专利名称：：方法和组合物的制作方法
技术领域：
：本发明总涉及新的葡聚糖基质及其制备方法。更具体而言，本发明涉及基于所述基质的制品和组合物以及涉及这些制品和组合物用于生物医学应用的用途。技术与新药开发相比，药物递送产品通常需要更少的开发时间和费用，尤其是当活性成分先前已明确赋予了安全性和毒性的特征时。此外，尽管面临药学性质的挑战，药物递送技术可用于新化学实体(NCE),使之能够按配方制得。(M.V.Chaubal,"ApplicationofDrugDeliveryTechnologiesinLeadCandidateSelectionandOptimization",DrugDiscoveryToday,9,(14),603國609,2004)。药物的控制释放和靶向递送是药物递送技术所基于的两个主要概念。成功认识这些概念可减少副作用，提高许多药物的生物利用度和稳定性，以及增强患者依从性和防止给药错误。口服途径为最方便给药的方法，因此稍微改善口服药物递送技术就可以增强患者依从性和药物的生物利用度。当前的药物递送技术主要集中于延迟释放，即药物剂型到达GIT的特定区域例如上段肠或结肠才释放。例如，已经实现多年的通过应用pH-敏感包衣定位递送药物至上段肠。至于口服药物递送，明胶胶嚢是最普遍的，但是当这些胶嚢包有肠溶聚合物时，明胶胶嚢壳的理化性质面临显著的挑战。与明胶胶嚢相比HPMC胶嚢具有一些优势，美国专利7094425提供具有适当包衣的HPMC胶嚢,致使药物在小肠或结肠中从该胶嚢中释放。然而，对于新材料依然存在急迫的需要，以使该领域获得更多的进步。基于生物降解的生物相容的聚合物的注射原位成型装置(Injectableinsituformingdevices)(ISFDs),作为控释药物递送系统是非常有吸引力的。它们与所有类型的组织和药物为潜在相容的，可提供全身或局部的药物递送，易于给药，简化又便宜制备。与基于微球的注射药物递送系统相似，ISFDs避免了需要植入药物递送系统的切口。然而，微球的制造和储藏存在许多问题。并且，一旦植入体内，由于它们的微粒本性，这些微球趋向于聚集并移行，这使得它们的行为难于预测。此外，如果发生一些并发症，从体内除去微球而不进行广泛的外科手术更是相当困难或不可能的。目前，蛋白质和肽类正变成普通药物，许多重组蛋白质处于临床试验中或者已经得到管理当局的批准。在当前的治疗中，对于大多数蛋白质和肽类，频繁的注射或输注疗法是规定的剂量方案，且由于蛋白质的短血浆半衰期和不稳定性，对于适当的递药系统，存在急迫的需要。ISFDs理论上是此种类型药物的优秀递药系统。尽管非常努力地瞄准发展技术以避免在ISFD产生期间蛋白质的不稳定性问题，但该领域的进步非常緩慢，主要的理由可能是多数蛋白质的三维结构太过敏感而经受不住所用的制备条件。例如，科学文献中含有基于降解的聚(乳酸-乙醇酸共聚物)(PLGA)的植入剂制备中的稳定性问题的大量描述，是由于暴露于有机溶剂和酸性环境，这造成PLGA基质的降解。最近已经显示在PLGA微球中的pH值降至1.5,可以完全充分地使多数在治疗上有用的蛋白质变性或损害(Fu等，VisualEvidenceofAcidicEnvironmentWithinDegradingPoly(lactic國co-glycolicacid)(PLGA)Microspheres,PharmaceuticalResearch,Vol.17,No.1,2000,100-106)。对于PLGA植入剂，由于酸性降解物继后更多地妨碍扩散以及激烈的自催化降解反应的事实，其pH值可预期会进一步降低。PLGA生物降解的本性使得生成的降解物通过其酸性基团的性能，能够催化更多的水解，这可导致强烈的生物降解和高速的生物降解，因而在注射该制剂后数周或数月导致微粒内部的pH值基本上降低。已经描述了许多努力，以试图解决生物学活性物质暴露给PLGA基质生物降解期间的化学酸性环境和制造过程中有机溶剂所引起的上述问题。已经尝试了将作为基质的PLGA替换为产生化学中性降解物例如氨基酸和PEG的聚合物(US专利申请20040077780)。ISFD的一些优秀综述为"Newbiodegradablepolymersforinjectabledrugdeliverysystems"(B.Jeong,Y.K.Choi,Y.H.Bae,G.Zentner,S.W.Kim,JournalofControlledRelease62(1999)109-114)"Insituformingparenteraldrugdeliverysystems:anoverview"(CB.Packhaeuser,J.Schnieders,CG.Oster,T.Kissel，EuropeanJournalofPharmaceuticsandBiopharmaceutics58(2004)445-455),"Insitu-forminghydrogels—reviewoftemperature-sensitivesystems.Reviewarticle"(EveRuel國Gariepy,Jean-ChristopheLeroux,EuropeanJournalofPharmaceuticsandBiopharmaceutics58(2004)409-426)。注射系统的原位胶凝化可以基于由温度、pH、离子或溶剂组分变化所驱使的特定聚合物分子締合的变化。许多聚合物(其可潜在用于ISFD)为新化学实体(NCE)且由于许多理由不适合肠胃外给药，尤其是重复性肠胃外给药。所有理由中最重要的是聚合物基质对哺乳动物组织的低生物相容性。根据上述，对生物降解性和生物相容性材料显然出现了需要，所述材料在原位凝胶化且可用于ISFD生产的方法中，以控制的、持续的或延迟的释放生物学活性物质。这样的生物降解性和生物相容性材料应当是在使生物学活性物质(即使为敏感的生物学活性物质)保持其生物活性条件下，在允许胃肠外施用高载量制剂的方法中，允许所述活性物质陷入其中的材料。生物降解性和生物相容性材料也应当是允许生产和应用的制剂基本上完全生物降解和生物相容的材料。发明概述本发明的一个目的是提供用于ISFD的生物降解的生物相容的聚合物基质，能够包含生物学活性物质，以使在制造过程中以及施用后基本上维持所述物质的生物活性。本发明的另一个目的是提供用于旨在靶向递送至GIT特异位点的胶嚢的基质。本发明的再一个目的是提供方法和组合物，用于注射的控释贮库系统，软组织增大(softtissueaugmentation)的》真充剂，和许多类型的医学装置。因此，在本发明的一个实施方案中，通过制备包含分子量1.0-100内，其中植入物在哺乳动物体内的原位生成，而提供固体或半固体植入物。在本发明的另一个实施方案中，提供制备用于在哺乳动物体内控制释放生物学活性物质(BAS)的组合物的方法，包括提供包含分子量1.0-100kDa的葡聚糖高浓度水溶液的液体组合物的步骤，任选将此液体组合物与生物学上的活性剂混合和将混合物注入哺乳动物体内的步骤;其中液体组合物在体内固化形成(半)固体植入物。根据本发明所用的术语"半固体植入物"是指植入物具有固体和液体之间的刚性和粘度的中间物。在一个实施方案中，葡聚糖在液体组合物中存在的浓度为50-75%wt,1尤选为60-70%wt。在植入物的一个实施方案中，葡聚糖的分子量可为1kDa至高达100kDa,例力n为l至70kDa。用于制备植入物的液体组合物优选是无菌的和无热原的。非常有利地，本发明的植入物为原位成型装置(ISFD),像这样，可以通过引入包含葡聚糖溶液和任选含有任何生物学活性物质的液体组合物在哺乳动物体内形成。引入可以例如通过输注或凭借皮下注射器进行，例如凭借25-号(gauge)或更细的针如22-号的针。在一个实施方案中，液体组合物还包含溶于或混悬其中的生物学活性物质。在液体组合物中可适当存在的生物学活性物质按重量计浓度为0.01至25%。在一个实施方案中，此植入物可考虑含有一种以上的生物学活性物质。在一个实施方案中，如果植入物用作软组织增大，在此液体组合物中可考虑没有生物学活性物质存在。可例如以微粉或以与葡聚糖水溶液相容溶剂中的溶液形式，将生物学活性物质加至液体组合物中。可以在加入葡聚糖前将所述活性物质掺入用于溶解葡聚糖的水中。为了本发明的目的，除非另有指示，术语"生物学活性物质"是指当给哺乳动物受试者施用时具有预期生物活性或效果的物质。可考虑将其选自例如蛋白质、多肽、肽、有机分子、寡核苷酸或聚核苷酸、或任何其它生物学活性分子。例如，生物学活性物质可选自生长因子、胰岛素、促红细胞生成素、干扰素a、干扰素P、干扰素y、凝血因子v-xiii、蛋白质C、高血糖素样肽1或2、C-肽、疫苗、激素例如性激素、表皮生长激素、人生长激素、LHRH-类似物、巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞集落刺激因子、瘦素、白细胞介素、锌指核酸酶或其任何一种的类似物或衍生物、和有机分子(例如甾族化合物、镇痛药、局部麻醉药、抗生素、化学治疗剂、免疫抑制剂、抗炎剂、抗增殖剂、抗有丝分裂剂、血管生成剂、抗凝血药)、寡核苷酸或聚核苷酸(例如同源重组寡核苷酸，包含编码蛋白质、多肽、肽的基因质粒，siRNA)、和任何其它生物学上的活性分子。在本发明的一个实施方案中，应用本领域技术人员众所周知的冷冻干燥技术，将用于形成植入物的液体组合物冷冻干燥。然后可将冷冻干燥的组合物方便地贮藏至应用，应用时将其再与水结合形成初始水浓度，然后将其引入哺乳动物体内。在本发明的另一个实施方案中，提供制备用于生物医学应用的组合物的方法，包括以下步骤(a)提供包含分子量为1-100kDa的葡聚糖水溶液的液体组合物；和(b)使此液体组合物固化;其中水在步骤(b)期间逐渐地从此液体组合物中消除。在本发明方法的一个实施方案中，葡聚糖的分子量可为1kDa至100kDa,例如为1kDa至70kDa。在本方法的一个实施方案中，在液体组合物中存在的葡聚糖的初始浓度可考虑为25-75%wt,例如为50-75%wt的浓度。本发明用于制备生物医学装置的方法，包括从此液体组合物中除去水，且这可以通过例如蒸发水或通过萃取水而实现。可在0~IO(TC例如05(TC的温度，诸如10—40。C例如20~37°C的温度进行蒸发。合适的蒸发速度为每小时按步骤(a)液体组合物的重量计0.1-75,例如1~50,或5~20%。在一个实施方案中，在步骤(b)中，通过向按重量计l份步骤(a)液体组合物中加入按重量计l-10份的乙醇、液体聚乙二醇(PEG)、或液体聚丙二醇(PPG)萃取，从此液体组合物中除去水。在制备用于生物医学应用的组合物方法的一个实施方案中，液体组合物还包含如本文以上所定义的生物学活性物质，它可以以溶液或分散液(混悬液或乳液)存在。在液体组合物中，可适当存在的生物学活性物质按重量计浓度为0.01至25%。在一个实施方案中，液体组合物可考虑含有一种以上的生物学活性物质。在一个实施方案中，如果组合物用作软组织增大的填充剂，在此液体组合物中可考虑没有生物学活性物质存在。例如可以以农史粉或以与葡聚糖水溶液相容溶剂中的溶液形式，加入生物学活性物质。可以在加入葡聚糖前将所述活性物质掺入水中，以得到本发明步骤(b)中应用的液体组合物。在一个实施方案中，因此提供了制备适合在哺乳动物体内控制释放生物学活性物质的组合物的方法，包括以下步骤(a)提供包含至少一种生物学活性物质和分子量1-100kDa的葡聚糖水溶液的液体组合物；和(b)使此液体组合物固化;其中水在步骤(b)期间逐渐地从此液体组合物中消除。此外，在本发明的一个实施方案中，提供用于生物医学应用的制品，例如硬药用胶嚢，硬医学装置例如板(plate)、螺丝钉(screw)或针(pin)或石更医学，￡体。最后，应当指出至于本发明的目的，哺乳动物可以为人或动物，例如农场动物如牛、猪、马、或羊，家养动物如狗或猫，实验动物如大鼠、小鼠或兔子等。本发明此外的实施方案如下文和权利要求中所定义。附图简述图l分别为实施例4和实施例5条件下表示胰岛素和睾酮释放的图形。图2为图形表示健康受试者l(BMI24)在第一天(D1)施用安慰剂组合物(2个各自含有250mg的葡聚糖40kDa的标准2存胶嚢)，在第二天(D2)施用根据本发明的包含胰岛素的组合物(2个各自含有250mg的葡聚糖基质和7.5IU人重组胰岛素的标准2#胶嚢)，和在第八天(D8)施用食物组合物和在第九天(D9)施用根据本发明包含胰岛素的组合物(4个各自含有250mg的葡聚糖基质和7.5IU人重组胰岛素的标准2#胶嚢)后分别测量的血糖浓度(mmol/L)变化。第一天(Dl)-禁食状态180分钟，第三天(D3)-在第30分钟口服15IU,第五天(D5)-在第30分钟进食，第七天(D7)-在第30分钟口服30IU和在第30分钟进食。图3为图形表示健康受试者2(BMI29)在第一天(D1)施用安慰剂组合物(2个各自含有250mg的葡聚糖40kDa的标准2弁胶嚢)，在第二天(D2)施用根据本发明的包含胰岛素的组合物(2个各自含有250mg的葡聚糖基质和7.5IU人重组胰岛素的标准2#胶嚢)，和在第八天(D8)施用食物组合物和在第九天(D9)施用根据本发明包含胰岛素的组合物(4个各自含有250mg的葡聚糖基质和7.5IU人重组胰岛素的标准2#胶嚢)后分别测量的血糖浓度(mmol/L)变化。第一天(Dl)-禁食状态180分钟，第三天(D3)-在第30分钟口服15IU,第五天(D5)-在第30分钟进食，第七天(D7)-在第30分钟口服30IU和在笫30分钟进食。发明详述本发明的主要目的是提供用于ISFD的聚合物基质，其能够包含掺入其中的生物学活性物质，以使在制造过程中以及施用后基本上维持所述物质的生物活性，且胶嚢基质旨在粑向递送至GIT特异位点。葡聚糖为适合的，甚至也许为理想的，基质材料，因为它不需要用有机溶剂溶解，且可降解为中性物质，最后葡萄糖可代谢成水和二氧化碳并经由呼吸和尿从体内排除。非常有利地，葡聚糖为众所周知的材料，且所有分子量的葡聚糖在胃肠道经位于小肠粘膜上的酶酶法降解，并据报道没有毒性(例如参见EUROPEANCOMMISSIONHEALTH&CONSUMERPROTECTIONDIRECTORATE-GENERAL,SCIENTIFICCOMMITTEEONFOODCS/NF/DOS/7/ADD3"FINALOPINIONOFTHESCIENTIFICCOMMITTEEONFOODONADEXTRANPREPARATION,PRODUCEDUSINGLEUCONOSTOCMESENTEROIDES,SACCHAROMYCESCEREVISIAE和LACTOBACILLUSSpp，ASANOVELFOODINGREDIENTINBAKERYPRODUCTS",2000年10月18日)。药学上可接受葡聚糖的实例为静脉内用作血浆扩充剂的分子量70kDa(Macrodex⑧)和40kDa(Rheomacrodex⑧)的那些葡聚糖。临床级别的葡聚糖是商业可得到的，且具有制备胃肠外给药制剂可接受的纯度(http:〃www.dextran.net/buydextran.html)。它们能够形成足够稳定的足够高浓度的水溶液，能够在允许保持所述物质生物活性的条件下与生物学活性物质混合。包括葡聚糖的碳水化合物聚合物具有玻璃转化温度，所述温度高于所有相似分子量的合成聚合物的玻璃转化温度。一种解释无定形碳水化合物的高玻璃转化温度的定性描述为，在干燥状态下碳水化合物分子之间的分子间氬键生成导致更大的分子实体生成,而水使碳水化合物链之间生成的氬键断裂。根据氢键合的重要作用，经由涉及氢键生成和断裂的复杂机制，进行氢键网络生成，且基本上依赖于两种参数-温度和水活度。利用这些参数，由氢键生成的数量及其特定的空间分布，理论上可获得不同类型的以碳水化合物为基础的聚合物基质。发明人完成的几种实验发现支持了葡聚糖可用作口服靶向递药系统(例如胶嚢)和ISFDs的聚合物基质的假说。本发明人已说明了高浓度的葡聚糖水溶液可轻易地获得。例如，2g分子量40kDa葡聚糖与lg水在注射器内混合可提供不是非常粘稠的溶液，所述溶液可通过18-22号针给药。置于两个表面(玻璃或金属)之间，葡聚糖溶液提供薄的不透明的薄膜，此薄膜在室温大约8小时后与所述表面不相互粘连。另外緩慢的干燥可提供具有独特性质的柔韧薄膜。当应用覆盖有这种溶液的玻璃或金属棒时，可获得标准胶嚢主体和帽形式的薄膜。溶出度比较试验显示基于葡聚糖基质的胶嚢和标准明胶胶嚢在水、PBS(pH7.4)和0.1NHC1中具有非常不同的溶出速率。例如，在37。C和1,000rpm(磁搅拌器)的50ml水、PBS(pH7.4)或0.1NHCl中，明月交月交囊全部溶出的时间为几秒钟，葡聚糖胶嚢全部溶出的时间为大约1小时。然而，在PBS中加入葡聚糖酶可将溶出时间减少到几分钟。将这些实验与上述提及的所有分子量的葡聚糖在胃肠道经位于小肠粘膜上的酶酶法降解的事实一起考虑，得到对小肠和结肠靶向递药的不是基于pH敏感包衣的新策略。有趣地，应在此指出有许多科学出版物指示葡聚糖只在结肠经细菌的酶降解(参见，例如，EuropeanPatentApplicationEP1184032Al)。然而，自1963年来肠内存在葡聚糖酶是众所周知的事实(参见DahlqvistA."RatIntestinaldextranase.Localizationandrelationtotheothercarbohydrasesofthedigestivetract",Biochem.J.(1963)86,72)。在启动氬键网形成过程后，从高浓度葡聚糖水溶液中緩慢消除水是影响最终产物性质(例如胶嚢壳的溶解性)技术的非常重要的方面。在这种水消除之外，可出现晶状葡聚糖粒子的生成(尤其为低分子量葡聚糖)，并将破坏均匀系统的完整性。至于尝试应用晶状葡聚糖粒子的药物递送描述于文献中，例如在美国专利4,713,249、欧洲专利申请EP1184032Al、美国专利申i青20040234615中。然而，在这些出版物中，没有提示具有均匀结构的制品，例如可以获得基于葡聚糖基质的胶嚢壳和植入物或专门装置。然而根据本发明，具有优秀的生物相容性和机械强度的基于葡聚糖的整体植入物可容易制成用于整形外科创伤固定的板、螺丝钉和针的形式以及用于牙科再生手术的生物可降解性薄膜。整形外科中的生物可降解的植入物不同于金属植入物，它们不要求第二次外科手术除去装置，但它们并没有#皮普遍采用，这可能是由于高水平的局部异物反应。现有技术最普及的基于PLA或PGA的植入物的生物降解过程从聚合物链经水解断裂为更小的碎片开始。植入物的分子量首先减少，植入物的机械强度减少，随后发生机械碎裂。然后通过可溶降解物的释放、巨噬细胞的吞噬和胞内的降解，出现植入物的吸收。组织对聚乙醇酸交酯制成的固定植入物的反应已被超出15个临床研究中所报道，已经记录到最高达47%的组织不良反应率(AmbroseCG,ClantonTO:Bioabsorbableimplants:Reviewofclinicalexperienceinorthopedicsurgery.AnnalsofBiomedicalEngineering32:171-177,2004)。可以指出，本申请所用的术语"植入物"是指植入哺乳动物体内的任何外来物体或组合物，例如硬医学装置例如板、螺丝钉或针，或固体或半固体异物，例如用于软组织增大的植入物。可以补充，术语"生物可降解，，是指基于葡聚糖的ISFD在肠胃外施用后溶入体内且葡聚糖分子可通过肾排泄或被生物体最终代谢为水和二氧化碳。在氩键形成均匀网的过程中，以最佳的速度经水蒸发或水萃取例如用液体聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG)、和乙醇萃取葡聚糖溶液的水的方法，可实现从浓缩的葡聚糖溶液中除去水。高浓度的葡聚糖溶液可分散在液体低分子量的PEG中，在固化后，可以获得接近于整体的葡聚糖微球。这些微球可用作可注射的填充剂，用作控释储库，或用作粑向递送的口服制剂。与葡聚糖混合的活性物质可以为溶解形式(例如在緩冲液中)，或为固体，无定形或晶形的形式，且混合可以在适当的温度下实现，所述温度一般为0"C至45。C,优选为室温(2(TC)。将生物学活性物质加入葡聚糖溶液中是可行的，或反之亦然。由于适合本系统应用的生物学活性物质如蛋白质通常为大分子，当溶解的大分子溶液与葡聚糖混合时，形成乳剂是可行的，其中大分子通常代表内相，或沉淀物。这是完全可接受的，条件是生物学活性物质保留其活性或没有可感知的活性降低。水不溶物可以以4分末、乳液或与水相容的溶剂例如乙醇中的溶液形式加入。然后通过搅拌制得均匀的溶液、乳液或混悬液，所述搅拌可应用本领域众所周知的适当技术进行。冷冻干燥经常为优选的干燥方法，由于正确设计地，它对于所包装的生物学活性物质如蛋白质是尤其温和的。将其应用于包含BAS的高浓度葡聚糖溶液，可提供在室温长期贮藏的制剂，且在应用前容易再与水结合形成初始水浓度。本发明人用葡聚糖高浓度水溶液进行了实验，所述溶液初始没有非常高的粘性且可通过注入哺乳动物体内施用。这些实-睑揭示葡聚糖溶液可以在体内生理条件下固化-这是先前公共区域没有描述过的事实。令人惊讶地，发现了当高浓度葡聚糖水溶液例如67%葡聚糖40kDa的水溶液置于水介质例如PBS中，或注入哺乳动物内，在暴露给水性环境后相对短的时间期限内出现凝胶形成，可使生物学活性物质(BAS)从所形成的植入物中得到释放出来。此外，所发现的非常重要的实验是在广范围的不同分子量和溶解度的药物中，陷入所形成植入物中的BAS释放率相同于葡聚糖基质生物降解的速率(主要为溶出作用)。本发明通过以下实施例进一步举例说明，这不应当解释为对本发明范围的限制。实施例1步骤1:在15ml实验管中将1g蒸馏水与3g葡聚糖(lkDa,Pharmacosmos)混合以获得按重量计大约75%溶液。将混合物在6mmHg下抽真空以除去气泡并在2,000rpm离心5分钟。得到澄清的溶液。步骤2:准备3个含有1ml葡聚糖溶液的15ml实验管，向每个管中加入2ml水，将它们置于37。C、30卬m的混合器中。每30分钟取1ml緩冲剂，加入lml新鲜的水。在水蒸发后重量测定法分析緩冲剂样品的基质浓度。在7天期间，溶出度显示出接近于零级速率，且大约50%基质团块溶解。实施例2步骤1:在15ml实验管中将1gpH7.4PBS与2g葡聚糖(40kDa,Pharmacosmos)混合以获得按重量计大约67%溶液。将混合物在6mmHg下抽真空以除去气泡并在2,000rpm离心5分钟，得到澄清的溶液。步骤2:准备3个含有1ml葡聚糖溶液的15ml实验管，向每个管中加入2mlpH7.4PBS,将它们置于37。C、30rpm的混合器中。每30分钟取lml緩冲剂，加入lml新鲜的緩沖剂。在水蒸发后重量测定法分析緩冲剂样品的基质浓度。在7天期间，溶出度显示出接近于零级速率，且大约50%基质团块溶解。实施例3步骤1:在15ml实验管中将1g蒸馏水与2g葡聚糖(40kDa,Pharmacosmos)混合以获得按重量计大约67%溶液。将混合物在6mmHg下抽真空以除去气泡并在2,000rpm离心5分钟。得到澄清的溶液。步骤2:准备3个含有lml葡聚糖溶液的15ml实验管，向每个管中加入2ml0.1NHCl，将它们置于37。C、30rpm的混合器中。每30分钟取lml介质，加入lml新鲜的酸。在水蒸发后重量测定法分析緩冲剂样品的基质浓度。在7天期间，溶出度显示出接近于零级速率，且大约50%基质团块溶解。实施例4步骤1:在15ml实验管中将1g蒸馏水与2g葡聚糖(40kDa,Pharmacosmos)混合以获得按重量计大约67%溶液。将混合物在6mmHg下抽真空以除去气泡并在2,000rpm离心5分钟。得到澄清的溶液。步骤2:将O.lml的胰岛素溶液(25IU)加入葡聚糖溶液中，并随其彻底地混合。向含有葡聚糖和胰岛素混合物的管中加入2ml緩冲剂，并将管置于37。C、30rpm的混合器中。每30分钟取1ml緩冲剂，加入1ml新鲜的緩冲剂。通过HPLC和ELISA方法分析緩冲剂样品的胰岛素浓度。在7天期间，显示胰岛素的释放接近于零级速率(图1)。实施例5步骤1:在15ml实^^管中将1g蒸馏水与2g葡聚糖(40kDa,Pharmacosmos)混合以获得大约67%wt.的溶液。将混合物在6mmHg下抽真空以除去气泡并在2,000rpm离心5分钟，得到澄清的溶液。步骤2:将0.1ml包含4mg睾酮的乙醇加入葡聚糖溶液中，并随其彻底地混合。向含有葡聚糖和睾酮混合物的管中加入2ml血清，并将管置于37。C、30rpm的混合器中。每30分钟取1ml血清，加入1ml新鲜的血清。通过专用ELISA方法分析緩冲剂样品的睾酮浓度。在7天期间，睾酮显示出零级释放(图1)。通过胃肠外注射(皮下和肌内地)以及作为对时间函数的组织学枱r查，已检查了基于ISFD葡聚糖的生物可降解性和生物相溶性。通过细口径针例如通常用于肌内应用的22号针，注射是可行的。基于葡聚糖的ISFD正常地乂人哺乳动物组织(小鼠)内消失而没有任何炎症和结締组织形成。实施例6步骤1:在15ml实验管中将1g蒸馏水与2g葡聚糖(40kDa,Pharmacosmos)混合以获得按重量计大约67%溶液。将混合物在6mmHg下抽真空以除去气泡并在2,000rpm离心5分钟，得到澄清的溶液。步骤2:通过体内应用小鼠为模型，研究了ISFD形成及其生物相溶性。将步骤1的溶液置于胰岛素注射器内并以肌内和皮下注射按每个动物20jul溶液的剂量给小鼠施用。追踪现察l、7、28、和49天，组织病理学证实ISFD的形成，它具有4艮好的耐受性7周后显示没有由ISFD引起的炎性反应和结締组织形成。因为组织中植入物溶出速率远远低于体外溶出试验的速率，获得的实验结果显示基于葡聚糖的ISFD可潜在地用作控制释放贮库系统以及用作软组织增大的填充剂。实施例7步骤1:在20ml注射器中将1.5ml胰岛素Actrapid(NovoNordisk)与3.5g葡聚糖(40kDa,Pharmacosmos)混合，以获得大约70%wt.的溶液。将溶液以标准存2硬明胶胶嚢(Capsulegel，USA)给药，每个胶嚢剂量为0.25g(7.5IU)。在室温12小时内水緩慢蒸发而不影响胶嚢形状和硬度。步骤2:在健康志愿受试者内研究了含胰岛素胶嚢的降血糖作用。包含250mg葡聚糖40kDa(Pharmacosmos)的胶嚢用作安慰剂。在大约12小时禁食过夜后的健康志愿受试者内进行实验，在实验过程中，测量血糖浓度(GlucometerOneTouch,BASICPlus,LIFESCAN,Johnson&Johnson)。给药治疗后3小时内不给受试者食物。研究过程中每个受试者在第一天(Day1)接受安慰剂(包含250mg葡聚糖40kDa的标准明胶胶嚢)。在第二天(Day2),所有受试者接受步骤1制备的两个胶嚢。在第八天(Day8)各个受试者服用碳水化合物范围的食物(carbohydratesreachfood),在第九天各自服用同样的食物并在食前60分钟服用步骤1制备的四个胶嚢。以时间间隔(每隔15分钟)抽取血样以测定血浆葡萄糖浓度(mmol/L)(图2和3)。本实验获得的数据显示这些胶嚢在禁食状态提供有价值的降血糖作用，且有效地减少了进食后的最大糖水平。权利要求1.固体或半固体植入物，其通过提供包含分子量为1.0-100kDa的葡聚糖水溶液的液体组合物且将此液体组合物引入哺乳动物体内而获得，其中植入物在哺乳动物体内的原位生成。2.权利要求1的植入物，其中液体组合物还包含溶于或混悬其中的生物学活性物质。3.权利要求2的植入物，其中生物学活性物质存在的浓度按液体组合物重量计为0.01至25%。4.权利要求2或权利要求3的植入物，其中生物学活性物质选自蛋白质、多肽、肽、有机分子、和寡核苷酸或聚核苷酸。5.权利要求1-4的任何一项的植入物，其中葡聚糖在液体组合物中存在的浓度为50-75%wt,优选为60-70%wt。6.权利要求1-5的任何一项的植入物，其中液体组合物是无菌的。7.权利要求1-6的任何一项的植入物，其中液体组合物凭借注射引入哺乳动物体内。8.权利要求7的植入物，其中注射凭借25-号或更细的针进行。9.权利要求2-8的任何一项的植入物，其中液体组合物为冷冻干燥的，且在引入哺乳动物体内前将其再与水结合形成初始水浓度。10.制备用于生物医学应用的组合物的方法，包括以下步骤(a)提供包含分子量为1-100kDa的葡聚糖水溶液的液体组合物；和(b)使此液体组合物固化;特征在于水在步骤(b)期间逐渐地从此液体组合物中消除。11.权利要求10的方法，其中葡聚糖的分子量为1-70kDa。12.权利要求IO或权利要求11的方法，其中葡聚糖在液体组合物中存在的浓度为25-75%wt。13.权利要求10-12的任何一项的方法，其中葡聚糖在液体组合物中存在的浓度为50-75%wt。14.权利要求10-13的任何一项的方法，其中来自步骤(a)的液体组合物中的水通过蒸发除去。15.权利要求14的方法，其中蒸发在0-100。C的温度下进行。16.权利要求15的方法，其中蒸发在2037。C的温度下进行。17.权利要求14-16的任何一项的方法，其中蒸发速度为每小时按步骤(a)液体组合物的重量计0.1~75%。18.权利要求10-13的任何一项的方法，其中来自步骤(a)的液体组合物中的水通过萃取除去。19.权利要求18的方法，其中萃取通过向按重量计1份步骤(a)液体组合物中加入按重量计l-10份的乙醇、液体聚乙二醇(PEG)、或液体聚丙二醇(PPG)而进行。20.权利要求10-19的任何一项的方法，包含将生物学活性物质引入步骤(a)的液体组合物中的步骤(c)。21.权利要求20的方法，其中生物学活性物质溶于或混悬于步骤(a)的液体组合物中。22.权利要求20或权利要求21的方法，其中生物学活性物质以一定的量引入，以至在液体组合物中存在的浓度按重量计浓度为0.01至25%。23.4又利要求19-22的4壬<可一项的方法，其中用于生物医学应用的组合物为适合在哺乳动物体内控制释放生物学活性物质的组合物。24.用于生物医学应用的制品，特征在于其包含根据权利要求10-23的任何一项方法所制备的组合物。25.权利要求24的制品，其为硬药用胶嚢的形式。26.权利要求24的制品，其为硬医学装置例如板、螺丝钉或针的形式。27.权利要求24的制品，其为硬医学假体的形式。全文摘要通过提供包含分子量为1.0-100kDa的葡聚糖水溶液的液体组合物且将此液体组合物引入哺乳动物体内，获得固体或半固体植入物，其中植入物在哺乳动物体内的原位生成。制备用于生物医学应用的组合物的方法，包括提供包含分子量为1-100kDa的葡聚糖水溶液的液体组合物和使此液体组合物固化的步骤；其中水在固化期间逐渐地从此液体组合物中消除。由此组合物制得生物医学制品。文档编号A61K47/36GK101370523SQ200780002663公开日2009年2月18日申请日期2007年1月17日优先权日2006年1月18日发明者V·A·萨贝特斯基申请人:鲍斯药品股份公司