专利名称：：灯盏花素注射液及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种治疗心脑血管疾病的中药制剂，尤其涉及灯盏花素注射液及其制备方法，属于中药领域。
背景技术：
：灯盏花素注射液在临床上用于治疗脑中风后瘫痪有很好的疗效。其主要成份为灯盏花乙素(野黄芩苷)。现有技术文献中公开了许多灯盏花乙素注射液，其中CN1091301公开了一种由灯盏花浸膏加氯化钠组成的灯盏花注射液，该注射液直接用灯盏花浸膏制成，其中灯盏花乙素的含量较低，而且注射液中还含有多种杂质，难以在制药工业中应用。CN1095934公开了一种由5-30%灯蓋花素水溶性盐加药用辅料制成的灯盏花注射液，其中的灯盏花素水溶性盐是由市售灯盞花素(纯度仅为卯％,且还含有灯盏花曱素等其他成分)加碱制成，由于市售灯盏花素含有较多杂质，在加碱成盐时容易使其中含有的酸性杂质如鞣酸也与碱締合从而进入注射液中，制成的注射液依然含有较多杂质，难以达到理想的治疗效果。而且，有些制备工艺中需要使用大孔吸附树脂进行纯化，例如CN03117754.9号专利中，不仅使用大量高纯度乙醇进行提取，而且提取后需要通过大孔吸附树脂进行柱层析纯化，在分离过程中还需要使用丙酮等溶剂，导致最后的产品中混杂有少量树脂等致痛物质。传统的制备方法需使用为药材重量几十倍的高浓度乙醇分为多次进行提取，其中，回收乙醇后还需要将水溶液冷冻以除掉杂质，最后再加活性炭煮沸除杂，所制备的注射液依然含有较多杂质，导致该产品在使用时容易引起疼痛，发冷，发热，皮渗，皮肤瘙痒等不良反应。显然，现有制备方法存在工艺繁瑣，乙醇耗量大，生产周期长等缺陷，并且，尽管进行反复精制也不能除尽注射液中的如鞣酸和树脂等致痛物质，由于传统方法所制备的灯盏花素注射液中含有一定的致痛物质，只能再向注射液中添加一定的止痛物质，诸如苯甲醇止痛等，这类止痛物质如长期使用有可能造成人体深部肌肉的坏死。由脑中风所致的瘫痪病人需要长期给药治疗，所以，临床上亟待需要一种不需要添加止痛物质的且制备工艺简捷的灯盏花素注射液。
发明内容本发明目的之一是提供一种新的灯盏花素注射液，该灯盏花素注射液不含有鞣酸和树脂等致痛物质且有效成份含量高，提高了疗效和使用安全性，LDso大幅度提高。本发明目的之二是提供一种制备上述灯盏花素注射液的方法。本发明上述目的是通过以下技术方案来实现的一种灯盏花素注射液，该灯盏花素注射液含有灯盏花甲素和灯盏花乙素的组合作为活性成分，且每毫升注射液中含灯盏花乙素2-20mg或以上。此外，该灯盏花素注射液不含有有鞣酸和树脂等致痛物质，且每毫升炽灼残渣低于0.5mg，每毫升重金属低于百万分之十。一种制备上述灯盏花素注射液的方法，包括以下步骤(1)将灯盏细辛用浓度(重量)为50-100%乙醇水溶液(100%乙醇指无水乙醇)渗漉提取；收集渗漉液，将渗漉液的pH值用碱液调至7-12,静置，过滤，收集滤液，备用；(2)将滤液的pH值用稀盐酸调至1-8,回收乙醇，稠膏用注射用水溶解，加压下用超滤膜(优选用分子截留值为1000的超滤膜)反复过滤；(3)收集滤液，控制滤液中总黄酮的含量为l-10mg/ml，另外补加NaCl使滤液中NaCl的含量为0.3-0.9wt%;再一次用超滤膜过滤，将滤液灌封，灭菌，即得。其中，步骤(l)中用乙醇水溶液进行渗漉提取时，乙醇的用量没有限制，只要可以将有效成分有效地提取出来即可，但通常以没过药材为宜，具体量根据药材含水量的不同略有差异，但一般为药材重量的0.5至15倍体积量，优选为2至12倍体积量，更优选5倍至12倍体积量，即如果药材为lkg，则乙醇的用量为500ml至15L之间，优选2L至12L,更优选5L至12L;为了达到更好的制备效果，步骤(l)中所述的渗漉提取按照以下方法进行将灯盏细辛装入提取罐加70-95%乙醇没过药材，在10。C-80。C的温度条件下(更优选为在50。C)保温一定时间(该保温时间本领域技术人员可视情况掌握或调控，可长可短，对于发明的效果或实施不构成实质性影响；作为参考，可选择保温30分钟-6小时)后渗漉提取；其中，更优选的，将出液速度控制在5-50ml/cm2.min(更优选为10-20ml/cm2.min);按v/w计，控制出液体积达原料料重量的5-15倍(更优选为7-10倍)，至提取液无色为止。步骤(1)中所述的过滤优选为用100目的滤布过滤；步骤(1)中将渗漉液的pH值用碱液调至8-12,进一步优选至9-12，更优选为9-11;静置1-20小时；其中，所ii^喊选自无积碱，例如碳酸钠(Na2C03),碳酸氩钠(NaHC03)，碳酸钾，碳酸氩钾，氢氧化钠，氢氧化钾，氢氧化钓，氧化4丐，碳酸钓，磷酸氢钾，磷酸苯二钠，乙醇钠，三(鞋甲基)氨基甲烷，氨三乙酸钠等；或者有机碱，例如乙二胺四乙酸四钠，三乙胺；或者选自精氨酸、赖氨酸、羟赖氨酸等碱性氨基酸。优选的，步骤(2)中将滤液的pH值用稀盐酸调至1-7，进一步优选为1-5，再进一步优选为2-5,最优选为2-4;步骤(2)或(3)中所述的超滤膜优选为分子截留值为1000的超滤膜进行过滤；步骤(2)中所述的过滤次数优选为两次以上，更优选为过滤三次或者四次，最优选为过滤五次。本发明制备灯盏花素注射液方法可有效除尽鞣质等致痛杂质，提高有效成份含量(每毫升含灯盏花乙素2-20mg或以上)，乙醇用量少，不需添加止痛剂(苯曱醇)，工艺简化，生产周期短，生产成本低，具有良好的经济效益，提高了用药安全性。具体实施例方式下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。实施例1取灯盏细辛饮片5kg,装入渗漉提取器，加50%乙醇没过药面，夹套通蒸汽，于80。CM呆温浸4h，之后从渗漉提取器下方访文液，上方补加50%乙醇，出液流速控制为20ml/citf.min，至流出液无色为止，得渗漉液40000ml;将渗漉液放冷至室温，缓緩搅动，滴加20%(重量)Na2C03水溶液至无白色沉淀生成，调pH=12,静置6h,用IOO目滤布，离心滤去沉淀，滤液加10%的HCl,回调pH二7，回收乙醇，至稠膏状，稠膏加5000ml注射用水，加热至60。C使溶，过0.45nm微孔滤膜过滤，滤液加压下过分子截留值为1000的超滤膜，测总黄酮含量二3.2mg/ml(声丁标准曲线法)，NaCl含量0.2%(AgN03滴定法)，补加NaC142.8g及注射用水1260ml，搅拌溶解测得总黄酮含量2.5mg/ml，NaCl含量0.9%，再用分子截留值为1000的超滤膜过滤一次，得注射液5600ml，灌装2ml/支，100。C流通蒸汽灭菌40min,得成品2800支。经检测，本实施例所制备的灯盏花素注射液中不含有鞣酸或树脂等致痛物质，其它成分的含量检测结果见表1。表1本实施例所制备的灯盏花素注射液检测结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>实施例2取灯盏细辛饮片5kg,装入渗漉提取器，力口80%乙醇没过药面，夹套通蒸汽，于50。C保温浸3h,之后从渗漉提取器下方放液，上方补加80%乙醇，出液流速控制为5ml/crtf.min,至流出液无色为止，得渗漉液50000ml;将渗漉液》丈冷至室温，缓缓搅动，滴加20o/o(重量)CaOH水溶液至无白色沉淀生成，调pH二9.5,静置4h，用100目滤布，离心滤去沉淀，滤液加10%的HCl,回调pEK3，回收乙醇，至稠膏状，稠膏加4500ml注射用水，加热至60。C使溶，过0.45^im微孔滤膜过滤，滤液加压下过分子截留值为1000的超滤膜，测总黄酮含量二3.8mg/ml(,丁标准曲线法)，NaCl含量0.2。/。(AgNCV滴定法)，补加NaC142.8g及注射用水860ml,搅拌溶解测得总黄酮含量3mg/ml,NaCl含量0.9。/。，再用分子截留值为1000的超滤膜过滤一次，得注射液5000ml，灌装2ml/支，100。C流通蒸汽灭菌40min,得成品2500支。经检测，本实施例所制备的灯盏花素注射液中不含有鞣酸或树脂等致痛物质，其它成分的含量检测结果见表2。表2本实施例所制备的灯盏花素注射液检测结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>实施例3取灯盏细辛饮片10kg，装入渗漉提取器，加90。/。乙醇浸没药面，夹套通蒸汽50。C保温3h后，下部放液，上方不断补加90%乙醇，出液流速控制在10ml/cnf.min，待流出液无黄色为止，得渗漉液约80000ml;放冷至室温，緩緩搅动下，滴加20%(重量)NaOH溶液，至白色沉淀不再生成为止，pH=10,静置4h,用100目滤布离心过滤，除去沉淀，滤液加10%HC1回调至pH二6，回收乙醇，得稠膏，加8000ml60。C的注射用水搅溶，用0.45pm微孔滤膜过滤，滤液加压下过分子截留值为1000的超滤膜，对超滤液测总黄酮含量为4.4mg/ml,(,丁标准曲线法)，NaCl含量为0.2%(AgN03滴定法)，补加注射用水2900ml,及NaC181.9g,搅溶后，测得总黄酮含量3.5mg/ml,NaCl含量0.9%，再用分子截留值为1000的超滤膜过滤一次，得注射液9000ml，灌装，2ml/支，100。C流通蒸汽灭菌40min,得成品4500支。经检测，本实施例所制备的灯盏花素注射液中不含有鞣酸或树脂等致痛物质，其它成分的含量检测结果见表3。表3本实施例所制备的灯盏花素注射液检测结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>实施例4取灯盏细辛饮片10kg，装入渗漉提取器，力口95%乙醇浸没药面，夹套通蒸汽10。C保温6h后，下部》文液，上方不断补加95%乙醇，出液流速控制在50ml/cnf.min，待流出液无黄色为止，得渗漉液约9万ml;放冷至室温，緩緩搅动下，滴加20%(重量)NaOH溶液，至白色沉淀不再生成为止，pH=10,静置5h，用IOO目滤布离心过滤，除去沉淀，滤液加10%HC1回调至pP^5,回收乙醇，得稠膏加8000ml60。C的注射用水搅溶，用0.45pm微孔滤膜过滤，滤液加压下过分子截留值为1000的超滤膜，对超滤液测总黄酮含量为5mg/ml,(,丁标准曲线法)，NaCl含量为0.2%(AgN03滴定法)，补加注射用水2900ml，及NaC181.9g，搅溶后，测得总黄酮含量4mg/ml,NaCl含量0.9%，再用分子截留值为1000的超滤膜过滤一次，得注射液8000ml，灌装，2ml/支，IO(TC流通蒸汽灭菌40min，得成品4000支。经检测，本实施例所制备的灯盏花素注射液中不含有鞣酸或树脂等致痛物质，其它成分的含量检测结果见表4。表4本实施例所制备的灯盏花素注射液检测结果品名灯盏花乙素炽灼残渣重金属灯盏花素注射液6mg/ml0.5mg/ml百万分之九实施例5取灯盏细辛饮片10kg，装入渗漉提取器，加95%乙醇浸没药面，夹套通蒸汽10。C保温6h后，下部放液，上方不断补加95%乙醇，出液流速控制在50ml/cm2.min,待流出液无黄色为止，得渗漉液约9万ml;放冷至室温，緩緩搅动下，滴加20%(重量)NaOH溶液，至白色沉淀不再生成为止，pH-lO,静置5h,用100目滤布离心过滤，除去沉淀，滤液加10%HC1回调至pH二5，回收乙醇，得稠膏加4000ml60。C的注射用水搅溶，用0.45pm微孔滤膜过滤，滤液加压下过分子截留值为1000的超滤膜，对超滤液测总黄酮含量为10mg/ml以上,(,丁标准曲线法)，NaCl含量为0.2%(AgN03滴定法)，补加注射用水1500ml,及NaC181.9g,搅溶后，测得总黄酮含量8mg/ml,NaCl含量0.9%,再用分子截留值为1000的超滤膜过滤一次，得注射液4000ml,灌装，2ml/支，100。C流通蒸汽灭菌40min,得成品2000支。经检测，本实施例所制备的灯盏花素注射液中不含有鞣酸或树脂等致痛物质，其它成分的含量检测结果见表4。表4本实施例所制备的灯盏花素注射液检测结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>实验例1本发明灯盏花素注射液的毒理实验1、小鼠一次静脉注射本发明实施例1制备的灯盏花素注射液，经检测，LD5()为573mg/kg，而作为对照的市售灯盏花素注射液相应的LDso为871.23mg/kg。2、小鼠一次腹腔注射本发明实施例2制备的灯盏花素注射液，经检测，LD50为1303mg/kg，而作为对照的市售灯盏花素注射液相应的LDs。为1891.78mg/kg。3、SD大鼠腹腔注射本发明实施例4制备的灯盏花素注射液90天，无毒剂量为20mg/kg,为临床推荐最大剂量的20倍；安全剂量为低于40mg/kg,是临床推荐最大剂量的40倍；中毒剂量为100mg/kg,是临床推荐最大剂量的100倍。权利要求1、一种灯盏花素注射液，其特征在于该注射液中含有灯盏花甲素和灯盏花乙素的组合作为活性成分，且每毫升注射液中含灯盏花乙素2-20mg或以上。2、按照权利要求1所述的灯盏花素注射液，其特征在于该灯盏花素注射液不含有致痛物质，且每毫升炽灼残渣低于0.5mg，每毫升重金属低于百万分之十。3、一种制备权利要求1或2所述灯盏花素注射液的方法，包括以下步骤(1)将灯盏细辛用50-100°/。乙醇溶液渗漉提取；收集渗漉液，将渗漉液的pH值用碱液调至7-12,静置，过滤，收集滤液，备用；(2)将滤液的pH值用稀盐酸调到1-8，回收乙醇，稠膏用注射用水溶解，加压下用超滤膜反复过滤；(3)收集滤液，控制滤液中总黄酮的含量为l-10mg/ml，另外补加NaCl使滤液中NaCl的含量为0.3-0.9wt%;再一次用超滤膜过滤，将滤液灌封，灭菌，即得。4、按照权利要求3的方法，其特征在于，步骤(l)中在进行渗漉提取时，按V/W计，乙醇溶液的用量为灯盏细辛重量的0.5倍至15倍体积量，优选为2倍至12倍体积量，更优选为5倍至10倍体积量。5、按照权利要求3的方法，其特征在于，步骤(l)中所述的渗漉提取按照以下方法进4亍将灯盏细辛装入提取罐加70-95%乙醇水溶液没过药材，在10°C-80°C的温度条件下保温后渗漉提取；优选的，在50。C的温度条件下保温1-6小时后渗漉提取。6、按照权利要求5的方法，其特征在于将出液速度控制在5-50ml/cm2.min，优选的，将出液速度控制在10-20ml/cm2.min;按v/w计，控制出液量体积达原料料重量的5-15倍，至提取液无色为止。7、按照权利要求3的方法，其特征在于步骤(l)中将渗漉液的pH值用碱液调至8-12，进一步优选至9-12，更优选为9-11。8、按照权利要求3的方法，其特征在于，步骤(1)中所述碱选自无积i碱，有才;i4^或碱性氨基酸；其中，所述的无积"喊包括碳酸钠，碳酸氢钠，碳酸钾，碳酸氢钾，氢氧化钠，氢氧化钾，氢氧化钙，氧化钙，碳酸钙，磷酸氢钾，磷酸苯二钠，乙醇钠，三(幾甲基)氨基甲烷或氨三乙酸钠；所述的有机i威包括乙二胺四乙酸四钠或三乙胺；所述的碱性氨基酸包括精氨酸、赖氨酸或幾赖氨酸。9、按照权利要求3的方法，其特征在于步骤(1)中所述的过滤为用100目的滤布过滤。10、按照权利要求3的方法，其特征在于步骤(2)中将滤液的pH值用稀盐酸调至1-7，进一步优选为调至1-5，再进一步优选为调至2-5,最优选为调至2-4。11、按照权利要求3的方法，其特征在于步骤(2)中所述的过滤次数为两次以上，更优选为过滤三次或者四次，最优选为过滤五次。12、按照权利要求3的方法，其特征在于步骤(2)或(3)中所述的超滤膜为分子截留值为1000的超滤膜。全文摘要本发明公开了一种灯盏花素注射液及其制备方法。该注射液含有灯盏花甲素和灯盏花乙素的组合作为活性成分，含灯盏花乙素2-20mg/毫升或以上，不含有致痛物质，炽灼残渣低于0.5mg/毫升，每毫升重金属低于百万分之十。其制备方法包括将灯盏细辛用乙醇渗漉提取；收集渗漉液，调pH值至7-12，静置，过滤，收集滤液，调pH值至1-8，回收乙醇，稠膏用注射用水溶解，加压下用超滤膜反复过滤；控制滤液中黄酮的含量为1-5mg/ml，使滤液中NaCl的含量为0.3-0.9wt％；过滤，灌封，灭菌。本发明方法可有效除尽鞣质等致痛杂质，不需添加止痛剂，有效成份含量高，乙醇用量少，工艺简化，生产周期短，生产成本低。文档编号A61K9/08GK101357117SQ20081014664公开日2009年2月4日申请日期2008年9月3日优先权日2008年9月3日发明者袭开利,郭东宇,韩兆华申请人:郭东宇