专利名称：取代的8-[6-氨基-3-吡啶基]黄嘌呤的制作方法
技术领域：
本发明涉及为A2B腺苷受体(AR)选择性拮抗剂的取代的8-[6-氨基-3-吡咬基]黄嘌呤和药物组合物。这些化合物和组合物可作为药剂。
烷基黄嘌呤茶碱(如下)是一种弱的非选择性腺苷拮抗剂(参见Linden
丄，等，Gmfe)vascw/ar祝o/ogy o/_PMnwes (噪呤类的心血管生物学)，主编，G.Burnstock等，1998，第1-20页)，在治疗哮喘方面是治疗上有用的。但是，它的应用与令人不快的副作用诸如失眠和多尿相关联。近年来，茶碱作为支气管扩张剂用于緩解哮喘的应用，已被其他类型的药物，例如选择性p2-肾上腺素能激动剂、皮质激素以及最近的白三烯拮抗剂所取代。这些化合物也有局限性。因此，具有副作用减少的茶碱类药物开发仍然是所期
背景技术：
望的。
人们已认识到，茶碱及其密切相关的类似物咖啡因阻滞内源性腺苷作为一种在大脑及其他器官中腺苷受体的局部调节剂、以治疗上有用的剂量而发挥作用。腺苷激活四种亚型的G蛋白偶合腺苷受体(AR)， A^A2a/A2b/
A3。恩丙茶碱(如下)是黄嘌呤的另一个例子，已有报道用以
阻滞a2b腺苷受体和用于治疗哞喘。LaNoue等(美国专利第6,060,481号)还证明了选择性腺苷A2B拮抗剂在改善患者中胰岛素敏感性方面是有用的。
已有报道，治疗浓度的茶碱或恩丙茶碱阻滞人类a2b受体，并且已建
议，这种亚型选择性拮抗剂作为抗哮喘药可具有潜在的应用。(参见Feoktistov,I,等，尸/jww"co/. Wev. 1997， 49, 381-402; Robeva, A. S.等，Z)n/gDev. Wes. 1996, 39, 243-252 )。已报道恩丙茶碱的IQ值为7 ^M，并且在结合人类A2B AR方面具有一定的选择性。(参见Robeva, A. S.等，Drag Dev.L 1996,找243-252和Linden, J.等，M /.泡匿co/. 1999, 56， 705-713 )。a2bar^皮表达在某些肥大细胞诸如BR系的犬肥大细胞瘤细胞中，可能负责引发急性的Ca"转移(mobilization)和脱粒。(参见Auchampach, J. A.等，Mo/.尸/zammco/. 1997， 52， 846-860和Forsyth, P.等，/My awm. 1999，4& 301-307 )。在延緩IL8从人类HMC-1肥大细胞释放方面，A2B AR同样引发Ca"+转移并参与其中。与A2B AR相关的其他功能为控制细胞生长和基因表达，(参见Neary, J.等，7>e"d 1996， W， 13-18 )内皮依赖型血管舒张(参见Martin, P. L.等，,尸/2^m"co/.77 e/: 1993， 265，248-253 ),以及来自肠内上皮的流体分泌(参见Strohmeier, G. R.等，</.说o/.CAew. 1995, 27" 2387-2394 )。还有才艮道，腺香通过A2B AR而发挥作用以便在表达嚢性纤维化转运调节因子的细胞中刺激氯化物的渗透性。(参见
8Clancy,丄R等，j附.J.尸/7"/0/. 1999， 276， C361-C369 )。
最近，Linden等(美国专利第6,545,002号)描述了一组新的为A2B腺苷受体(AR)的选择性拮抗剂的化合物和药物组合物。
尽管具有可用于A" Am和A3AR的腺苷受体亚型选择性探测物(probe)，但是已知仅很少的选择性拮抗剂用于a2b受体。因此，存在对选择性A2B受体拮抗剂化合物的持续需要。
发明内容
本发明提供了取代的8-[6-氨基-3-吡啶基]黄嘌呤或者立体异构体或者
药学上可接受的盐，它们作为a2b腺苷受体的拮抗剂而发挥作用。
本发明还提供了含有与药学上可接受的赋形剂相组合的本发明化合物或其立体异构体或药学上可接受盐的药物组合物。
此外，本发明提供了一种治疗方法，其用于治疗哺乳动物诸如人中的病理状况(condition)或症状，其中一种或多种病理症状牵涉腺苷A2B受体的活性(例如过度活性)，而且拮抗(即阻滞)是所期望的以改善这类症状。因此，本发明提供了一种治疗疾病的方法，其包括给药治疗有效量的至少一种本发明的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中所述疾病选自哮喘、变态反应、变应性疾病(例如，变应性鼻炎和鼻窦炎)、自体免疫疾病(例如，狼疮)、腹泻性疾病、胰岛素抗性、糖尿病(例如，I型和II型)、与缺血/再灌注损伤、心脏病发作相关的肥大细胞脱粒的预防，肺瘤组织中血管增生的抑制，以及糖尿病视网膜病变或高压氧诱导视网膜病变中血管增生的抑制。
本发明提供了本发明的新化合物用于医学治疗。
本发明还提供了本发明的新化合物用于制备治疗哺乳动物中与有害
的a2b受体活化或活性相关的病理状况或症状的药物的应用。
本发明还包括一种方法，该方法包括将本发明的化合物与靶Affi腺苷
受体位点(包含所述受体)体内或体外地相接触以便结合至所述受体，所述化合物任选地带有放射性同位素(放射核素)，诸如，示例，氚、放射性碘(例如，用于结合检验的1251或用于光镨成像的1231)及类似物。包含结合A2B腺苷受体位点的细胞膜可^C用于测量试验化合物的腺苷受体亚型选择性，或者可被用作一种手段以鉴別用于治疗与A犯受体介导相关疾病或状况的潜在治疗剂，其借助将所述治疗剂与所述放射配体和受体相接触，并且测量放射配体置换和/或治疗剂结合的程度。
实现发明的最佳方式
申请人已发现，下面所示取代的8-[6-氨基-3-吡咬基]黄嘌呤在治疗与
有害的A2B受体活化或活性相关疾病或状况方面是有用的。
一方面，本发明提供了一种选自以下的化合物，或其立体异构体或药学上可^^受的盐
S 6<formula>formula see original document page 11</formula><formula>formula see original document page 12</formula><formula>formula see original document page 13</formula><formula>formula see original document page 14</formula>另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含(a)治疗有效量的 一种上述化合物；和(b)药学上可接受的赋形剂。
另一方面，本发明提供了一种用于预防或治疗哺乳动物中病理状况或
症状的治疗方法，其中牵涉腺苷A2B受体的活性，而且拮抗它的作用是所
期望的，所述方法包括对该哺乳动物给药治疗有效量的一种本发明化合 物。
另一方面，本发明提供了一种治疗疾病的方法，所述方法包括给药治 疗有效量的至少一种本发明的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中所述疾病选自哮喘、变态反应、变应性疾病(例如，变应性鼻炎 和鼻窦炎)、自体免疫疾病(例如，狼疮)、腹泻性疾病、胰岛素抗性、糖 尿病、与缺血/再灌注损伤、心脏病发作相关的肥大细胞脱粒的预防，肿瘤 组织中血管增生的抑制，以及糖尿病视网膜病变或高压氧诱导视网膜病变 中血管增生的抑制。
另一方面，本发明提供了本发明化合物用于医学治疗。
另 一方面，提供了本发明化合物用于制备用来治疗哺乳动物中疾病的 药物的应用。
应当理解的是，本发明任何方面或特征，无论其是优选的或者不是优 选的，均可以与本发明的任意其他方面或特征相组合，无论这类其他特征 为优选的或者不是优选的。
如同本领域的普通技术人员所认识的，本发明化合物的咪唑环可以互 变异构的形式或以互变异构体而存在，因此同样包括在本发明的范围内。
该互变异构体表示为结构(Ia)和(Ib):
(la) (lb)
其中，R、 R1、 R2、 X和Z如这里所定义的。
就命名或提及一个化合物而言，例如，应当理解的是出于本申请的目 的，也考虑它的对应互变异构体。
术语"包括"、"例如"、"诸如"以及类似术语是被示例性使用的，并非 想要限制本发明。
不定冠词"一种(个)"(a和an)是指"至少一种(个)"或"一种(个) 或多种(个)"，当在本申请(包括权利要求书)中使用时，另有说明除外。
本领域技术人员能够认识到，具有手性中心的本发明化合物可以光学 活性和外消旋形式而存在以及被分离。有些化合物可显示多态性。应当理
〔
o
、解为，本发明包括了拥有这里所述有用性质的本发明化合物的任意外消旋
的、光学活性的、多态的、或立体异构形式、或其混合物；在本领域中， 已熟知的是如何制备光学活性形式(例如，用重结晶技术拆分外消旋形式， 用手性合成从光学活性原料来合成，或者应用手性固定相以色谱法分离)， 以及如何应用这里所述标准检验或者应用本领域熟知的其他相似检验来 确定治疗活性。
哺乳动物和患者涵盖了通常在医学护理下的温血哺乳动物(例如，人 类和驯养动物)。哺乳动物的实例包括(a)猫科动物、犬科动物、马科动 物、牛科动物和人以及(b)人类。
"治疗(Treating)"或"治疗(treatment)"涵盖了哺乳动物中疾病状态 的治疗，而且包括(a)预防哺乳动物中疾病状态的发生，特别是，当这种 哺乳动物易于患有疾病状态但是尚未被诊断为患有它时；(b)抑制疾病状 态，例如，阻止它发展；(c)緩解疾病状态，例如，引起疾病状态消退直 至达到期望的终点；和/或(d)消除疾病状态，例如，引起疾病状态和/或 其作用终止。治疗还包括疾病症状的改善(例如，减少疼痛或不适)，其 中这种改善可以直接地或者不直接地影响疾病(例如，引起、转移、表达 等)。
"药学上可接受的盐"指所披露化合物的衍生物，其中母体化合物是用 制造它们的酸或碱盐来改性的。药学上可接受盐的实例包括，但不限于， 碱性残基如胺的无机酸盐或有机酸盐；酸性残基如羧酸的碱盐或有机盐； 及类似物。药学上可接受的盐包括常规的无毒性盐或由例如无毒性无机酸 或有机酸所形成母体化合物的季铵盐。例如，这种常规无毒性盐包括，但 不限于，从无机酸和有机酸衍生的那些，所述无机酸和有机酸选自1,2-乙 二磺酸、2-乙酰氧苯甲酸、2-羟基乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯 甲酸、碳酸氢酸(bicarbonic add)、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙二磺酸、 乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、乙醇酰基对氨苯 基砷酸(glycollyarsanilic )、 己基间苯二酚酸(hexylresorcinic )、海巴酸 (hydrabamic)、氬溴酸、盐酸、氬碘酸、羟基马来酸、羟基萘甲酸、羟基 乙磺酸、乳酸、乳糖酸、十二烷基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、萘磺酸(napsylic)、硝酸、草酸、朴酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、聚半 乳糖醛酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、碱式乙酸(subacetic)、琥珀酸、氨基 磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、鞣酸、酒石酸以及甲苯磺酸。
本发明药学上可接受盐可以用常规的化学方法从含有碱性或酸性部 分的母体化合物来合成。通常，这种盐可以用这些化合物的游离酸或碱形 式与化学计量量的适宜碱或酸在水中或者在有机溶剂中或者在两者混合
物中反应而制备；通常，优选非含水溶媒如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇 或者乙腈。合适盐的歹寸表可见于ite/m'wgtow; P/ amiaceM"ca/ Sckwces, 第 18版，Mack出版公司，Easton， PA， 1990，第1445页，藉此其内容通过 引用并入本文。
"治疗有效量"包括治疗此处所列的一种适应症而单独或者相組合给药 时本发明化合物的有效数量。"治疗有效量"还包括所要求保护的化合物的 组合治疗所期望适应症的有效数量。优选地，化合物的组合是协同作用的 组合。例如，如Chou和Talalay在爿dv.i^gw/. 1984, 22:27-55中所 描述的，当组合给药时化合物的协同作用大于作为单一药剂单独给药时化 合物的加和作用。 一般地，协同作用是以化合物的次优浓度被非常清楚地 证实。协同作用可以是以组合与单个组份相比更低的细胞毒性、增强的作 用、或一些其他有益作用。
所列基团、取代基以及范围的特定和优选值仅用于示例；它们不排除 其他定义值或在基团和取代基所定义范围内的其他值。
合成
本发明化合物可以用US2005/0065341中所述的方法(其内容通过引 用并入本文)来制备。
本发明化合物还可以用P. J. Scammells等，J. A化d O e附.12, 2704-2712 (1994)中所述的方法来制备。在吡啶中于5°C将二氨基-l,3-二取代尿嘧啶 用6-氯代烟酰氯来酰化，从而得到式(5a)化合物。所得的酰胺(5a)在 氬氧化钠水溶液中经回流环化而得到化合物A。如反应路线l所示，应用 DMF为催化剂、在亚硫酰氯中经回流6-羟基烟酸制备6-氯代烟酰氯。=\如
^为氬的IC 在此应用了下列缩写 [125I]ABA
125
DMF/CHA,吡咬 。y丫 —N
R2 c
I-ABOPX AR
CGS 21680#-(4-氨基苄基)-腺苷
1251_3-(4-氨基-3-碘代千基)-8-氧乙酸 酉旨-l-丙基-黄p票p令
腺苷受体
2-[4-[(2-羧基乙基)苯基]乙基-氨 基]-5N-T^乙基氨曱酰基腺苷
可以用烷基溴或烷基碘烷基化化合物A而得到式A、匕合物。在压力 试管中于150-160。C，化合物A或V与取代的胺反应而得到式B或B1 化合物。R4为氢的式B1化合物可与酰基氯(acyl chloride)反应而得到 R4为-C(0)R，C)的化合物。
反应^各线1
HO'
a'
(la)
(2a)
A:
MO
Na2S204
R1、
1
NH2
吡p定 1
CH2C12
or w 朋2
l邻-160。C
5
■si .o
18CPX8-环戊基-l,3-二丙基黄噤呤
DMEMDulbecco改进的eagle培养基
DMFN,N-二甲基甲酰胺
DMSO二甲亚砜
EDTA乙二胺四乙酸盐
HEK细胞人胚肾细胞
Ki平衡抑制常数
NECA5'-(W-乙基氨曱酰基)腺苷
W画PIAR-A^-苯基异丙基腺苷
TEA三乙胺
TIX薄层色谱法
ZM 2413854-(2-[7-氨基-2-{呋喃基} {1,2,4}三唑
{2,3-3}{1,3,5}三嗪-5-基氨基乙基)苯
酚
本发明的化合物可被配制为药物组合物并以适于所选给药途径如口 服、或肠胃外、经静脉内、肌内、局部、吸入或皮下途径的各种形式给药
至哺乳动物宿主如人类患者。示例性药物组合物公开于"Remington: The Science and Practice of Pharmacy (雷明顿制药科学与实践)，，，A. Gennaro ， 主编，第20版，Li卯incott, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA。
因此，本发明化合物可与药学上可接受的赋形剂如惰性稀释剂或可吸 收、可食用的载体相组合而系统性给药，例如口服。可将它们封闭在硬的 或软壳明胶胶嚢内，可压制成片剂或者直接掺入患者饮食的食物中。至于 口服治疗性给药，活性化合物可与 一种或多种赋形剂相组合并以可摄入的 片剂、含片、锭剂、胶嚢剂、酏剂、悬浮液、糖浆、威化(wafer)及类似 形式应用。这种组合物和制品应当包含至少0.1%的活性化合物。该组合物 和制品的百分比当然可以是变化的，而且可常规地为给定单元剂型重量的 约2%至约60%之间。在这种治疗上有用的组合物中活性化合物的量为能够获得有效剂量水平的量。
片剂、锭剂、丸剂、胶嚢剂及类似物还可包含下列物质粘合剂诸如 黄荒胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂诸如磷酸氢钙；崩解剂诸如 玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸及类似物；润滑剂诸如硬脂酸镁；以及甜 味剂诸如蔗糖、杲糖、乳糖或阿斯巴甜或者可以加入调味剂诸如薄荷，冬 青油或櫻桃调味剂。当单元剂型是胶囊时，除了上述类型的材料，它可含 有液态载体，诸如植物油或聚乙二醇。各种其他的材料可以作为包衣或者 用于另外修4争该固体单元剂型的物理形式而存在。例如，片剂、丸剂或胶 嚢可以用明胶、蜡、虫胶或糖及类似物包衣。糖浆剂或酏剂可含有活性化 合物、作为甜味剂的蔗糖或果糖、作为防腐剂的尼泊金曱酯和尼泊金丙酉旨、 染料和调味剂如樱桃味或橙味剂。当然，在制备任何单元剂型中使用的任 意材料应当是药学上可接受的并且在所用的数量内基本上无毒性。此外， 活性化合物可被掺入持续释放制品和装置中。
活性化合物还可以通过输注或注射而静脉内或腹膜内给药。该活性化 合物或其盐的溶液可在水中制备，任选地与无毒性的表面活性剂混合。分 散体也可在甘油、液态聚乙二醇、三醋汀或它们的混合物中以及在油中制 备。在存储和应用的一般条件下，这些制品含有防腐剂以防止微生物的生 长。
适于注射或输注的药物剂型可包括含有活性成分的无菌含水溶液或 分^t体或者无菌粉末，其适于临时制备无菌可注射的或可输注的溶液或者 分散体，任选地包封在脂质体中。在任何情况下，最终的剂型在制造和存 储条件下应当是无菌的、流动的和稳定的。液态载体或溶媒(vehicle)可 以是溶剂或液态的分散介质，包括，例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘 油、丙二醇、液态聚乙二醇，及类似物)、植物油、无毒性甘油酯、以及 它们适宜的混合物。例如，借助形成脂质体，借助在分散体情况下保持所 需粒子大小，或者借助应用表面活性剂，可保持适当的流动性。微生物作 用的预防可用各种抗菌和抗真菌剂例如尼泊金酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、 硫柳汞及类似物来实现。在许多情况下，优选的是包括等渗剂，例如，糖 类，緩沖剂或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可以通过在该组合物中应用延迟吸收剂例如单硬脂酸铝和明胶而实现。
无菌可注射溶液是通过在适合溶剂中加入所需量的活性化合物以及 上面列举的各种其他成分(需要时)，随后过滤灭菌而制备的。至于用于 制备无菌可注射溶液的无菌粉末，优选的制备方法为真空干燥和冻干技 术，其得到一种存在于先前灭菌过滤溶液中的活性成分以及任意额外所需 成分的粉末。
至于局部给药，本发明化合物可以纯的形式而应用，亦即，当它们是 液态时。但是，通常所期望的是，以与皮肤病学上可接受载体(可以是固 体或液体)相組合的组合物或制剂而将它们施用至皮肤。
有用的固态载体包括精细分开的固体诸如滑石、粘土、微晶纤维素、
硅胶、矾土 (alumina)及类似物。有用的液态载体包括水、醇或二醇或水 -醇/二醇混合物，其中本发明化合物以有效的水平溶解或分散，任选地借 助无毒性的表面活性剂。可以添加辅助剂例如香精和额外的抗微生物剂， 以便优化给定用途的属性。得到的液态组合物可以从吸收垫来应用，用于 浸渗至绷带和其他敷料或者应用泵类型的或气溶胶喷雾器喷至患病部位。
增稠剂诸如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和脂肪酸酯、脂肪醇、改 性的纤维素或改性的矿物材料还可以与液态载体一起使用，以便形成可扩
展的糊剂、凝胶剂、软膏、皂类及类似物，直接应用于使用者的皮肤。
可用于将本发明化合物传递至皮肤的、有用的皮肤病学组合物的实例 是本领域已知的；例如，参见Jacquet等，(美国专利第4,608,392号)，Geria (美国专利第4，992,478号)，Smith等(美国专利第4,559,157号)和 Wortzman (美国专利第4,820,508号)。本发明化合物的有用剂量可以由对 比它们的体外活性以及动物模型中体内活性而确定。在小鼠和其他动物中 有效剂量外推至人的方法是本领域已知的；例如，参见美国专利第 4,938,949号。
通常，本发明化合物在液态组合物诸如洗液中的浓度为(a)约0.1-25 重量％和(b)约0.5-10重量％。在半固态或固态组合物诸如凝胶或粉末中 的浓度为(a)约0.1-5重量％和(b)约0.5-2.5重量％。治疗应用中所需的化合物或其活性盐或衍生物的量不仅随着具体化
合物或选定的盐而变化，还随着给药途径、待治疗疾患(condition)的性 质、以及年龄和患者的状况而变化，并且最终由巡诊医师或临床医师处理。 但是，通常，适合的剂量范围为(a)每日约1.0-100 mg/kg体重，(b)每 日约10-75 mg/kg体重，和(c )每日约5-20 mg/kg体重。
所述化合物可以单元剂型；例如，片剂、胶嚢等而常规给药，每个单 元剂型含有(a)约4-400 mg, (b)约10-200 mg,和(c)约20-100 mg 的活性成分。
理想地，应当给药活性成分以便达到活性化合物的峰血浆浓度(a)约 0.02-20 ^iM， (b)约0.1-10 inM,和(c)约0.5-5 pM。这些浓度是可实现 的，例如用静脉内注射0.005-0.5%的活性成分溶液、或口J良施用含有约 4-400 mg活性成分的大丸剂。
本发明的化合物还可以从吸入器、吹入器、喷雾器或加压包(pack) 或传输气溶胶喷雾的其他装置而吸入给药。加压包可包含适宜的推进剂诸 如二氧化碳或其他适宜的气体。对于加压气溶胶，剂量单位可以用提供传 递计量数量的数值来确定。吸入器、吹入器、喷雾器已被全面地描述于药 学参考书，例如《雷明顿制药学》(Remington's Pharmaceutical Sciences) 第16巻(1980 )或第18巻(1990 ) Mack出版公司。
期望的剂量可常规地以单一剂量或者如以适当的间隔例如每日两个、 三个、四个或更多个亚剂量(sub-dose)而给药的分开剂量存在。该亚剂 量本身可进一步分成，例如，许多离散疏松间隔的给药；诸如从吹入器多 次吸入或者应用许多滴至眼睛。
在本说明书中所引用的所有专利、专利申请、书和参考文献藉此通过 引用将其全部内容并入。在任何不一致的情况下，包括其中任何定义的本 发明内容占优。
本发明参照各种特定的和优选的实施方案和技术进行了描述。尽管如 此，应当理解的是，可以进行多种改变和改进，但仍然在本发明的精神和 范围内。实施例
叙夢
应用本领域熟知的药理才莫型或应用如下所述的检验方法，可以确定本 发明化合物用作A2B腺苷受体拮抗剂的能力。
应用Robeva， A等在Biochem. Pharmacol., 51. 545-555 (1996)中所描述 的技术，将大鼠A2B受体cDNA亚克隆至表达质粒pDoubleTrouble。在感 受态的JM109细胞中扩增质粒，应用Wizard Megapr邻柱(Promega Corporation, Madison, WI)分离质粒DNA。借助Lipofectin将A2B腺苷 受体引入HEK-293细胞中，如在Feigner,P. L.等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 7413-7417 (1987)中所描述的。
被转染的HEK细胞生长于5%0)2/95%02湿化空气、温度为37°C的 条件下。根据在0.6mg/mLG418中细胞的生长选择集落。将转染的细胞维 持在补充了 Hams F12营养混合物(1/1)、 10%新生小牛血清、2mM谷氨 酰胺且含有50 IU/mL青霉素、50 mg/mL链霉素以及0.2 mg/mL遗传霉素 (Geneticin) ( G418, Boehringer Mannheim)的DMEM中。在10 cm直径 圓盘中培养细胞并在生长融合时(大约72小时后)传代培养。
^顏沐潜合试發
^f乂犯f谬将融合单层的HEK-A2B细胞用PBS冲洗，随后用水冷 的含有蛋白酶抑制剂(10 |ug/mL苄脒，100 pM苯基曱烷磺酰氟，和2 |iig/mL 各一种抑肽酶、抑胃酶素和亮肽素)的緩沖液A (10 mMHEPES， 10 mM EDTA， pH 7.4 )冲洗。在Polytron( Brinkmann)中将细胞均质20s,以30,000 xg离心，用緩冲液HE (10 mMHEPES ， lmMEDTA， pH7.4，含有蛋白 酶抑制剂)冲洗沉淀物两次。将最终的沉淀物重新悬浮在补充了 10%蔗糖 的緩冲液HE中并于-80。C以等份试样冷冻。至于结合检验，将膜解冻并且 用HE稀释5-10倍至大约1 mg/mL的最终蛋白浓度。为了确定蛋白浓度， 将膜和小牛血清白蛋白标准品溶解于0.2%NaOH/0.01% SDS中，并且应用 荧光胺荧光测量蛋白。Stowell, C. P.等，Anal. Biochem., M, 572-580 (1978)。用[3H]ZM214,385 (17 Ci/mmol, Tocris Cookson, Bristol UK) (Ji, X.等， Drug Design Dis匿,Ji, 216-226 (1999))或者125I-ABOPX (2200 Ci/mmol) 进行大鼠A2B腺苷受体的饱和度结合的检验。为了制备^I-ABOPX，将在 甲醇/1 MNaOH (20: 1)中的10 |uL 1 mM ABOPX加至50 100 mM磷 酸盐緩冲液(pH 7.3)。加入1或2 mCi的Na125I，随后是10 1 mg/mL在 水中的氯胺-T。经室温20分钟孵育后，加入50 |LiL 10 mg/mL在水中的焦 亚硫酸钠用以猝灭反应。将反应混合物施加于C18 HPLC柱，用甲醇和5 mM磷酸盐pH 6.0的混合物洗脱。经35%甲醇5分钟后，曱醇浓度在15 分钟内骤增至100%。在11-12分钟后洗脱的是未反应的ABOPX;在18-19 分钟洗脱的是^I-ABOPX，相对于初始的1251产率为50-60%。
在平衡结合检验中，127I/125I-ABOPX的比率为10-20/1。在补充了 1 U/mL腺苷脱胺酶和5 mM MgCl2、总体积为0.1 mL的HE缓冲液中，用 20-25 ng膜蛋白一式三份进行放射配体结合试验。孵育时间为21。C、 3小 时。在100 |LiM NECA存在下，测量非特异性结合。应用0.6 nM的 125I-ABOPX完成竟争实验。应用Brandel细胞收集仪(Ga他ersburg， MD ), 在Whatman GF/C过滤器上将膜过滤，然后在15-20秒内用水冷緩沖液(10 mM Tris, 1 mM MgCl2,pH 7.4 )冲洗3次。用Marquardt非线性最小二乘 内插法计算单一位点结合模型的Bmax和Ko值。Marquardt, D. M., J. Soc. Indust. Appl. Math., U, 431-441.21 (1963)。不同化合物的K;值衍生自所描 述的ICsJ直。Linden. J., J. Cvcl. Nucl. Res,, 8. 163-172 (1982)。重复实验的 数据列表为平均值土SEM。
^,岸必#|茅爱糸[3H]CPX. Bruns, R. F.等，Naunvn- Schmiedeberg's Arch. Pharmacol., 335, 59-63 (l987)。在放射配体结合检验中，将 125I-ZM241385和^I-ABA应用至衍生自HEK-293细胞的膜，该细胞分别 表达重组大鼠A!、 A2A和AsAR。如所述，进行了卩H]iW^-苯基异丙基腺 香Schwabe, U.等,Naunvn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol., 313, 179-187 (1980). ([3H]K-PIA, Amersham, Chicago, IL)至来自大鼠大脑皮质膜的A受 体的结合和卩H]CGS 21680 Jarvis, M.F.等，J. Pharmacol. Exp. Therap., 251, 888-893 (1989). (DupontNEN, Boston, MA)至来自大鼠紋状体膜的A^受体的结合。腺苷脱氨酶(3单位/mL)存在于大脑膜的制备过程中，在30。C、 30分钟预孵育中，以及在用放射配体孵育过程中。所有非放射性化合物首 先溶于DMSO中，然后用緩冲液稀释至最终浓度，其中DMSO的量始终 不超出2%。应用Brandell细胞收集仪(Brandell, Gaithersburg， MD)，在 WhatmanGF/B过滤器上经快速过滤而终止孵育。用3mL緩冲液冲洗各试 管三次。
使用了至少六种不同浓度的竟争剂，其跨越了每个化合物IC50被适当
调节的3个数量级。IC5G值，由应用非线性回归法计算得到(Graph-Pad Prism, San Diego， CA)，,皮转化为表^见Ki值，如所述。Linden, J., J. Cvcl. Nucl. Res., &163-172 (1982)。受试化合物的Hill系数范围为0.8至1.1。
将来自 一个合流T75烧瓶的HEK-A2B细胞用不含Ca"和Mg"的 Dulbecco磷酸緩冲盐溶液(PBS)沖洗，然后在不含Ca^和Mg^而带有0.05% 胰蛋白酶和0.53 mMEDTA的HBSS中孵育，直至细胞分离开。细胞通过 250xg离心在PBS中冲洗两次，然后再悬浮于主要由137mMNaCl、5mM KCl、 0.9mMMgSO4、 1.4mMCaCl2、 3mMNaHC03、 0.6 mMNa2HP04、 0.4mMKH3PO4、 5.6 mM葡萄糖以及10 mM HEPES、 pH 7.4和。&2+灵敏 的荧光染料indo-l-AM (5 pM)所组成的10 mL HBSS中，37°C，共60分钟。 冲洗细胞一次，然后再悬浮于不含染料的、补充了 1 U/ml腺苷脱氨酶的 25mLHBSS中，并在室温保持。加入制备为在DMSO或溶媒中100X母 液的腺苷受体拮抗剂，然后转移细胞至37。C浴2分钟。然后将细胞(在2 ml 中1百万个)转移至维持于37°C、在Aminco SLM 8000分光荧光计(SML 仪器，UrbanaIL)内的搅拌小池中。应用4nm狭缝宽度，记录在400和485 nm(激发，332 mn)处所获得的indo-l荧光比率。在100s平衡期后，加入 NECA。
豕^4M尸好欢炎
在DMEM/HEPES緩沖液(DMEM含有50 mM HEPES， pH 7.4， 37°C) 中进行环AMP的产生。用DMEM/HEPES緩冲液冲洗每孔细胞两次，然 后加入100 腺普脱氨酶(最终浓度10 IU/mL)和100 的罗列普拉
25(rolipram)和咯利普兰(cilostamide)溶液(最终浓度各为10 pM),随后为 50 nL受试化合物(适当的浓度)或者缓冲液。15分钟后，通过除去培养基 和加入200 0.1 M HC1,终止37°C的孵育。于-20。C储存酸提取物直至 检验。根据利用cAMP结合蛋白(PKA)的、具有如下较小改进的方案[van der Wenden等，1995],检测环AMP的量。检验的緩冲液是由pH为7.5的150 mM K2HPO4/10 mM EDTA/0.2% BSAFV所组成。将样品(20 mL)于0°C孵 育90分钟。经Brandel M-24细胞收集仪内的GF/C玻璃微纤(microfiber) 过滤器过滤孵化物。另外用4次2 mL 150 mM K2HPO4/10 mM EDTA (pH 7.5, 4。C)冲洗过滤器。在提取2小时后，在Packard Emulsifier Safe闪烁液 中，对穿孔的(punched)过滤器进行计数。
在上面亲合性检验中，本发明的代表性化合物已显示为起作用的。
在Varian-300 MHz光谱仪上进行质子核磁共振光谱分析，而且光谘取 自DMS0-4。除注明外，化学位移被表示为ppm，从DMSO (2.5 ppm)的 相对ppm至低场。用ThermoFi皿igan LCQ质谱仪进行电喷雾电离(ESI)质 谨分析。
经应用TLC (硅胶60 F254, 0.25 mm,铝板支持，EM Science, Gibbstown, NJ),和应用Varian C18 5《敫米分析柱(4.6 mm x 150 mm)、以线性梯度溶剂 系统、流速1 mL/分钟的HPLC (Shimadzu)判断，所有的黄嘌呤衍生物都是同质的。所用的溶剂系统为MeOH(0.P/。曱酸)H20 (0.1%甲西吏)。以300 nm 和254 nm处的UV吸收值检测峰值。NMR和质谱表明与指定的结构相一 致。
教备或承/七^定差必^參v4好遞^才法
将在CH2C12 (20 mL)中、由6-羟基烟酸(1,444 g, 10.4 mmol)制备的6-氯代烟酰氯滴加至5,6-二氨基-1,3-二取代尿嘧啶(8 mmol)的无水吡啶(8.2 mL)溶液，维持在5。C。将反应物升温至室温并且再搅拌3小时。加入水(50 mL)以便猝灭反应。蒸发溶剂从而得到一种深色(dark)的油状物。将油 状物在2NNaOH(20mL)中回流2h。冷却后，用浓HC1将pH小心调节至 7。固体形成，收集，用水(20mL)、醚(20mL)和氯仿(20mL)洗涤， 得到米色固体。该产物用于下一步，无需进一步纯化。
1A: U-二丙基-8-(6-氯代-3-吡啶基)黄噤呤
^NMR (DMSO, d6): S 0.89 (m, 6H), 1.59(m, 2H), 1.73(m, 2H), 3.88 (t, 2H, J=7.2Hz), 4.00(t, 2H, J=7.2Hz), 7.68(d, 1H, J=8.4Hz), 8.50(dd, 1H, J产2.4Hz, J2=8.4Hz), 9.07(d, IH, J=2.4Hz),
MS:m/z 348 (M+H)+,
2A: 1 -环丙基-3-丙基-8-(6-氯代-3-吡咬基)黄噤呤
& NMR (DMSO, d6): 5 0.72 (m, 2H), 0.91(t, 3H, J=7.8Hz), 1.03(m, 2H), i1.72(m, 2H), 2.63(m, 1H), 3.98 (t, 2H, J=7.8Hz), 7.68(d, 1H, J=8.4Hz), 8.46(dd1H, J产2.4Hz, J2=8.4Hz), 9.07(d, IH, J=2.4Hz). MS:m/z346 (M+H)+.
3A: U -二烯丙基-8-(6-氯代-3-吡咬基)黄嘌呤
NMR (DMSO, de): 4.56(d, 2H, J=5.1Hz), 4.70(d, 2H, J=5.1Hz), 5,15(m, 4H), 5.98(m, 2H), 7.74(d, 1H, J=8.4Hz), 8.50(dd, 1H, J尸2.4Hz, J2=8.4Hz), 9.12(d, 1H, J=2.4Hz).
MS: m/z 344 (M+H)+,
姅备^^承/七好必定差必^參5 ^遞^才法
将化合物A(40 mg)和相应的取代胺(0.5 mL或0.5 g)》文入压力管。(如 果该胺是固体，加入作为溶剂的乙醇4mL。)用氩气冲洗该压力管，密封 并于160°C搅拌48-60 h。冷却后，加入醚(IO mL)。收集得到的固体并 用珪胶柱或制备型TLC纯化(溶剂A: CH2C12: MeOH =20: 1至10:1或者溶 剂B: CH2C12: MeOH: TEA=20: 1: 0.1至4: 1: 0.1)。
<formula>formula see original document page 28</formula>IB: l-环丙基-3-丙基-8J6-甲氨基-3-吡^t^l黄噤呤
& NMR (DMSO, d6): 0.72 (m, 2H), 0.91(t, 3H, J=7.5Hz), 1.03(m, 2H): 1.71(m, 2H), 2.62(m, 1H), 2.81(d, 3H, J=4.5Hz), 3.96 (t, 2H, J=7.5Hz), 6.52(d 1H, J=9.0Hz), 7.07(d, 1H, J=4.5Hz), 8.01(dd, 1H, J尸2.4Hz, J2=9.0Hz), 8.73(d: 1H, J=2.4Hz).
MS:m/z341(M+H)+.
2B: U-二丙基-8-「6-G-曱氧乙基)氨基-3-吡口絲l黄嘌呤
!H NMR (DMSO, d6): S 0.93 (m, 6H), 1.63(m, 2H), 1.78(m, 2H), 3.38(s:3H), 3.53(s, 4H), 3.91(t, 2H, J=7.5Hz)， 4.05(t, 2H,风5Hz), 6.65(d, 1H: J=8.7Hz), 7.24(s(br), 1H), 8.06(dd, 1H, J尸2.4Hz, J产8.7Hz), 8.71 (d, 1H J=2.4Hz).
MS: m/z 387(M+H)+.
3B: 1-环丙基-3-丙基-8-「6-(7-曱氧乙基)M-3-吡啶基l黄噤呤
& NMR (DMSO, 4): 0.74 (m, 2H), 0.94(t, 3H, J=7.5Hz), 1.06(m, 2H): 1.75(m, 2H), 2.65(m, IH), 3.32(s, 3H), 3.52(s, 4H), 4.00(t， 2H, J=7.5Hz): 6.64(d, IH, J=8.7Hz), 7.23(s(br), 1H), 8.04(dd, 1H, J尸2.4Hz, J2=8.7Hz): 8.76(d， 1H, J:2.4Hz).
MS: m/z 385(M+H)+.
4B: 1,3-二烯丙基-8-『6-(2-曱氧乙基)氨基-3-吡^^l黄噪呤
& NMR (DMSO, de): 3.32(s, 3H), 3.52(s, 4H), 4,55(d, 2H, J=5.1Hz): 4.68(d, 2H, J=5,lHz), 5.15(m, 4H), 5.95(m， 2H), 6.64(d, 1H, J=9.0Hz): 7.25(s(br), 1H), 8.05(dd, 1H, J尸2.4Hz, J2=9.0Hz), 8.77(d, 1H, J=2.4Hz).
MS: m/z 383(M+H)+.
5B: l-环丙基-3-丙基-8-「6-(7-吗啉基乙基)氨基-3-吡咬基l黃嘌呤
& NMR (DMSO, de): 0.74 (m, 2H), 0.94(t, 3H, J=7,5Hz), 1.06(m, 2H): 1.75(m, 2H), 2.46(t, 4H, J=4.5Hz), 2.52(m, 2H), 2.65(m, IH)， 3.46(m, 2H): 3.63(t, 4H. J=4.5Hz), 4.00(t, 2H, J=7.2Hz), 6.62(d, IH, J=8.7Hz), 7.23(t, 1H: J=5.4Hz), 8.04(dd, 1H， J尸2.4Hz, J2=8.7Hz), 8.75(d, 1H， J=2.4Hz).
MS:m/z440(M+H)+.
6B: 1-环丙基陽3隱丙基隱8國『6隱(2-(哌咬-l哩基)乙氨基V3-吡o组l黃噤呤
& NMR (DMSO, de): 0.74 (m, 2H), 0.94(t, 3H, J=7.5Hz), 1.07(m， 2H): 1.44(m, 2H), 1.57(m, 4H), 1.75(m, 2H), 2.51(m, 6H), 2.65(m, IH), 3.48(m: 2H), 4.00(t, 2H, J=7.2Hz), 6.63(d, IH, J=9.0Hz), 7.05(t， IH), 8.05(dd, 1H: J尸2.4Hz, J2=9.0Hz), 8.76(d, IH, J=2.4Hz).
MS: m/z 438(M+H)+.
307B: l-环丙基-3-丙基-8-「6-(7-(吡咯烷-l-基)乙氨基V3-吡咬基1黄嘌呤 MS:m/z424(M+H)+,
賴备疯應必合參y> ^遞^7才法
将氨基取代的吡咬基化合物旦(50 mg )在80-100°C溶于吡啶(25 mg) 中。在冷却至室温后，室温下加入所期望的酰基氯(acid chloride) (4-6当 量)。室温搅拌该混合物24-60 h。用冰猝灭反应并除去溶剂，然后用硅胶 柱纯化(CH2Cl2: MeOH=96: 4)残留物，从而得到化合物1-36和46-51, 产率60-80%。
1: l-环丙基-3-丙基-8-r6-(N-『6-f三氟甲基)烟酰基l-N-曱氨基V3-吡咬基l 黄噤呤
HPLC条件MeOH40。/。-95o/o梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留 时间=9.77分钟。
& NMR (DMSO, d6): 0.72 (m, 2H), 0.89(t, 3H, J=7.5Hz), 1.01(m, 2H), 1.71(m, 2H), 2.62(m, 1H), 3.53(s, 3H), 3.96(t, 2H, J=7.5Hz), 7.53(d, 1H, J-8.4Hz), 7.88(d， 1H, J=8.4Hz), 8.00(dd, 1H, J尸1.8Hz, J2=7.8Hz), 8.38(dd, 1H, J产2.4Hz, J2=8.4Hz), 8.70(s, 1H), 8.94(d, 1H, J=2.4Hz).
MS: m/z 514(M+H)+.
2: l-环丙基-3-丙基-8-「6-fN-「6-(三氟甲基)烟酰基l-N-乙氨基)-3-吡咬基l
黄噤呤
HPLC条件MeOH40。/。-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留 时间=10.13分钟。
& NMR (DMSO, de): 0.70 (m, 2H), 0.88(t, 3H, J=7.5Hz), 1.02(m, 2H), 1.19(3H, J=7.2Hz), 1.69(m, 2H), 2.61(m, 1H), 3.95(t, 2H, J=7.2Hz), 4.08(q, 2H, J=7.5Hz), 7.46(d, 1H, J=8.7Hz), 7.85(d, 1H, J=8.1Hz), 7.96(dd, 1H, J尸8.1Hz, J2=2.1Hz), 8.36(dd, 1H, J尸8.7Hz, J2=2.1Hz), 8.66(s, 1H), 8.96(d, 1H， J=2.1Hz).
MS: m/z 528(M+H)+.3: l-环丙基-3-丙基-8-〖6-(N-『6-(三氟甲基)烟酰基l-N-丙氨基)-3-吡p絲l 黄噪呤
HPLC条件MeOH40。/。-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=10.80分钟。
& NMR (DMSO, de): !H NMR (DMSO, de): 口0.71 (m, 2H), 0.91(m, 6H), 1.03(m, 2H), 1.57-1.73(m, 4H), 2.61(m, 1H), 3.92-4.04(m, 4H), 7.47(d, 1H, J=8.7Hz), 7.85(d, 1H, J=8.4Hz), 7.95(d, 1H, J=8.4Hz), 8.36(dd, 1H, J产8.7Hz, J^2.4Hz), 8.66(s, 1H), 8.95(d, 1H, J=2.4Hz).
MS: m/z 542(M+H)+.
4: l-环丙基-3-丙基-8-『6-(N-「6-(三氟甲基)烟酰基l-N-(2-曱氣乙基)氨 基)-3-吡啶基l黄嘌呤
HPLC条件MeOH40。/。-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=10.08分钟。
NMR (DMSO， de): !H NMR (DMSO, d6): 0.71 (m, 2H), 0.88(t， 3H, J=7,5Hz), 1.05(m, 2H), 1.70(m, 2H), 2.62(m, 1H), 3.19(s, 3H), 3.62(t, 2H, J=5.4Hz), 3.96(t, 2H, J=7.5Hz), 4.21(t, 2H, J=5.4Hz), 7.47(d, IH, J=8.7Hz), 7.87(d, 1H, J=8.1Hz), 7.96(d, 1H， J=8,lHz), 8.34(dd, 1H, J尸8.7Hz, J2=2.4Hz), 8.66(s, 1H), 8.95(d, 1H, J=2.4Hz).
MS: m/z 558(M+H)+.
5: 1-环丙基-3-丙基-8-『6-(^-〖6-氟烟酰基)-1^2-曱氧乙基)氨基)-3-吡啶 基l黄嘌呤
HPLC条件MeOH40。/。-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=9.32分钟。
& NMR (DMSO, de): 0.74(m, 2H), 0.92(t, 3H, J=7.5Hz), 1.06(m， 2H), 1.73(m, 2H), 2.65(m, 1H), 3.19(s, 3H), 3.64(t, 2H, J=5.7Hz), 3.99(t, 2H, J=7.5Hz), 4.22(t, 2H, J-5.7Hz), 7.18(dd, 1H, J尸8.4Hz, J尸2.4Hz), 7.41(d, 1H, J=8.4Hz), 7.91(td, 1H, J尸8.4Hz, J2=2.4Hz), 8.18(d, IH, J=2.4Hz), 8.36(dd, 1H,J产8.4Hz, J2=2.1Hz), 8,76(d, 1H, J=2.1Hz). MS: m/z 508(M+H)+.
6: l-环丙基-3-丙基-8-『6-(N-烟酰基-N-(2-曱氣乙基)氨基V3-吡咬基l黄 噤呤
HPLC条件MeOH40。/o-95o/。梯度，10分钟，然后MeOH95V。。保留 时间=8.53分钟。
MS: m/z 490(M+H)+.
7: l-环丙基-3-丙基-8-「6-rN-烟酖基-N-(环丙基曱基)氨基)-3-吡啶基l黄 噪呤
HPLC条件MeOH40。/o-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=9.77分钟。
MS: m/z 486(M+H)+.
8: l-环丙基-3-丙基-8-『6-(N-烟酰基-N-(环丙基)氨基)-3-吡啶基l黄嘌
吟
HPLC条件MeOH40。/。-95o/o梯度，10分钟，然后MeOH95Vo。保留 时间=8.67分钟。
MS: m/z 472(M+H)+.
9: 1-环丙基-3-丙基-8-6-0^『6-(三氟甲基)烟酰基1-]^-(环丙基曱基) 氨基)-3-吡咬基l黄嘌呤
HPLC条件MeOH40。/o-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH 95%。保留 时间=10.71分钟。
^NMR (DMSO, 4): 0.19(m, 2H), 0.41(m, 2H), 0.72(m, 2H), 0.91(t, 3H, J=7.2Hz), 1.00-1.16(m, 3H), 1.70(m, 2H), 2.62(m, 1H), 3.96(m, 4H), 7.47(d, IH, J=8.4Hz), 7.86(d, 1H, J=8.1Hz), 7.97(dd, 1H, J尸2.1Hz, J2=8.1Hz), 8.36(dd, 1H， J尸2.1Hz, J2=8.4Hz), 8.68(s, 1H), 8.98(d, 1H, J=2.1Hz).
MS: m/z 554(M+H)+.
3310: 1-环丙基-3-丙基-8-「6-(^-「6-〖三氟曱基)烟酰基1-^ (四氢呋喃基曱 基)氨基)-3-吡啶基—j黄嘌呤
HPLC条件MeOH40。/。-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH 95%。保留 时间=10.31分钟。
丄H NMR (DMSO, d6): 0.71(m, 2H), 0.88(t, 3H, J=7.5Hz), 1.02(m, 2H), 1.54誦1.96(m, 6H), 2.61(m, 1H), 3,57(dt, 2H, J尸6.9Hz, J2=3.0Hz), 3.96(t, 2H, J=7.2Hz), 4.04-4.18(m, 3H), 7.48(d, 1H, J=8.4Hz), 7.85(d, 1H, J=8.4Hz), 7.95(dd, 1H, J尸8.4Hz, J2=2.4Hz), 8.34(dd, 1H, J尸8.4Hz, J尸2.4Hz)， 8.66(s， 1H), 8.93(d, 1H, J=2.4Hz).
MS: m/z 584(M+H)+.
11: l-环丙基-3-丙基-8-『6-(N-烟酰基-N-乙氨基)-3-吡咬基l黄噤呤
HPLC条件MeOH40。/o-95。/o梯度，IO分钟，然后MeOH 95%。保留 时间=8.93分钟。
& NMR (DMSO, d6): 0.72(m, 2H), 0.91(t， 3H, J=7.2Hz), 1.04(m, 2H), U9(t, 3H, J=7.2Hz), 1.70(m, 2H), 2.61(m, 1H), 3.95(t, 2H, J=7.2Hz), 4.06(q， 2H, J:7.2Hz), 7.33(m, 2H), 7.80(dt, 1H, J尸l,5Hz, J2=8,lHz), 8.31(dd, 1H， J尸2.4Hz, J产8.4Hz), 8.44(d, IH, J=2.1), 8.53(dd, 1H, J尸2.1Hz, J2=4.8Hz), 8.99(d, 1H, J=2.1Hz).
MS: m/z 460(M+H)+.
12: l-环丙基-3-丙基-846-fN-烟酰基-N-丙絲)-3-吡p絲l黄。票呤
工H NMR (DMSO, d6): 0.72(m, 2H), 0.88(t, 6H, J=7.5Hz), 1.02(m, 2H), 1.57-1.74(m, 4H), 2.62(m, IH), 3,97(m, 4H), 7.31(dd, IH, J尸7.8Hz, J2=0.9Hz): 7.34(d, IH, J=8.7Hz), 7.68(dt, IH, J产7.8Hz, J2=1.8Hz), 8.30(dd, IH, J产8.4Hz: J2=2.4Hz), 8.42(d， IH, J=2.4Hz), 8.51(dd, IH, J尸4她，J2=1.5Hz), 8.99(d, IH J=2.4Hz).
HPLC条件MeOH40。/o-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH 95%。保留 时间=9.7分钟。MS:m/z474(M+H)十.
13: 1-环丙基-3-丙基-8-『6-( —-『6-氟烟酰基l-N-f环丙基曱基l氨基)-3-吡
HPLC条件MeOH40o/。-95。/。梯度，IO分钟，然后MeOH95。/。。保留时间=10.09分钟。
& NMR (DMSO, d6): 0.15(m， 2H), 0.39(m, 2H), 0.72(m, 2H), 0.89(t, 3H,J=7.5Hz), 1.00-1.20(m, 3H), 1.71(m, 2H), 2.63(m, 1H), 3.95(m, 4H), 7.13(dd,1H, J尸8.4Hz, J2=2.1Hz), 7.37(d, 1H, J=8.4Hz), 7.88(m, 1H), 8.16(s, 1H),8.33(dd, 1H， J尸8.4Hz, J2=2.1Hz), 9.00(d, IH, J=2.1Hz).
MS: m/z 504(M+H)+.
14: l-环丙基-3-丙基-8-r6-(N-f6-氟烟酰基卜N-甲氨基)-3-吡啶基l黄噪
呤
HPLC条件MeOH40。/。-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留时间=9.00分钟。
& NMR (DMSO, de): 0.72(m, 2H), 0.90(t, 3H, J=7,5Hz), 1.03(m, 2H)，1.72(m, 2H), 2.63(m, 1H), 3.51(s， 3H), 3,97(t, 2H, J=7.5Hz), 7,17(dd, 1H,J尸8.1Hz, J2=2.1Hz), 7.45(d, 1H, J=8.4Hz), 7.93(m, 1H), 8.20(s， 1H), 8.36(dd,1H, J尸7.5Hz, J2=2.1Hz), 8.99(s, 1H).
MS: m/z 464(M+H)+,
15: l-环丙基誦3-丙基-8-「6國(N-烟酰基-N-烯丙絲)-3國吡咬基l黄噤呤
HPLC条件MeOH40。/。-95。/。梯度，IO分钟，然后MeOH95。/。。保留时间=9.28分4中。
& NMR (DMSO,似！H NMR (DMSO, 口0.71(m, 2H), 0.88(t, 3H,J=7.5Hz), 1.03(m, 2H), 1.68(m, 2H), 2.61(m, 1H), 3.95(t, 2H, J=7.2Hz), 4.67(d2H, J=4.5Hz), 5.16(m, 2H), 5.92(m, 1H), 7.37(m, 2H), 7.73(d, 1H, J=7.8Hz),8.32(d, 1H, J=8.7Hz), 8.48(s, 1H), 8.54(, d, 1H, J=3.9Hz), 9.0(s, 1H).
MS:m/z 472 (M+H)+,16: l-环丙基-3-丙基-8-〖6-(N-[6-(三氟曱基)烟酰基l-N-烯丙氨基V3-吡
";o堡-i貫w杀，
HPLC条件MeOH40。/o-95o/。梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留时间=10.37分钟。
NMR (DMSO, d6): NMR (DMSO, 4): 0.73(m， 2H), 0.91(t, 3H,J=7.5Hz), 1.03(m, 2H), 1.72(m， 2H), 2.66(m, 1H), 3.99(t， 2H, J=7.2Hz), 4.73(d2H， J=4.8Hz), 5.15-5.30(m, 2H), 5.91画6.00(m, 1H), 7.53(d, 2H, J=8.4Hz),7.91(d, 1H, J=8.1Hz), 8.03(d, 1H, J=8,lHz), 8.40(dd, 1H, J尸8.4Hz, J2=2.1Hz),8.73(s, 1H), 8.95(d, 1H, J=2,lHz).
MS: m/z 540 (M+H)+.
17: 1-环丙基-3-丙基-8-『6-(N-烟酰基-N-(l-r哌咬-l-基l乙基)氨基V3-吡
HPLC条件MeOH40。/。-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留时间=4.90分钟。
MS: m/z 543 (M+H)+.
18: l-环丙基-3隱丙基-8-『6-CN-f6-r三氟曱基)烟酰基l國N-(7-『哌啶-l-基l乙基)氨基)-3-吡啶基l黄嘌呤
HPLC条件MeOH40Q/。-95Q/。梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留时间=6.63分钟。
MS: m/z611 (M+H)+,
19: l-环丙基-3-丙基-8-『6-(N-烟酰基-N-(2-吗啉基乙基)氨基V3-吡啶基l黄噤呤
HPLC条件MeOH20。/。-70。/。梯度，10分钟，然后MeOH70。/。。保留时间=9.44分钟。
MS: m/z 545 (M+H)+,
20: l-环丙基-3-丙基-8-f6-(N-「6-(三氟曱基)烟酰基l-N-(2-吗啉基乙基)氨基V3-p比p定基l黄噤呤
36HPLC条件MeOH40。/o-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留
—'.、—^ 一 _ 一 .、*- L
盯!日JUf)分,f 。
H NMR (DMSO, d6): 0.73(m， 2H), 0.91(t, 3H, J=7.5Hz), 1.05(m, 2H),1.73(m, 2H)， 2.36(m, 4H), 2.63(m, 3H), 3.39(m, 4H), 3.99(t, 2H, J=7.5Hz),4.20(t, 2H, J=6.0Hz), 7.43(d, 1H, J=8,4Hz), 7.90(d, H, J=8.1Hz), 8.00(d, 1H,J=8.1Hz), 8.34(dd, 1H, J尸8.4Hz， J2=2.4Hz), 8.70(s, 1H), 8.99(d, 1H,J=2.4Hz).
MS:m/z613 (M+H)+.
21: l-环丙基-3-丙基-8-「6-(N-「6-氟烟酰基l-N-(2-「哌啶-l-基l乙基)氨基)-3-吡啶基l黄噤呤
HPLC条件MeOH20。/o-52。/。梯度，10分钟，然后MeOH 52%。保留时间=13.9分钟。
& NMR (DMSO, de): 0.74(m, 2H), 0.92(t, 3H, J=7.5Hz), 1.06(m, 2H),1.45-1.84(m, 8H), 2.65(m, 1H), 2.99(m, 2H), 3.35(m, 2H), 3.59(m, 2H), 3.99(t,2H, J=7.5Hz), 4.45(m, 2H), 7.20(dd, 1H, J尸8.4Hz, J2=2.4Hz), 7.43(d, 1H,J=8.4Hz), 7.97(dt, 1H, J尸8.1Hz, J2=2.4Hz), 8.23(d, H, J=2.4Hz), 8.35(dd, 1H,J尸8.4Hz, J2=2.4Hz), 9.12(d, 1H, J=2.4Hz), 10.13(s, 1H).
MS:m/z561 (M+H)+.
22: 1-环丙基-3-丙基-8-『6-(^-『6-氟烟酰基1-:^-(2-吗啉基乙基)氨基)-3-吡咬基l黄嘌呤
HPLC条件MeOH20。/。-70。/o梯度，10分钟，然后MeOH70。/。。保留时间=10.13分钟。
& NMR (DMSO, d6): 0.73(m, 2H), 0.89(t, 3H, J=7.5Hz), 1.03(m, 2H),1.73(m, 2H), 2.34(m, 4H), 2.62(m, 3H), 3.39(m, 4H), 3.96(t, 2H, J=7.5Hz),4.16(m, 2H), 7.14(dd, 1H, J尸8.7Hz, J2=2.4Hz), 7.31(d, 1H, J=8.7Hz)， 7.89(td,J尸8.4Hz, J2=2.4Hz), 8.16(d, IH, J=2.4Hz), 8.29(dd， 1H, J「8.7Hz, J2=2.4Hz),9.00(s, 1H).MS: m/z 563 (M+H)十.
23: l-环丙基-3-丙基-846"N—頃酰基-N-(2-吡咯烷-l-基l乙基、,氨基)-3-p比咬基l黄噤呤
HPLC条件MeOH40。/o-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=4.62分钟。
MS: m/z 529 (M+H)+,
24: l-环丙基-3-丙基-8-f6-(N-[6-(三氟曱基)烟酰基l-N-(2-r吡咯烷-l-基l 乙基)氨基)-3-吡咬基l黄嘌呤
HPLC条件MeOH40。/。-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=6.43分钟。
MS: m/z 597 (M+H)+.
25: l-环丙基-3-丙基-8-f6-f(K-烟酰基-N-fp塞吩-2-基)曱基l氨基)l-3-吡 咬基l黄嘌呤
HPLC条件MeOH40。/o-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=10.10分钟。
MS:m/z528 (M+H)+.
26: l-环丙基-3-丙基-8-〖6-(N-[6-(三氟曱基)烟酰基l-N-异丁氨基)-3-吡
HPLC条件MeOH40。/o-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留 时间=11.06分钟。
& NMR (DMSO, de): 0,71(m, 2H), 0.88(m, 9H), 1.02(m, 2H), 1.68(m, 2H), 1.91(m, 1H), 2.61(m， 1H), 3.95(m, 4H)， 7.48(d, 1H, J=8.4Hz), 7,83(d, 1H, J=8.4Hz), 7.92(d, 1H, J=8.1Hz), 8.35(dd, 1H, J尸8.4Hz, J2=2.1Hz), 8.64(s, 1H) 8.94(d, 1H, J=2.1Hz).
MS: m/z 556 (M+H)+.
27: U-二丙基-8-f6-(N-烟酰基-N-(环丙甲基)氨基)-3-吡咬基l黄嘌呤HPLC条件MeOH40o/。-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留 时间=10.63分钟。
!H NMR (DMSO, d6): 0.18(m, 2H), 0.42(m, 2H), 0.89(m, 6H), 1.15(m, 1H), 1.60(m, 2H), 1.74(m, 2H), 3.87(t, 2H, J=7.2Hz), 4.01(m, 4H), 7.34(m, 2H), 7.71(d, 1H， J=7,8Hz), 8.31画8.54(m, 3H), 8.69(s, IH).
MS:m/z488 (M+H)+.
28: U-二丙基-8-「6-(N-『6"三氟曱基)烟酰基l-N-(环丙曱基)氨基)-3-吡 咬基l黄噪呤
HPLC条件MeOH40。/o-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=11.46分钟。
& NMR (DMSO, 4): 0.18(m, 2H), 0.42(m, 2H), 0.89(m, 6H), 1.16(m, 1H), 1.60(m, 2H), 1.74(m, 2H), 3.87(t, 2H, J=7.2Hz), 4.01(m, 4H), 7.49(d, 1H, J:8.4Hz), 7.87(d, 1H, J=8.4Hz), 7.97(d, 1H, J=8,4Hz), 8.38(dd, 1H, J产8.4Hz, J2=2.4Hz), 8.69(s, 1H), 9.00(d, 1H, J=2.4Hz).
MS: m/z 556 (M+H)+.
29: 1.3-二丙基-8-「6-(N46-(三氟甲基)烟酰基l-N-Q-曱氣基乙基)氨 基)-3-吡啶基l黄噤呤
HPLC条件MeOH40。/o-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留 时间=10.91分钟。
& NMR (DMSO, d6): 0.87(m, 6H), 1.60(m, 2H), 1.73(m, 2H), 3.19(s, 3H), 3.62(t, 3H, J=5.1Hz), 3.86(t, 2H, J=7.2Hz), 4.00(t, 2H, J=7.2Hz), 4.31(t, 2H, J=5.1Hz), 7.48(d, IH, J=8.4Hz), 7.87(d, 1H, J=8.4Hz)，)， 7.96(d, 1H, J=8.4Hz), 8.36(dd, 1H, J尸8.4Hz, J2=2.4Hz), 8.66(s, 1H), 8.95(d, 1H, J=2.4Hz).
MS: m/z 560 (M+H)+.
30: 1,3-二丙基-8-r6-(N-(6-氟烟酰基)~^-(2-曱氣基乙基)絲V3-吡梵基1 黄噪呤
39'H NMR (DMSO, de): 0.88(m, 6H), 1.57(m, 2H), 1.72(m, 2H), 3.18(s, 3H), 3.60(t, 2H， J=5.7Hz), 3.86(t, 2H, J=7.5Hz), 4.00(t, 2H, J=7.5Hz), 4.19(t, 2H, J=5.7Hz), 7.14(dd, 1H, J尸8.7Hz, J2=2.7Hz), 7.39(d, 1H, J=8.7Hz), 7.88(dt 1H, J尸8.4Hz, J2=2.7Hz), 8.15(d, 1H, J=2.7Hz), 8.34(dd, 1H, J尸8.4Hz, J2=2.4Hz), 8,99(d, 1H, J=2.4Hz).
HPLC条件MeOH40。/。-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=10.18分钟。
MS: m/z 510 (M+H)十
31: U-二烯丙基-8-f6-(N-『6-(三氟曱基)烟酰基l-N-(2.甲氧基乙基)氨 基)-3-吡啶基l黄嘌呤
!H NMR (DMSO, d6): 3.18(s, 3H), 3.60(t, 2H, J:5.4Hz), 4.21(t, 2H, J=5.4Hz), 4.50(d, 2H, J=4.5Hz), 4.64(d, 2H, J=4.5Hz), 5.02-5.15(m, 4H), 5.83誦6.00(m, 2H), 7.48(d, 1H, J=8.7Hz), 7.86(d , 1H, J=8.4Hz，), 7.95(d, 1H, J=8.4Hz), 8.35(dd, 1H, J尸8.4 Hz, J2=2.4Hz), 8.67(d, 1H, J=1.5Hz), 8.95(d, 1H: J=2.4Hz).
HPLC条件MeOH40。/o-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=9.81分钟。
MS: m/z 556 (M+H)+.
32: 1,3-二烯丙基-846-(1^-「6-氟烟酰基l-N-(7.曱氧基乙基)氨基V3-吡啶 基l黄嘌呤
HPLC条件MeOH40。/o-95o/o梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留 时间=9.00分钟。
MS: m/z 506 (M+H)+.
33: U-二烯丙基-8-f6-rN-烟酰基-]^-(2-甲絲乙基)氨基)-3-吡咬基l黄 嘌呤
HPLC条件MeOH40。/。-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=8.28分钟。MS: m/z 488 (M+H)+.
34: 1,3-二丙基-8-『6-(N-哝唤基)-3-吡啶基l黄噤呤
化合物34可以从化合物1A与哌口秦缩合而形成。
HPLC条件MeOH20。/。-75o/。梯度，IO分钟，然后MeOH75。/。。保留 时间=9.24分钟。
& NMR (DMSO, 4): 0.87(q, 6H, J=7.5Hz), 1.56(m, 2H), 1.72(m, 2H), 2.78(t, 4H, X5Hz), 3.52(t, 4H, J=4.5Hz), 3.85(t， 2H, J=7.5Hz), 3.99(t, 2H, J=7.5Hz), 6.88(d, 1H, J=9.0Hz), 8.13(dd, 1H, J尸9.0Hz， J2=2.4Hz), 8.80(d, 1H, J=2.4Hz).
MS: m/z 398 (M+H)+.
35: 1.3-二丙基-8-『6-(N-(6-氟代烟酰基VN-(甲基)氨基V3-吡啶基l黄嘌
吟
HPLC条件MeOH40。/。-95Q/。梯度，10分钟，然后MeOH95y。。保留 时间=10.01分钟。
& NMR (DMSO, de): NMR (DMSO, de): 0.88(m, 6H), l,57(m, 2H), 1.72(m, 2H), 3.50(s， 3H), 3.86(t, 2H， J=7.5Hz), 4.00(t, 2H, J=7.5Hz), 7.16(dd, 1H, J尸8.4Hz, J2=2.4Hz), 7.45(d, 1H, J=8.7Hz), 7.92(dt, 1H, J尸8.4Hz, J2=2.4Hz), 8.19(d, IH, J=2.4Hz), 8.36(dd, 1H, J尸8,7Hz, J2=2.4Hz), 8.99(d, 1H J=2.4Hz).
MS:m/z466(M+H)+.
36: U-二丙基-8-「6-(N-『6-(三氟曱基)烟酰基l-N-(乙基)氨基)-3-吡咬基l 黄噪呤
HPLC条件MeOH40。/o-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH 95%。保留 时间=10.87分钟。
!H NMR (DMSO, de): 0.92(m, 6H), L24(t, 3H, J=6.9Hz), 1.55-1.78(m, 4H), 3.90(t, 2H, J=7.2Hz), 4.03(t, 2H, J=7.2Hz), 4.12(q， 2H, J=6.9Hz), 7.51(d, IH, J=8.4Hz), 7.90(d, IH, J=8.4Hz), 8.00(dd, 1H, J尸8.4Hz, J2=1.8Hz),
418,41(dd, 1H, J尸8她，J2=2.1Hz), 8.71(s, 1H), 9.01(d, 1H, J=1.8Hz).
13C NMR (DMSO, de): 10.95, 11.11, 13,10, 20.79, 20.78, 42.181, 43.12 44.46, 108,22, 120.26, 120.45, 120.97, 122.87, 135.71, 136.06, 137.75, 146.44 146.55, 147.00, 148.25, 149.03,150.61, 154.08, 155.11, 166.48.
MS: m/z 530 (M+H)+.
化合物B
制备脲取代的吡咬基化合物37-41的通用方法
将化合物B (50mg)和相应净皮取代的异氰酸酯(3当量)置于压力罐 中并溶于无水THF (~5-10ml)中。用氮气冲洗压力罐，密封并于80。C搅 拌24-72小时。冷却后，真空浓缩该混合物，而且用梯度硅胶色谱法或制 备型HPLC纯化。
37: l-(5-(l-环丙基-2,3,6,7-四氩-2,6-二氧代-3-丙基-lH-嘌呤-8-基)吡啶 -2-基)-1 -(2-甲氣基乙基>3-(3-曱氣基苯基)脲
HPLC条件MeOH40。/。-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留 时间=12.80分钟。
MS: m/z 534 (M+H)+,
38: l-(5-(l-环丙基-2,3,6,7-四氢-2,6-二氧代-3-丙基-lH-嘌呤-8-基)吡啶 -2-基)-3-(3-氟苯基)-1-(2-甲氣基乙基)脲
HPLC条件MeOH40。/o-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留 时间=12.94分钟。
& NMR (DMSO, d6): 0.77 (m, 2H), 0.95 (t, 3H, J=7.2Hz), 1.07 (d, 2H,J-6.3 Hz), 1.77(d, 2H, J=6.9 Hz), 2.67 (m, IH), 3.31 (s, 3H), 3.65 (t, 2H, J=5.4 Hz), 4.03(t, 2H, J=6.6 Hz), 4.23 (t, 2H, J=5.4 Hz), 6.91 (m， IH), 7.37 (in, 2H), 7.59 (m, 2H)， 8.47(d， IH, J=8.7 Hz), 9.14 (s, IH), 11.20 (s, IH).
MS: m/z 522 (M+H)+.
39: lW5-a-环丙基-2,3.6,7-四氬-2,6-二氧代-3-丙基-lH-噤呤-8-基)吡 啶-2-基〗-3-(2-氟苯基〗-l-(2-甲氣基乙基)脲
HPLC条件MeOH40。/。-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留 时间=13.28分钟。
MS: m/z 522 (M+H)+,
40: 3-(3-氯代苯基)-1-。-(1-环丙基-2,3.6,7-四氬-2,6-二氣代-3-丙基-111-嘌呤-8-基)吡啶-2-基)-1-(2-甲氣基乙基)脲
HPLC条件MeOH40。/。-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=13.55分钟。
& NMR (DMSO, ds): 0.77 (m, 2H)， 0.95 (t, 3H, J=7.2Hz), 1,07 (m, 2H), 1.77(q, 2H, J=7.2 Hz), 2.67 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.65 (t, 2H. J=5.4 Hz), 4.04(t: 2H, J=6.3 Hz), 4.22 (t, 2H, J=5.4 Hz), 7.12(dd, IH, J=1.5Hz， 8.4Hz), 7J7(t, 2H: J=8.1Hz), 7.55(q, 2H, J=9.0Hz), 7.80(t, IH, J=2.1Hz), 8.46(dd, IH, J产2,7Hz, J2=9.3Hz), 9.15(d, IH, J=2,4Hz), H.14(s, IH).
MS:m/z538 (M+H)+.
41: l-(5-n-环丙基-2,3,6,7-四氢-2,6-二氣代-3-丙基-lH-噤呤-8-基〗吡咬 -2-基V3-(3-(三氟曱基)苯基V W2-曱氣基乙基)脲
HPLC条件MeOH40。/o-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留 时间=13.30分钟。
& NMR (DMSO, de): 0.76 (m, 2H), 0.98 (t, 3H, J=7.2Hz), 1.07 (q, 2H, J=7.2Hz), 1.77(q, 2H, J=7.2 Hz), 2.67 (m, 1H), 3.29 (s, 3H), 3.65 (t, 2H, J=5.7 Hz), 4.04(t, 2H, J=6.3 Hz), 4.31 (t, 2H, J=5.7 Hz), 7.42(d, IH, J=8.4Hz), 7.59(m, 3H), 7.84(d, IH, J=8.1Hz), 8.09(s, IH), 8.47(dd, IH, J产2.4Hz,
43:=8.7Hz), 9.15(s, 1H), 1U4(s, 1H). MS: m/z 572 (M+H)+.
o o
或
化合物B
制备酰胺取代的吡咬基化合物42-45的通用方法
将化合物B (50mg)和相应酸酐或酰基氯(>10当量)置于压力罐中 并溶于无水吡啶( 5-10ml)中。至于酸酐的反应，加入催化量的DMAP。 用氮气冲洗压力罐，密封并于80。C搅拌24-72小时。冷却后，真空浓缩该 混合物，而且用梯度硅胶色语法或制备型HPLC纯化。
42: N-(5-n-环丙基-2丄6,7-四氬-2,6-二氣代-3-丙基-lH-嘌呤-8-基)吡啶 -2-基VN-(2-(吡啶-2-基)乙基)乙酰胺
HPLC条件MeOH40。/。-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=12.80分钟。
MS: m/z 474 (M+H)+,
43: N-『5-(l-环丙基-2,6-二氧代-3-丙基-2,3,6,7-四氢-lH-嘌呤-8-基)吡啶 -2-基l-N-苯乙基-苯曱酰胺:
HPLC条件MeOH40。/o-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=12.63分钟。
H NMR (DMSO, de): 0.72(m, 2H), 0.91 (t, 3H, J=7.5Hz), 1.02 (m, 2H), 1.70(q, 2H, J=7.5 Hz), 2.61 (m, 1H), 2.97 (t, 2H, J=7.5Hz), 3.96(t, 2H, J=6.3Hz), 4.23(t, 2H, J=7.2 Hz), 7.04(d, IH, J=8.4Hz), 7.25(m, 4H), 7.49(m, 2H), 7.62(m, IH), 7.95(m, 2H), 8.18 (dd, IH, J尸2.7Hz, J2=8.7Hz), 9.03(d, IH, J=1.8Hz).MS: m/z 535 (M+H)十.
44: N-('5-('l-环丙基-2,3,6、7-四氬-2,6-二氧代-3-丙基-lH-噤呤-8-基)吡啶 -2-基)-N-(环丙基甲基)苯甲酰胺
HPLC条件MeOH40。/o-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留 时间=11.95分钟。
JH NMR (DMSO, de): 0.19 (m， 2H), 0.41 (m, 2H), 0.75 (m, 2H), 0.92(t, 3H, J=7.2Hz), 1.05 (m, 2H), 1.67 (m, 1H), 1.75 (q, 2H, J=7.5 Hz), 2.65 (m, 1H)， 3.97 (m,4H), 7.18 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.37 (m, 3H), 7.57 (m, 2H), 7.99 (m, 1H), 8.26 (dd, 1H, J产2.7 Hz, J2=8.7 Hz), 9.07 (d, 1H, J=1.8 Hz).
MS: m/z 485 (M+H)+.
45: N-(5-a-环丙基-2,3.6、7-四氢-2,6-二氧代-3-丙基-lH-嘌呤-8-基)吡啶 -2-基)-N-(2-(吡咬-3-基)乙基)棕榈酰胺(pivalamide):
HPLC条件MeOH 40%-95%梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=9.80分4中。
MS:m/z516(M+H)+.
46: U-二丙基-8-『6-(N-『6-氟代烟酰基l曱氨基)-3-吡咬基l黄嘌呤
力NMR (DMSO, de): !H NMR (DMSO, 0.88(m, 6H), 1.57(m， 2H), 1.72(m, 2H), 3.50(s, 3H), 3.86(t, 2H， J=7.5Hz), 4.00(t, 2H, J=7.5Hz)， 7.16(dd, 1H, J尸8.4 Hz, J2=2.4Hz), 7,45(d, 1H， J=8.7Hz), 7.92(dt, 1H, J尸8.4 Hz, J2=2.4Hz), 8.19(d, 1H, J=2.4Hz), 8.36(dd, 1H， J尸8,7 Hz, J2=2.4Hz), 8.99(d, 1H， J-2.4Hz).
HPLC条件MeOH40。/。-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=10.01分钟。
MS: m/z 466 (M+H)+,
47: 3-卡基-l-(5-(Z3,6,7-四氬-2,6-二氣代-U-二丙基-lH-噤呤-8-基)吡 啶-2-基)-W2-吗啉基乙基)脲
& NMR (DMSO, de): 0.77(m, 2H), 0.95(t， 3H, J=7.5Hz), 1.08(m, 2H),1.77(m, 2H), 2.45(m, 4H), 2.56(m, 2H), 2.65(m, 1H), 3.47(m, 4H), 4.03(t, 2H,
7.60(d， IH, J=9.0Hz), 8.40(dd, IH, J尸9.0Hz, J2=2.4Hz)， 9.02(d, IH, J=2.4Hz), 9.45(t, IH, J=5.4Hz).
HPLC条件MeOH20。/o-75。/。梯度，10分钟，然后MeOH75。/。。保留 时间=10.33分钟。
MS: m/z 573 (M+H)+.
48: 3-苄基-l-(5-n-环丙基-2丄6,7-四氢-2,6-二氣代-3-丙基-lH-噤呤-8誦 基)吡啶-2-基>1-(2-曱M乙基)脲
H NMR (DMSO, de): 0.74(m, 2H), 0.95(t, 3H， J=7.5Hz), l.OS(m, 2H), 1.77(m, 2H), 2.67(m, IH), 3.30(s， 3H), 3.59(t, 2H, J=5.7Hz), 4.03(t, 2H, J=7.5Hz), 4.19(t, 2H, J=5.7Hz), 4.46(t, 2H, J=5.7Hz), 7.26-7.40(m, 5H), 7.58(d IH, J=9.0Hz), 8.41(dd, IH, J尸9.0Hz, J2=2.4Hz), 9.02(d, IH, J=2.4Hz), 9.18(t, IH, J=5.7Hz).
HPLC条件MeOH40。/。-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH950/。。保留 时间=11.31分钟。
MS:m/z518(M+H)+.
49: l-(5-n-环丙基-2丄6,7-四氢-2,6-二氧代-3-丙基-lH-噤呤-8-基)吡咬 -2-基Vl "2-曱氯基乙基V3-"-曱氣基苯基)脲
& NMR (DMSO, d6): 0.77(m, 2H), 0.96(t, 3H, J=7.5Hz), 1.08(m, 2H), 1.79(m, 2H), 2.68(m, 1H), 3.33(s, 3H), 3.65(t, 2H, J=5.7Hz), 3.79(s, 3H), 4.04(t, 2H, J=7.5Hz), 4.24(t, 2H, J=7.5Hz), 6.94(dd, 2H, J产6.9Hz， J2=2.1Hz), 7.50(dd, 2H, J尸6.9Hz, J2=2.1Hz), 7.57(d， 1H， J=9.0Hz), 8.44(dd， 1H, J尸9.0Hz, J2=2.4Hz), 9.11(d, 1H, J=2.4Hz), 10.90(s, 1H).
HPLC条件MeOH40。/。-95。/o梯度，10分钟，然后MeOH95。/。。保留 时间=11.47分钟。
MS: m/z 534 (M+H)+.50: l-环丙基-3-丙基-8-『6-(3-「3,4-二氟苯基Vl-(Z3-二羟基丙基l脲
基)=3=吡啶基1黄嘌呤
将四氧化锇(0.0780 mg, 0.3068 mmol )和4-曱基吗啉-N-氧化物(0.046 mg， 0.3927 mmol)加至1-烯丙基-1-[5-(1-环丙基-2,6-二氧代-3-丙基-2,3,6,7-四氢-lH-嘌呤-8-基)-吡啶-2-基]-3-(3,4-二氟-苯基)-脲(0.102 g， 0.1956 mmol)的丙酮和水(15 mL)溶液中。25。C搅拌反应72小时，此时加热 至40°C ，再搅拌反应48小时。应用43 g硅胶柱、运行从0-8%的DCM/MeOH 梯度，纯化产物。将馏分浓缩，过滤，和用MeOH冲洗，从而得到白色固 体。
HPLC条件MeOH40。/。-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH95。/。， 5分 钟。保留时间=11.98分钟。
MS: m/z 556 (M+H)+,
51: l-环丙基-3-丙基-8-〖6-(3-『三氟-间-曱苯磺酰基Vl-(2,3-二羟基丙基l 脲基)3-吡咬基l黄嘌呤
将四氧化锇(0.055 g, 0.2163 mmol)和4-曱基吗啉-N-氧化物(0.036 g, 0.3073 mmol)加至l-烯丙基-l-[5-(l-环丙基-2,6-二氧代-3-丙基-2,3,6,7國 四氢-lH-嘌呤-8-基)-吡啶-2-基]-3-(3-三氟甲基-苯基)-脲 (0.098 g， 0.n70 mmol)的丙酮和水(15 mL)溶液中。25°C搅拌反应72小时，此时加热 至40°C,再搅拌反应48小时。应用43 g硅胶柱、运行从0-8°/。的DCM/MeOH 梯度，纯化产物。将馏分浓缩，过滤，和用MeOH冲洗，从而得到白色固 体。
HPLC条件MeOH40。/。-95。/。梯度，10分钟，然后MeOH95。/。， 5分 钟。保留时间=13.23分钟。
MS: m/z 588 (M+H)+.
根据上述教导，本发明的多种改进和变化是可能的。因此，应当理解 的是，在附后的权利要求范围内，本发明是可以实施的，除非此处明确说 明。
4权利要求
1. 一种选自下列组的化合物，或其药学上可接受的盐
2. —种药物组合物，其包含(a) 治疗有效量的权利要求1所述的化合物；和(b) 药学上可接受的赋形剂。
3. —种用于治疗哺乳动物中病理状况或症状的治疗方法，其中牵涉腺苷A2B受体的活性，而且拮抗它的作用是所期望的，所述方法包括对该哺乳动物给药有效量的权利要求1所述的化合物。
4. 一种用于治疗哞喘、变态反应、变应性疾病或自体免疫疾病的方法，所述方法包括对需要这种治疗的哺乳动物给药有效量的权利要求1所述的化合物。
5. —种用于治疗腹泻性疾病、胰岛素抗性、糖尿病、癌症、缺血/再灌注损伤、糖尿病视网膜病变或高压氧诱导视网膜病变的方法，所述方法包括对需要这种治疗的哺乳动物给药有效量的权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐。
6. 权利要求1所述的化合物用于医学治疗。
7. 权利要求1所述的化合物用于制备用来治疗哺乳动物如人类中疾病的药物的应用。
全文摘要
本发明提供了为A2B腺苷受体(AR)选择性拮抗剂的取代的8-[6-氨基-3-吡啶基]黄嘌呤和药物组合物。这些化合物和组合物可作为药剂。
文档编号A61K31/497GK101466382SQ200780022207
公开日2009年6月24日 申请日期2007年6月13日 优先权日2006年6月16日
发明者J·M·里格尔, R·D·汤普森, 王国权 申请人:PGx健康有限责任公司