专利名称：：胸腺素α-1在制备预防和治疗变态反应的药物中的应用的制作方法胸腺素a-l在制备预防和治疗变态反应的药物中的应用本发明涉及胸腺素a-l在制备预防和治疗变态反应的药物中的应用。变态反应是一种对通常无害于人的对物质反应过度的疾病，与正常免疫应答相比，它们构成了突发性有害(paroxitic)免疫应答。机体免疫系统的功能通常是保护机体免遭病原体如细菌、病毒或毒性物质的危害。而变态反应则是免疫系统对非病原生物的超敏免疫反应。个体第一次接触引起变态反应的变应原以后，每次接触此变应原时个体即能识别此变应原。第二次和所有以后接触此变应原所产生的症状实际上不仅取决于所涉及的变应原，而且取决于受影响的机体和其免疫反应的强度。当变应原接触个体的免疫系统时，它会剌激(机体)产生能结合含组胺细胞的抗体。产生这种物质能引起病人典型的变应性症状受影响组织搔痒、肿胀，过度分泌粘液和肌肉痉挛。这些症状的严重程度和差别具有很强的个人主观性，因为它取决于个体。最常见的变应原有食物、药物、化妆品中含有的某些成分、珠宝首饰所用的某些金属、昆虫的叮咬、尘螨、花粉、霉菌和宠物。如果母亲在哺乳期间不吃某些食物，例如牛奶、鸡蛋和坚果，哺乳儿童发生接触性(contracting)变态反应(包括哮喘)的可能性较低。如果发生变态反应，只有采用适当的治疗和尽可能避免接触有关变应原才能将未来发生变态反应危险的可能性降至最小。症状的严重程度和类型的差别取决于所述反应、受累及机体区域和病人免疫系统的敏感性。然而，有某些共同症状鼻炎、咳嗽、呼吸问题、流泪增加、接触区(通常为眼、鼻、咽喉和皮肤)搔痒、皮疹、呕吐、腹泻、头痛。变应性疾病是由易感个体对常见的环境抗原(变应原)产生了T辅助细胞(Th2)禾卩IgE-特异性应答所导致。研究在预防变应原引起这些潜在过敏性不良免疫反应中，对天然的或诱导的T调节(Treg)细胞群作用的兴趣日益增高。近年来的证据提示，Treg细胞可主动地预防非特应性个体对变应原产生Th2应答，而在变态反应病人中它们的功能可能减弱。这显示通过调节Treg细胞的功能有可能进行治疗。近年来的研究目的是了解产生变应原特异性Treg细胞和发挥其功能所涉及的机制。主要目的是促进开发适合诱导持久的但同时局限化的非全身性变应原特异性抑制机制的治疗方案。迄今，一直采用抗组胺药物和含考的松的那些抗炎药物或有时采用顺势(homeopathic)疗法来治疗变态反应。然而，用某些药物治疗可能会引起相当大的有时是严重的副作用，例如引起免疫抑制或各种代谢疾病。鉴于以上所述，证明需要能预防和治疗变态反应但没有已知疗法缺点的新药物。本发明人发现胸腺素a-l能有效预防和治疗变态反应而对机体没有任何毒性。胸腺素a-l(Ta-l)是一种天然胸腺肽，己熟知可单用或与IFN-a联用来治疗某些病毒感染，也可用作免疫佐剂(GoldsteinA.等，2004ExpertOpin.Biol.Ther.4:559-573)。也已知可用胸腺素a-l治疗的其它适应症，如治疗免疫缺陷症、肿瘤和AIDS。还已知胸腺素a-l可与IFN-a联用，在治疗某些病毒感染中作为生物应答的调节剂，还可用作免疫佐剂(GoldsteinA.等，2004ExpertOpin.Biol.Ther.4:559-573)。近年来的研究发现了此分子具有新的出乎意料的作用。近年业已证明Tal能通过Toll样受体(TLR)9调节树突状细胞(DC)的功能，起着先天性和适应性免疫系统内源调节剂的作用(RomaniL.等,2004,Blood103:4232-4239)。由于对DC具有这种功能活性，业已发现Tal能在体内外诱导功能活性Treg细胞(RomaniL,Blood2006)。这些研究为将Tal用作功能活性Treg细胞的诱导剂提供了合理的前提。面对例如目前的皮质类固醇药物疗法的全身性不加区别的免疫抑制作用，上述方法的优点是可调节高度选择性的和特定的异常免疫反应。本发明的具体目的是用Tal来制备预防和治疗变态反应的药物，例如，所述变态反应是由变应原，如食物(如卵清蛋白)、药物、化妆品中所含成分、珠宝首饰所用的某些金属(如镍)、昆虫的叮咬、尘螨、花粉、霉菌、宠物和真菌如烟曲霉0^pe/^7/u5/Mw/gafus)弓I起的。现在通过一些优选实施方式，并具体参见附图描述本发明，目的是说明而非限制本发明图1显示Tal在ABPA(A)和OVA引起的变态反应(B)中效果的数据。无(None)代表对照小鼠。图2显示Tal和CpG对ABPA的效果的比较数据。图3显示Tal对ABPA中肺部募集单核细胞的效果的数据。图4显示Tal对ABPA中局部炎症病理变化的效果的数据。实施例1:在两种实验性变态反应模型中评价胸腺素a-l的效果。一种模型包括在产生变态反应的条件下给予鸡卵清蛋白(OVA)诱导变态反应。另一种模型包括用环境变应原即烟曲霉孢子诱导变态反应。方法变态反应和治疗按表1所述，用曲霉(^^"^///^)诱导病理变态反应(称为ABPA，变应性支气管肺曲霉菌病)，用OVA诱导病理变态反应(MontagnoliC,FallarinoF,GazianoR,BozzaS，BellocchioS,ZelanteT,KurupWP,PitzurraL，PuccettiP,RomaniL."对曲霉菌的免疫和耐受涉及到功能不同的调节性T细胞和色氨酸分角军代谢(Immunityandtolerancetoy4s;erg〃/wsinvolvefunctionallydistinctregulatoryTcellsandtryptophancatabolism)"J.Immunol.2006，176:1712-1723)。使小鼠接受腹腔内(i.p.)和皮下(s.c.)注射5溶于不完全弗氏佐剂(西格玛公司(Sigma))的烟曲霉菌培养过滤物(CCFA)，然后连续接受两次鼻内注射(相隔一周)20CCFA。末次鼻内接触后一周，使小鼠气管内(i.t.)接受107个曲霉菌分生孢子04^^^7/^comW/fl)。对于OVA致敏，第0天小鼠通过i.p./s.c接受10[igOVA，然后连续接受两次鼻内注射(相隔一周)溶于灭菌盐水中的10OVA(VI级鸡OVA;西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich))和1mgAl(OH)3佐齐!j(注射用铝；伊利诺斯州罗克福德的皮尔斯公司(Pierce,Rockford,IL))。一周后分析小鼠的炎症和变态反应参数。对于组织学分析，将浸在石蜡中的组织切片(3-4pm)用希弗氏过碘酸(PAS)染色以评价总体形态。用50、200和400倍放大观察PAS染色的肺切片以评估变态反应的典型"杯状(Globet)"细胞。用May-Grtowald试剂(吉姆萨(Giemsa)，西格玛公司)对变应性小鼠的肺进行染色，以便进行肺总细胞计数和差异性计数，然后进行分析。羟脯氨酸测定按前人(MontagnoliC,FallarinoF,GazianoR，BozzaS,BellocchioS,ZelanteT，KurupWP，PitzurraL，PuccettiP,RomaniL."对曲霉菌的免疫和耐受涉及到功能不同的调节性T细胞和色氨酸分解代谢(Immunityandtoleranceto爿j^e,gz7/z^sinvolvefunctionallydistinctregulatoryTcellsandtryptophancatabolism)"J.Immunol.2006,176:1712-1723)所述测定了肺中的胶原蛋白水平。通过羟脯氨酸标准曲线(O-IOOpg/ml)计算出羟脯氨酸浓度。血清IgE测定。用酶联免疫吸附试验测定血清样品中的总IgE(MontagnoliC,FallarinoF,GazianoR,BozzaS,BellocchioS,ZelanteT，Kur叩WP,PitzurraL，PuccettiP,RomaniL."对曲霉菌的免疫和耐受涉及到功能不同的调节性T细胞和色氨酸分解代谢"J.Immunol.2006,176:1712-1723，此文中关于用酶联免疫吸附试验测定血清样品的部分)。用胸腺素al治疗。提供无菌干粉形式的Tal(购自美国密苏里州圣路易斯的西格玛公司(Sigma，St丄ouis，MO，USA);产品编号T3410;分子式C^H2i5N33055)和乱序(scambled)肽。用无菌水(用标准鲎(Limulus)裂解物试验检测内毒素水平<0,03pg/ml)重建这些干粉。按照表1和2中报告的实验设计，在ABPA模型和OVA变态反应模型中，i.p给予每公斤体重50和200微克剂量的Tal。对照小鼠接受乱序肽。在所选的实验中，治疗小鼠，与已知能改善变态反应症状的药物即含非甲基化CpG序列的寡脱氧核苷酸作比较。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>a.CCFA:烟曲霉的培养过滤物表2<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>图1显示在ABPA(A)和OVA引起的变态反应(B)中Tal效果的数据。此结果清楚地表明Tal治疗后变应性炎症参数显著下降，即作为变应性炎症介质的羟脯氨酸和IgE抗体的局部产生显著减少。此效果为剂量依赖性，发现在200微克Tal剂量时有效，而在更低剂量时无效，预防和实际治疗时情况相同。无代表对照小鼠。图2显示Tal和CpG对ABPA的效果的比较数据。此结果清楚地表明Tal预防和治疗时降低变应性炎症参数的效果与CpG相当。无代表对照小鼠。图3显示Tal对ABPA中肺部募集单核细胞的效果的数据。此数据表明预防和治疗时，通过Tal的作用显著减少了引起变态反应病理表现的嗜酸性粒细胞的募集。而且其效果与CpG相当。Tal对其它类型细胞如中性粒细胞和单核/巨噬细胞的募集没有任何明显作用。图4显示Tal对ABPA中局部炎症病理变化的效果的数据。用Tal治疗(+)或不用Tal治疗(-)的ABPA小鼠肺切片经不同放大倍数观察显示在以下项目有显著差异i)炎症渗出液，用Tal预防性治疗后炎症渗出液显著减少；ii)存在粘膜下腺细胞(称为杯状细胞)的存在，这种细胞是产生粘液的主要细胞，PAS染色呈紫色。用Tal治疗伴有这些细胞增生的减少。总之，以上数据提示Tal对预防和治疗变态反应均有显著的抗变态反应作用。权利要求1.胸腺素α-1在制备预防和治疗变态反应的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述变态反应是由变应原，如食物、药物或化妆品中所含物质，珠宝首饰所含的金属、昆虫的叮咬、尘螨、花粉、霉菌、宠物和真菌的变应原引起的。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述食物中所含物质是卵清蛋白。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述真菌是烟曲霉。全文摘要本发明涉及胸腺素α1在制备预防和治疗变态反应的药物中的应用。文档编号A61K38/22GK101626778SQ200780039959公开日2010年1月13日申请日期2007年9月27日优先权日2006年10月27日发明者E·加拉西,F·比斯托尼,G·拉斯,L·罗马尼,P·西尼巴迪瓦莱波纳申请人:适马-道制药业公司