专利名称：含有木鳖子提取物的伤口愈合剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有伤口愈合功效的木鳖子(Momordicae semen)提取物。本发明还涉及含有木鳖子提取物活性成分的伤口愈合局部透皮剂，通过诱导皮肤受伤的动物模型证 实其能够缩短伤口闭合和治疗所需的时间。
背景技术：
木鳖子是木鳖子(Momordicae)的成熟种子，木鳖子是广泛分布于中国南部的多 年生藤本植物。从9月至11月收集其果实，然后如下处理将每个果实切成两片并半干；立 即取出种子或将含有种子的果实放入罐中，直至果皮和果肉腐烂，将种子分离。用这种方法处理的木鳖子对于风湿性疼痛和肌肉痉挛等具有强效抗炎活性和治 疗功效。直至最近，木鳖子提取物的已知成分是固醇、齐墩果醇酸、木鳖子酸、木鳖子皂苷I、 II。现在，广泛使用的用于治疗一般皮肤伤口的外用制剂是杆菌肽、庆大霉素、卡那霉 素、四环素、土霉素、甲氯环素、多粘菌素、硝基糠腙、磺胺嘧啶、夫西地酸等。事实上，对用 于有效治疗难处理伤口如糖尿病性足部溃烂的新的、较好的伤口愈合药剂存在着很大的需 求。此外，研发了 一种新的伤口愈合剂，如将上述外用制剂与湿敷料如水凝胶或聚氨酯泡沫 体混合的功能性敷料将形成高附加值的产品。发明详述技术问题本发明的发明人努力研发了用于治疗或缓和伤口的药物，使用与化学物质相比由 局部施用引起的副作用或毒性少的植物化学药品。将选定的粗制草药提取物施用于用于测 试的皮肤受伤的小鼠模型，并且结果显示木鳖子提取物或其含有木鳖子皂苷I的级分显著 缩短了受伤皮肤闭合或治疗所需的时间。因此，本发明的目的在于提供一种伤口愈合药剂，其包含木鳖子提取物或含有木 鳖子皂苷I的木鳖子级分。技术解决方法本发明涉及一种伤口愈合药剂，其特征在于含有木鳖子提取物作为活性成分。上述木鳖子提取物含有木鳖子级分，该级分含有由以下的通式1表示的作为活性 成分的木鳖子皂苷I。通式1 附图描述
图1表示皮肤受伤小鼠模型中显示的伤口愈合效果。最佳实施方式以下将进一步举例说明本发明。本发明涉及用于局部透皮应用的药物制剂，包含木鳖子提取物或含有木鳖子皂苷 I的木鳖子级分作为活性成分，通过皮肤受伤的动物模型证实其显著缩短了伤口闭合和治 疗所需的时间。根据本发明的木鳖子提取物通过用为木鳖子干重2-10倍的水或含水醇溶液提取 来获得，其也可以通过传统的用于粗制药品的提取方法获得。上述方法中所用的醇优选 c「c6，更优选甲醇、乙醇等。根据本发明的包含木鳖子皂苷I的木鳖子级分可以从木鳖子提取物获得，所述木 鳖子提取物通过用极性溶剂以传统的方法处理木鳖子获得。通过使用非离子吸附树脂或反 相硅胶树脂以传统的柱色谱层析法处理木鳖子提取物可以有效地生产木鳖子级分，也可以 使用有机溶剂通过皂苷沉淀法来生产木鳖子级分，所述有机溶剂优选丙酮、乙酸乙酯等。在进行柱色谱层析法中，可以与有机溶剂，诸如含水醇溶液、乙醇、丙酮等一起使 用Amberlite XAD-16或十八烷基甲硅烷基(0DS)-硅胶树脂，从而可以从木鳖子提取物中 选择性地制备包含高浓缩皂苷的级分。将木鳖子提取物溶解于3-5倍(w/w)的蒸馏水中，并加入超过水5-10倍(w/w)的 丙酮，然后选择性地沉淀皂苷，由此最终产生含有提高含量的木鳖子皂苷的级分。可以通过使用常规的方法制得根据本发明的木鳖子提取物或含有木鳖子皂苷I 的木鳖子级分，通过将作为活性成分的木鳖子提取物或含有木鳖子皂苷I的木鳖子级分与 药物学上可接受的载体、成形剂、稀释剂等以20000-20 1的重量比，并且相对于整个药物 组合物的含量为0. 01-30wt%重量比混合。以这种方式，可以制得膏剂、敷剂、贴剂等形式的伤口愈合局部透皮剂。此外，根据本发明的木鳖子提取物或级分的剂量根据内部再吸收速率、体重、年 龄、性别、健康状况、饮食、给药时间、使用方法、排泄速率、疾病严重程度、医学专家(或主 管人)的决定、患者需求等而不同。此外，以这种方式由此制造的单位剂量制剂可以根据医学专家指导和监控的决定 以及患者的需求，通过专门的方法来使用，或以规律的时间间隔来给药。本发明可以使用下文中所述的实施例来得到进一步的描述，但本发明并不限于这些。
实施例制备实施例1 木鳖子提取物的制备将获自中国草药市场的木鳖子种子研磨成合适的大小，将含水乙醇溶液(2L， 10% )加入磨细的木鳖子种子中(1kg，干重)，然后在80°C的水浴中提取两次，6小时。将 提取物过滤，在60°C下使用旋转蒸发器减压浓缩，在真空炉中将溶剂完全除去，将所得物干 燥并磨成粉，然后获得木鳖子提取物(40-50g)。制备实施例2 使用非离子吸附树脂制备木鳖子皂苷I级分1使用非离子吸附树脂Amberlite XAD-16对制备实施例1中获得的提取物进行柱 色谱层析。将溶解于甲醇中(10%)的提取物(30g)倒入吸附树脂柱中(11)。将蒸馏水和含 水甲醇溶液(30%，ν/ν)各自以树脂体积3倍的量流过柱子，接着将含水甲醇溶液(70% ) 和100%的甲醇各自以树脂体积3倍的量流过柱子，以获得洗出液级分。将所得到的级分干 燥，磨成粉，并最终获得木鳖子皂苷I级分1 (IOg)。制备实施例3 使用用于沉淀的有机溶剂制备木鳖子皂苷I级分2通过使用有机溶剂如丙酮沉淀制备实施例1中所获得的提取物来获得含有高 浓度木鳖子皂苷I的级分。将制备实施例1中获得的提取物(IOOg)溶解于蒸馏水中 (300-500ml)，加入丙酮(1800-3000ml)，并混合在一起，然后产生了含有皂苷的沉淀物。通 过使用滤纸将沉淀物分离出来，干燥，然后获得了木鳖子皂苷I级分2(60g)。制备实施例4 使用反相硅胶树脂色谱层析制备木鳖子皂苷I级分3使用十八烷基甲硅烷基(ODS)-硅胶树脂(YMOGEL 0DS_A12nm，S_150m)对制备实 施例3中获得的提取物进行柱色谱层析。相对于IOg样品，使用了 250g树脂。将 树脂2-3 倍量的30% (ν/ν)含水甲醇溶液流过后，将树脂2-3倍量的60% (ν/ν)含水甲醇溶液流过， 以获得洗出液级分。将所得到的级分减压浓缩，在真空炉中将溶剂完全干燥，然后获得了木鳖子皂苷I 级分 3 (3. 5g)。制备实施例5 纯木鳖子皂苷I的分离从制备实施例4中获得的级分纯化木鳖子皂苷I。使用乙腈和水的混合溶剂 (29 71，0.1%三氟醋酸)以9. 5ml/min的洗脱速度进行高性能液相色谱层析(HLPC)，并 且只收集约45min时的峰。将所得到的级分减压浓缩并在真空炉中完全干燥。所用的柱是 YMC J’ Sphere0DS-H80，并且在 210nm 处检测波长。为了检测所获得材料的结构，将其质谱和NMR谱数据与文献中的相比较[Iwamoto， Okabe， Yamauchi, Tanaka， Rokutani, Hara, Mihashi, Higuchi.Studies on the constituents of Momordicacochinchinensis Spreng.I.Isolation and characterization of the seedsaponins， Momordica saponin I and II.(对 木 鳖子组分的研究。I.种子皂苷、木鳖子皂苷I和II的分离和表征Khemical & pharmaceuticalbulletin 1985,33(2) :464_478]，并发现数据与木鳖子皂苷I的相同，已 经报道了木鳖子皂苷I存在于木鳖子中(木鳖子皂苷I ;3-0-β-D-吡喃半乳糖基(1-> 2)-[a-L_吡喃鼠李糖基(1- > 3)]-i3_D-葡糖醛酸吡喃糖苷-28-0-i3_D-吡喃木糖基 (1- > 3) - β -D-吡喃葡糖基(1- > 3) - [ β -D-吡喃木糖基(1- > 4) ] - a -L-吡喃鼠李糖基 (1- > 2) - β -D-吡喃岩藻糖基丝石竹皂甙)。[通式1] 分子量1673.77熔点241_244°C比旋光[a]19D=-14.8° (CO. 7, MeOH H2O = 1 2)制备实施例1至4中获得的木鳖子提取物和木鳖子皂苷I级分的含量显示于表1 中。[表 1] 实施例1 木鳖子提取物的伤口愈合效果1.测试材料和给药将制备实施例1获得的木鳖子提取物、制备实施例4中获得的木鳖子皂苷I级分3 和制备实施例5中获得的木鳖子皂苷I分别以50、10和5 μ g/20 μ 1的浓度溶解于CMC中 (羧甲基纤维素，0.5%)。将由此制得的测试材料(20μ1)局部施用于受伤的小鼠皮肤上，
每天一次，连续10天。作为阳性对照药物，如上制备了 CGS-21680(Tocris，USA)，并以10 μ g/20 μ 1的剂 量局部施用，每天一次，连续10天。2.测试方法将二十五只具有24g士2g体重的⑶-1血统的小鼠分成5组。将小鼠放入分开的 笼子中。用环已烯巴比妥(90mg/kg，IP)麻醉后，将小鼠肩部和背部的毛剃除。使用锋利的 打孔机(ID12mm)将一部分皮肤切除，该部分皮肤包括皮肤下的肌肉层和与其连接的组织。 在皮肤上形成伤口后，将木鳖子提取物、木鳖子皂苷I级分3、木鳖子皂苷I和CGS-21680的 测试材料各自以50、10、5和10 μ g/20 μ 1的浓度分别局部施用于小鼠，每天一次，连续10 天。在第1、3、5、7、9和 11 天使用 Image-ProPlus (Media Cybernetics，版本4· 5. 0. 29) 测量透明塑料薄膜上检测的受伤皮肤面积。然后，使用graph-prism (Graph Software USA) 计算伤口闭合率(％)和伤口闭合所需的时间(CT5tl)(表2和图1)。在一尾方差分析(一 尾AN0VA)后进行Durmett ’ s测试，以比较各个测量点的处理组和载体组。差异在P < 0. 05 是统计学显著的。如表2和图1所示，发现根据本发明的木鳖子提取物、含有木鳖子皂苷I的木鳖子 级分和木鳖子皂苷I具有较好的伤口愈合效果。[表 2] (*相对于载体组P < 0. 05)实施例2 大鼠的口服急性毒性测试如下对6周大的SPF (无特异性病原体)SD大鼠进行2_周重复剂量毒性测试。将制备实施例1中获得的木鳖子提取物和制备实施例4中获得的木鳖子皂苷I级 分3分别溶解于0.5% CMC中。将制剂口服给药于大鼠(5只大鼠/组)，每日剂量分别为 2，000mg/kg 和 500mg/kg，持续 2 周。在第15天，观察大鼠的存活、临床症状和体重变化。然后，对大鼠进行血液学测试 和血液生化测试。然后将大鼠尸检，并用肉眼观察来发现它们腹腔和胸腔器官的任何异常。 结果表明没有发现明显的临床症状，并且所有大鼠都存活了。此外，关于它们的体重、血液 学和血液生化测试和尸检，没有发现毒性。因此，认为根据本发明的木鳖子提取物和木鳖子 皂苷I级分3对于口服是安全的，口服的最小致死剂量(LD5tl)分别为2，000mg/kg和500mg/
kg ο制剂实施例1 透皮组合物的制备如下所述使用本发明的木鳖子提取物或含有木鳖子皂苷I的木鳖子级分制备透 皮组合物。[组合物1]活性成分(0. 04g)、聚丙烯酸钠(1. 3g)、甘油(3. 6g)、氢氧化铝(0. 04g)、对羟基苯 甲酸甲酯(0. 2g)，水(14g)[组合物2]活性成分(0.08g)、丙二醇(1.6g)、液体石蜡(0. Sg)、肉豆蔻酸异丙酯(0. 4g)、 Gelva 1430(16. 4g)。制剂实施例2 膏剂的制备如下从本发明的木鳖子提取物或含有木鳖子皂苷I的木鳖子级分制备膏剂组合 物。[组合物]活性成分(Ig)、鲸蜡醇棕榈酸酯(20g)、鲸蜡醇(40g)、硬脂醇(40g)、肉豆蔻酸异 丙酯(80g)、山梨酸酐硬脂酸酯(20g)、聚山梨酸酯(60g)、丙基P-氧苯甲酸酯(Ig)、甲基 P-氧苯甲酸酯(Ig)、适量磷酸和蒸馏水。[工业实用性]本发明公开了没有由局部施用引起的副作用或毒性但在治疗伤口中具有较好效 果的木鳖子提取物、天然提取物，因此预期可以用作伤口愈合药剂。
权利要求
一种伤口愈合药剂，其含有木鳖子提取物或含有木鳖子皂苷I的木鳖子级分作为活性成分。
2.根据权利要求1的伤口愈合药剂，其中通过用水或低级含水醇溶液提取木鳖子来获 得所述木鳖子提取物。
3.根据权利要求1的伤口愈合药剂，其中通过使用有机溶剂的皂苷沉淀法或通过使用 非离子吸附树脂或反相硅胶树脂的柱色谱层析，使所述木鳖子级分含有提高含量的木鳖子 皂苷I。
4.根据权利要求3的伤口愈合药剂， [通式1] 其中所述木鳖子级分含有16-80wt%由通式1所示的木鳖子皂苷I。
5.根据权利要求1的伤口愈合药剂，其中所述药剂是局部透皮组合物。
6.根据权利要求6的伤口愈合药剂，其中将所述局部透皮组合物配制成膏剂、敷剂或 贴剂。
全文摘要
本发明涉及具有伤口愈合功效的木鳖子提取物。特别地，本发明涉及含有木鳖子提取物活性成分的伤口愈合透皮剂，通过诱导皮肤受伤的动物模型证实其能够缩短伤口闭合和治疗所需的时间。
文档编号A61K36/42GK101861158SQ200880116400
公开日2010年10月13日 申请日期2008年10月21日 优先权日2007年10月22日
发明者尹世晙, 张基旭, 表成洙, 金周玄, 金峰撤 申请人:Sk化学株式会社