专利名称：二氢杨梅素在制备药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及二氢杨梅素在制备药物中的应用，具体用于制备治疗口腔溃疡、口腔炎症和胃溃疡、胃炎的药物。同时涉及从显齿蛇葡萄中制备二氢杨梅素的方法。
背景技术：
从葡萄科植物中提取二氢杨梅素的方法已经99119123.4号专利公开，但该专利没有公开低温处理重结晶制备二氢杨梅素的方法；其他文献公开了二氢杨梅素有降血糖(参见覃洁萍、中药与天然药物2001；18(5)351)、护肝(参见钟正贤、周桂芬、陈学芬，等。中国中医药科技2002；9(3)155)和钙拮抗(参见周雪仙、周天达、谭春生.现代应用药学1997；14(2)8)作用；没有专利或文献公开二氢杨梅素制备成药物治疗口腔溃疡、口腔炎症、胃溃疡、十二指肠溃疡、急性或慢性咽炎、盆腔炎和/或附件炎、慢性胃炎和/或肠炎。
二氢杨梅素的分子式为C15H12O8，结构式为
发明内容
本发明的目的在于提供二氢杨梅素在制备药物中的应用。
本发明的药物是含二氢杨梅素的制剂，可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂或注射剂。
本发明的药物是指含二氢杨梅素单一成分的制剂或与其他成分配伍的组合制剂。
本发明所述的组合制剂是指含二氢杨梅素之外，或还含有其他动、植物(包括中药)提取物，或还含有其他中药药粉。
本发明的药物，是指二氢杨梅素或含二氢杨梅素的组合物，可与药学上能接受的载体混合，用于制备治疗口腔溃疡、口腔炎症和胃溃疡、胃炎的药物。
本发明的另一个目的是低温处理重结晶法从显齿蛇葡萄中制备二氢杨梅素，处理过程与公开的方法有明显区别，而且令人意外地发现用这种方法获得了高纯度的二氢杨梅素。关键步骤为用显齿蛇葡萄干燥嫩茎叶的常规水提浓缩液在4℃及其以下放置12至48小时，重结晶1次或多次，干燥；加乙醇、活性炭，加热回流，抽滤，滤液回收乙醇，减压浓缩，室温放置，析出结晶后，抽滤，干燥；重结晶1次或多次，得到含量达95％以上的二氢杨梅素。
加入合适的辅料和/或其他成分，压制成片剂，或制成胶囊剂，或制成颗粒剂，或制成注射剂。
为了更好地理解本发明的实质，通过实施例详细说明。但是应该理解这些实施例只是说明本发明，而不是在任何方面限制本发明的范围。
具体实施例方式 实施例1从显齿蛇葡萄制备二氢杨梅素 取10kg显齿蛇葡萄干燥嫩茎叶，加入100kg水，温浸0.5-1小时，压滤；药渣再加入80kg水，温浸0.5-1小时，压滤；合并滤液，减压浓缩至相对密度1.05-1.08(60-70℃热测)，4℃以下放置24小时，抽滤、收集固体部分，干燥、研细，得到粗总黄酮1.6kg； 取1.5kg粗总黄酮，加入15000ml 95％乙醇、300 g活性炭，加热回流0.5小时，抽滤，滤液回收乙醇，减压浓缩至3500ml左右，室温放置，待析出结晶后，抽滤，干燥，得到粗结晶1.18kg； 取1.0kg粗结晶，加入10000ml 95％乙醇、200g活性炭，加热回流0.5小时，抽滤，滤液回收乙醇，减压浓缩至2500ml左右，室温放置，待析出结晶后，抽滤，干燥，得到精制结晶0.83kg； 取精制结晶样品，以二氢杨梅素为对照品，HPLC法测定，样品中二氢杨梅素含量为96.8％。
实施例2二氢杨梅素对兔免疫性口腔粘摸溃疡的作用 取家兔30只，体重1.77±0.15kg，雌雄兼用，按性别体重分层随机分为3组，背部脊柱两侧脱毛，酒精消毒，每只动物于脱毛处取20个点，第1组注射弗氏佐剂，其他2组注射免疫佐剂，每点0.05ml，每2周1次，共5次。于第5次免疫注射后第7天，口腔给药，第1、2组给蒸馏水，第3组给二氢杨梅素250mg/kg，给药体积为2.0ml/kg，1日内分4次给予，间隔3小时，共给药4天。试验期间每天观察动物口腔粘膜发生溃疡的情况；末次给药后第2天，耳缘静脉取血，分离血清，检测血清抗口腔粘膜抗体滴度；然后耳缘静脉注入空气处死动物，取口腔粘膜发生溃疡部位的组织，用4％甲醛溶液固定做病理学检查。
注射弗氏佐剂的动物，给蒸馏水前后均没有观察到口腔粘膜溃疡。注射免疫佐剂4次后，80％以上的动物数量不一、程度不同地出现口腔粘膜溃疡，溃疡多发下唇粘膜；给药前，各组动物发生口腔粘膜溃疡的情况无明显差异。给二氢杨梅素250mg/kg后口腔粘膜出现溃疡的动物数明显减少(表1)。
表1二氢杨梅素对家兔口腔粘膜溃疡的影响(
，n＝10) 与弗氏佐剂对照比较+++p＜0.01；与免疫佐剂对照比较*p＞0.05，**p＜0.05 弗氏佐剂对照组家兔血清抗口腔粘膜抗体滴度为0.404-0.52。免疫佐剂对照组家兔血清抗口腔粘膜抗体滴度明显升高，二氢杨梅素250mg/kg能明显降低家兔血清抗口腔粘膜抗体滴度(表2)。
表2二氢杨梅素对血清中抗口腔粘膜抗体滴度值的影响(
，n＝10) 与弗氏佐剂对照比较+++p＜0.01；与免疫佐剂对照比较**p＜0.05 组织病理学镜检显示，弗氏佐剂对照组家兔口腔粘膜上皮未见溃疡，组织结构清晰。免疫佐剂对照组全部家兔口腔粘膜上皮出现坏死脱落，形成溃疡，溃疡底部及上皮下有小血管扩张充血，溃疡底部、溃疡表面和小血管周有中性粒细胞、淋巴细胞及单核细胞浸润。给二氢杨梅素的家兔，部分动物口腔粘膜可见上皮形成浅表溃疡，溃疡表面被覆少量中性白细胞，溃疡上皮下偶见小血管扩张和中性粒细胞、淋巴细胞或单核细胞浸润。
实施例3二氢杨梅素对兔表皮葡萄球菌所致口腔溃疡的作用 取新西兰兔20只，体重1.83±0.17kg，雌雄兼用，按体重分层随机分为2组，分别按0.03ml/只将15亿CFU/ml的表皮葡萄球菌菌液注射到新西兰兔口腔颊粘膜下，24小时后形成脓疮且自行破溃成溃疡。自溃疡形成开始，2组分别给蒸馏水2.0ml/kg、二氢杨梅素250mg/kg，口腔给药，体积均为2.0ml/kg，1日内分4次给予，间隔3小时，共给药3天。给药前和给药后第3天，分别用分规测量溃疡直径和溃疡周围红晕大小，判断炎症指数；从第3天开始，每天观察2次，间隔12小时，记录溃疡愈合时间。
与蒸馏水比较，二氢杨梅素250 mg/kg明显减少表皮葡萄球菌所致兔口腔疡直径(表3)。
表3.二氢杨梅素对表皮葡萄球菌所致兔口腔溃疡直径的影响(
，n＝10) 与蒸馏水比较*P＞0.05，***P＜0.01 与蒸馏水比较，二氢杨梅素250mg/kg明显减轻表皮葡萄球菌所致兔口腔溃疡炎症指数(表4)。
表4.二氢杨梅素对表皮葡萄球菌所致兔口腔溃疡炎症指数的影响(
，n＝10) 与蒸馏水比较*P＞0.05，***P＜0.01 与蒸馏水比较，二氢杨梅素250mg/kg明显缩短表皮葡萄球菌所致兔口腔溃疡的愈合时间(表5)。
表5.二氢杨梅素对表皮葡萄球菌所致兔口腔溃疡愈合时间的影响(
，n＝10) 与蒸馏水比较**P＜0.05 实施例4二氢杨梅素对大鼠幽门结扎型胃溃疡的作用 取SD大鼠20只，体重200±11g，雌雄各半，随机分为2组，分别给蒸馏水10ml/kg和二氢杨梅素0.5g/kg灌胃7天，第5天开始禁食不禁水，末次给药后3小时，乙醚麻醉，腹中线打开腹腔，结扎幽门后缝合腹腔，禁食禁水，18小时后处死，结扎贲门取出全胃，10％福尔马林固定15min后沿胃大弯剪开，用水冲洗胃内容物后，观察前胃部粘膜面溃疡发生的情况，用显微镜测量溃疡面积，判断溃疡指数(11-12mm2；213-25mm2；326-37mm2；438-50mm2；5≥50mm2或穿孔)，计算溃疡抑制百分率。
与蒸馏水比较，二氢杨梅素能显著降低溃疡指数，明显抑制胃溃疡的发生(表6)。
表6.二氢杨梅素对大鼠幽门结扎型胃溃疡的影响(
，n＝10) 注与蒸馏水比较，***p＜0.01 实施例5二氢杨梅素对大鼠角叉菜胶足跖肿胀性炎症的作用 取雄性大鼠20只，体重143±9g，按体重分层随机分为2组，分别给蒸馏水5ml/kg、二氢杨梅素0.50g/kg灌胃，体积为5ml/kg，每日1次，共给药3天。末次给药同时，分别按0.1ml/只注射1％角叉菜胶至大鼠右后足跖致炎。致炎前和致炎后2、4、6小时分别用游标卡尺测量右后足跖厚度，计算肿胀率。
与蒸馏水比较，二氢杨梅素0.50g/kg能明显降低大鼠角叉菜胶足跖肿胀率(表7)。
表7.二氢杨梅素对大鼠角叉菜胶足跖肿胀的影响(
，n＝10) 与蒸馏水比较*p＞0.05，**p＜0.05，***p＜0.01 实施例6二氢杨梅素对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 取雄性小鼠20只，体重20.3±1.1g，按体重分层随机分为2组，分别给蒸馏水10ml/kg、二氢杨梅素0.70g/kg灌胃，体积为10ml/kg，每日1次，共给药3天。末次给药1小时后，每鼠尾静脉注射0.5％依文思兰5ml/kg，5分钟后腹腔注射0.7％醋酸10ml/kg，再过30分钟后颈椎脱臼处死动物，用8.0ml生理盐水分4次冲洗腹腔，收集冲冼液稀释至10ml，加0.1N NaOH 0.1ml，放置30分钟后用7230型分光光度计于590nm波长处测光密度，从依文思兰标准曲线上读冲洗液中依文思兰含量。
与蒸馏水比较，二氢杨梅素0.70g/kg明显降低小鼠腹腔毛细血管通透性(表8)。
表8.二氢杨梅素对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响(
，n＝10) 与蒸馏水比较**p＜0.0权利要求
1.二氢杨梅素在制备治疗胃溃疡和胃炎的药物中的用途。
全文摘要
本发明公开了二氢杨梅素在制备治疗胃溃疡和胃炎的药物中的用途。
文档编号A61P1/00GK101081221SQ200710106278
公开日2007年12月5日 申请日期2003年10月30日 优先权日2003年10月30日
发明者陈立峰, 蔡光先, 王实强 申请人:湖南省中医药研究院