至少一种肉毒杆菌神经毒素在治疗由至少一种抗肿瘤药引起的疼痛中的治疗应用的制作方法

专利名称：至少一种肉毒杆菌神经毒素在治疗由至少一种抗肿瘤药引起的疼痛中的治疗应用的制作方法
至少一种肉毒杆菌神经毒素在治疗由至少一种抗肺瘤药引起的
疼痛中的治疗应用
本发明的主题是至少一种肉毒杆菌神经毒素在获得用于治疗或预防与 抗肿瘤治疗有关的一种或多种化疗后疼痛中的用途。
化疗后神经病是由用于对抗癌症的化学治疗引起的疼痛，它在现今仍 然是一种难以緩解或治愈的病状。这种类型的疼痛与癌性肿瘤自身引起的 疼痛是有区别的。事实上，化疗后神经病由为治疗目的而施用淤患者的抗 肿瘤药所引起。
化疗后神经性疼痛具有特定的症状学特征。通常而言，这些疼痛尤其 以连续的弥漫性痛为特征，而没有灼伤类型的机賊性或炎性痛。对抗连续
性痛的这种背景，可以发生其它症状闪电样痛(shooting pain)类型的自发 性发作、麻刺感，更特别是四M刺感，或者还有放电。这些症状的地形 图对应于与周围或中枢系统化一致的分布。换言之，这些化疗后神经性疼 痛的地形图独立于癌性肿瘤的地形图。
在已知用于这种疼痛的治疗中，可以提及的有抗惊厥药、抗抑郁药或 阿片类化合物如吗啡(其在19世纪初期由德国药学家Friedrich Serttirner 从鸦片中分离出，吗啡是鸦片的主要成分)的施用。
而且，世界卫生组织推荐了镇痛药物的三种处方水平，这是一种在 70%患者中证明有效的规则
第I水平非阿片样镇痛药，用于轻度至中度疼痛；
第II水平弱的阿片类镇痛药与非阿片样物质的联合，用于中度至强 度疼痛；
第III水平强的阿片类镇痛药，用于强度至非常强的疼痛。 然而，目前可获得的能够降低抗肿瘤治疗引起的疼痛的化合物的使用 不是令人满意的，因为它要求使用高剂量的化合物或者频繁地重复施用化 合物而可能产生对化合物的耐药性或习惯性。而且，这些抗疼痛治疗可产生副作用，这附加了已经由癌症产生的那些副作用。
因此，发现治疗这些化疗后神经性疼痛的其它手段已经变得非常有必要。
因此，本发明提出解决的技术问JI^IJC现新的用于由抗肿瘤药治疗引
起的疼痛的治疗。
出人意料的是，发明人已经证明施用肉毒杆菌神经毒素在治疗由化 学治疗引起的疼痛中具有镇痛作用。
为此目的，本发明提出了至少一种肉毒杆菌神经毒素在获得用于治疗 或预防一种或多种化疗后疼痛的药物中的用途。
本发明提供了决定性的优点，特别是避免或预防了在用抗肿瘤药治疗 后的疼痛，由此允许增加治疗剂量而不增加疼痛。
最后，本发明的优点是它可以应用于所有工业，特别是制药、兽医学 和化妆品工业。
后，本发明的其它优点和特征显^将变得显而易见。' 、''
"疼痛"或"痛"在本发明的含义内指"与出现的或潜在的组织损伤 有关的或者患者以该术语描述的任何不愉快的情绪或感觉经历"。
表述"肉毒杆菌神经毒素"指如下的肉毒杆菌毒素其为游离蛋白质 (即，不含任何与它复合的蛋白质)，或蛋白质复合物，所述蛋白质复合物 能够包括例如与肉毒杆菌毒素组合的血凝素(HA蛋白质)，或蛋白质片段。
表述"肉毒杆菌毒素"指具有肉毒杆菌毒素的生物活性的分子，其可 以是例如蛋白质、多肽、肽、融合蛋白、截短的蛋白质、嵌合蛋白、突变 蛋白或重组蛋白。
表述"肉毒杆菌毒素的生物活性"在本发明的含义内指肌肉麻痹或胞 吐作用的抑制，特别是乙酰胆碱或其它神经递质的胞吐作用的抑制。
"蛋白质""、"多肽"或"肽"在本发明的含义内指天然或非天然、 左旋或非左旋、右旋或非右旋氨基酸的聚合物。
"嵌合蛋白"在本发明的含义内指将不同类型分子组合后获得的蛋白 质，例如将脂类、糖脂、肽、多肽、蛋白质、糖蛋白、碳水化合物、多糖、核酸、聚乙二醇等等组合后获得的蛋白质。
自20世纪80年代以来，肉毒杆菌毒素、特别是A1型肉毒杆菌毒素(易 普森公司(Ipsen)销售的Dysport 或者爱力根公司(Allergan)销售的 Botox⑥)已经应用于人来治疗多种和各种疾病/病症。在可以用肉毒杆菌毒 素治疗的疾病/病症中，可以提及的有肌肉障碍(例如睑痉挛、成人或儿童 的痉挛状态或者斜颈)、偏头痛.、肌肉来源的疼痛、糖尿病、多汗症(或过 量出汗)、唾液分泌过多或者甚至是皱紋。
纯的或近乎纯的肉毒杆菌神经毒素可以从包含肉毒杆菌毒素的蛋白质 复合物获得，例如按照C"/re"f鄉/cs /" M/m^》/ogv ""^ /附附"朋/ogy (1995)， 195，第151-154页描述的方法获得。纯的或近乎纯的肉毒杆菌神经 毒素可以例如通过将含有肉毒梭菌(a仍加VZ/"附5W"/i'"WM)菌抹的发酵介 质或培养介质进行纯化而获得，并且可以例如用肉或富含蛋白质的食物来 进行富集。
本发明的主题首先是至少一种肉毒杆菌神经毒素在获得用于治疗或预 防一种或多种化疗后疼痛的药物中的用途。
更具体而言，本发明的主JHA至少一种肉毒杆菌神经毒素在获得用于 治疗或预防一种或多种化疗后疼痛的药物中的用途，可以理解，肉毒杆菌 神经毒素通过局限性途径施用能够获得全身性作用。
优选本发明的主题不是治疗癌症、肺瘤或肿瘤引起的疼痛、特别是与 骨肺瘤有关的疼痛。
优选本发明的至少一种肉毒杆菌神经毒素在获得药物中的用途能够治 疗或预防抗肺瘤药或其盐或衍生物引起的化疗后疼痛。
抗肿瘤药或其盐或衍生物优选选自下述化合物或它们的混合物紫杉 烷类(taxanes)、铂盐类或其它抗肿瘤药。
抗肿瘤药或其盐或衍生物优选选自紫杉烷类，例如多西他赛、紫杉醇 (泰素)或它们的混合物。
抗肿瘤药或其盐或衍生物优选选自铂盐类，例如顺铂、奥沙利铂或卡 賴或它们的混合物。
抗肿瘤药或其盐或衍生物优选选自长春花新碱、长春花碱、依托泊苷、替尼泊苷、Ara-A(腺苷-阿糖胞苷)、Ara-C (阿糖胞苷)、氟尿嘧啶、丙卡巴 肼、长春瑞滨、吉西他滨或还有诸如以下的产品或产品混合物紫杉醇/ 卡铂、紫杉醇/蒽环类、紫杉醇/卡铂/吉西他滨、紫杉醇/雌莫司汀、多西他 赛/顺柏、多西他赛/多柔比星、多西他赛/长春瑞滨、多西他赛/曲妥单抗、 多西他赛/卡培他滨或者顺铂/环磷酰胺、顺铂/〗尹立替康、卡铂/托泊替康、 卡铂/雌莫司汀、依托泊苷/雌莫司汀、长春花^雌莫司汀。
盐指可药用的盐，特别是无机酸加成盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢 碘酸盐、硫酸盐、磷酸盐、二磷酸盐和硝酸盐，或者有机酸加成盐，例如 醋酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、 甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、朴酸盐和硬脂酸盐。当能够应用由碱如氢氧化 钠或氢氧化钾形成的盐时，它们也落入本发明的范围内。其它可药用盐的 实例可以参见"碱性药物的盐的选择"(Salt selection for basic drugs), 丄 泡肌(1986)， 33,201-217。
优选肉毒杆菌神经毒素能够获得全身作用。 "全身作用"在本发明的含义范围内指局限性施用能够获得全身性作用。
根据本发明的优选的用途，肉毒杆菌神经毒素通过肌内、皮内或皮下 注射来施用。
优选本发明所用的肉毒杆菌毒素选自A型、Al型、A2型、B型、C 型、Cl型、D型、E型、F型或G型肉毒杆菌毒素。
Al型肉毒杆菌神经毒素事实上标准的肉毒杆菌毒素，其通常称为A 型肉毒杆菌毒素，不管其亚型如何。Al型肉毒杆菌神经毒素以名称 DYSPORT⑧或BOTOX⑧名称出售。
根据本发明，Al型肉毒杆菌神经毒素可以对应Al型肉毒杆菌毒素与 血凝素的复合物，或者可以对应不含所有复合蛋白质的Al型肉毒杆菌毒 素。
在1990年左右，从肉毒中毒的儿童病例中首次分离到A2型肉毒杆菌 毒素(Sakaguchi等人,/wt / FoWAf/cr^ioA (1990)， 11， 231-242)。该毒素在 免疫学和生物化学上不同于Al型肉毒杆菌毒素。A2型肉毒杆菌毒素可以从以下菌林中分离出Kyoto-F、 Chiba-H、 Y-8036、 7103画H、 7105-H、 KZ1828、 NCTC2012或NCTC9837 (Cordoba 等人，jp/;/. Af/cn^,W. (1995)， 18， 13-22; Franciosa等人，在2003年 11月第40次机构间肉毒中毒研究协调委员会(Interagency Botulism Research Coordinating Committee, IBRCC)会议上的摘要)。
优选本发明所用的肉毒杆菌毒素是Al型肉毒杆菌毒素。
按照本发明的一种变通方案，本发明所用的肉毒杆菌神经毒素是从肉 毒梭菌菌林分离的A2型肉毒杆菌毒素，所述肉毒梭菌菌林在国立典型培 养物保藏中心(National Collection of Type Culture画Central Public Health Laboratory -伦敦-UK)以保藏号NCTC9837标明和得到。菌林NCTC9837 有时称为Mauritius 1955菌林。
A2型肉毒杆菌毒素与Al型毒素在其JU^酸序列、分子量、免疫和遗 传特'l"生方面有戶斤不同(Kubota等人，5/oc/re肌j5/o/;/y;s. J es, Gwi附wi. (1996)， 224(3)， 843-848)。
根据优选的实施方案，本发明所用的肉毒杆菌神经毒素是其中至少一 个氨基酸被删除、修饰或替换的被改变的肉毒杆菌神经毒素。
优选本发明所用的肉毒杆菌神经毒素与至少一种多糖或多种多糖的混 合物组合。
多糖在本发明的含义内指包含至少两个单体的聚合物，所述单体是糖。 该定义包括二糖。
在本发明的框架内，多糖可以是离子型的和/或非离子型的。
优选该组合物包含至少一种主要包含葡萄糖单元的多糖。术语"主要" 表示葡萄糖占单体单元数目的大部分。
作为本发明的用途的适宜多糖的实例，可以提及的有淀粉、淀粉衍生 物、羟乙基淀粉且特别是2-羟基-乙基淀粉。
本发明的适宜的多糖可以是被取代的，特别是它们可以被烷基、烷氧 基或者自身被醇官能团取代的烷基所取代。
根据本发明的变通方案，本发明的适宜多糖的量为每l单位肉毒杆菌 毒素至少l照多糖。根据多糖的选择，每l单位肉毒杆菌毒素应用至少0.5ftg多糖是可能的。
优选本发明所用的肉毒杆菌神经毒素与至少一种表面活性剂或者多种 表面活性剂的混合物组合。
表面活性剂在本发明的含义内指乳化剂或增溶剂。
在本发明的框架内，所用的表面活性剂可以选自阳离子型、阴离子型 或非离子型表面活性剂。
优选本发明所用的肉毒杆菌神经毒素与至少一种表面活性剂或者多种 表面活性剂的混合物组合，所述的表面活性剂选自阳离子型、阴离子型或 非离子型表面活性剂。
优选本发明所用的肉毒杆菌神经毒素与至少一种表面活性剂组合，所 述的表面活性剂选自聚山梨酯的非离子型表面活性剂。
在聚山梨酯中，可以提及的有聚山梨酯20、聚山梨酯21、聚山梨酯 40、聚山梨酯60、聚山梨酯61、聚山梨酯65、聚山梨酯80、聚山梨酯81、 聚山梨酯85、聚山梨酯120、聚山梨酯80醋酸盐。
根据本发明的变通方案，优选的表面活性剂是聚山梨酯80。
本发明所用的肉毒杆菌神经毒素可以优选通过注射来施用，例如通过 肌内、皮内或皮下注射，或者还可以通过局部应用如应用贴剂来施用。
对本发明的注射而言，肉毒杆菌神经毒素可以与有助于注射的物质组 合，所述物质也称为注射媒介物或注射载体。
对本发明的肉毒杆菌神经毒素而言，被提供用于治疗上文提及的疾病 或病症的剂量才艮据施用方法、待治疗受治疗者的年龄和体重以及后者的状 态而不同，并且最终将由参与医师或兽医来决定。由参与医师或兽医确定 的此量在本文称为"治疗有效量，，。
优选本发明所用的肉毒杆菌神经毒素的注射剂量为0.01-1500 U，优选 0.01-1000 U，更优选0.1-500 U，更优选0.1國100U，还更优选1曙20U，无
论肉毒杆菌毒素的类型或来源如何(毒素的单位(u)在实验部分中定义)。 本发明的主M如上所述的肉毒杆菌神经毒素在获得用于治疗或预防
一种或多种化疗后疼痛、即与抗癌治疗相关的疼痛的药物中的用途。 表述"癌"或"癌症"在本发明的含义内指任何类型的癌症，即^性、非侵入性、浸润性、激素性、非激素性、局限性或转移性的癌症。
根据本发明的优选用途，肉毒杆菌神经毒素能够治疗或预防患者的一 种或多种化疗后疼痛，所述患者是患有例如结肠癌、直肠癌、乳癌、肺癌、 胰腺癌、睾丸癌、肾癌、子宫癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌、骨癌、脊 髓癌的患者以及患有肉瘤、癌、纤维腺瘤、成神经细胞瘤、白血病、淋巴 瘤或黑素瘤的患者。
图l显示了在紫杉醇诱发的周围神经病模型中通过跖下途径注射入右
爪(同侧)后Al型肉毒杆菌毒素对右爪的作用。
图2显示了在紫杉醇诱发的周围神经病模型中通过跖下途径注射入右 爪(同侧)后Al型肉毒杆菌毒素对左爪(对侧)的作用。
图3显示了注射方案。
下述实施例解斧沈明了本发明，而不限制本发明的范围。 实施例
通过测定致死剂量LD50对根据本发明使用的肉毒杆菌神经毒素进行 定量。LDso在本发明的含义内指给定物质的致死剂量或半数致死剂量。它 是导致试验组中所测试的动物中有50%死亡的剂量(或量)。毒素的单位(U) 对应于经腹膜内途径施用的小鼠中的LD50。
施用抗肿瘤药引起的神经病模型
在通过施用抗肿瘤药紫杉醇(泰素@)引起的周围神经病模型中体内评 价了 Dysport (Al型肉毒杆菌毒素)的活性。
将体重约160g的雄性Sprague Dawley (查尔斯河(Charles River))大鼠 在动物房条件下圏养6天。动物分为4组，至少10只。
在D0、 D2、 D4和D7天通过J^M内(i,p.)注射2 mg/kg紫杉醇引发神 经病。
在首次注射之前，将大鼠编号，称重，在压力增加的机喊刺激后评价 伤害感觉(疼痛阈值)采用根据Randall和Selitto方法的镇痛计量在大鼠 两只后爪上引起初压(210g/mm2)。这些测量允许在发生神经病之前(DO)定 义基线值。相应于神经性损害的伤害感觉阈值的降低在首次注射紫杉醇后第14 天和第24天之间达到最大。大鼠的两只后爪的伤害感觉阈值类似地降低。 因而在大鼠后爪上在第14天和第24天之间进行神经病研究。在所描述的 情况中，伤害感觉测定在D18和D21天进行。
在实验当天(D15)，将大鼠称重，测定伤害感觉，从研究中排除在这一 天还没有出现神经病的动物(与D0天测定相比伤害感觉的下降)。将 Dysport经跖下注射入大鼠右后爪(同侧)，在施用后3天和6天测定2只后 爪(同侧和对侧)的伤害感觉。
Dysport对泰素引起的神经病的作用
图l表示了在紫杉醇引起的周围神经病模型中Dysport (Al型肉毒杆 菌毒素)在经跖下途径注射入右爪(同侧)后对右爪的作用。
对照指示了当增加应用于爪子的压力时大鼠所耐受的疼痛阈值；这一 组用紫杉醇溶媒(3% montanox,在0.9% NaCl中)通过j^内途径和用 Dysport溶媒(0.9% NaCl)通过跖下途径进行处理。在D0至D21天，伤害 感觉阈值位于约500 g/mm2。
病理对照指示了当增加应用于爪子的压力时大鼠所耐受的疼痛阈值； 这一组用紫杉醇通过腹膜内途径和用Dysport溶媒(0.9% NaCl)通过跖下途 径进行处理。在第0天，该阈值为约544g/mm2，然后在第15天下降达到 232 g/mm2、在第18天达到216 g/mm2和在第21天达到216 g/ mm o这些 结果显示，在,内注射紫杉醇后，大鼠爪子的敏感度随着应用于它们的 压力增加。
^HSI用紫杉醇溶媒(3% montanox，在0.9% NaCl中)经,内途径处 理的组以20 U/kg剂量跖下施用Dysport，显示大鼠所耐受的疼痛阈值没有 显著改变。在应用于大鼠爪子的机械刺激后的疼痛阈值从DO至D21天为 约590 g/mm2。
给用紫杉醇处理的组以20 U/kg剂量跖下施用Dysport显示大鼠右爪 所耐受的疼痛阈值增加。在应用于大鼠爪子的^刺激后的疼痛阈值显著 增加，与D15天(Dysport之前)的232 g/mm2相比，在D18天(即用Dysport处理后3天)达到约500 g/mm2和在D21天(即用Dysport处理后6天)达到 约480 g/mm2。
图2显示了在紫杉醇引起的周围神经病模型中Dysport (Al型肉毒杆 菌毒素)在经跖下途径注射入右爪(同侧)后对左爪(对侧)的作用。
对照指示了当增加应用于爪子的压力时大鼠所耐受的疼痛阈值；这一 组用紫杉醇溶媒(3% montanox，在0.9% NaCl中)通过J^内途径和用 Dysport溶媒(0.9% NaCl)通过跖下途径进行处理。从D0至D21天，伤害 感觉阔值位于约500 g/mm2。
病理对照指示了当增加应用于爪子的压力时大鼠所耐受的疼痛阈值； 这一组用紫杉醇通过J^J度内途径和用Dysport溶媒(0.9% NaCl)通过跖下途 径进行处理。在第0天，该阈值为约536g/mm2，然后在第15天下降达到 228 g/mm2、在第18天达到216 g/mm2和在第21天达到204 g/mm2。这些 结果显示，在腹膜内注射紫杉醇后，大鼠爪子的敏感度随着应用于它们的 压力增加。
i^l用紫杉醇溶媒(3% montanox，在0.9% NaCl中)经J3U^内途径处 理的组以20 U/kg剂量跖下施用Dysport，显示大鼠所耐受的疼痛阈值没有 显著改变。在应用于大鼠爪子的机喊刺激后的疼痛阈值从DO至D21天为 约610 g/mm2。
给用紫杉醇处理的组以20 U/kg剂量跖下施用Dysport显示大鼠左爪 所耐受的疼痛阈值增加。在应用于大鼠爪子的机械刺激后的疼痛阈值显著 增加，与D15天(Dysport之前)的244 g/miii2相比，在D18天(即用Dysport 处理后3天)达到约540 g/mm2和在D21天(即用Dysport处理后6天)达到 约512 g/mm2。
这些结果显示，在四次连续全身注射紫杉醇所产生的周围神经病的测 试中，通过测定大鼠的两只后爪，对大鼠右爪经跖下施用Dysport产生了 镇痛作用。
权利要求
1.至少一种肉毒杆菌神经毒素在获得用于通过局限性施用使得能够获得全身性作用来治疗或预防一种或多种化疗后疼痛的药物中的用途。
2. 根据权利要求1的用途，其特征在于一种或多种化疗后疼痛由抗 肿瘤药或其盐引起。
3. 根据前述权利要求之一的用途，其特征在于一种或多种化疗后疼 痛由选自下述化合物或它们的混合物的抗肺瘤药或其盐引起紫杉烷类或 铂盐类。
4. 根据前述权利要求之一的用途，其特征在于一种或多种化疗后疼 痛由选自多西他赛、紫杉醇(泰素)或它们的混合物的抗肿瘤药或其盐引起。
5. 根据权利要求3的用途，其特征在于一种或多种化疗后疼痛由选 自顺柏、奥沙利铂或卡铂或它们的混合物的抗肿瘤药或其盐引起。
6. 根据前述权利要求之一的用途，其特征在于一种或多种化疗后疼 痛由选自如下的抗肿瘤药或其盐引起长春花新碱、长春花碱、依托泊苷、 替尼泊苷、Ara-A (腺苷-阿糖胞苷)、Ara-C (阿糖胞苷)、氟尿嘧啶、丙卡 巴肼、长春瑞滨、吉西他滨或还有诸如以下的产品或产品混合物紫杉醇/ 卡铂、紫杉醇/蒽环类、紫杉醇/卡铂/吉西他滨、紫杉醇/雌莫司汀、多西他 赛/顺柏、多西他赛/多柔比星、多西他赛/长春瑞滨、多西他赛/曲妥单抗、 多西他赛/卡培他滨或顺铂/环磷酰胺、顺铂/伊立替康、卡铂/托泊替康、卡 铂/雌莫司汀、依托泊苷/雌莫司汀、长春花^雌莫司汀。
7. 前述权利要求之一的用途，其特征在于肉毒杆菌神经毒素通过肌 内、皮内或皮下途径施用。
8. 根据前述权利要求之一的用途，其特征在于肉毒杆菌毒素选自A 型、Al型、A2型、B型、C型、Cl型、D型、E型、F型或G型肉毒杆 菌毒素。
9. 根据前i^i5L利要求之一的用途，其特征在于肉毒杆菌毒素是A1型 肉毒杆菌毒素。
10. 根据前述权利要求之一的用途，其特征在于肉毒杆菌神经毒素与至少 一种多糖或多种多糖的混合物组合。
11. 根据前i^3L利要求之一的用途，其特征在于多糖是2-羟基-乙基淀粉。
12. 根据前述权利要求之一的用途，其特征在于肉毒杆菌神经毒素是 其中至少一个氨基酸被删除、修饰或替换的被改变的肉毒杆菌神经毒素。
13. 根据前述权利要求之一的用途，其特征在于肉毒杆菌神经毒素与 至少 一种表面活性剂或多种表面活性剂的混合物组合，所述表面活性剂选 自阳离子型、阴离子型或非离子型表面活性剂。
14. 根据前述权利要求之一的用途，其特征在于肉毒杆菌神经毒素与 至少一种表面活性剂组合，所述的表面活性剂选自聚山梨酯的非离子型表 面活，性剂。
15. 根据前述权利要求之一的用途，其特征在于肉毒杆菌神经毒素以 0.01 U至1500 U的剂量施用。
16. 根据前述权利要求之一的用途，其特征在于一种或多种化疗后疼 痛影响患有结肠癌、直肠癌、乳癌、肺癌、胰腺癌、睾丸癌、肾癌、子宫 癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌、骨癌、脊髓癌的患者以及患有肉瘤、癌、 纤维腺瘤、成神经细胞瘤、白血病、淋巴瘤或黑素瘤的患者。
全文摘要
本发明涉及至少一种肉毒杆菌神经毒素在获得用于治疗或预防抗肿瘤药引起的一种或多种疼痛中的用途。
文档编号A61K35/74GK101541336SQ200780039947
公开日2009年9月23日 申请日期2007年10月26日 优先权日2006年10月27日
发明者C·法夫尔, M·奥盖, P-E·卡波黑尔德拉瑟尼赫 申请人:益普生制药两合公司