专利名称：：首乌丹参滴丸中丹酚酸b含量测定方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药首乌丹参滴丸产品中丹酚酸B的含量测定方法。
背景技术：
：首乌丹参滴丸是天士力公司开发的中药制剂，处方由丹参240份、三七130份、制首乌240份、女贞子120份、天然冰片0.050.8份、适量成型辅料和包衣材料等组成。具有活血止痛，滋补肝肾之功效。主治肝肾阴虚型冠心病、心绞痛，症见胸脘痞闷，心前剧痛，伴头昏目涩、腰膝酸软、心烦失眠，舌暗红，脉沉或细数。适用于稳定型心绞痛而有上述症状者。方中天然冰片又名龙脑，味辛苦，性微寒，归心、脾、肺经，其味辛散，具有开窍醒神、消肿止痛功效。现有首乌丹参滴丸制剂存在质量控制方法落后，产品质量不易控制的缺点。现有质量控制方法中并没有对其丹酚酸B成分进行含量测定的内容。故现有质量控制方法不能有效控制产品的质量，从而将影响产品的生产和保证质量。为有效控制产品质量，我们建立了首乌丹参滴丸新的质量控制方法，我们采用高效液相色谱法对首乌丹参滴丸中丹酚酸B进行了定量分析。为首乌丹参滴丸质量控制方法提供了依据。该质量控制方法精密度、灵敏度、稳定性均好，确保产品质量的"安全、均一、稳定、有效、可控"。
发明内容本发明提供一种新的首乌丹参滴丸的质量控制方法。本发明方法包括对首乌丹参滴丸中的丹酚酸B成分进行含量测定的步骤。其中对丹酚酸B成分进行含量测定采用高效液相色谱法。本发明方法包括将丹酚酸B对照品，首乌丹参滴丸供试品，不含丹酚酸B的首乌丹参滴丸供试品分别通过高效液相色谱仪，按公式计算首乌丹参滴丸供试品中丹酚酸B的所用仪器为高效液相色谱仪，色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，1%甲酸水溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为286nm;柱温为25°C;进样量为10ul;理论塔板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>所用药剂为丹酚酸B对照品；纯化水；甲醇；无水甲酸；首乌丹参滴丸不含丹酚酸B的首乌丹参滴丸(阴性滴丸)。其中优选的仪器为Agilent1100高效液相色谱仪，配置四元泵，VWD检测器，自动进样器，在线真空脱气机，柱温箱；AS3210Aultrasoniccleaner。检测方法—、检测溶液制备对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每1ml含0.0307mg的溶液，即得。供试品溶液制备取首乌丹参滴丸供试品0.6g(压口)，精密称定，置25ml容量瓶中，加入75%甲醇20ml，超声处理30分钟，迅速冷却至室温，加75%甲醇至刻度，摇匀，过0.45iim微孔滤膜，取续滤液即得。阴性供试品溶液制备取不含丹参的首乌丹参滴丸阴性供试品0.6g(压口)，精密称定，置25ml容量瓶中，加入75%甲醇20ml，超声处理30min，迅速冷却至室温，加75%甲醇至刻度，摇匀，过0.45iim微孔滤膜，取续滤液即得。二、操作分别吸取以上对照品溶液，供试品溶液和阴性供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，得到对照品溶液色谱图，供试品(供试品)溶液色谱图，阴性供试品溶液色谱图，三、计算按下述公式计算供试品中丹酚酸B含量。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中A#:首乌丹参滴丸供试品溶液峰面积A标丹酚酸B对照品溶液峰面积Cfe:丹酚酸B对照品溶液浓度(单位为mg/ml)M#:首乌丹参滴丸供试品称样量(g)N稀释体积首乌丹参滴丸供试品的稀释体积(N=25ml)为验证本发明方法的"安全、均一、稳定、有效、可控"。进行了以下实验—、干扰试验分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，进行测定。将阴性供试品色谱图与对照品色谱图和供试品色谱图进行比较，阴性供试品在丹酚酸B出峰的时间范围内未见任何杂峰，供试品各色谱峰分离良好。证明，所建HPLC检测丹参滴丸中丹酚酸B含量的方法可排除干扰，该方法可靠、准确，可信度高。二、线性关系考察分别精密量取对照品溶液1、2、4、6、8、10iU注入液相色谱仪，记录色谱图，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标进行线性回归，回归方程为y=1102.3x-6.9896，R2=1。结果表明，丹酚酸B在0.0956iig0.9560iig(即丹酚酸B对照品浓度为0.00956mg/ml0.0956mg/ml，进样体积10yl)范围内，呈良好线性关系，该方法线性良好。三、精密度试验取供试品(批号20080201)，按供试品溶液的制备方法进行制备，连续进样6次，测定，其RSD为0.28%，该方法精密度良好。四、稳定性试验取20080201批供试品按供试品溶液的制备方法进行制备，在室温条件下(18°C20°C)分别于分别在0，1，2，3，6，12h进样，其RSD为0.81%，该方法稳定性良好。五、重复性试验取供试品(批号20080201;压口)共6份，每份0.6g，精密称定，按供试品溶液制备方法进行制备，进样，测定，其RSD为1.04%，该方法重复性良好。六、回收率试验取供试品(批号20080201;压口)共6份，每份0.3g，精密称定，分别精密加入丹酚酸B对照品溶液(0.0956mg/ml)4.74ml，按供试品溶液的制备方法进行制备，进样、测定，其回收率为101.0X，RSD为2.0%，该方法回收率良好。七、供试品含量测定取20080201、20080202和20080203批首乌丹参滴丸，按上述方法进行丹酚酸B的含量测定并计算，其含量分别为1.45mg/g、l.41mg/g和1.58mg/g。本发明的一些处理方法是经过筛选得到的，如供试品处理方法本品为包衣滴丸，压口后的供试品超声提取30min，滴丸溶散，滴丸的包衣层亦溶散；而不压口的供试品经超声提取30min后，滴丸溶散，但包衣层存在，不能保证测定成分在规定的时间内释放出完全，影响含量测定结果。提取方法的选择(1)供试品加甲醇超声处理30min;(2)供试品加75%甲醇回流提取60min。方法(1)与方法(2)含量测定无差异；方法(1)操作简便快速，故选定(1)为本试验的提取方法。流动相和洗脱方式的选择试验过程我们对比了(1)以甲醇_乙腈-0.5%甲酸溶液(30:10:60)为流动相进行洗脱(2)乙腈和1%甲酸水溶液进行洗脱(3)乙腈和1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱三种方法，最终确定以乙腈和1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱的方法，能使丹酚酸B与其它各峰完全分离，明显提高分离度，故选定作为本实验的流动相进行梯度洗脱。柱温的选择试验过程中，我们选择设定了柱温分别为25t:、35t:和45t:。通过试验发现(l)柱温为35t:时供试品的出峰时间较25t:有所提前，但丹酚酸B与其它各峰的分离不如25t:时好；(2)当柱温升高到45t:时，丹酚酸B对照品和供试品中丹酚酸B的峰形发生明显变化。因此我们确定检测柱温为25t:。具体实施例方式实施例1:将丹酚酸B对照品，首乌丹参滴丸供试品，不含丹参的首乌丹参滴丸阴性供试品分别通过高效液相色谱仪，按公式计算首乌丹参滴丸供试品中丹酚酸B的含量。所用仪器为Agilent1100高效液相色谱仪，配置四元泵，VWD检测器，自动进样器，在线真空脱气机，柱温箱；AS3210Aultrasoniccleaner。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，1%甲酸水溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为286nm;柱温为25°C;进样量为10ul;理论塔板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)0237720237721901030卯10312377402377所用药剂为丹酚酸B对照品；纯化水；甲醇；无水甲酸；首乌丹参滴丸，不含丹酚酸B的首乌丹参滴丸(阴性滴丸)。检测方法—、检测溶液制备对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每1ml含0.0307mg的溶液，即得。供试品溶液制备取本品0.6g(压口)，精密称定，置25ml容量瓶中，加入75%甲醇20ml，超声处理30分钟，迅速冷却至室温，加75%甲醇至刻度，摇匀，过0.45ym微孔滤膜，取续滤液即得。阴性供试品溶液制备取不含丹参的首乌丹参滴丸阴性供试品0.6g(压口)，精密称定，置25ml容量瓶中，加入75%甲醇20ml，超声处理30min，迅速冷却至室温，加75%甲醇至刻度，摇匀，过0.45iim微孔滤膜，取续滤液即得。二、操作分别吸取以上对照品溶液，供试品溶液和阴性供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，得到对照品溶液色谱图，供试品(供试品)溶液色谱图，阴性供试品溶液色谱图，三、计算按下述公式计算供试品中丹酚酸B含量。A样XC标XN稀释体积丹酚酸B含量(mg/g)=-A标XM样7其中A#:首乌丹参滴丸供试品溶液峰面积A标丹酚酸B对照品溶液峰面积Cfe:丹酚酸B对照品溶液浓度(单位为mg/ml)M#:首乌丹参滴丸供试品称样量(g)Nfts#w:首乌丹参滴丸供试品的稀释体积(N=25ml)。权利要求一种首乌丹参滴丸的质量控制方法，包括采用高效液相色谱法对首乌丹参滴丸中的丹酚酸B成分进行含量测定的步骤其特征在于，样品在检测前经过提取，在提取前经过压口处理。2.权利要求l的质量控制方法，其特征在于，样品在检测前压口后加甲醇经超声提取2535min。3.权利要求2的质量控制方法，其特征在于，样品在检测前压口后加甲醇经超声提取30min。4.权利要求3的质量控制方法，其特征在于，色谱过程中采用乙腈和1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。5.权利要求4的质量控制方法，其特征在于，检测柱温为25°C。6.权利要求5的质量控制方法，其特征在于，所述对首乌丹参滴丸中的丹酚酸B成分进行含量测定的步骤包括将丹酚酸B对照品，首乌丹参滴丸供试品，不含丹酚酸B的首乌丹参滴丸供试品分别通过高效液相色谱仪，按公式计算首乌丹参滴丸供试品中丹酚酸B的含7.权利要求6的质量控制方法，其特征在于，所述对首乌丹参滴丸中的丹酚酸B成分进行含量测定采用高效液相色谱仪，色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，1%甲酸水溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为286nm;柱温为25°C;进样量为lOul;理论塔板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000，<table>tableseeoriginaldocumentpage2</column></row><table>8.权利要求7的质量控制方法，其特征在于，所述对首乌丹参滴丸中的丹酚酸B成分进行含量测定的方法如下一、检测溶液制备对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每lml含0.0307mg的溶液，即得，供试品溶液制备取本品0.6g，精密称定，置25ml容量瓶中，加入75%甲醇20ml，超声处理30分钟，迅速冷却至室温，加75%甲醇至刻度，摇匀，过O.45iim微孔滤膜，取续滤液即得，阴性供试品溶液制备取不含丹参的首乌丹参滴丸阴性供试品0.6g，精密称定，置25ml容量瓶中，加入75%甲醇20ml，超声处理30min，迅速冷却至室温，加75%甲醇至刻度，摇匀，过0.45iim微孔滤膜，取续滤液即得，二、操作分别吸取以上对照品溶液，供试品溶液和阴性供试品溶液各lyl，注入液相色谱仪，得到对照品溶液色谱图，供试品溶液色谱图，阴性供试品溶液色谱图，三、计算计算供试品中丹酚酸B含量。9.权利要求8的质量控制方法，其特征在于，所述对首乌丹参滴丸中的丹酚酸B成分进行含量测定的公式如下A样XC标XN稀释体积丹酚酸B含量(mg/g)=-A,一Y"/TwJX怀…丄"忏射A#:首乌丹参滴丸供试品溶液峰面积Afe:丹酚酸B对照品溶液峰面积Cfe:丹酚酸B对照品溶液浓度(单位为mg/ml)M#:首乌丹参滴丸供试品称样量(g)Nftff#w:首乌丹参滴丸供试品的稀释体积(N=25ml)。10.权利要求9的质量控制方法，其特征在于，所述对首乌丹参滴丸中的丹酚酸B成分进行含量测定的方法如下一、检测溶液制备对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每1ml含0.0307mg的溶液，即得，供试品溶液制备取本品0.6g，精密称定，置25ml容量瓶中，加入75%甲醇20ml，超声处理30分钟，迅速冷却至室温，加75%甲醇至刻度，摇匀，过O.45iim微孔滤膜，取续滤液即得，阴性供试品溶液制备取不含丹参的首乌丹参滴丸阴性供试品0.6g，精密称定，置25ml容量瓶中，加入75%甲醇20ml，超声处理30min，迅速冷却至室温，加75%甲醇至刻度，摇匀，过0.45iim微孔滤膜，取续滤液即得，二、操作分别吸取以上对照品溶液，供试品溶液和阴性供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，得到对照品溶液色谱图，供试品溶液色谱图，阴性供试品溶液色谱图，三、计算按下述公式计算供试品中丹酚酸B含量，A样XG标XN稀释体积丹酚酸B含量(mg/g)=-A标XM样射A#:首乌丹参滴丸供试品溶液峰面积Afe:丹酚酸B对照品溶液峰面积Cfe:丹酚酸B对照品溶液浓度(单位为mg/ml)M#:首乌丹参滴丸供试品称样量(g)Nftff#w:首乌丹参滴丸供试品的稀释体积(N=25ml)。全文摘要本发明提供一种新的首乌丹参滴丸的质量控制方法，本发明方法包括对首乌丹参滴丸中的丹酚酸B成分进行含量测定的步骤。文档编号A61P9/10GK101744892SQ200810153630公开日2010年6月23日申请日期2008年11月28日优先权日2008年11月28日发明者周水平,李莉,王宏志,马洁申请人:天津天士力制药股份有限公司