专利名称：：一种丹参脂溶提取物和罂粟仔油组合的脂微球制备方法
技术领域：
：本发明提供一种丹参脂溶提取物和罂粟仔油组合的脂微球，本发明还公开了其制备方法，及其在预防和治疗制备肝损伤疾病的药物中医疗用途，属于药物制备领域技术。
背景技术：
：罂粟籽油为罂粟科植物罂粟(PapaveiSomniferumL)种仔压榨的油脂。罂粟籽油无毒、无麻醉作用，它是由少量的饱和脂肪酸和多烯不饱和脂肪酸组成，含有易于人体吸收的亚麻酸和花生酸，能够降低人体高血脂，抑制体内低密度脂蛋白的升高。是人体内不能合成而必需的一种脂肪酸。这种脂肪酸通过人体吸收并转化生成，亚麻酸，并最终生成前列腺素，从而参与调节人体的各种基本生理过程，包括调解血压、胆固醇合成、细胞增生。罂粟籽油含醛类、呋喃酮类、吡嗪类、柠檬烯、异丁酸丁酯等香味物质气味独特醇香。虽然，罂粟籽油具有很好的营养价值，但是服用这种原油型制剂和服用其他原油型制剂一样，常常会出现腹泻导致消化系统紊乱症。另一方面，由于原油软胶囊剂普遍存在着渗油、硬化和崩解迟缓等问题。
发明内容本发明提供一种丹参脂溶提取物和罂粟仔油组合的脂微球，是将丹参脂溶性化合物和罂粟仔油进行组合，并利用多烯磷脂酰胆碱具有的表面活性特点，制成水包油型脂微球的一种乳化液分散体系。本发明还公开了上述脂微球的制备工艺，适用于工业化生产。本发明进一步公开了丹参脂溶提取物和罂粟仔油组合的脂微球在预防和治疗制备肝损伤疾病的药物中医疗用途。本发明涉及丹参脂溶提取物和罂粟仔油组合的脂微球，是利用多烯磷脂酰胆碱表面活性剂特点，经过专用的乳化设备制成磷脂膜包封的水包油型微乳乳粒分散体系，其平均粒径在50500rnn。本发明提供的丹参脂溶提取物和罂粟仔油组合脂微球，是由以下各组份原料按总量1000ml制成的罂粟籽油50300g、丹参脂溶性化合物0.55.0g、多烯磷脂酰胆碱1050g、维生素E.100300mg、油酸l6g、木糖醇110g、甘油2025g、氢氧化钠2540mg、加水至1000ml。制备工艺如下按比例称取上述原料，在对乳化系统中油罐减压抽真空以后，注入氮气恢复到常压，在氮气保护状态下，将罂粟籽油置于油罐中，加入多烯磷脂酰胆碱,加入维生素E,搅拌状态下，油温缓升至70'C,使多烯磷脂酰胆碱溶解，依次加入丹参脂溶性化合物、油酸搅拌均匀至完全溶解，恒温，氮气保护，成油相。取无菌水或者注射用水至乳化系统水罐中，水中充氮气除氧，水温升至至7(TC，依次加入依地酸二钠、木糖醇或者甘油、氢氧化钠搅拌至完全溶解，恒温，成水相。在氮气保护状态下，启动油罐高速乳化剪切机，将乳化系统水罐中水相缓注入油罐中，使之成乳化液，根据需要，测定初乳的pH值，其中对于口服液pH应为pH6.5pH7.0，注射液应为pH7.5pH8.5为宜。将上述获得乳化液注入高压乳化均质机，数次循环均质至脂微球的平均粒径不大于200nm，90%粒径累积值不大于400mn，且没有大于lnm的颗粒。本发明所述罂粟籽油是经过灭活不含有毒性成分，不饱和脂肪酸含量不低于80%，且可供食用或者可供注射用。本发明所述的丹参脂溶性化合物系从天然植物丹参中提取，或者是丹参酮I单体化合物；或者丹参酮IIA单体化合物；或者隐丹参酮单体化合物；或者二氢丹参酮I单体化合物；或者是丹参脂溶性混合物。.本发明所述的多烯磷脂酰胆碱是指磷脂含量不低于45%;油酸与亚油酸总含量不低于40%;溶血磷脂酰胆碱不得大于3.0%,或者含不饱和脂肪酸混合物的磷脂酰胆碱。进一步，也可以采用大豆磷脂酰胆碱(大豆卵磷脂)和从蛋黄中提取蛋黄磷脂酰胆碱(蛋黄卵磷脂)作为表面活性剂。本发明获得的丹参脂溶性化合物和罂粟籽油组合与多烯磷脂酰胆碱制成的脂微球，通过磷脂酰胆碱膜作用,靶向聚于人体肝脏部位，用于肝损伤疾病病的预防和治疗。本发明所述的丹参脂溶性化合物与罂粟籽油的组合，不只限于此还可以从植物、动植物中提取、也可以是全化学合成的脂溶性化合物与罂粟籽油形成的组合。本发明可以根据需要加入抗氧化剂、稳定剂和螯合剂等。具体可以用维生素E作为抗氧化剂；油酸作为脂微球膜系稳定剂；依地酸二钠作为螯合剂。本发明所述的丹参脂溶性化合物与罂粟籽油的组合，不只限于此还可以从其他植物、动植物中提取的富含不饱和脂肪酸既可供食用也可以供注射用油。具体的可以采用橄榄油或者深海鱼油。本发明可以采用任何有利的碱调节剂来调节pH值，具体采用氨氧化钠。本发明可根据需要加入甜味剂和等参剂，具体可以加入木糖醇、甘油。以下是实验本发明脂微球剂的药效作用实验目的探讨丹参酮脂溶提取物和罂粟仔油组合脂微球剂对于小鼠瘤体生长的抑制作用。实验动物体重1820g小鼠，雌雄各半。实验过程-肿瘤细胞的复苏H22肝癌细胞株采用快速融化的手段。这样可以保证细胞外结晶在短时间内融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内结晶对细胞造成的损害。取出冻存管直接投入37'C温水中，并轻轻摇动令其内容尽快融化。从37'C水浴中取出冻存管，用75%乙醇消毒后开启，用吸管吸出细胞悬液，注入离心管并加入10倍以上的培养液，混合后低速离心，除去上清液，再重复用培养液洗一次。用适量培养液稀释后，接种培养瓶，放入C02培养箱静置培养，次日更换一次培养液，继续培养。肿瘤细胞的传代悬浮细胞多采用离心方法传代，即将细胞连同培养液一并转移到离心管内，离心转数为8001000r/min;离心时间5mim然后去除上清液，加新的培养液到离心管内，用吸管吹打使之形成细胞悬液，然后传代接种。肿瘤细胞的接种无菌条件下建立荷瘤鼠模型。腹腔接种小鼠7d后，抽取接种小鼠腹水，细胞计数板计数后，用无菌生理盐水稀释，调整细胞数约为2X107ml，分别给90只小鼠腋下接种该稀释后的瘤细胞悬液0.2ml/只，全部制成荷瘤鼠模型，接种24h后给药。抗肿瘤实验过程将90只小鼠随机分为3组，盐水注射对照组，按丹参酮IIA10mg/kg注射组和3ing/kg注射组。经小鼠腹腔给药10天后，停药后次日，将各组动物称重并断髓处死，钝性剥离瘤组织，称重，计算各组小鼠的平均瘤重。比较各组阴性对照组与阳性对照组的差异，并计算对肿瘤生长的抑制率。抑制率=(对照组平均瘤重一丹参酮IIA组平均瘤重)/对照组平均瘤重X100M<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>丹参酮IIA与罂粟籽油组合的脂微球剂与盐水对照组比较:*p<0.001，表明该剂对H22肝癌细胞有抑制作用。以下实验本发明丹参酮IIA与罂粟籽油组合的脂微球剂12个月稳定性考察结果-<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>有以上实验证明本发明获得丹参酮IIA脂溶提取物和罂粟仔油组合脂微球剂对H22肝癌细胞具有一定的凋亡和抑制作用，也证明了本发明获得的脂微球乳化液分散体系性质稳定，且丹参酮脂溶提取物和多烯磷脂酰胆碱主要药学质量指标稳定。本发明的积极效果在于将丹参脂溶性化合物和罂粟仔油的组合，利用多烯磷脂酰胆碱表面活性剂特点，经过专用的乳化设备制成磷脂膜包封的水包油型微乳乳粒分散体系，得到脂微球乳化液分散体系，用于预防和治疗制备肝损伤疾病的药物，并且对肝癌细胞具有一定的凋亡和抑制作用，可以作为肝肿瘤疾病治疗药物使用。具体实施例方式下面通过具体实施方式的详细描述来进一步阐明本发明，但并不是对本发明的限制，仅仅作示例说明。实施例1取罂粟籽油100g、丹参酮IlA2g、多烯磷脂酰胆碱20g、维生素E100mg、油酸2g、甘油25g、氢氧化钠35mg、加水至1000ml;首先将乳化系统中油罐减压抽真空以后，注入氮气恢复到常压，在氮气保护状态下，取罂粟籽油置于油罐中，加入多烯磷脂酰胆碱,加入维生素E，搅拌状态下缓升温至7(TC，使多烯磷脂酰胆碱溶解，依次加入丹参酮IIA、油酸钠搅拌均匀至完全溶解，恒温，氮气保护，成油相；取无菌水至乳化系统水罐中，水中充氮气除氧，升温至70X:,依次加入甘油、氢氧化钠搅拌至完全溶解，恒温，成水相。在氮气保护状态下，启动油罐高速乳化剪切机，将乳化系统水罐中水相缓注入油罐中，使之成乳化液，测定乳液pH值在pH7.58.5范围内，低于此范围可用适量浓度氢氧化钠溶液调整。将上述获得乳液注入高压乳化均质机，数次循环均质至脂微球的平均粒径不大于200nm，90%粒径累积值不大于400nm，且并且没有大于lnm的颗粒。氮气压力过滤2阿和0.45^m膜至灌装线液位罐，分装，12rC/15min灭菌。实施例2取罂粟籽油50g、丹参酮I0.5g、多烯磷脂酰胆碱10g、维生素E100mg、油酸lg、氢氧化钠25mg、加水至1000ml;按与实施例1相同的制备过程进行制备。分装，10(TC/30fflin灭菌。实施例3取罂粟籽油100g、二氢丹参酮l0.5g、多烯磷脂酰胆碱20g、维生素E100mg、油酸2g、甘油25g、氢氧化钠35mg、加水至1000ml;按与实施例1相同的制备过程进行制备，分装。121'C/15min灭菌。实施例4罂粟籽油100g、隐丹参酮lg、多烯磷脂酰胆碱20g、维生素E100mg、油酸2g、甘油25g、氢氧化钠35mg、加水至1000ml;按与实施例1相同的制备过程进行制备，分装。12rC/15min灭菌。实施例5取罂粟籽油200g、丹参酮脂溶混合物5g、不饱和脂肪酸混合物磷脂酰胆碱20g、维生素E150mg、油酸4g、氢氧化钠25mg、加水至1000ml;按与实施例1相同的制备过程进行制备，分装。100'C/30min灭菌。实施例6称取罂粟籽油300g、丹参酮脂溶混合物5g、大豆磷脂酰胆碱20g、维生素E150mg、油酸6g、氢氧化钠25mg、加水至1000ml;按与实施例1相同的制备过程进行制备，分装。100°C/30min灭菌。实施例7罂粟籽油200g、丹参酮脂溶混合物2g、蛋黄磷脂酰胆碱20g、维生素E150rag、油酸4g、氢氧化钠25mg、加水至1000ml:按与实施例1相同的制备过程进行制备，分装。100°C/30oiin灭菌。实施例8橄榄油100g、丹参酮脂溶混合物2g、多烯磷脂酰胆碱20g、维生素E100mg、油酸2g、甘油25g、氢氧化钠35rag、加水至1000ml;按与实施例1相同的制备过程进行制备，分装。12rC/15min灭菌。实施例9深海鱼油100g、丹参酮脂溶混合物2g、多烯磷脂酰胆碱20g、维生素E100mg、油酸2g、甘油25g、氢氧化钠35mg、加水至1000ml:按与实施例1相同的制备过程进行制备，分装。12rC/15min灭菌。权利要求1、一种丹参脂溶提取物和罂粟仔油组合脂微球，是由以下各组份原料按总量1000ml制成的罂粟籽油50～300g、丹参脂溶性化合物0.5～5.0g、多烯磷脂酰胆碱10～50g、维生素E.100～300mg、油酸1～6g、木糖醇1～10g、甘油20～25g、氢氧化钠25～40mg、余量为水。2、权利要求1所述脂微球的制备工艺，包括以下步骤按比例称取上述原料，在对乳化系统中油罐减压抽真空以后，注入氮气恢复到常压，在氮气保护状态下，将罂粟籽油置于油罐中，加入多烯磷脂酰胆碱,加入维生素E，搅拌状态下，油温缓升至7(TC，使多烯磷脂酰胆碱溶解，依次加入丹参脂溶性化合物、.油酸搅拌均匀至完全溶解，恒温，氮气保护，成油相；取无菌水或者注射用水至乳化系统水罐中，水中充氮气除氧，水温升至至7(TC，依次加入依地酸二钠、木糖醇或者甘油、氢氧化钠搅拌至完全溶解，恒温，成水相；在氮气保护状态下，启动油罐高速乳化剪切机，将乳化系统水罐中水相缓注入油罐中，使之成乳化液，乳液pH6.5pH8.5;进一步，将上述获得乳液注入高压乳化均质机，数次循环均质至脂微球的平均粒径不大于200nm，90%粒径累积值不大于400nm，且没有大于lpm的颗粒。3、权利要求1所述的脂微球在预防和治疗制备肝损伤疾病的药物中的应用。全文摘要本发明公开了一种丹参脂溶提取物和罂粟仔油组合的脂微球，是将丹参脂溶性化合物和罂粟仔油进行组合，并利用多烯磷脂酰胆碱具有的表面活性特点，制成水包油型脂微球乳化液分散体系，用于预防和治疗制备肝损伤疾病的药物，对H22肝癌细胞具有一定的凋亡和抑制作用。文档编号A61K9/16GK101336968SQ20081005100公开日2009年1月7日申请日期2008年7月22日优先权日2008年7月22日发明者侯文阁,曦陈申请人:侯文阁