专利名称：：一种防治缺血性脑血管疾病的药物复合物及其制备方法一种防治缺血性脑血管疾病的药物复合物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种防治缺血性脑血管疾病的药物组合物及其制备方法。
背景技术：
：随着当今社会人口的老龄化，脑血管病发病率不断增高，具有发病率高、致残率高、死亡率高的"三高，，特点，已成为严重危害人类健康的主要疾病之一。在联合国WH0调查的57个国家中死于脑血管病者占11.3%,其中有40个国家脑血管病占死因前三位。美国脑卒中患者的总数达400万人次以上。我国每年死于脑血管病约100万人，2003年脑血管疾病在城市和农村疾病死亡原因中均排名第二位，仅次于恶性肺瘤。在脑血管病中，缺血性脑血管病约占80°/。。缺血性脑血管病是神经科常见病、多发病，致残率极高，是目前重点防治的一种疾病，它包括脑动脉硬化症，脑梗塞等，这类患者容易引起中风、血管性痴呆、认知功能障碍合并阿尔茨海默病等疾病。阿魏酸(Ferulicacid，FA),化学名为4-羟基-3-甲氧基苯丙烯酸，是阿魏、川弯、当归、升麻、木贼等多种中药的有效成分之一。阿魏酸水溶性不大，因此常制成钠盐(Sodiumferulate,SF)应用。阿魏酸具有明显的药理活性，具有很强的抗氧化活性，能清除自由基，调节人体生理机能，抑制产生自由基的酶，具有促进清除自由基的酶的产生，抗血小板凝集和血栓等作用。最新研究表明，阿魏酸具有治疗阿尔茨海默症的开发前景；对缺血性脑损伤有保护作用。但由于阿魏酸难以通过血脑屏障，其生物利用度低，疗效不佳。削弱了阿魏酸在中枢神经系统应发挥的作用。冰片分为天然冰片和合成冰片，天然水片的主成分是龙脑(Borneol，2-莰醇；分子式d。H180),合成冰片也收载于中国药典，主要成份为龙脑和异龙脑(约含有35%的异龙脑)，均是小分子脂溶性单辟类物质，可经肠道迅速吸收。最新研究还发现冰片具有抗脑缺血损伤和加速脑缺血后脑血管内皮的修复的作用。近几年治疗缺血性脑血管病药物不断问世，但疗效并不令人满意，且有些药物毒副作用大。
发明内容本发明的目的就是为了克服现有的单用阿魏酸与冰片治疗缺血性脑血管疾病疗效不佳的缺点，提供一种具有药理作用协同互补、起效快、有效时间延长、服用剂量小、疗效确切的防治缺脑血性脑血管疾病的药物组合物及其制备方法。为实现上述目的，本发明提供一种防治缺血性脑血管疾病的药物组合物，其含有活性成份和载体，所述活性成份由重量比为100:0.5~10的阿魏酸或其在药学上可接受的盐与水片组成，可以制备为适于临床应用的任何药物剂型，包括但不限于颗粒、胶嚢剂、片剂、滴丸剂、栓剂、注射剂。本发明的阿魏酸的药学上可接受的药用盐可以是钠盐、钾盐、铵盐、4丐盐、镁盐、铁盐及其他可接受的药用盐，也可以直接采用阿魏酸。本发明的水片可以是天然冰片，也可以是人工冰片。本发明的防治缺血性脑血管疾病的药物组合物中，所述阿魏酸或其在药学上可接受的盐与冰片的重量比以100:1~5为较佳。本发明的防治缺血性脑血管疾病的药物组合物中，所述阿魏酸或其在药学上可接受的盐与冰片的重量比以100:2为最佳。本发明药物组合物与药物中可以接受的相应药用辅料或载体等辅助添加成分并按相应的制药方法加工，即可成为相应的口力l药物制剂和注射药物制剂。如普通的颗粒(剂)、胶嚢剂、片剂、滴丸剂、栓剂、注射剂，也可以加工成緩释制剂与控释制剂。口服制剂含有常用的可以被接受的辅助添加成分，如粘合剂、填充剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、矫味剂等，必要时可对片剂、滴丸剂进行包衣。在注射制中可以被接受的注射用溶剂、緩沖剂、附加剂等常用的辅助添加成分，按相应的常规工艺方法处理，制成注射剂、注射用冻干4分针、输液制剂。本发明的药物的使用剂量以成年人计是0.2~2g/人/次，每日一至三次。本发明还进一步提供上述防治缺血性脑血管疾病的药物组合物的制备方法。本发明的药物的制备方法包括如下步骤颗粒(剂)的制备(1)按重量比分别称取阿魏酸钠或阿魏酸和冰片，分别研细，过80目筛，取3%乙醇溶解冰片，加入阿魏酸盐或阿魏酸，混合均匀得原料；(2)在步骤(1)的混合原料中，加入适量的蔗糖粉、糊精，制成软材，经14目筛制粒，于506(TC干燥至水分在3%以下。即得颗粒剂。胶嚢剂的制备(1)同颗粒的步骤(l);(2)在步骤(1)的混合原料中，加入适量淀粉、糊精，制成软材，经14目筛制粒，于5060。C干燥至水分在3%以下。装入2号胶囊壳中，即得胶嚢剂。片剂的制备(1)同颗粒的步骤(l);(2)在步骤(1)的混合原料中，加入与混合原料重量比为1:0.25的淀粉，1:0.15的蔗糖粉，1:0.1的糊精(冒号后为添加的物质，下同)，制成软材，经14目筛制粒，于506(TC干燥至水分在3°/。以下，得干燥颗粒，再加入l:0.Ol的硬脂酸镁，压片，即得片剂。滴丸剂的制备(1)同颗粒的步骤(l);(2)在步骤(1)的混合原料中，加入与混合原料重量比为1:1的滴丸基质聚乙二醇6000,加热熔融，温度为8095。C，充分搅拌均匀，移入滴丸机，以二曱硅油为冷却剂滴制，即得滴丸剂。栓剂的制备(1)同颗粒的步骤(l);(6)分别取与混合原料重量比为1:5的聚乙二醇400及聚乙二醇4000于水浴上加热熔化，加入步骤(1)的混合原料，搅拌至溶解，并迅速倾入已涂润滑剂的栓模内，至稍微溢出模口，冷后削平，取出包装即得栓剂。注射液的制备(1)同颗粒的步骤(l);(7)在步骤(1)的混合原料中，加入0.9%(重量体积比)的氯化钠调节等渗，加入总制备量30%~80%(体积百分比)的注射用水，搅拌使充分溶解，添加注射用水至制备量，以微孔滤膜过滤，分装，即得注射液。动物实验表明，阿魏酸钠与冰片合用后能减轻短暂性全脑缺血小鼠的脑水肺，改善其行为障碍，增强空间学习记忆能力，其机制可能是通过协同发挥清除自由基抗氧化作用，减少血脑屏障的通透性，减少活性胶质细胞和减少海马神经元死亡实现的；复合使用阿魏酸或其可接受的药用盐和冰片比单一使用阿魏酸或其盐、冰片和阳性药物脑复康对短暂性全脑缺血小鼠的疗效更显著，尤其是能明显改善其认知障碍。本发明揭示了阿魏酸或其盐与冰片的组合物对短暂性全脑缺血的神经保护作用，两药联合发挥了两药的协同作用，与单一阿魏酸钠相比，吸收半衰期延长，达峰时间更快，而且降低了阿魏酸的药量，增加了药物的安全性。本发明作为防治缺脑血性脑血管疾病的药物具有药理作用协同互补、起效快、有效时间延长、月良用剂量小、疗效确切的优点。具体实施方式以下结合具体的实施例对本发明作进一步说明。以下通过实施例形式的具体实施方式，是对本发明的上述内容再作进一步的说明，但本发明不限于以下实施例。凡在本发明的技术思想启发下，用本领域普通技术知识和工艺方法做出的各种修改、替换和变更，均包括在本发明中。制剂实施例l:分别取阿魏酸钠65.9g，水片1.32g,蔗糖粉673g,糊精67.3g,分别研细，过80目筛，取3。/。乙醇溶解冰片，加入阿魏酸钠混匀，再加蔗糖粉和糊精制成软材，经14目筛制粒，于5060。C干燥至水分在3%以下，即得颗粒剂，共制得100包。用法8g/包/次x2次/日。制剂实施例2:分别取阿魏酸钠65.9g，水片0.33g,分别研细，过80目筛，取3%乙醇溶解冰片，加入阿魏酸钠制成软材，经14目筛制粒，于5060。C干燥至水分在3%以下，装入2号胶嚢壳中，即得胶嚢剂。共制得168粒。用法1~2粒/次，2~3粒/日制剂实施例3:分别取阿魏酸钠65.9g,冰片6.59g，淀粉16.8g，蔗糖粉IOg,糊精6.7g，硬脂酸镁0.673g,分别研细，过8G目筛，取3%乙醇溶解水片，加入阿魏酸钠，再加入淀粉、蔗糖粉，用水溶解糊精混合制成软材，经14目筛制粒，于5060。C干燥至水分在3°/。以下，再加入硬脂酸镁，压片，即得片剂，共制得202片。用法2片/次，2次/日。制剂实施例4:分别取阿魏酸钾65.9g，水片0.659g,聚乙二醇600067.3g，取阿魏酸钾与冰片分别研细，过80目筛，取少量3°/。乙醇溶解冰片，加入阿魏酸钾搅拌均匀，再加入聚乙二醇6000，加热熔融，温度为80~95°C,充分搅拌均匀，移入滴丸机，以二曱硅油为冷却剂滴制，即得滴丸剂。共制5384粒，用法10粒/次，2次/日。制剂实施例5:分别取阿魏酸钩65.9g，冰片1.32g，聚乙二醇400336.5g,聚乙二醇4000336.5g,取阿魏酸钩与冰片分别研细，过80目筛，取少量3°/乙醇溶解冰片。另取聚乙二醇400及聚乙二醇4000于水浴上加热熔化(水浴温度为50°C),加入阿魏酸钓与冰片，搅拌至溶解，并迅速倾入已涂润滑剂的栓模内，至稍微溢出模口，冷后削平，取出包装即得栓剂共制得296粒，用法l粒/次，3次/日。制剂实施例6:分别取阿魏S臾镁131.8g,水片2.64g，氯化钠9g,注射用水800ml,搅拌使充分溶解，添加注射用水至1000ml,以微孔滤膜过滤，分装，每支5ml即得注射液。每天1支。以本发明实施例作试验样品，进行对短暂性全脑缺血动物模型的多项药效学指标的药效学试验。并以单一的阿魏酸钠高、低剂量、单一水片以及阳性药物脑复康进行对比试验，以证明本发明药物复合物在预防与治疗缺血性脑血管疾病的效果。短暂全脑缺血模型制备选用C57BL/6J小鼠，以10%水合氯醛35^1/10g腹腔麻醉小鼠后，仰面固定于手术台上，以75%酒精消毒颈部皮肤，行颈部正中切口。剥离下颌腺及双侧胸骨舌骨肌、肩胛舌骨肌与胸骨乳突肌，暴露颈总动脉，钝性分离双侧颈总动脉，及伴行神经尤其是迷走神经，用动脉夹同时夹闭双侧颈总动脉30min后，恢复血供，缝合皮肤并消毒伤口。々支手术组只分离双侧颈总动脉，不行缺血再灌注术。动物分组随机分10组(1H叚手术组(SAM，n=30):只分离双侧CCA，但不夹闭。(2)缺血模型组(VEH,n=30):造模，ig等量生理盐水。(3)阳性药物组(PIRACETAMUM，n=30):造模，ig0.5g/kg脑复康溶液。(4)阳性药物空白对照组(PIRACETAM薩SAM，n=12):只分离双侧CCA，但不夹闭，并ig0.5g/kg脑复康水溶液。(5)单一阿魏酸钠(SF)低剂量组(SF100,n=30):造模，igl00mg/kgSF3。/。乙醇溶液。(6)单一SF高剂量组(SF400,n=30):造模，ig400mg/kgSF溶液3%乙醇溶液。(7)单一冰片组(B,n=30):造模，ig2mg/kg冰片3%乙醇溶液。(8)制剂实施例1低剂量组(SF100+B,n=30):造模，ig100mg/kgSF+2mg/kg水片3%乙醇复合溶液。(9)制剂实施例3中剂量组(SF200+B,n=30):造模，ig200mg/kgSF+2mg/kg冰片3y。乙醇复合溶液。(10)制剂实施例2高剂量组(SF400+B，n=30):造模，ig400mg/kgSF+2mg/kg水片3°/。乙醇复合溶液。给药药物组造模前30min给药1次，缺血再灌后5min给药1次，共2次给药。假手术组及缺血组ig等量生理盐水。药效学实施例1:对短暂全脑缺血小鼠术后死亡率、癫痫率的比较全脑缺血能诱发癫痫。术后每组小鼠分别观察死亡情况以及是否会诱发癫痫。癫痫发作形式主要有以下4种①狂奔无方向改变的持续性奔跑，不主动避开障碍物。在狂奔时可伴有胡须的抽动和很响的呼吸声。如小鼠被关在笼子里，它将撞击容器壁或跳起撞击笼盖。狂奔可持续约30s至lmin。②全身性阵挛指身体和四肢阵挛。③局部性阵挛指局限的头部/前肢或后肢/尾发生阵挛。④肢体抽动小鼠后腿站立，前肢抽动，并可见失去平^f軒。表l各组全脑缺血小鼠术后24h死亡率、癫痫率比较<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>Note:▲P<0.05vsSAM(空白组)；#P<0.05vsVEH(才莫型纟且)模型组小鼠术后至24h内的死亡率比其他组高，模型组在术后24h时发生癫痫的机率比空白组高，说明本实验造模方法能使小鼠短暂性全脑缺血，从而诱发癫痫，具体表现为小鼠在笼子里撞击容器壁或跳起撞击笼盖。狂奔持续约30s至lmin;全身和尾部间断发生阵挛。单一药物组发生癫痫机率均比模型组低，但没有显著性差异。阳性药物组、复合药物中、高剂量组癫痫发生率比模型组显著降低，提示阳性药物、复合药物能减轻小鼠脑缺血损伤，单一药物组有一定作用，但不及复合药物组。(结果见表1)药效学实施例2:对短暂全脑缺血小鼠术后神经功能评分每组小鼠分别于手术清醒后(4~6h)、24h和48h在相同环境中进行神经功能评分。采用ZeaLonga5分制评分标准0分，无神经损害的症状；1分，不能伸展前爪；2分，向外侧转圈；3分，向外侧倾倒；4分，不能自发行走，意识丧失，分数越高，动物的行为障碍越严重。表2各组全脑缺血小鼠术后神经功能评分比较(；±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>VEH(才莫型组)；$P<0.01vsSF100(单一阿魏酸钠低剂量组)各组小鼠在大约4~6h完全清醒过来，模型组神经功能评分明显高于空白组(P<0.001),各药物组评分明显低于模型组，其中以SF与冰片的复合药物组最低分(P<0.001),以后小鼠神经功能逐渐恢复，24h后除模型组外，其他组均恢复至正常水平，模型组48h后恢复至正常水平。提示单一或复合使用SF和冰片均能在一定程度上减轻小鼠脑缺血损伤，但复合用药的效果比单一SF低剂量组要好(P<0.05)。(结果见表2)药效学实施例3:对短暂全脑缺血小鼠Morris水迷宫测试主要分为隐蔽平台试验与探索试验。水迷宫装置的圆形水池直径100cm、高40cm、水深25cm,水温22±0.5°C;透明的圆形平台直径IOcm、高24cm,放在西南象限，没入水面下1cm,使得小鼠在水池中游泳时看不到水面下的平台。每组12只小鼠，术后第4天将小鼠放入水迷宫装置池中自由游泳90s,不放置平台，以排除有游泳障碍的动物。术后第5天开始测试隐蔽平台试验，每天4次，分别将小鼠从四个象限面向池壁放入池中，持续5d。图像自动监视系统追踪小鼠的游泳轨迹(每次《90s),记录小鼠寻找固定平台的时间(潜伏期)。如果小鼠找到平台，记录实际找到的时间并允许其在平台上停留15s;如果90s内未找到平台，则记录为90s并将其引导至平台上停留15s，放入笼中休息1015rain,之后开始下一次测试。4次成绩的平均值为当日成绩。并对每只小鼠的搜索策略按①直线式；②趋向式；③随机式；④边缘式进行记录。直线式和趁向式游泳轨迹为有效搜索策略，边缘式和随机式游泳轨迹为无效搜索策略，计算每曰有效搜索策略百分比。完成隐蔽平台试验后，将小鼠放入笼中休息lh,之后开始做探索试验。除去平台，将小鼠从东南象限面向池壁放入水迷宫装置池中自由游泳90s，记录小鼠在各象限停留时间和穿越平台的次数。表3各组全脑缺血小鼠Morris水迷宫测试潜伏期比较(；c±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>(同组第一天的潜伏期)；*P<0.05;P<0.01vsSAM(空白组)；#P<0.05;"P<0.01;*"P<0.001vsVEH(才莫型组)各组小鼠的潜伏期均随测试天数增多而明显缩短。模型组在第1-5天的潜伏期明显长于假手术组(P<0.05,P<0.01)。脑复康假手术组与假手术组没有显著性差异；脑复康组与模型组也没有显著性差异。单一药物组中低剂量SF、高剂量SF和水片组分别在第2天、第l-2天、第l天短于模型组(P〈0.05,P<0.01),提示单一药物在初期对脑缺血均有一定作用。复合药物低、中、高剂量的潜伏期分别在第1~5天、第25天、第25天明显短于模型组(P<0.05，P<0.01，P<0.001)，提示复合药物能增强短暂性全脑缺血小鼠的空间学习能力，对脑缺血有明显的保护作用。(见表3)。表4各组全脑缺血小鼠Morris水迷宫有效搜索策略百分比比较(；土s)组别有效搜索策略(％)Id2d3d4d5dsa-14±92.86±89.29±SAM(n=12)is.9012.2013.36100.oo±o豕100.00±0*29.17±66.67±87.50±95.83±95.83±VEH(n=ll)24.58"30.28sA13.6f10.21$M10.21wPIRACET扁M36.11±69.44±89.29±92.86±87.50±(n=12)30.9030.05s28.35w18.90鹏13.36鹏PIRACETAMUM79.17±83.33±95.83±91.67±100.00±0*SAM(n=12)18.8220.4110.2112.91SF10037.50±75.00±68.75±75.00±81.25±(n=12)32.2720.41*30.3230.0023.94$SF40082.14±85.71±82.14±(n=12)27.82"96.43±9.45'24.4096.43±9.4531.3464.29±78.57±89.29±89.29±B(n=12)19.67'30.3719.67$19.67s100.00±0$$*SF100+B75.00±90.63±96.8,8±(n=12)13.36*##18.60*8.84$*100.00±0SM100.00±O鹏SF200+B64.29±92.86±92.86±(n=12)24.40'18.90#18.90*100.00±0W100.00±(fSF400+B57.14±89.29±92.86±96.43±(n=12)27.82*13.36$18.90s9.45s*100.00±(fNote:*P<0.05;MP<0.01;wP<0.001vsthe1stdaywithinthegroup;(同组第一天的有效搜索策略)▲P<0.05;▲▲P<0.01vsSAM(空白组)；#P<0.05;"P復01;#"P<0.001vsVEH(模型组)各组有效搜索策略百分比均随测试天数增多而明显增加。模型组在第12天的有效搜索策略百分比明显少于假手术组(P〈0.05，P<0.01),多以以边缘式或随机式进行搜索，即在迷宫中围绕池壁游动或做无规律运动，学习记忆能力差。脑复康假手术组与假手术组没有显著性差异；脑复康组与模型组也没有显著性差异。单一药物组中高剂量SF和水片组分别在第12天、第1天的有效搜索策略百分比大于模型组(P<0.05，P<0.01),提示单一药物对脑缺血有一定作用。复合药物低、中、高剂量的有效搜索策略百分比均在第1~2天明显大于模型组(P<0.05,P<0.01)，动物多以趋向式或直线式进行搜索，即在平台周围做趋向运动或直接游返平台，表现出对平台的记忆，提示复合药物能增强短暂性全脑缺血小鼠的空间学习能力，对脑缺血有明显的保护作用。但因模型组的有效搜索策略百分比也随天数增多而明显增加，所以药物组在3~5天与模型组没有显著性差异。(见表4)。表5各组全脑缺血小鼠Morris水迷宫各象限停留时间比较(S±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>Note:$P<0.05vsIIIquadrantwithinthegroup(同组第III象限的停留时间)；AP<0.05vsSAM(空白组)；*P<0.05vsVEH(才莫型组)假手术组小鼠在第III象限即目的象限的停留时间均比其他三个象限长(P〈0.05),穿越平台次数较多，说明小鼠经过5天的水迷宫训练，已对平台产生记忆。而it型组在目的象限的停留时间与其他象限无显著性差异，穿越平台次数较少。复合药物低、中、高剂量组在目的象限的停留时间均比其他一二个象限长(P<0.05)，穿越平台次数比模型组多(P<0.05)。脑复康组和单一药物组与模型组无显著性差异。(见表5)。药效学实施例4:对短暂全脑缺血小鼠血清、皮层和海马SOD(超氧化歧化酶)活性及MDA(丙二醛)含量测定另取(l)(2)(3)(5)(6)(7)(8)组各6只小鼠，于缺血后再灌60min后，断头取血取脑，用预冷生理盐水洗干净脑上血液。10000r/min离心10min分离血清，测定血清SOD活性及MDA含量。分别取小鼠皮层与海马于玻璃匀浆器中，加入预冷生理盐水，进行脑匀浆，3000r/min离心10min，取上清液，按照说明书测定脑内蛋白含量及S0D活性和MDA含量。表6血清SOD及MDA活性(；±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表7皮层SOD及MDA活性(X土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表8海马SOD及MDA活性(；±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>SF100+B420.21±19.21*140.67±18.37'Note:AP<0.05vsSAM(空白组)；#P<0.05vsVEH(才莫型组)与假手术组比较，模型组小鼠血清、皮层和海马SOD活力明显降低(P<0.05，P<0.001，P<0.0001)，MDA含量明显增加(P<0.05)。脑复康组小鼠血清、皮层和海马SOD活力比;f莫型组明显增加(P<0.05)。单一SF高剂量组小鼠血清、皮层和海马的SOD活力比模型组明显增加(P<0.05),皮层MDA含量比模型组明显降低(P<0.05)。单一水片组海马的SOD活力比模型组明显增加(P<0.05)。复合药物低剂量组小鼠的血清、皮层和海马SOD活力均比才莫型组明显增加(P<0.05),MDA含量明显降^氐(P<0.05)(表6、7、8)。提示复合药物低剂量组对模型组小鼠有脑缺血有保护作用。药效学实施例5:对短暂全脑缺血小鼠脑含水量测定另取(l)(2)(3)(5)(6)(7)(8)组各6只小鼠，于缺血后再灌注24h后，每只小鼠取一半脑进行脑含水量测定。如上，取左边脑于-4。C生理盐水中洗净血渍用吸水纸吸干后称重为湿重，于120。C烘箱烘至恒重约18h(两次重量之差<0.3mg)，称重为干重，计算脑含水量。脑组织含水量(％)=(湿重-干重)/湿重x100%表9各组脑含水量比较(x±s)组号(n=6)脑含水量(％)SAM78.98±0.13VEH80.43±0.40"PIRACETAMUM79.15±0.20*SF10079.49±0.42SF40079.53±0.53B79.33±0.18*SF100+B79.23±0.20*Note:▲▲P<0.01vsSAM(空白纟且)；#P<0.05vsVEH(才莫型组)模型组脑含水量显著高于假手术组(P<0.01),说明短暂性全脑缺血小鼠脑部血供发生障碍，引起脑水肿。脑复康、冰片组、复合药物低剂量组的脑组织含水量虽也比正常高，但显著低于模型组(P<0.05)。提示复合药物低剂量组能减轻脑缺血引起的脑水肺(见表9)。药效学实施例6:对短暂全脑缺血小鼠血脑屏障通透性测定另取(l)(2)(3)(5)(6)(7)(8)组各10只小鼠，于缺血后再灌注17h经尾静脉iv2%伊文氏蓝溶液(4ml/kg)。于15min后取脑，用-4。C生理盐水洗干净脑上血液，再用滤纸吸干，精密称重。按1.5ml/100mg湿脑组织加入曱酰胺，制成匀浆。置50。C隔水式培养箱中24h。4000转/分离心20min，取上清液以空白脑匀浆平行管为空白管测定吸光度，根据标准曲线求得脑组织EB(伊文氏蓝)含量，以ng/mg湿脑组织表示。Note:P<0.001vsSAM(空白组)；###P<0.001vsVEH(才莫型组)模型组脑组织中的EB含量明显大于假手术组(P<0.001)。脑复康、高剂量SF、冰片与复合药物组小鼠脑组织中的EB含量明显小于模型组(P<0.001),其中复合药物的EB含量最低。而低剂量SF组的EB含量与模型组无差异。提示复合药物低剂量组能减少脑缺血引起的血管通透性增多(见表IO)。药效学实施例7:对短暂全脑缺血小鼠组织病理学检查(HE染色)另取(l)(2)(3)(5)(6)(7)(8)组各6只小鼠，于缺血后再灌注72h取脑，投入10°/。曱醛溶液中固定24h以上，常规脱水，石蜡包埋，冠状切片，片厚4jam,行苏木精-伊红(Ematoxylinandeosin，HE)染色。结果显示，假手术组小鼠海马CA1区锥体细胞排列整齐、紧密，层次清楚，细胞核染色清晰，呈深蓝色，胞体呈圆形，胞质无明显嗜伊红改变。模型组小鼠出现不同程度神经元及神经胶质细胞变性坏死，数目减少，排列紊乱，死亡细胞结构不清，轮廓模糊，胞浆呈空泡样变，核破碎、固缩。海马CA1区大多数神经元胞体呈三角形，胞质嗜伊红浓染。部分标本脑区见较多的圓形或椭圓形、胞质丰富、嗜伊红色、核小、致密、偏于细胞一侧的"肥胖型星形胶质细胞(gemistocyticastrocyte)"增生。脑复康组与单一药物组海马CA1区部分神经元胞体呈三角形，胞质嗜伊红部分深染。复合药物组与模型组相比细胞排列规整，且细胞形态较完整，脑组织肿胀及星形胶质细胞增生较轻。海马CA1区少量神经元胞质嗜伊红浓染，表10药物对全脑缺血小鼠血管通透性的影响(；±s)组别(n=10)2.00±0.648.84±1.79胞体呈三角形，仅少数神经元胞体椭圓，胞质无明显嗜伊红改变。提示复合药物低剂量组减少脑缺血小鼠CA1区的神经元死亡，对脑缺血有保护作用。药效学实施例8:对短暂全脑缺血小鼠GFAP免疫组化染色上述每组6只小鼠，于缺血后再灌注72h取脑，石蜡包埋切片后，使用gfap(神经胶质原纤维酸性蛋白)抗体，检测各组海马CA1区、皮层区含gfap阳性细胞的数目。结果显示，假手术组小鼠海马CA1区和皮层gfap在星形胶质细胞中表达不明显，且树突较细。模型组的星形胶质细胞呈棕黄色或褐色，数量增多，染色较深，胞体较大，突起粗大。单一药物组和复合药物组的gfap阳性细胞数介于假手术和模型组之间，其中复合药物组比单一药物组数目更少。提示复合药物低剂量组抑制胶质细胞的激活，对脑缺血有保护作用。权利要求1、一种防治缺血性脑血管疾病的药物复合物，其含有活性成份和载体，所述活性成份由重量比为100∶0.5～10的阿魏酸或其在药学上可接受的盐与冰片组成，剂型为适合临床应用的剂型。2、根据权利要求1所述的一种防治缺血性脑血管疾病的药物组合物，其特征在于阿魏酸的药学上可接受的盐选自钠盐、钾盐、铵盐、4丐盐、镁盐、铁盐及其他可接受的药用盐。3、才艮据权利要求1所述的一种防治缺血性脑血管疾病的药物组合物，其特征在于冰片是天然冰片。4、根据权利要求1所述的一种防治缺血性脑血管疾病的药物组合物，其特征在于冰片是人工冰片。5、根据权利要求1所述的一种防治缺血性脑血管疾病的药物组合物，其特征在于所述阿魏酸或其在药学上可接受的盐与水片的重量比为100:1~5。6、根据权利要求1或5所述的一种防治缺血性脑血管疾病的药物组合物，其特征在于所述阿魏酸或其在药学上可接受的盐与冰片的重量比为100:2。7、一种防治缺血性脑血管疾病的药物组合物的制备方法，包括如下步骤(1)按重量比分别称取阿魏酸钠或阿魏酸和冰片，分别研细，过80目筛，取3%乙醇溶解水片，加入阿魏酸盐或阿魏酸，混合均匀得原料；(2)按各种制剂的常规工艺制备成相应的剂型。全文摘要本发明提供一种防治缺血性脑血管疾病的药物组合物及其制备方法，其含有活性成份和载体，所述活性成份由重量比为100∶0.5～10的阿魏酸或其在药学上可接受的盐与冰片组成，可以制备为适于临床应用的药物剂型包括颗粒、胶囊剂、片剂、滴丸剂、栓剂、注射剂。本发明揭示了阿魏酸或其盐与冰片的组合物对短暂性全脑缺血的神经保护作用，两药联合发挥了两药的协同作用，与单一阿魏酸相比，吸收半衰期延长，达峰时间更快，而且降低了阿魏酸的药量，增加了药物的安全性。本发明作为防治缺脑血性脑血管疾病的药物具有药理作用协同互补、起效快、有效时间延长、服用剂量小、疗效确切的优点。文档编号A61K31/185GK101181256SQ20071003177公开日2008年5月21日申请日期2007年11月29日优先权日2007年11月29日发明者刘培庆,姚美村,林竹贞,皮荣标申请人:中山大学