专利名称：一种制备高纯度莫西克汀的方法
技术领域：
本发明涉及药物化学领域，具体而言，本发明涉及一种制备高纯度莫西克汀的方法。
背景技术：
本发明涉及一种制备莫西克汀的方法。莫西克汀(INN: Moxidectin)是一种大环内酯类的
农用抗生素，主要用于治疗牛羊等动物体内的寄生虫病，可以通过链霉菌发酵产生尼莫克汀
(1NN:Nemadectin)，再通过化学反应得到。美国专利US4916154A (其全部内容在此引入作为
参考)提供了一种制备莫西克汀的方法，即将链霉菌发酵后产生的发酵液经过固液分离，浸取
后得到的尼莫克汀溶液通过萃取，硅胶柱层析，凝胶层析得到纯度90%以上(HPLC)的尼莫克
汀，将提纯的尼莫克汀通过上保护氧化，脱保护肟化反应得到莫西克汀，再经过硅胶柱层析得
到高纯度的莫西克汀。该方法能得到纯度90%以上的莫西克汀，但该方法工艺复杂，需要操作
及控制都繁琐的硅胶凝胶层析，该层析溶剂用量较大，对进入硅胶柱的上柱物无水要求高，重
复使用性低，致使该层析收率降低，成本较高。
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发明内容
本发明致力于提供一种更简单有效成本更低的制备高纯度莫西克汀的方法。我们经过研究惊 奇的发现，通过固液分离，浸取后得到的尼莫克汀通过一种廉价的可以重复使用多次的大孔吸 附树脂去除大部分发酵液残留的糖类，蛋白质及一部分脂溶性杂质，经树脂层析后得到的尼莫
克汀初步提纯液纯度在40% 50%,我们更惊奇的发现，上述初步提纯液直接上保护反应得到上 保护液经过大孔吸附树脂层析后得到纯度85%以上的上保护物，该组分经过氧化，脱保护肟化 后经大孔吸附树脂层析得到纯度93%以上的莫西克汀溶液，从而我们可以通过常规的浓縮结晶 把莫西克汀从溶液中分离出来。
本发明涉及的预提纯的尼莫克汀的制备方法参见THE JOURNAL OF ANTIBIOTICS(4， 1988， 519-528 )，其固形物所含的尼莫克汀含量在15%—25%，其全文在此引入作为参考。 本发明涉及的制备高纯度的莫西克汀的方法的特征在于.-
(1) 将预提纯的尼莫克汀溶液经大孔吸附树脂层析，采用极性有机溶剂和水的混合溶液洗脱；
(2) 将上述洗脱液通过二氯甲垸萃取后经常规浓縮去除溶剂；
(3) 将上述浓縮物通过上保护反应得到上保护液；
(4) 将上述上保护液通过大孔吸附树脂层析，所述层析用极性溶剂和水混合溶剂洗脱；
(5) 将上述上保护洗脱液经过氧化，脱保护，肟化反应得到莫西克汀反应液；
(6) 上述莫西克汀反应液经大孔吸附树脂层析，所述层析用极性溶剂和水混合溶剂洗脱，得到 的洗脱液即为高纯度的莫西克汀溶液；
(7) 如有需要可用常规的浓縮结晶技术将产物从溶液中分离出来。
其中步骤(1)进入树脂柱的尼莫克汀溶液优选为经过固液分离，浸取后得到的尼莫克汀 溶液(参照THE JOURNAL OF ANTIBIOTICS(4, 1988 519-528 ))。其中步骤(1)大孔吸附 树脂为一种非离子交换非极性的颗粒度较粗的大孔树脂，其中优选20-40目的大孔吸附树脂。 其中步骤(4) (6)大孔吸附树脂为一种非离子交换非极性的颗粒度较细的大孔树脂，其中优 选80-100目的大孔吸附树脂；步骤(1) (4) (6)所述极性溶剂包括乙醇、丙酮或者甲醇， 优选溶剂为乙醇；在所述混合溶剂中，优选所述的极性溶剂的浓度为50%—90% (V/V)，更 优选50-75% (V/V );优选步骤(1) (4) (6)进入树脂柱的料液浓度为0.5-1% (W/W)。
与现有技术中的方法相比，本发明的方法由于使用了大孔树脂层析代替的硅胶层析分离， 该方法不仅稳定可控、容易工业化，而且提高了产品纯度、质量和收率。
本发明测定尼莫克汀及莫西克汀的含量方法采用高效液相色谱法，下面通过实施例来进一 步阐述本发明所提到的方法。
具体实施例方式
下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明实施例的制备方法仅仅是用于
说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都 属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的百分数是重量百分数，另外，本发明 说明书中的(W/W)是指重量比或者重量比浓度，(V/V)是指体积比或者体积比浓度。
实例l:制备高纯度莫西克丁的方法
1，链霉菌发酵产生的发酵液经固液分离，浸取后的得到的尼莫克汀预提纯液100g，纯度15 %,流过大孔吸附树脂柱，树脂型号HP-20 (40目，三菱化学，日本)，柱内填充物体积10L， 流完后改用乙醇水溶液梯度洗脱，从50%—90% (V/V)梯度洗脱，控制洗脱流速每小时1一L5 倍柱体积，收集尼莫克汀组分，洗脱组分加入1/10体积的二氯甲烷萃取后减压浓缩至干。浓縮 物中含尼莫克汀85g，含量46%。
2，上述尼莫克汀浓縮物经上保护反应(常规反应)后得到上保护物80g，流过大孔吸附树 脂柱，树脂型号H-60 (80目，购自南京林化研究所)，柱内填充物体积10L,流完后改用乙醇水 洗脱剂洗脱，从60%—80% (V/V)梯度洗脱，控制洗脱流速每小时1 — 1.5倍柱体积收集含上 保护液纯度在85%以上的组分，加入1/10(V/V)洗脱液体积的二氯甲烷萃取，减压浓縮至干。 该浓縮物中含上保护物68g，纯度87.8%。
3，上述上保护浓縮物经氧化，脱保护，肟化反应(常规反应)后得到莫西克汀55g,流过 大孔吸附树脂柱，树脂型号H-60 (80目，购自南京林化研究所)，柱内填充物体积10L，流完后 改用乙醇水洗脱剂洗脱，从50%—70% (V/V)梯度洗脱，控制洗脱流速每小时1一1.5倍柱体 积，收集含莫西克汀纯度在93X以上的组分，合并后含莫西克汀42g，纯度94.8X，加入1/10(V/V) 洗脱液体积的二氯甲垸萃取，减压浓缩至干。
4，将上述浓缩物加入无水乙醇至莫西克汀浓度40%，溶解过滤后放入冰箱48小时后过滤干 燥得到固体的莫西克汀，经测定莫西克汀含量94.6% (折干)。
实例2:制备高纯度莫西克丁的方法
l，链霉菌发酵产生的发酵液经固液分离，浸取后的得到的预提纯液，纯度18%，固形物中含 尼莫克汀1.2% (W/W) 120g，流过大孔吸附树脂柱，树脂型号XAD-1600 (40目，罗姆-哈斯公司 生产，美国)，柱内填充物体积12L，流完后改用丙酮水溶液梯度洗脱，从50%—80% (V/V) 梯度洗脱，控制洗脱流速每小时1一1.5倍柱体积，收集尼莫克汀组分，洗脱组分加入1/10体 积的二氯甲垸萃取后减压浓缩至干。浓缩物中含尼莫克汀98g，含量43.6%。
2,上述尼莫克汀浓縮物经上保护反应后得到上保护物95g，流过大孔吸附树脂柱，树脂型号 H-60 (80目，南京林化研究所)，柱内填充物体积10L，流完后改用丙酮水洗脱剂洗脱，从60
% — 75% (V/V)梯度洗脱，控制洗脱流速每小时1一1.5倍柱体积收集含上保护液纯度在85% 以上的组分，加入1/10(V/V)洗脱液体积的二氯甲烷萃取，减压浓縮至干。该浓縮物中含上保护 物80g，纯度86. 5%。
3, 上述上保护浓縮物经氧化，脱保护，肟化反应后得到莫西克汀65g，流过大孔吸附树脂柱， 树脂型号H-60 (80目，南京林化研究所)，柱内填充物体积IOL，流完后改用丙酮水洗脱剂洗脱， 从50%—70% (V/V)梯度洗脱，控制洗脱流速每小时1一1.5倍柱体积，收集含莫西克汀纯度 在93%以上的组分，合并后含莫西克汀48g，纯度93.5%，加入1/10(V/V)洗脱液体积的二氯 甲垸萃取，减压浓缩至干。
4, 将上述浓缩物加入无水乙醇至莫西克汀浓度40%,溶解过滤后放入冰箱48小时后过滤干 燥得到固体的莫西克汀，经测定莫西克汀含量93.2% (折干)。
实例3:制备高纯度莫西克丁的方法
1, 链霉菌发酵产生的发酵液经固液分离，浸取后的得到的预提纯液，纯度13.8%，固形物 中含尼莫克汀0.8% (W/W) 80.6g，流过大孔吸附树脂柱，树脂型号HP-20 (40目，三菱化学， 日本)，柱内填充物体积10L，流完后改用乙醇水溶液85%浓度洗脱，控制洗脱流速每小时l一 1.5倍柱体积，收集尼莫克汀组分，洗脱组分加入1/10体积的二氯甲垸萃取后减压浓缩至干。 浓縮物中含尼莫克汀68.2g，含量41.5%。
2, 上述尼莫克汀浓縮物经上保护反应后得到上保护物63.8g，流过大孔吸附树脂柱，树脂型 号H-60 (80目，南京林化研究所)，柱内填充物体积10L，流完后改用乙醇水溶液75%洗脱，控 制洗脱流速每小时l一l. 5倍柱体积收集含上保护液纯度在85%以上的组分，加入1/10(V/V)洗 脱液体积的二氯甲垸萃取，减压浓缩至干。该浓縮物中含上保护物53.8g，纯度86.2%。
3, 上述上保护浓縮物经氧化，脱保护，肟化反应后得到莫西克汀43.6g，流过大孔吸附树脂 柱，树脂型号H-60 (80目，南京林化研究所)，柱内填充物体积7L，流完后改用乙醇水溶液70% 洗脱，控制洗脱流速每小时1一1.5倍柱体积，收集含莫西克汀纯度在93%以上的组分，合并后 含莫西克汀29.6g，纯度93.6%,加入1/10(V/V)洗脱液体积的二氯甲垸萃取，减压浓縮至干。
4, 将上述浓縮物加入无水乙醇至莫西克汀浓度40%,溶解过滤后放入冰箱48小时后过滤干 燥得到固体的莫西克汀，经测定莫西克汀含量93.2% (折干)。
权利要求
1.一种制备高纯度莫西克汀的方法，其特征在于(1)将预提纯的尼莫克汀溶液经大孔吸附树脂层析，采用极性有机溶剂和水的混合溶液洗脱；(2)将上述洗脱液通过二氯甲烷萃取后经常规浓缩去除溶剂；(3)将上述浓缩物通过上保护反应得到上保护液；(4)将上述上保护液通过大孔吸附树脂层析，所述层析用极性溶剂和水混合溶剂洗脱；(5)将上述上保护洗脱液经过氧化，脱保护，肟化反应得到莫西克汀反应液；(6)上述莫西克汀反应液经大孔吸附树脂层析，所述层析用极性溶剂和水混合溶剂洗脱，得到的洗脱液即为高纯度的莫西克汀溶液；(7)如有需要可用常规的浓缩结晶技术将产物从溶液中分离出来。
2. 根据权利要求1的方法，其中步骤(1)进入树脂柱的预提纯的尼莫克汀溶液为经过固液分 离，浸取后得到的尼莫克汀溶液。
3. 根据权利要求1的方法，其中步骤(1)的大孔吸附树脂为一种非离子交换非极性的20-40 目的大孔吸附树脂。
4. 根据权利要求l的方法，其中步骤(4)和(6)的大孔吸附树脂为一种非离子交换非极性的 80-100目的大孔吸附树脂。
5. 根据权利要求l一4之一的方法，其中步骤(1) 、 (4)或(6)所述极性有机溶剂选自乙醇、 丙酮和甲醇。
6. 根据权利要求5的方法，其中步骤(1) 、 (4)或(6)所述极性有机溶剂为乙醇。
7. 根据权利要求5的方法，所述的极性溶剂的浓度为50%_90% (V/V)。
8. 根据权利要求7的方法，所述极性溶剂的浓度为50% — 75% (V/V)。
9. 根据权利要求l的方法，其中步骤(l)、 (4)或(6)进入树脂柱的料液浓度为0.5-1% (W/W)。
全文摘要
本发明涉及一种制备高纯度莫西克汀的方法，该方法包括以下步骤(1)将预提纯的尼莫克汀溶液经大孔吸附树脂层析，采用极性有机溶剂和水的混合溶液洗脱；(2)将上述洗脱液通过二氯甲烷萃取后经常规浓缩去除溶剂；(3)将上述浓缩物通过上保护反应得到上保护液；(4)将上述上保护液通过大孔吸附树脂层析，所述层析用极性溶剂和水混合溶剂洗脱；(5)将上述上保护洗脱液经过氧化，脱保护，肟化反应得到莫西克汀反应液；(6)上述莫西克汀反应液经大孔吸附树脂层析，所述层析用极性溶剂和水混合溶剂洗脱，得到的洗脱液即为高纯度的莫西克汀溶液，如有需要可用常规的浓缩结晶技术将产物从溶液中分离出来。本发明的方法由于使用了大孔树脂层析代替的硅胶层析分离，该方法不仅稳定可控、容易工业化，而且提高了产品纯度、质量和收率。
文档编号A61P33/00GK101372492SQ200810126358
公开日2009年2月25日 申请日期2008年6月26日 优先权日2007年6月29日
发明者缪建玉 申请人:浙江海正药业股份有限公司