专利名称：：包含双胍的脂质体的制作方法
技术领域：
：本发明涉及包含双胍的脂质体，基于包含至少一种双胍作为杀微生物活性剂的脂质体的抗菌制剂，所述包含双胍的脂质体和抗菌制剂的制备，以及它们的可能的用途和利用它们的用途的产品。
背景技术：
：若创伤脱水、创伤中有大量的细菌存在和/或创伤用毒性试剂处理，则创伤的愈合过程将显著地恶化。通过比较，潮湿的环境、缺少病原体的移生以及生长因子存在度的增加将促进上皮形成和肉芽组织的形成。在专家中潮湿的创伤愈合的优点是无可置疑的，其中创伤中的潮湿环境是为了刺激细胞生长并由此达到被损伤组织的最快的可能的再生。另一方面，潮湿的环境也为细菌提供了良好的生长条件。然而，创伤的微生物污染将显著地影响创伤愈合的过程，尤其最近几年由于微生物对于抗生素的耐药性提高，因而引起更多的问题。由于具有微生物(口语为"细菌")的创伤的低度移生是个规律，因此创伤的微生物污染的扩散应该被尽可能地阻止或避免。尤其是如耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌(MRSA)的多重耐药的致病性微生物的污染需要处理以阻止其进一步扩散。因此，被微生物污染或感染的创伤应该抗菌处理，因为-只要创伤有微生物移生，就有可能形成感染；-只要创伤仍被感染，创伤的愈合过程就不完全，或完全但被延緩；-创伤的感染可能扩散并导致败血症；以及-对于被多重耐药的病原体移生的创伤而言，这些病原体的进一步的扩散必须被阻止。特别是对于烧伤创面，必须尽早阻止创伤感染，尤其是预期的大面积创伤的污染的情况。技术文献描述了多种用于清洁具有耐抗生素的微生物的创伤的方法。例如，已提出通过冲洗溶液的方法从创伤去除菌斑和粗污染。通常，林格氏(Ringer's)液、林格氏乳酸盐溶液或等渗氯化钠溶液可用于这些目的。但是，这些溶液没有抗菌活性且它们仅仅达到清洁创伤的目的。具有抗微生物活性的清洁创伤的溶液也可在市场上获得。例如，这些产品是碘溶液、过氧化氢溶液、银盐溶液或聚己缩胍溶液，但是它们都具有某些缺点。碘具有强大的氧化作用，它能导致抗革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌、真菌和原虫，以及许多病毒的可靠的杀微生物活性。与以前经常使用的含有乙醇的碘溶液(碘酒)的使用相比，提供水溶性的聚维酮碘(PVP硪、聚乙烯吡咯烷酮碘)使得创伤处理基本没有疼痛，但是在PVP碘的使用中仍然存在许多禁忌症和问题。例如，PVP碘中的碘经过皮肤由组织吸收，已知的碘变态反应和碘不耐性可与PVP碘的使用产生沖突，并且已证明碘可以抑制细胞分裂。因此，用PVP碘处理创伤导致延緩的创伤愈合。通过将PVP石典掺入到脂质体中，其以Repithef(MundipharmaGmbH，林堡市，德国)的名称可商业获得，组织对PVP碘的耐力可显著地改善，而不影响所述PVP碘的效力。Repithef的基本物质是聚丙烯酸酯凝胶，其除了水之外，包含所谓的水质体(hydrosome),也就是，特殊的多层脂质体。除了包含PVP捵作为小剂量抗菌剂之外，这些脂质体(其由多个像洋葱皮排列的磷脂双层组成)还包含大量的水。由此Repithd⑧能够像常规的水凝聚制剂一样释放和吸收水；这样，它能产生水分平衡。然而，就像PVP碘或众所周知的碘酒一样，Repithe产主要是暂时地导致处理区着色。PVP碘固有的褐色表明含有PVP碘的制剂的效力，但它也导致织物染色。此外，当使用Repithef或任何其他的含有碘的制剂时，下面的禁忌症必须考虑甲状腺的曱状腺机能亢进疾病、疱疹样皮炎、对碘的超敏反应。此外，Repithe产不能在放射治疗的前后使用。同样，在怀孕和哺乳期间，以及新生儿和不到6个月龄的婴儿，含碘的制剂应该仅在非常小心的考虑并通过医师监控曱状腺功能之后才能使用。创伤中的过氧化氢在释放氧气下快速分解成水。释放的氧气能氧化污染的细菌的细胞壁。因为它的通过快速释放氧气而引起的泡沫活动，所以使用过氧化氢能够成功地机械性清洁特别是被污染的和/或结痂性的创伤。另一方面，用过氧化氢处理也导致创伤的表面的化学灼伤，这至少会拖延创伤愈合。因此，过氧化氢不适合长期使用，尤其在慢性创伤的情况下。银盐溶液通过破环细菌的细胞壁和使细菌酶变性而进行杀菌的。但是问题是硝酸银溶液的稳定性不好，银离子的可能的吸收，以及由于银引起的蛋白凝固而导致的皮肤表面的破坏。由于这些原因，专家一度认为使用银盐溶液处理创伤已经过时了。如果仅由于所述抗生素部分，使用磺胺嘧咬银(银和磺酰胺磺胺嗜啶的配合物)不再被认为是可接受的。用于创伤愈合的即用型聚己缩胍溶液可商业获得，名称为Lavasept(费森尤斯，巴德霍姆堡，德国)或Prontosan(贝朗派佐德有限公司，麦松根，德国)。聚己缩胍(聚亚己基缩双胍；PHMB)被认为是具有作用范围广和良好耐受性的局部抗菌剂。通过其阳离子电荷，聚己缩胍通过提高细菌细胞膜的渗透性和通过提高的渗透性引起的钾损失和细胞浆的其他成分损失导致细胞死亡从而进行抗菌的。由于它的起效相当的慢，因此聚己缩胍更被推荐用于慢性不良愈合或敏感创伤的重复使用。然而，使用聚己缩胍溶液的缺点是在甚至少量的带负电离子的存在下，例如藻酸盐、丙烯酸盐、乳酸盐或碘离子的存在下，这些抗菌剂会失去它们的活性的事实。由于这个原因，必须注意聚己缩胍溶液不能和其他的创伤治疗法和/或现代的创伤绷带一起使用。同样，当选择创伤覆盖物时，必须确保这些创伤覆盖物不含非活性剂。除了所述抗菌溶液，许多还包含用来保护敷料免受微生物移生并减少创伤中的病菌数量的活性剂的创伤敷料也是可获得的。尤其是包含银或银盐作为抗微生物整理的创伤敷料已被广泛使用，例如，产品Actisorb(Johnson&JohnsonWM,Norderstedt，德国)和Contreet-H(ColoplastGmbH，汉堡，德国)。所述Actisorb⑧创伤敷料(它是元素银和活性炭的组合)特有根据创伤的渗出行为在创伤中产生抗菌的银浓度的被包封的银离子的水胶体敷料。曾一度也出现了基于胶原、纤维素衍生物或藻酸盐的创伤敷料，在大多数情况下，其包含浓度为0.52%的聚己缩胍作为抗微生物活性剂。这些创伤敷料是通过用包含聚己缩胍的水溶液喷射或浸润基质或载体材料而制备的。然而，已表明，聚己缩胍很好地结合到经常用于生产创伤敷料和绷带的基质或载体材料。这影响了聚己缩胍从创伤敷料中释放，且最终也影响了聚己缩胍的抗微生物活性。
发明内容本发明的任务是提供一种抗菌制剂，通过该抗菌制剂创伤能被清洁和/或处理，其具有广泛的作用和良好的耐受性，其既不会导致变性现象也体变色，且其也适合在如慢性创伤的情况下长期使用。本发明的一个目的是提供一种抗菌制剂，通过该抗菌制剂潮湿创伤处理的观念能被保留，而不必担'"、创伤或必须使用的创伤敷料的污染。本发明的另一目的是提供一种制备稳定的且包含至少一种具有抗微生物活性的双胍的脂质体的方法。本发明的又一目的是提供包含至少一种具有抗微生物活性的双胍的抗菌创伤敷料，其中双胍的利用率和由此其抗微生物活性最终被提高。根据本发明，这些目的是通过提供包含至少一种具有抗微生物活性的双胍的特定组合物的脂质体而实现的。因此，如果在脂质体的制备中，没有使用具有阴离子首基(例如磷脂酰甘油)的类脂，在双胍的存在下可能制备稳定的脂质体。为了制备和负载具有双胍的脂质体，在WO02/36257中描述的交叉流注入法由于它的非常温和的加工条件和高效率而特别有益。然而，负载有双胍的脂质体的制备不限于这种方法。现有技术中已知的用于制备和负载脂质体的其他方法也能用于此目的，例如高压匀质法、微流化法或超声法。可以掺入到根据本发明的脂质体中的双胍优先选自药理学上可接受的双胍的组中，所述药理学上可接受的双胍包括1,1'-亚己基-二-{5-(4-氯苯基)-双胍}(氯己定)、1,1'-亚己基-二-{5-(4-氟苯基)-双胍}(氟己定)、聚亚己基缩双胍(PHMB)、阿来西定(N,N"-二(2-乙基己基)-3,12-二亚胺基-2,4,11，13陽四氮杂四癸烷二酰亚胺(tetraazatetradecanediimidamine))、l，l'-亚己基-二[5-(2-乙基己基)双胍])和VantociflB型(ICI)的聚亚己基缩双胍化合物。此外，所述双胍也可以选自在US2,684,924、US2,990,425、US3，468，898、US4,022,834、US4,053，636、US4,198,392、US4，891，423、US5,182,101、US6,503,952、GB705,838和GB702,268中描述的药理学上可接受的双胍化合物之中。在特别优选的实施方式中，所述双胍以它们的可溶于水的、生理学上可接受的盐的形式掺入到所述脂质体中。例如，可以掺入到所述脂质体中的特别优选的双胍为聚亚己基缩双胍盐酸盐、氯己定二葡糖酸盐、氯己定二乙酸盐、氯己定二盐酸盐和阿来西定盐酸盐。由于所述包含双胍的脂质体的抗微生物性质即使在脂质体被冷冻干燥之后也令人惊讶地保持不变，因此对于创伤敷料的制备，根据本发明的脂质体可以几乎任何形式的外观使用。具体实施例方式接下来，通过特别优选的实施方式对本发明进行更加详细的描述。然而，这些描述不能解释为限制本发明的性质于下文描述的实施方式。令人惊讶地发现如果所述脂质体基本上没有具有阴离子首基的类脂，则聚己缩胍能被稳定地掺入到脂质体中。通过负载类脂层或通过负载脂质体内的水相，可以使脂质体负载有活性剂。当聚己缩胍为可溶于水的物质时，认为这些分子不能被稳定地掺入到脂质体的类脂双层中，但是应该保留在脂质体内的相中。由此，试图使水相负载有聚己缩胍。ii为此目的，在适合的负载緩冲液，优选Tris-HCl(pH7.5)和HEPES(pH7.0)中制备各种组分的脂质体。为了制备所述脂质体，将使用的每种类脂溶解在96%的乙醇中，并使用交叉流注入法通过压力控制注射器将其注入到水相中。这样形成的脂质体的尺寸通过注入点的局部类脂浓度调节，其由乙醇相中的类脂浓度、乙醇浓度、注入压力、注射器孔和注入点的水相的流速来确定。将类脂注入到水相之后立刻将混悬液用更多量的水相稀释以降低乙醇的浓度到容许的水平，优选降低到7.5~15%。最初，作为初步实验，制备了2种脂质体混悬液。混悬液#1由氬化大豆磷脂酰胆碱(S100-3=87%二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)和13%二棕榈酰磷脂酰胆石咸(DPPC;10|imol/ml))和胆固醇(2|nmol/ml)组成。混悬液#2由氢化大豆磷脂酰胆碱(5pmol/ml)、蛋黄磷脂酰甘油(E-PG;5nmol/ml)和胆固醇(2|imol/ml)组成。通过动态光散射测定两种脂质体混悬液的嚢泡尺寸和尺寸分布且得到了相似的制备结果，平均嚢泡尺寸为直径120~130nm和多分散指数(PDIX作为散射的测量)为0.23~0.24。随后，将CosmocilCQ(Archchemicals,Inc,US)加入到这些脂质体混悬液(9体积份脂质体混悬液+1体积份CosmocilGQ)，CosmocilGQ为20%的聚己缩胍水溶液(聚(亚氨基亚氨羰基)亚氨六亚曱基盐酸盐溶液)，因此所述脂质体混悬液包含2%的聚己缩胍。在几分钟内，在混悬液#2中观察到大量的沉淀，但是在混悬液#1中未观察到。比较的光散射测定结果显示混悬液#1中的脂质体的尺寸没有变化。对于具有聚己缩胍的混悬液#2，得到大于4,000到5,000nm的平均嚢泡尺寸的比较的测量结果与没有加入聚己缩胍的混悬液#2中的脂质体尺寸相比，显示显著的变化。在聚己缩胍的存在下，制备具有与混悬液#1和混悬液#2中相同类脂组成的脂质体同样也得到相似的结果。为了制备这些脂质体，用PBS以1:1稀释CosmocilGQ制备10%的聚己缩胍溶液。使用交叉流注入法，在55。C将此溶液注入到类脂/乙醇溶液中，且随后用PBS以l:5稀释。混悬液#3(S100-3，胆固醇和聚己缩胍)包含通过光散射测量得到的平均尺寸为360370nm的脂质体。然而，混悬液#4(S100-3，E-PG，胆固醇和聚己缩胍)在加入聚己缩胍之后显示出类似于混悬液#2的沉淀行为。混悬液#4中的嚢泡尺寸为3,000~4,000nm。这些结果显示只要没有磷脂酰甘油掺入到脂质体膜中，脂质体可在聚己缩胍的存在下制备。磷脂酰甘油是具有阴离子首基的磷脂。此外，在这些实验中观察到在加热过程中，在PBS/聚己缩胍溶液中出现了反复的轻微的混浊。因此，即使PBS基本上适合作为水相的緩冲液，但是对于制备包含聚己缩胍的脂质体，PBS不是最佳的緩沖液。由于被考虑用于制备脂质体的类脂在约pH7.0时显示良好的稳定性，因此考虑緩沖液适合在该pH使用，选择各种緩冲液来代替PBS緩冲液用于初步实验。在这些实验中发现加入聚己缩胍时50mM柠檬酸(pH7.0)导致强的浊度反应，其虽然在过程温度加热到40~50。C时消失，一旦冷却又会出现。20mM的Tris緩冲液(pH7.5)和20mM的HEPES緩沖液(pH7.0)例如将被作为緩沖溶液提及，其被证明特别适合于在制备包含聚己缩胍的脂质体中稀释聚己缩胍，在聚己缩胍的存在下，两者都不会导致浊度反应。此外，使用这两种最后提及的緩沖液得到包含聚己缩胍的脂质体就它们的尺寸、负载聚己缩胍和稳定性而言都没有显著区别。在其他的一系列实验中，使用不同类脂制备包含聚己缩胍的脂质体，即-S100-3=氢化大豆磷脂酰胆碱(87。/。二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)和13。/。二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)的混合链、氬化磷脂)；-E-PC=来自蛋黄的磷脂酰胆碱(具有不饱和脂肪酸的天然、混合链的磷脂)；-E80S=来自蛋黄的80。/。磷脂酰胆碱(E-PC)和20%磷脂酰乙醇(E-PE;l-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇)的混合物(具有不饱和脂肪酸和荷电部分的天然、混合链的磷脂)；-DMPC=二肉豆蔻酰磷脂酰胆石咸；和-DPPC=二棕榈酰磷脂酰胆碱。所述脂质体的尺寸分布产生不同的结果。在缺少胆固醇下，用S100-3在55。C与10%聚己缩胍制备的脂质体(混悬液#6)显示出平均脂质体尺寸200250nm的单峰分布。通过比较，胆固醇的存在导致多峰分布的脂质体混悬液(混悬液#5),其不用于进一步的研究。在胆固醇的存在下，在35。C用E-PC制备的包含聚己缩胍的脂质体(混悬液#7)产生具有平均直径200nm的均匀的单峰嚢泡群，但是在缺少胆固醇(混悬液#8)下却没有。存在或缺少1520mol。/。胆固醇下^f吏用E80-S制备的混悬液(混悬液#9和混悬液#10)对脂质体的形成没有影响。由于胆固醇不是成膜类脂，所以胆固醇即使以高达或稍微低于50mol。/。的量也是可应用的，而不会影响脂质体的形成。在混悬液#6、#7、#9和#10中脂质体的单峰尺寸分布得出在聚己缩胍和膜类脂之间存在很小或没有相互作用的结论。在多峰粒径分布的情况下，聚己缩胍可能与膜或与其单个成分相互作用并由此破坏了均一的囊泡的形成。仅具有嚢泡的单峰尺寸分布的脂质体混悬液被用于进一步分析和制备。这些混悬液在具有醋酸纤维素膜(其具有100kDa的分子排阻限度)的10mlAmicon搅拌式超滤杯中(Amiconstircell)过滤除去未掺入的聚己缩胍部分。随后，使用曙红实验法测定在过滤中得到的所有部分的聚己缩胍含量。平均15~25%的加入的聚己缩胍掺入到了检测的脂质体中。滤液的分析也显示出在脂质体中聚己缩胍保持稳定，在连续的滤液中聚己缩胍的量不断减少，且渗余物中聚己缩胍含量在预期的范围之内。使用合成的类脂DPPC(二棕榈酰磷脂酰胆碱)和DMPC(二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱)也进行了相应的实验。在这些实验中发现不论在胆固醇的存在(混悬液#11)或胆固醇的缺失(混悬液#12)下，使用DPPC在5055。C制备的脂质体混悬液均显示多峰的尺寸分布。像不饱和类脂混合物制备的脂质体(混悬液#7和#8)—样，在35。C使用DMPC和胆固醇制备的脂质体(混悬液#13)显示出较好的结果，即脂质体的平均直径约400~500nm且加入的PHMB的约3040%的稳定的掺入。由于不能确定地阐明是否用于上述实验的Tris緩沖液能被用于药物制剂或医疗产品，并且由于已证明HEPES緩沖液一直在药物制剂中使用，因此使用20mMHEPES緩沖液(pH7.0)代替Tris緩冲液，重复当使用Tris緩沖液时得到满意结果(即混悬液#7、#9、#10和#13)的脂质体制备。如通过比较混悬液#7、#9、#10和#13与混悬液#15#18的嚢泡尺寸和聚己缩胍负载量所显示的(见表1)，在使用Tris緩沖液制备的脂质体和HEPES緩冲液制备的脂质体之间没有发现差异。关于嚢泡的尺寸以及它们的尺寸分布，和聚己缩胍的包封行为，都没有发现显著的差异。仅包含E-PC/胆固醇的脂质体混悬液(混悬液#7和#15)在分析中显示比其余的脂质体制剂更宽范围的测量值。在进一步的实验中，为了保护由不饱和类脂制备的脂质体在其贮藏过程中免受氧化降解并通过加入微生素E改善创伤愈合而在制备过程中另外将这些自由基清除剂加入到类脂/乙醇溶液中。首先，测定出维生素E的没有不利地影响嚢泡形成过程的最适量。结果发现可以将高至40mol%的维生素E加入到类脂相而不影响嚢泡形成。基于这些结果，在进一步的实验中，制备具有20mol。/。维生素E的包含聚己缩胍的脂质体，并随后过滤和分析。就嚢泡粒径和聚己缩胍的成嚢泡量而言，由这些制备物制得的脂质体(混悬液#19#21)的性质与没有加入维生素E的制备物制得的脂质体(混悬液#15、#16、#17)的性质相同。当使用维生素E时，加入的PHMB的约20~25%也同样被以脂质体的方式纟参入。脂质体对于聚己缩胍的负载量取决于其嚢泡尺寸。具有150~200nm直径的脂质体通常能负载15~20%的加入到制剂的聚己缩胍，具有400500nm直径的脂质体通常能稳定地负载30~40%的加入到制备物中的聚己缩胍。为了制备抗菌活性的脂质体混悬液，除了优选已被证实具有良好的耐受性和作用广泛的聚己缩胍之外，也可以使用任何其他的具有抗微生物活性的且是生理学上可接受的双胍。所使用的聚己缩胍的分子量没有任何实质性地限制。迄今使用的任何分子量的聚己缩胍都可以使用。优选的PHMB具有1，50015,000g/mo1范围的分子量。优选的聚己缩胍为聚合度为1216的聚己缩胍。所述聚合度表示在聚合反应过程中连接形成一个大分子的单体分子的平均数量。以脂质体方式掺入的聚己缩胍或其他的以脂质体方式掺入的双胍加入到创伤敷料中可以不同的方式完成。例如，可以将包含聚己缩胍的脂质体加入到用于创伤敷料的载体材料的聚合物溶液中。随后通过蒸发或冷冻干燥去除溶剂。为了制备潮湿的创伤敷料，在进一步加工创伤敷料之前，所述溶剂可以全部或部分保留在创伤敷料，分别在用于创伤敷料的载体材料中。作为选择，也可以使用聚己缩胍溶液所用的方法将包含双胍的脂质体的混悬液涂布到载体材料。由此，所述包含双胍的脂质体可以通过喷洒或喷雾涂布到载体材料。因此，本发明涉及基于包封在脂质体中的活性剂的抗菌制剂，且其特征在于所述脂质体不含具有阴离子首基的类脂，在其内部具有水性介质，并且在所述的水性介质中包含至少一种双胍组中的抗;微生物活性剂。表1:制备的脂质体混悬液的组成和性质的概括<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>在特别优选的实施方式中，根据本发明的组合物包括作为具有抗微生物活性的质量聚合物双胍的聚己缩胍，特别优选聚己缩胍具有1,500~15,000g/mol的分子量和/或12~16的聚合度。所述水性介质优选为緩沖液，且特别优选PBS、Tris緩沖液和HEPES緩冲液。所述水性介质应当具有6~8的pH值，优选pH值为7.0-7.5。在优选的实施方式中，所述脂质体，更确切的是所述脂质体的类脂双层，包含胆固醇。在所述脂质体中，胆固醇含量可以总计达到50mol%;优选地，胆固醇含量为15~20mol%。在另一优选的实施方式中，除了胆固醇适用之外，在每个情况中相对于总的类脂，所述脂质体，更确切的是所述脂质体的类脂双层，以高至40mol%的量、优选以20mol%的量含有维生素E。根据本发明的所述脂质体优选具有50~800nm的平均尺寸，特别优选平均尺寸150~500nm的脂质体。根据本发明的制剂可以如混悬剂、乳剂、洗剂、酊剂、喷雾剂、凝胶剂、乳膏剂或软膏剂的形式存在。本发明也涉及制备基于包封在脂质体中的选自双胍组中的抗微生物活性剂的抗菌组合物的方法，其中所述脂质体不含具有阴离子首基的类脂，且所述方法的特征在于，最初通过压力控制注射器将乙醇类脂相注入到包含选自双胍组中的抗微生物活性剂的水相中，在嚢泡的形成发生之后用緩冲液稀释所述水相，以及随后去除未掺入的活性剂。优选地，用于稀释所述脂质体混悬液的緩沖液与用于制备水相的緩沖液相同。在根据本发明的方法中，用于类脂相的磷脂优选选自由天然的或合成的选自由磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱及其混合物组成的组中的磷脂；且所述天然的磷脂优选源自蛋黄或大豆。优选地，氯己定、氟已定、阿来西定或聚己缩胍用作具有抗微生物活性的双胍；特别优选具有1,500~15,000g/mo1的分子量和/或12~16的聚合度的聚己缩胍。在根据本发明的方法中，所述水相优选由緩沖系统制备，特别优选选自由PBS(磷酸盐緩冲盐水)、Tris緩冲液和HEPES緩沖液组成的组中的。所述水相的pH调节到6~8;特别优选地，所述pH值为7.07.5。在特别优选的方法中，在每种情况中相对于总的类脂，所述类脂相以050mol%的量、优选以15~20mol%的量包含胆固醇；和/或以040mol%的量、优选以20mol%的量包含维生素E。本发明也涉及根据本发明的抗菌组合物的用途，更具体地涉及其用于生产创伤敷料的用途，可以例如通过喷洒、喷雾或浸润给提供抗微生物脂质体。适合作为生产所述创伤敷料的载体材料是常规的用于此目的且本领域技术人员公知的任何材料，例如胶原、纤维素和纤维素衍生物、聚氨基曱酸酯、藻酸盐，单独或与由藻酸盐、透明质酸及其盐(透明质酸盐)、果胶、角叉藻聚糖、黄原胶、硫酸化右旋糖酐、纤维素衍生物、如氧化再生纤维素的氧化纤维素、软骨素、4-硫酸软骨素、6-硫酸软骨素、肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸角质素、硫酸皮肤素、淀粉衍生物及其混合物组成的组中的多糖组合。在另一优选的用途中，例如胶原溶液的聚合物溶液与所述脂质体混悬液混合，且随后通过干燥或冷冻干燥将所述一种或多种溶剂全部或部分去除，由此可得到具有抗微生物活性脂质体的海绵。因此本发明也涉及创伤敷料，其包括包含双胍的脂质体且是基于例如纤维素、如羟曱基纤维素的纤维素衍生物、藻酸盐、脱乙酰壳多糖、淀粉或淀粉衍生物、胶原、聚丙烯酸酯、聚氨基曱酸酯或上述化合物的混合物作为载体材料。根据本发明的创伤敷料的优选实施方式为水凝胶、水胶体、海绵、薄膜(film)、膜(membrane)、非纺织物、纺织物、编织物、其他织物、梳棉生条、填塞等。特别优选地，相对于所述敷料的干重，根据本发明的创伤敷料以0.01~1.0wt%的量包含以脂质体方式加入的抗微生物活性的双胍，优选聚己缩胍。实施例为了制备具有抗菌效果的胶原海绵，将1%胶原混悬液(来源于牛)与确定量的脂质体混悬液(在Tris緩沖液中)彻底混合，随后置于塑料皿中。然后将混合物在-50。C低温快速冷冻并接着冻干。这样，相对于胶原的干重，制备出具有聚己缩胍含量为0.05wt%、0.1wt%、0.5wt。/o或lwt。/。的胶原海绵。使用三种不同的脂质体混悬液I.E80-S、胆固醇和维生素E的脂质体(混悬液#20);II.E80-S和维生素E(混悬液^21);和III.DMPC和胆固醇的脂质体(混悬液#22)。通过琼脂扩散实验更加详细地检测包括含有聚己缩胍的脂质体的胶原海绵和用于制备这些胶原海绵的脂质体混悬液对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和白色念珠菌的抗微生物活性。为此目的，将所述微生物在非选择性液态培养基中于3035。C培养24h，且随后用含有1%蛋白胨的l%NaCl溶液分别稀释到1xio8CFU/ml(菌落形成单位)和3.8x107CFU/ml(白色念珠菌)。将每种稀释液100pl分别涂到CSA和SDA皿上(CSA=酪蛋白-大豆-蛋白胨琼脂；SDA=沙氏葡糖琼脂(Sabouraud-dextroseagar))。将所述琼脂皿干燥3~5分钟。在涂布所述溶液、脂质体混悬液或胶原海绵之后，在测定抑制区之前，所述皿分别在30~35。C培养24h并在2025。C培养48h(白色念珠菌)。通过测定从海绵或琼脂皿中用于溶液或混悬液填入的孔到抑制暈的边缘的距离定量抑制的面积。所述结果以半定量的形式概述在表2中。所述包括负载有聚己缩胍的脂质体的胶原海绵对三种检测的微生物(金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和白色念珠菌)显示出良好的抗微生物活性。在这些检测中，与具有包含聚己缩胍的基于E80-S的脂质体的胶原海绵相比，基于DMPC的、具有包含聚己缩胍的基于DMPC的脂质体的胶原海绵对检测的微生物显示出最弱的抗微生物活性。即使仅负载有少量的聚己缩胍，具有包含聚己缩胍的基于E80-S的脂质体的胶原敷料对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌也显示出良好的活性。这些创伤敷料对于绿脓杆菌的抗微生物活性是不一致的；然而，即使在所述创伤敷料负载少量的聚己缩胍的情况下，也没有发生创伤敷料的微生物污染。所述脂质体混悬液的冷冻干燥对于所述制剂的抗微生物活性没有负面的影响。本结果显示使用以脂质体方式加入的聚己缩胍，至少在胶原或使用胶原的基础上，可能制备具有优异抗微生物活性的创伤敷料。表2:包含聚己缩胍的制剂的抗微生物活性的半定量评价<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>权利要求1、基于包封在脂质体中的抗微生物活性剂的抗菌组合物，其特征在于，所述脂质体不含具有阴离子首基的类脂，所述脂质体在其内部具有水性介质，且在所述水性介质中含有至少一种双胍组中的抗微生物活性剂。2、根据权利要求1所述的抗菌组合物，其特征在于，所述脂质体包括磷脂，所述磷脂选自天然和合成的包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱及其混合物的磷脂的组中。3、根据权利要求2所述的抗菌组合物，其特征在于，所述脂质体包含具有至少14个碳原子，优选至少16个碳原子的酰基链长度的磷脂。4、根据权利要求2所述的抗菌组合物，其特征在于，所述天然磷脂源自蛋黄或大豆。5、根据权利要求14中的任意一项所述的抗菌制剂，其特征在于，所述双胍选自包括氯己定、氟已定、阿来西定、聚己缩胍及其水溶性生理学上可接受的盐的双胍的组中。6、根据权利要求5所述的抗菌制剂，其特征在于，所述聚己缩胍具有1,500~15,000g/mo1的分子量和/或12~16的聚合度。7、根据前述权利要求中的任意一项所述的抗菌组合物，其特征在于，所述水性介质为选自由PBS、Tris緩沖液和HEPES緩沖液组成的组中的緩冲液。8、根据前述权利要求中的任意一项所述的抗菌组合物，其特征在于，所述水性介质的pH值为68,优选7.07.5。9、根据前述权利要求中的任意一项所述的抗菌组合物，其特征在于，在每种情况中相对于总的类脂，所述脂质体优选含有高至50mol%，更优选含有15~20mol%的胆固醇。10、根据前述权利要求中的任意一项所述的抗菌组合物，其特征在于，在每种情况中相对于总的类脂，所述脂质体优选含有高至40mol%，更优选含有20mol°/。的维生素E。11、根据前述权利要求中的任意一项所述的抗菌组合物，其特征在于，所述脂质体平均尺寸为50800nm，优选150500nm。12、根据前述权利要求中的任意一项所述的抗菌组合物，其特征在于，所述抗菌组合物以混悬剂、乳剂、洗剂、酊剂、喷雾剂、凝胶剂、乳膏剂或软膏剂的形式存在。13、制备基于包封在脂质体中的抗微生物活性剂的抗菌组合物的方法，其中所述脂质体不含具有阴离子首基的类脂且在其内部具有水性介质，且其中在所述水性介质中含有至少一种双胍组中的抗微生物活性剂，其特征在于，-通过压力控制的注射器将乙醇类脂相注入到含有双胍组中的抗微生物活性剂的水相中；-在嚢泡的形成Jl.生之后，用緩冲液稀释所述水相；以及-去除未掺入的活性剂。14、根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述类脂相包括选自天然或合成磷脂的组中的磷脂，优选自由磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱及其混合物组成的组中。15、根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述磷脂选自具有至少14个碳原子的酰基链长度的磷脂的组中，且优选自具有至少16个碳原子的酰基链长度的磷脂的组中。16、根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述天然磷脂源自蛋黄或大豆。17、根据权利要求1316中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述双胍选自包括氯己定、氟已定、阿来西定、聚己缩胍及其水溶性生理学上可接受的盐的双胍的组中。18、根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述聚己缩胍选自具有1,50015,000g/mol的分子量和/或12~16的聚合度的聚己缩胍的组中。19、根据权利要求1318中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述水性介质为选自由PBS、Tris緩沖液和HEPES緩冲液组成的组中的緩冲液。20、根据权利要求1319中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述水性介质的pH值为6~8，优选7.0~7.5。21、根据权利要求1320中任意一项所述的方法，其特征在于，在每种情况中相对于总的类脂，所述类脂相优选含有高至50mol%，更优选含有15~20mol。/。的胆固醇。22、根据权利要求13~21中的任意一项所述的方法，其特征在于，在每种情况中相对于总的类脂，所述类脂相优选含有高至40mol%，更优选含有20mol%的维生素E。23、根据权利要求1~12中的任意一项所述的抗菌组合物用于制备创伤敷料的用途。24、根据权利要求23所述的用途，其特征在于，用所述组合物喷洒、喷雾或浸润所述创伤敷料的载体材料。25、根据权利要求24所述的用途，其特征在于，将聚合物溶液与所述组合物混合，并通过干燥或冷冻干燥将所述溶剂完全或部分回收。26、创伤敷料，其特征在于，所述创伤敷料包括根据权利要求112中的任意一项所述的抗菌组合物。27、根据权利要求26所述的创伤敷料，其特征在于，所述创伤敷料是基于纤维素、如轻曱基纤维素的纤维素衍生物、藻酸盐、脱乙酰壳多糖、淀粉、胶原、聚丙烯酸酯、聚氨基曱酸酯或前述化合物的混合物作为载体材料的。28、根据权利要求26或27所述的创伤敷料，其特征在于，所述创伤敷料以水凝胶、水胶体、海绵、薄膜、膜、非纺织物、纺织物、编织物、梳棉生条或填塞的形式存在。29、根据权利要求2628中的任意一项所述的创伤敷料，其特征在于，相对于所述敷料的干重，所述创伤敷料含有0.01~1.0wt。/。的双胍。全文摘要本发明涉及包含双胍的脂质体和基于该包含双胍的脂质体的抗菌制剂，所述包含双胍的脂质体和抗菌制剂的制备，以及它们可能的用途和利用它们的用途的产品，尤其是创伤敷料，其中所述脂质体的特征在于其基本上不含具有阴离子首基的类脂。文档编号A61K9/127GK101410090SQ200780011145公开日2009年4月15日申请日期2007年3月15日优先权日2006年4月1日发明者克里斯琴·勒雷尔,安德烈亚斯·瓦格纳,蒂姆·阿克塞尔·威廉斯申请人:洛曼-劳舍尔国际股份有限公司