专利名称：：一种用于预防及治疗急性肝损伤的药物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种预防及治疗由药物、酒精及毒物等对肝脏造成的急性损害的水飞蓟宾，丁二酸钠盐的制备方法，更具体地说，涉及一种水飞蓟宾'丁二酸钠冻干粉针的制备方法。
背景技术：
：肝脏是药物代谢的主要器官，大多数药物在肝内经生物转化排除，在此过程中，一定量的药物、酒精及毒物等本身及其代谢产物可通过直接作用或免疫机制造成肝脏的急性损害和病变。近年来，随着药物品种的不断增加，酒精消费群体日益庞大，农作物频繁使用合成农药，人们误食有毒蘑菇等因素导致急性肝损害的发生率亦相应增加。其中药物性肝病占所有住院黄疸病例的2%5%，占急性肝炎病例的10%，50岁以上患者中达40%1'2。暴发性肝炎中20%50%与药物有关[2，3]，中草药所致肝损害占药物性肝病的30%[4。据全球资料证实，60亿人口中酒精肝患会约2.3亿人，在美国，因酒精摄入过量而导致的肝脏疾患已成为男性的第四大主要死亡原因[5]。我国专家预测，目前酒精肝患者仍然具有很大上升的趋势。另外农药残留量高的蔬菜水果、因误食毒性较高的蘑菇等造成急性肝损伤的发生率fe低，但中毒后导致肝脏快速损伤，严重者数小时内导致死亡，较短时间内抢救病人显得尤为重要。综上所述，一种安全、有錄的预防及治疗肝损伤的药物的研究与开发迫在眉睫。水飞蓟宾(SIL，SilybummarianumL.Gaertn.)，是菊科水飞蓟属植物，原产南欧、北非，以民间草药用于治疗肝胆疾病，具有抗肝胆中毒，保护肝细胞膜，改善肝功能的生理活性。我国早在50年代初，由英国引入作观赏，70年代初开始研究其医药功^[，国内外学者对水飞蓟的有效成分进行了大量的研究，并开发出产品益肝灵片及复方益肝灵片均载入部颁标准。但由于S1L的水溶性和脂溶性均较差，生物利用度低，吸收量不稳定，大大降低了临床疗效，常规剂型如益肝灵片(即水飞蓟素片)临床应用受到很大限制。为提高SIL的生物利用度，增加其疗效，将其结构进行衍生化得ft其水溶性化合物水飞蓟宾'丁二酸钠。经动物试验证明，本品具有预防及治疗由于药物、毒物及酒精等造成的肝损伤。
发明内容本发明所要解决的问题是提供一种水飞蓟宾*丁二酸钠冻干粉针的制备方法，将水飞蓟宾'丁二酸钠以注射剂的形式直接进入血液以提高生物利用度，使水飞蓟宾'丁二酸钠以固体的形式存在，达到易存储、更稳定，起效果快的目的。本发明提供的技术方案是，水飞蓟宾.丁二酸钠，其结构式如下OMeOHO本发明提供的制备水飞蓟宾*丁二酸钠冻干粉针的方法包括以下步骤:(1)将水t蓟宾'丁二酸钠溶解于注射用水中，制备成含水飞蓟宾'丁二酸钠的溶液；(2)于上述溶液中加入附形剂使溶解；(3)将上述溶液中用活性炭加热脱色后，用稀盐酸或稀氢氧化钠溶液调节pH为79，过滤；(4)滤液无菌分装，冷冻干燥，即得。上述步骤中所述的(2)中的附形剂为甘露醇或乳糖。本发明工艺简单，产品水溶性好，可不用加其他助溶剂，直接用注射用水溶解即可使用。下面结合实施例及主要药效学试验对本发明作进一步的说明。实施例一取水飞蓟宾'丁二酸钠原料50g，加入注射用水5000ml中得溶液，再加入50g甘露醇，充分搅拌使其溶解，用1%(w/v)的活性炭4(TC加热脱色并用1M氢氧化钠溶液调节pH为9.0，冷至室温，滤过，无菌分装于西林瓶中，冷却干燥后压塞，即得本发明水飞蓟宾*丁二酸钠冻干粉针。实施例二取水飞蓟宾'丁二酸钠原料30g，加入注射用水1000ml中得溶液，再加入60g乳糖，充分搅拌使其溶解，用3W(w/v)的活性炭5(TC加热脱色并用0.5M稀盐酸溶液将上述溶液调节pH为7.0,冷至室温，滤过，无菌分装于西林瓶中，冷冻干燥后压塞，压盖，即得本发明水飞蓟宾*丁二酸钠冻干粉针。药效学试验-一、注射用'水飞蓟宾，丁二酸钠冻干粉对小鼠四氯化碳急性肝损伤的影响1受试药物实施例一的注射用水飞蓟宾'丁二酸钠冻干粉针，氯化钠注射液。2受试动物昆明种SPF级小鼠，雌性，体重18g22g，由广东医学动物试验中心提供。3试验方法3.1动物分组将50只小鼠随机分层分组，每组10只，共5组。分别为正常对照组、模型组、注射用水飞蓟宾*丁二酸钠30mg&g"、15mg*kg—!、7.5mg-kg'1组。3.2试验步骤将正常对照组、模型组给予小鼠0.9%生理盐水尾静脉注射0.5m1/只，注射用水飞蓟宾*丁二酸钠三个剂量依照剂量尾静脉注射，每天1次，连续5天，于第6天，除正常对照组外，其余各组用0.P/。四氯化碳10mhkg—i腹腔注射1次，2^小时后各组小鼠摘除眼球取血，分离血清，测定ALT和AST活性。结果用t检验，与模型组进行比较。表l.不同剂量注射用水飞蓟宾，丁二酸钠对小鼠四氯化碳急性肝损伤的影响(均数±标准差)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注与模型教$较，进行t检验，'p<0.01从以上结果可见模型组与正常对照组相比有显著性差异(pO.01);注射用水飞蓟宾'丁二酸钠30、15、7.5mg-kg"高、中、低剂量均能明显降低四氯化碳所致小鼠血清中的ALT和AST，且降低AST作用最为明显，注射用水飞蓟宾-丁二酸钠高、中、低剂量组的降酶作用与剂量存在量效关系呈剂量正相关关系。注射用水飞蓟宾'丁二酸钠具有保护急性肝损伤的作用。二、注射用水飞蓟宾'丁二酸钠过敏性、溶血性和血管刺激性试验1受试药物实施例二注射用水飞蓟宾，丁二酸钠冻干粉针，注射用氯化钠溶液。2受试动物家兔2.1-2.5kg，雌雄兼用；豚鼠200300g，雌雄兼用。动物均由广东省医学试验动物中心提供。3试验方法3.1全身过敏试验取健康豚鼠18只，随机分为3组，每组6只①氯化钠注射液对照组，②卵白蛋白组(0.5%)，③注射用水飞蓟宾*丁二酸钠30mg/kg。各组分别按无菌操作隔H腹腔注射氯化钠注射液、0.5%卵白蛋白和注射用水飞蓟宾《丁二酸钠30mg/kg，0.5mi/只，共3次进行动物致敏。致敏后将每组动物随机分为2批，每批各3只，一批于首次致敏后第14天静脉注射对应药液1ml/只进行攻击；另一批于首次致敏后第21天同法攻击。观察动物攻击后30分钟内有无咳嗽、抓鼻、竖毛、呼吸困难、痉寧、休克及死亡等情况。结果按表2进行过敏反应评分，计算出每批动物反应平均分数。_表2全身过敏性反应评分标准__反短芬叛^^0无明显反应1只有轻微抓鼻、颤抖或竖毛2有几次咳嗽、有抓鼻、颤抖或竖毛3多次或连续咳嗽、伴有呼吸困难或痉挛、抽搐等4痉挛、抽搐、大小便失禁、休克、死亡试验结果见表3，盐水组两次攻击试验结果均呈阴性。根据结果判断标准认为注射用水飞i]宾J一二酸钠无明显致敏作用。表3注射用水飞蓟宾，丁二酸钠过敏试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>3.2溶血试验家兔颈动脉插管取血约20ml,将所得红细胞用生理盐水祷释成2%的混悬液，备用。将注射用水飞蓟宾.丁二酸钠用生理盐水稀释50倍，备用。取试管7支分别进行注射用水飞蓟宾.丁二酸钠2%的溶血试验。按表4加样，第6管不加受试品，作为空白对照，第7管不加受试品，用蒸馏水代替生理盐水，作为溶血的阳性对照。将各管轻轻摇匀，在37t:水浴中保温4小时，观察各管的溶血和凝集现象。分别于保温0.5、1、2、3和4小时肉眼观察各管溶血情况。结果判断标准参见表5。表4.2%注射用水飞蓟宾.丁二睡钠溶血试验加样表__管号J^^^J"2%红细胞悬液(ml)2.52.52.52.52.52%注射用水飞蓟宾'丁二0.10.20.30.40.5酸钠(ml)生理盐水(ml)2.42.32.22.1,,2.0蒸馏水(ml)_----'-_表5.红细胞溶血、凝集判断标准全溶血溶液澄明红色，管底无细胞残留；部分溶血溶液澄明红色或棕色，管底有少量红细胞残留；无溶血红细胞全部下沉，上层液体无色澄明；凝集_红细胞凝聚成块，振摇后不能分散;_2%注射用水飞蓟宾*丁二酸钠试验结果显示，本品对红细胞无明显的影响。3.3血管刺激试验取健康、耳缘无损伤家兔6只，随机分为两组5%注射用水飞蓟宾'丁二酸钠组和0.9%生理盐水对照组。给药容积15ml/kg,给药速度为lml/min，每天1次，连续7天。给药期间至未次给药后24小时肉眼观察给药局部的静脉血管及周围组织的红肿情况。然后分别于注射部位近心端24cm处剪取耳缘，用10%甲醛固定，常规组织切片，观察病理变化。肉眼观察可见葡萄糖对照组和葛根素组662.572.52.;2.5只家兔的注射部位血管均有不同程度的淤血，距注射部位2cm和距注射部位4cm耳廓未见明显充血、水肿。结合病理切片结果显示5%注射用水飞蓟宾《丁二酸钠对血管无明显剌激作用。参考文献D]潘国宗主译.胃肠急症学.人民卫生出版社.1999，381403.[2]梁扩寰，李绍白.肝脏病学.人民卫生出版社.1995，750769.[3]魏镜龙,内科讲座.人民卫生出版社.i985,4754.[4]姚光弼.药物性肝病.中华消化杂志.1999，19(5):339342.[5]Sm他W,CecilB.Textbookofedicine[M].l她ed.Pennsylvania:SzundersCompany,1992—230259,权利要求1.一种成分为水飞蓟宾·丁二酸钠冻干粉针的制备方法，包括以下步骤(1)将水飞蓟宾·丁二酸钠溶解于注射用水中，充分搅拌成溶液。(2)于上述溶液加入甘露醇或乳糖使溶解。(3)将上述溶液用活性炭加热脱色并用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节pH7～9，过滤。(4)滤液无菌分装，冷冻干燥，即得。2.根据权利要求1所述的水飞蓟宾'丁二酸钠冻干粉针，其特征在于所述的水飞蓟宾-丁二酸钠为水飞蓟宾经丁二酸反应制备得到的化学纯度为90%以上的化学物质。3.—种成分为水飞蓟宾*丁二酸钠冻干粉针应用于预防及治疗由药物、酒精及毒物等对肝脏造成的急性损害。全文摘要本发明公开了一种用于预防及治疗急性肝损伤的水飞蓟宾·丁二酸钠冻干粉针的制备方法，包括以下步骤(1)将水飞蓟宾·丁二酸钠原料溶解于注射用水中，制备成溶液；(2)于上述溶液中加入甘露醇或乳糖使溶解；(3)将上述溶液用活性炭加热脱色并调节pH7～9，过滤；(4)滤液无菌分装，冷冻干燥，即得。本发明方法工艺简单，用注射用水溶解即可使用。可用于预防及治疗由药物、酒精及毒物等对肝脏造成的急性损害。文档编号A61K9/19GK101244041SQ200710026898公开日2008年8月20日申请日期2007年2月13日优先权日2007年2月13日发明者傅卫国,伟王,王佩贤,黄伟静申请人:广州安健实业发展有限公司