和校准的图像采集系统(NikonACT-1v2.12)的NikonEclipseE600显微镜进行光学显微分析。使用ImageProplus图像处理软件(MediaCybernetics,SilverSpring,MD)处理图像。该软件使用对比-区分算法(contrast-differentiationalgorithm)将替加环素颗粒与一致的背景分离开。数据分析的结果如以下表4中所示。表4样品颗粒长度均值中位数微米微米微米向替加环素水溶液中加入甲醇22.6718.1647.87向甲醇中加入替加环素水溶液7.283.9718.1通过将替加环素由二氯曱烷中结晶能获得III型。通过将替加环素由乙腈中结晶能获得IV型。通过将替加环素由四氢呋喃中结晶能获得V型。按照本发明，可以由本发明的I-V型来制备用于动物或人的替加环素制剂。替加环素的五种结晶固体形式在水中的溶解度均大于25mg/ml，因此，预期它们彼此均是生物等效的。还可以在进行或不进行冷冻干燥步骤的情况下用I-V型中的任何一种制备肠胃外使用的药物组合物。还可按照本发明制名"使用I-V型中一种或多种的结晶替加环素的药物组合物。此类药物组合物可用于递送药学有效量的一种或多种I-V型替加环素。所述组合物可包括与药学上适合的载体组合或联合的替加环素的结晶形式。以下非限制性的实施例举例说明了制备I-V型替加环素的若干种方法。实施例1一I型的制备在有效搅拌下，在室温(25-28X:)将300克粗制9-氯乙酰氨基米诺环素緩慢加入到在配有搅拌器和温度计的5升3-颈圆底烧瓶中的2000ml叔丁胺中。加入48克碟化钠，将反应混合物在35-40"C搅拌6小时。通过HPLC监控反应，当起始物料剩余<2%时，用500ml曱醇处理并于40'C在旋转蒸发器上除去溶剂。向残余物中加入1100ml曱醇和1700ml水。将溶液冷却至0-2。C，用浓HCl(250mL)调节至pH7.2。此时反应混合物的总体积为3500ml。将其用水稀释至8.5升并用浓HCl(12mL)调节至pH4.0-4.2。向溶液中加入1.6kg经过洗涤的Amber-chrom(CG161cd)(NVM27%)树脂并搅拌30分钟，调节至pH4.0-4.2。滤出树脂，对剩余水溶液进行产物测定并在4-8'C贮存。将树脂在2.0升含20%甲醇的水(体积/体积)中制成浆液。将混悬液搅拌15分钟，调节至pH4.0-4.2。再次滤出树脂，对滤液进行产物测定。再用2.0升含20%曱醇的水重复萃取树脂2次。将所有树脂萃取物和以上的剩余水溶液集中，用30。/。氬氧化铵调节pH至7-7.2。用6x3.0升二氯甲烷萃取水溶液，在萃取之间调节pH至7.0-7.2。将集中的二氯甲烷萃取物通过250克无7JC硫酸钠过滤，浓缩至500ml并冷却至0-3。C。结晶出产物。在0-3X:搅拌浆液l小时，将固体过滤并用2x50mL冷二氯甲烷洗涤，在40'C真空干燥(29英寸Hg)。获得的固体重量为110克。通过X-射线粉末衍射鉴别所获得的固体为I型替加环素(HPLC面积％97.9，0.3%差向异构体)。实施例1A—实施例1的树脂的制备通过以下操作在使用前对实施例1的树脂进行洗涤取lkgAmberchrom(来自TosoHaas的CG161CD)，将其在6-7升含12%2國丙醇的水(体积/体积)中制成浆液，搅拌12-16小时。将其过滤，在6-7升50%乙腈-水(体积/体积)中搅拌30分钟。将浆液过滤，然后重新在7升乙腈中制成浆液，搅拌30分钟，过滤。重复乙腈制浆液两次并过滤。然后将树脂在6升甲醇中制成浆液，搅拌l小时，过滤。然后将树脂在7升去离子水中制成浆液，搅拌16小时，过滤。然后将树脂再次在7升水中制成浆液，搅拌1小时，过滤。将水制浆液再重复3次。将树脂过滤，在过滤漏斗上历经10-12小时除去尽可能多的水。将其装瓶并低温(5-8。C)贮存。实施例2—I型的制备在0-5。C将10.00克9-氨基米诺环素逐份加入到60ml水中。逐份加入10.98克叔丁基甘氨酰氯盐酸盐，将温度保持在0-5t:。搅拌40-60分钟后，向反应混合物中逐滴加入30%氢氧化铵以调节pH至7.2，同时将温度保持在0-5。C。向溶液中加入83ml甲醇，随后加入60ml二氯甲烷。搅拌15分钟后，分离各相。再每次萃取前用调节pH至7.2的4x40ml二氯甲烷萃取K相。向合并的有机相中加入10ml甲醇，用硫酸钠干燥溶液，然后过滤。将溶液浓缩。在5-10。C将所得的混悬液搅拌l小时，然后过滤。使用2xlOml冷二氯甲烷洗涤固体，然后干燥，得到8.80g产物(产率76.8。/。)；用HPLC面积％表示的纯度98.4,C-4差向异构体0.1%;MS(FAB):m/z586(M+H);585(M+)。实施例3—II型的制备在22。C将0.5gI型在8ml甲醇中制成浆液。将浆液温热至约35'C以获得澄清溶液，将其冷却至22'C并保持30分钟以产生稠的红色浆液。将该浆液过滤并在25'C真空干燥过夜。通过热重分析("TGA")和粉末X-射线衍射分析所得的固体。TGA图(图8)显示在87C有5.3%的重量损失，在实验中使用10C/分钟的标准升温速率(ramprate)。在TGA炉内在氮气气氛中对新鲜样品进行加热-冷却循环(图9)。在第一个加热循环中，观察到4.4%的重量损失，在第二个和第三个循环中没有观察到重量损失，表明重量损失可能是水。在第三个循环后，所得的粉末外观为红色。实施例4一II型的制备在40t:将30mg粗制替加环素溶于50(Hd去离子水中，将该溶液在23'C进行搅拌。历经15分钟向该溶液中以lOOjil的增量加入500fd甲醇。加入完成后，将混浊溶液搅拌约10分钟，然后获得红色结晶性沉淀。通过在空气中过滤分离出该物质，然后在40X:真空干燥8小时，通过X-射线粉末衍射确定得到21.4mgII型。实施例5—II型的制备在40。C将30mg粗制替加环素溶于500jil去离子水中，将该溶液在23。C进行搅拌。在10C历经约15分钟向该溶液中加入800ji1甲醇。在加入期间获得结晶性沉淀。通过在空气中过滤分离出该物质，然后在40t:真空干燥8小时，通过X-射线粉末衍射确定得到20.2mgII型。实施例6—III型的制备在22'0将0.2581型在21111曱醇中制成浆液，形成混悬液。加入0.01gV型的晶种。将混悬液在22。C搅拌96小时。随后将浆液过滤并在22C真空干燥。通过热台显微术、X-射线粉末衍射、HPLC(99.98%纯度)和光学显微术对所得III型固体进行分析。实施例7一1￥型的制备在22。C将0.15gl型加入2ml乙腈中。获得澄清溶液，将其搅拌30分钟，获得混悬液。将浆液过滤并在22。C真空干燥。通过热台显微术、X-射线粉末衍射、HPLC(93.39%纯度)和光学显微术对所得灰白色IV型固体进行分析。实施例8—IV型的制备在22。C将0.167gl型在乙腈中制成浆液。将浆料温热至30'C,获得澄清溶液。历经5分钟向溶液中加入2ml正庚烷。形成混悬液，将其冷却至22。C并在该温度保持30分钟。将浆液过滤并将所得固体用5ml正庚烷洗涤，在22n真空干燥。通过热台显孩史术、X-射线粉末衍射、HPLC(96.39%纯度)和光学显微术对所得固体IV型进行分析。实施例9一V型的制备在22n将0.22gI型加入到2ml四氢呋喃中并搅拌5分钟。获得澄清溶液，向其中加入2ml正庚烷。将所得浆液在22t:搅拌30分钟。将浆料过滤并在22X:真空干燥。通过热台显微术、X-射线粉末衍射、HPLC(93.57%纯度)和光学显微术对所得V型固体进行分析。权利要求1.I型替加环素，其具有位于约5.2°2θ和约11.1°2θ的X-射线粉末衍射峰。2.权利要求1的I型替加环素，其进一步具有位于约8.3°26的X-射线粉末衍射峰。3.权利要求1的I型替加环素，其进一步具有位于约24.8。20的X-射线粉末衍射峰。4.1型替加环素，其具有基本如图1的X-射线粉末衍射图镨。5.权利要求1的I型替加环素，其热台熔点起点温度为约170n至约1721;。6.权利要求3的I型替加环素，其热台熔点起点温度为约170"C至约172。C。7.通过从溶液中结晶出替加环素制备的I型替加环素。8.权利要求7的I型替加环素，其中所述溶液含有二氯甲烷。9.II型替加环素，其具有位于约9.2°2e、约9.7°20和约20.4。2G的X-射线粉末衍射峰。10.权利要求9的II型替加环素，其进一步具有位于约18.4。20的X-射线粉末衍射峰。11.权利要求9的II型替加环素，其进一步具有位于，约17.7。20的X-射线粉末衍射峰。'12.II型替加环素，其具有基本如图2的X-射线粉末衍射图语。13.权利要求9的II型替加环素，其热台熔点起点温度为约169°C。14.权利要求12的II型替加环素，其热台熔点起点温度为约169。C。15.通过将I型替加环素在一种或多种适合溶剂中制成浆液制备的II型替加环素。16.权利要求15的II型替加环素，其中一种适合溶剂是甲醇。17.权利要求15的II型替加环素，其中所述浆液含有一种以上的适合溶剂。18.权利要求15的II型替加环素，其中所述适合溶剂是甲醇/二氯甲烷。19.通过从溶液中结晶出替加环素制备的n型替加环素。20.权利要求19的II型替加环素，其中所述溶液含有甲醇。21.权利要求19的II型替加环素，其中所述溶液含有曱醇/二氯甲烷。22.III型替加环素，其具有位于约6.0。20的X-射线粉末衍射峰。23.权利要求22的III型替加环素，其进一步具有位于约5.2。20的X-射线粉末衍射峰。24.权利要求22的III型替加环素，其进一步具有位于约9.3。20的X-射线粉末衍射峰。25.III型替加环素，其具有基本如图3的X-射线粉末衍射图镨。26.权利要求22的III型替加环素，其热台熔点起点温度为约167匸。27.权利要求25的III型替加环素，其热台熔点起点温度为约167'C。28.通过将I型替加环素在一种或多种适合溶剂中制成浆液制备的III型替加环素。29.权利要求25的III型替加环素，其中一种适合溶剂是二氯曱烷。30.权利要求28的III型替加环素，其中所述适合溶剂是二氯曱烷/四氢呋喃。31.IV型替加环素，其具有位于约4.6。20和约9.2。20的X-射线粉末衍射峰.32.权利要求31的IV型替加环素，其进一步具有位于约8.8。20的X-射线粉末衍射峰。33.权利要求31的IV型替加环素，其进一步具有位于约16.8。29的X-射线粉末衍射峰。34.权利要求33的IV型替加环素，其进一步具有位于约18.0。20的X-射线粉末衍射峰。35.IV型替加环素，其具有基本如图4的X-射线粉末衍射图i普。36.权利要求31的IV型替加环素，其热台熔点起点温度为约no。c。37.权利要求35的IV型替加环素，其热台熔点起点温度为约170'C。38.通过将I型替加环素在一种或多种适合溶剂中制成浆液制备的IV型替加环素。39.权利要求38的IV型替加环素，其中所述溶剂是乙腈。40.权利要求38的IV型替加环素，其中所述适合溶剂是乙腈/正庚烷。41.通过从溶液中结晶出替加环素制备的IV型替加环素。42.权利要求36的IV型替加环素，其中所述溶液含有乙腈。43.V型替加环素，其具有位于约4.3。29和约11.4°29的X-射线粉末衍射峰。44.权利要求43的V型替加环素，其进一步具有位于约8.6。26的X-射线粉末衍射峰。45.权利要求43的V型替加环素，其进一步具有位于约17.3。20的X-射线粉末衍射峰。46.权利要求45的V型替加环素，其进一步具有位于约25.9。20的X-射线粉末衍射峰。47.V型替加环素，其具有基本如图5的X-射线粉末衍射图傳。48.权利要求43的V型替加环素，其热台熔点起点温度为约174。C。49.权利要求47的V型替加环素，其热台熔点起点温度为约174'C。50.通过将I型替加环素在一种或多种适合溶剂中制成浆液制备的V型替加环素。51.权利要求50的V型替加环素，其中所述适合溶剂是四氢呋喃。52.通过从溶液中结晶出替加环素制备的V型替加环素。53.权利要求52的V型替加环素，其中所述溶液含有四氢呋喃。54.权利要求50的V型替加环素，其中所述适合溶剂是四氢呋喃/正庚烷。55.组合物，其包含至少一种替加环素的结晶固体形式。56.权利要求55的组合物，其包含I型替加环素和II型替加环素。57.权利要求55的组合物，其包含I型替加环素和III型替加环素。58.权利要求55的组合物，其包含I型替加环素、II型替加环素和ni型替加环素。59.药物组合物，其包含至少一种替加环素的结晶固体形式。60.权利要求59的药物组合物，其中至少一种固体形式是I型。61.权利要求59的药物组合物，其中至少一种固体形式是II型。62.权利要求59的药物组合物，其中至少一种固体形式是m型。63.权利要求59的药物组合物，其中至少一种固体形式是IV型。64.权利要求59的药物组合物，其中至少一种固体形式是V型。65.组合物，其包含药学有效量的I型替加环素。66.组合物，其包含药学有效量的II型替加环素。67.组合物，其包含药学有效量的III型替加环素。68.组合物，其包含药学有效量的IV型替加环素。69.组合物，其包含药学有效量的V型替加环素。70.制备II型替加环素的方法，其包括将I型替加环素在一种或多种适合溶剂中制成浆液。71.权利要求70的方法，其中一种适合溶剂是甲醇。72.权利要求70的方法，其中所述适合溶剂是甲醇/二氯甲烷。73.制备III型替加环素的方法，其包括将I型替加环素在一种或多种适合溶剂中制成浆液。74.权利要求73的方法，其中一种适合溶剂是二氯甲烷。75.权利要求73的方法，其中所述适合溶剂是二氯甲烷/四氢呋喃。76.制备IV型替加环素的方法，其包括将I型替加环素在一种或多种适合溶剂中制成浆液。77.权利要求76的方法，其中一种适合溶剂是乙腈。78.权利要求76的方法，其中所述适合溶剂是乙腈/正庚烷。79.制备V型替加环素的方法，其包括将I型替加环素在一种或多种适合溶剂中制成浆液。80.权利要求79的方法，其中一种适合溶剂是四氢呋喃。81.制备II型替加环素的方法，其包括从溶液中结晶出替加环素以制备II型替加环素。82.权利要求81的方法，其中所述溶液含有甲醇。83.制备IV型替加环素的方法，其包括从溶液中结晶出替加环素以制备IV型替加环素。84.权利要求83的方法，其中所述溶液含有乙腈。85.制备V型替加环素的方法，其包括从溶液中结晶出替加环素以制备V型替加环素。86.权利要求85的方法，其中所述溶液含有四氢呋喃。87.制备I型替加环素的方法，其包括从溶液中结晶出替加环素以制备I型替加环素。88.权利要求87的方法，其中所述溶液含有二氯甲烷。89.制备II型替加环素的方法，其包括向替加环素水溶液中加入甲醇以制备II型替加环素。90.权利要求89的方法，其中11型替加环素的平均粒径>20^1111。91.制备II型替加环素的方法，其包括向曱醇中加入替加环素水溶液以制备II型替加环素。92.权利要求91的方法，其中1I型替加环素的平均粒径〈20fim。93.权利要求1-54中任意一项所述形式的替加环素在制备用于肠胃外使用的药物组合物中的用途。全文摘要本文描述了替加环素的结晶固体形式、即I型、II型、III型、IV型和V型、包含这些结晶固体形式的组合物以及制备这些结晶固体形式的方法。文档编号A61P31/00GK101248038SQ200680027182公开日2008年8月20日申请日期2006年5月25日优先权日2005年5月27日发明者A·哈德菲尔德,J·W·黄,L·克里什楠,M·S·库,S·S·戴希穆克申请人:惠氏公司