专利名称：一种积雪草甙及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种积雪草甙及其制备方法，属于药用活性成分的提取技术领域。(二)
背景技术：
积雪草为双子叶植物伞形科植物积雪草的全草或带根全草，具有清热利湿，消肿解毒之 功效；用于治疗湿热黄疸，痢疾风疹、喉肿、肿毒和跌打损伤等。积雪草甙是积雪草提取物 中的有效成分之一。积雪草甙具有多种药理作用(1)美容有抗氧化作用，祛除老死角 脂层，促进皮肤的新陈代谢，增加皮肤的弹性及光滑，补充营养素。(2)保健调节内分 泌，改善肠道功能，延缓衰老，改善记忆，改善贫血，促进睡眠，改善肠胃功能。(3)减 肥降低胆固醇，清除多余脂肪与降低超重，调节大脑的神经递质，补充大脑神经中枢的营 养。(4)促进伤口愈合和治愈皮肤损伤能治疗皮肤溃疡，如顽固性创伤、皮肤结核、麻 风等。对小鼠、豚鼠、兔肌肉注射或皮下植入时可促进皮肤生长、局部白细胞增多、结缔组 织血管网增生、粘液分泌增加、毛和尾的生长加速等。(5)调节免疫功能积雪草甙可抑 制自身抗体的形成，降低免疫球蛋白，改善细胞免疫功能。(6)抗菌对金黄色葡萄菌、 溶血型链球菌、各种痢疾杆菌、伤寒杆菌均有抑制作用。(7)抗溃疡作用可抑制大鼠幽 门结扎溃疡和应激性溃疡。(8)对中枢神经的作用刺激中心神经系统，从而改善记忆和 抗疲劳。(9)镇静、安定作用可用于治疗失眠症。另据文献报道，积雪草甙对静脉功能 不全而致的长期不能愈合的下肢渍疡及外伤病例、手术或创伤引起的肌腱粘连、灼伤等因素 所致的创面恢复后的瘢痕疙瘩以及硬皮病均有一定疗效。积雪草甙还能轻度抑制乙酰胆碱的 作用，并用于乳腺增生的治疗。积雪草甙的保健、药用功效如此之多，但到目前为止，很少有关于从积雪草中提取高纯 度积雪草甙的相关报道。CN1491656A公开了从积雪草中提取积雪草提取物的工艺步骤，但该 提取物的主要成分为积雪草甙和羟基积雪草甙，二者在提取物中的含量为10 95%，没有将 积雪草甙和羟基积雪草甙分开。CN101210040A公开了一种积雪草甙化学对照品的分离制备方 法，可获得纯度大于98%的积雪草甙化学对照品，但该方法是以重量含量30 97%的积雪草 甙提取物为原料进行分离提纯的，必须先从积雪草中提取出一定含量的积雪草甙提取物。(三)
发明内容
本发明所要解决的技术问题是采用先进的工艺方法从积雪草中提取、分离、纯化积雪草甙，其工艺流程简单，生产成本低，所得提取物中积雪草甙的含量高。本发明的技术方案 一种积雪草甙，它是以积雪草为原料，用水或低碳醇提取，提取液经过柱层析分离纯化、树脂脱色、析晶、重结晶、干燥而制得的以积雪草甙为主要成分的提取物，其中积雪草甙的重量含量》95%。上述积雪草甙的制备方法为取积雪草，用水或低碳醇加热回流或超声提取1 3次，每次5 180min，合并提取液，浓縮，离心，上清液进大孔树脂柱进行纯化，先用水再用低碳 醇洗柱，收集醇洗脱液；洗脱液进脱色树脂柱，收集流出液，再用低碳醇进行洗脱，将洗脱 液和流出液合并，浓縮后放置12 72小时，析出晶体，用低碳醇加热溶解晶体，溶解液浓縮 后放置12 72小时，析出晶体，洗涤，干燥，即得积雪草甙。所用的积雪草原料可以是鲜积 雪草或干积雪草。上述制备方法中，可用加热渗漉提取代替加热回流或超声提取，渗漉速度O. 1 2BV/h， 渗漉时间4 24小时。更具体的制备方法为将积雪草粉碎(粉碎后有利于有效成分的充分溶出)，用2 20 倍(优选为3 12倍)重量的水或低碳醇加热渗漉、加热回流或超声提取，合并提取液，浓 縮至提取液体积的1/10 1/2，离心，上清液进大孔树脂柱进行纯化，先用纯化水洗柱1.5 4h，再用低碳醇洗柱至洗脱液澄清、透明，收集醇洗脱液(为树脂重量的1 4倍)；洗脱液 进脱色树脂柱，收集流出液，再用树脂重量2 6倍的低碳醇进行洗脱，将洗脱液和流出液合 并，浓縮至其体积的1/15 1/2，放置12 72小时，析出晶体，抽滤，洗涤，用5 15倍晶体 重量的低碳醇加热至35 9(TC溶解晶体，将溶解液浓縮至其体积的1/15 1/2，放置12 72 小时，析出晶体，抽滤，洗涤，干燥，粉碎，即得积雪草甙。加热渗漉提取时，温度为40 6(TC;加热回流提取时，温度为30 10(TC，提取时间为 每次1 3小时；超声提取时，工作频率15 80KHz，提取时间为每次5 100min。以上所述的低碳醇为甲醇、乙醇、丁醇或戊醇，其体积浓度为30% 100%。当采用回流 提取时，提取次数和醇浓度是影响收率和含量的关键因素，提取次数优选为2次，醇浓度优 选为30% 95%。所述的浓縮均为真空浓縮，浓縮温度40 6(TC，真空度O. 06 0. lMPa。 提取液离心时采用三足离心，转速为1700r/min。 大孔树脂柱纯化时，液体流速为O. 5 2BV/h。所述的大孔树脂柱是以苯乙烯为骨架的D101型、HPD-100型、D130型或AB-8型大孔吸附 树脂。申请人经过筛选实验发现，这几种大孔吸附树脂对积雪草甙的纯化效果更好，而且其价格便宜，可以多次重复使用，成本较低。所述的脱色树脂柱为大孔型脱色树脂柱、中性氧化铝树脂柱或者活性炭柱。 与现有技术相比，本发明利用现代生物提取技术，采用水提或醇提、柱层析分离纯化、 脱色、析晶、重结晶的工艺路线从积雪草中提取积雪草甙，通过树脂柱层析和重结晶来提高 积雪草甙的纯度，使得提取物中积雪草甙的重量含量达95%以上(HPLC法测定)；而且其工 艺流程简单，生产周期短，有机溶剂用量省，生产成本低，适于大批量生产。 具体实施例方式
本发明的实施例l:积雪草甙的制备方法，其步骤如下1) 提取将鲜积雪草粉碎后投入洁净的提取罐中，加入8倍重量的60% (v/v)乙醇，控 制温度在85'C，第一次回流提取2h (从溶液沸腾开始计时)，然后压出药液，第二次再加入 6倍重量的60% (v/v)乙醇，回流提取2h，合并提取液。2) 浓縮、离心将提取液导入洁净的浓縮器中进行真空浓縮，温度控制在5(TC，真空 度为0.08MPa，浓縮至提取液体积的l/6;浓縮后的提取液通过三足离心机离心，转速为 1700r/min;3) 柱层析纯化离心上清液直接进型号为AB-8的大孔吸附树脂柱进行纯化，液体流速 为1.5BV/h;先用纯化水洗柱至流出液清澈，水洗约2. 5小时，再用60% (v/v)乙醇洗柱至洗 脱液澄清、透明，收集带醇味的洗脱液，收集醇洗脱液为树脂重量的3倍。4) 脱色将收集的洗脱液直接进大孔型脱色树脂柱，收集流出液，再用相当于树脂重 量4倍的60% (v/v)乙醇进行洗脱；将洗脱液和流出液合并，进行真空浓縮，温度控制在50 °C，真空度为0.08MPa，浓縮至原液(浓縮前液体)体积的1/8。5) 析晶浓縮液放置18小时，析出大量的晶体，抽滤，用60% (v/v)乙醇洗晶体。6) 重结晶用10倍晶体重量的30% (v/v)乙醇加热至8(TC溶解晶体，将溶解液真空浓 縮，温度控制在5(TC，真空度为0.08MPa，浓縮至溶解液体积的1/5，浓縮液放置15小时，析 出大量的晶体，抽滤，用30% (v/v)乙醇洗净晶体。7) 干燥将晶体真空干燥，粉碎，得积雪草甙。 本发明的实施例2:按以下步骤制备积雪草甙1) 提取将干积雪草粉碎后投入洁净的提取罐中，加入12倍重量的水，控制温度在 IO(TC，第一次回流提取3h (从溶液沸腾开始计时)，然后压出药液，第二次加入5倍重量的 水，回流提取2h，第三次再加入2倍重量的水，回流提取lh，合并提取液。2) 浓縮、离心将提取液导入洁净的浓縮器中进行真空浓縮，温度控制在6(TC，真空度为O. lMPa，浓縮至提取液体积的l/2;浓縮后的提取液通过三足离心机离心，转速为 1700r/min;3) 柱层析纯化离心上清液直接进型号为HPD-IOO的大孔吸附树脂柱进行纯化，液体流 速为1.0BV/h;先用纯化水洗柱至流出液清澈，水洗约3小时，再用85% (v/v)乙醇洗柱至洗 脱液澄清、透明，收集带醇味的洗脱液，收集醇洗脱液为树脂重量的2倍。4) 脱色将收集的洗脱液直接进中性氧化铝树脂柱，收集流出液，再用相当于树脂重 量6倍的75% (v/v)乙醇进行洗脱；将洗脱液和流出液合并，进行真空浓縮，温度控制在60 °C，真空度为O. lMPa，浓縮至原液(浓縮前液体)体积的1/12。5) 析晶浓縮液放置40小时，析出大量的晶体，抽滤，用45% (v/v)乙醇洗晶体。6) 重结晶用12倍晶体重量的65% (v/v)乙醇加热至9(TC溶解晶体，将溶解液真空浓 縮，温度控制在6(TC，真空度为O. lMPa，浓縮至溶解液体积的1/10，浓縮液放置30小时，析 出大量的晶体，抽滤，用45% (v/v)乙醇洗净晶体。7) 干燥将晶体真空干燥，粉碎，得积雪草甙。 本发明的实施例3:按以下步骤制备积雪草甙1) 提取将鲜积雪草粉碎后加入2 3倍重量的80% (v/v)甲醇浸润6小时，使积雪草原 料充分膨胀，分次均匀地装入渗漉器中，压紧，放置8 48小时后再加入17 18倍重量的 80% (v/v)甲醇，加热至5(TC开始渗漉，渗漉速度为lBV/h，时间15小时，收集渗漉液。2) 浓縮、离心将渗漉液导入浓縮器中进行真空浓縮，温度控制在4(TC，真空度为 0.06MPa，浓縮至提取液体积的1/10;浓縮后的提取液通过离心机离心，转速为1700r/min;3) 柱层析纯化离心上清液直接进型号为D101的大孔吸附树脂柱进行纯化，液体流速 为O. 5BV/h;先用纯化水洗柱至流出液清澈，水洗约1.5小时，再用70% (v/v)甲醇洗柱至洗 脱液澄清、透明，收集带醇味的洗脱液，收集醇洗脱液为树脂重量的l倍。4) 脱色将收集的洗脱液直接进活性炭柱，收集流出液，再用相当于树脂重量2倍的 70% (v/v)甲醇进行洗脱；将洗脱液和流出液合并，进行真空浓縮，温度控制在4(TC，真空 度为0.06MPa，浓縮至原液(浓縮前液体)体积的1/2。5) 析晶浓縮液放置15小时，析出大量的晶体，抽滤，用30% (v/v)甲醇洗晶体。6) 重结晶用5倍晶体重量的60% (v/v)甲醇加热至5(TC溶解晶体，将溶解液真空浓縮 ，温度控制在4(TC，真空度为0.06MPa，浓縮至溶解液体积的1/2，浓縮液放置12小时，析出 大量的晶体，抽滤，用30% (v/v)甲醇洗净晶体。7) 干燥将晶体干燥，粉碎，得积雪草甙。本发明的实施例4:按以下步骤制备积雪草甙1) 提取将干积雪草粉碎后投入提取罐中，加入7倍重量的95% (v/v)乙醇，超声提取 80min，收取药液，再加入3倍重量的95% (v/v)乙醇，超声提取50min，合并提取液；超声 工作频率为15 80KHz。2) 浓縮、离心将提取液导入浓縮器中进行真空浓縮，温度控制在55'C，真空度为 0.07MPa，浓縮至提取液体积的l/8;浓縮后的提取液通过离心机离心，转速为1700r/min;3) 柱层析纯化离心上清液直接进型号为D130的大孔吸附树脂柱进行纯化，液体流速 为2BV/h;先用水洗柱至流出液清澈，水洗约4小时，再用50% (v/v)乙醇洗柱至洗脱液澄清 、透明，收集带醇味的洗脱液，收集醇洗脱液为树脂重量的4倍。4) 脱色将收集的洗脱液直接进大孔型脱色树脂柱，收集流出液，再用相当于树脂重 量5倍的50% (v/v)乙醇进行洗脱；将洗脱液和流出液合并，进行真空浓縮，温度控制在45 °C，真空度为0.09MPa，浓縮至原液(浓縮前液体)体积的1/15。5) 析晶浓縮液放置72小时，析出大量的晶体，抽滤，用60% (v/v)乙醇洗晶体。6) 重结晶用15倍晶体重量的50% (v/v)乙醇加热至35。C溶解晶体，将溶解液真空浓 縮，温度控制在5(TC，真空度为0.07MPa，浓縮至溶解液体积的1/15，浓縮液放置70小时， 析出大量的晶体，抽滤，用40% (v/v)乙醇洗净晶体。7) 干燥将晶体干燥，粉碎，得积雪草甙。
权利要求
1.一种积雪草甙，其特征在于它是以积雪草为原料，用水或低碳醇提取，提取液经过柱层析分离纯化、树脂脱色、析晶、重结晶、干燥而制得的以积雪草甙为主要成分的提取物，其中积雪草甙的重量含量≥95％。
2.权利要求l所述积雪草甙的制备方法，其特征在于取积雪草，用水或低碳醇加热回流或超声提取1 3次，每次5 180min，合并提取液，浓縮，离心，上清 液进大孔树脂柱进行纯化，先用水再用低碳醇洗柱，收集醇洗脱液；洗脱液进脱色树脂柱， 收集流出液，再用低碳醇进行洗脱，将洗脱液和流出液合并，浓縮后放置12 72小时，析出 晶体，用低碳醇加热溶解晶体，溶解液浓縮后放置12 72小时，析出晶体，洗涤，干燥，即得积雪草甙。
3.根据权利要求2所述积雪草甙的制备方法，其特征在于用加热渗 漉提取代替加热回流或超声提取，渗漉速度O. 1 2BV/h，渗漉时间4 24小时。
4.根据权利要求2或3所述积雪草甙的制备方法，其特征在于将积 雪草粉碎，用2 20倍重量的水或低碳醇加热渗漉、加热回流或超声提取，合并提取液，浓 縮至提取液体积的1/10 1/2，离心，上清液进大孔树脂柱进行纯化，先用纯化水洗柱1.5 4h，再用低碳醇洗柱至洗脱液澄清、透明，收集醇洗脱液；洗脱液进脱色树脂柱，收集流出 液，再用树脂重量2 6倍的低碳醇进行洗脱，将洗脱液和流出液合并，浓縮至其体积的1/15 1/2，放置12 72小时，析出晶体，抽滤，洗涤，用5 15倍晶体重量的低碳醇加热溶解晶 体，将溶解液浓縮至其体积的1/15 1/2，放置12 72小时，析出晶体，抽滤，洗涤，干燥 ，粉碎，即得积雪草甙。
5.根据权利要求4所述积雪草甙的制备方法，其特征在于所述的低 碳醇为甲醇、乙醇、丁醇或戊醇，其体积浓度为30% 100%。
6.根据权利要求4所述积雪草甙的制备方法，其特征在于所述的浓 縮均为真空浓縮，浓縮温度40 60。C，真空度O. 06 0. lMPa。
7.根据权利要求4所述积雪草甙的制备方法，其特征在于提取液离心时采用三足离心，转速为1700r/min。权利要求8根据权利要求4所述积雪草甙的制备方法，其特征在于大孔树脂 柱纯化时，液体流速为O. 5 2BV/h。权利要求9根据权利要求4所述积雪草甙的制备方法，其特征在于所述的大 孔树脂柱是以苯乙烯为骨架的D101型、HPD-100型、D130型或AB-8型大孔吸附树脂。权利要求IO根据权利要求4所述积雪草甙的制备方法，其特征在于所述的 脱色树脂柱为大孔型脱色树脂柱、中性氧化铝树脂柱或者活性炭柱。
全文摘要
本发明公开了一种积雪草甙及其制备方法，它是以积雪草为原料，用水或低碳醇提取，提取液经过柱层析分离纯化、树脂脱色、析晶、重结晶、干燥而制得的以积雪草甙为主要成分的提取物，其中积雪草甙的重量含量≥95％。本发明利用现代生物提取技术，采用水提或醇提、柱层析分离纯化、脱色、析晶、重结晶的工艺路线从积雪草中提取积雪草甙，通过树脂柱层析和重结晶来提高积雪草甙的纯度，使得提取物中积雪草甙的重量含量达95％以上(HPLC法测定)；而且其工艺流程简单，生产周期短，有机溶剂用量省，生产成本低，适于大批量生产。
文档编号A61K36/23GK101323637SQ20081030315
公开日2008年12月17日 申请日期2008年7月29日 优先权日2008年7月29日
发明者卢昶年, 卢照凯 申请人:卢照凯;卢昶年