专利名称：纳米级对比剂和使用方法
纳米级对比剂和使用方法相关申请的交叉引用根据35U. S.C. § 120，本申请要求于2007年12月5日提交的美国临时专利申 请No. 60/922，481的优先权。此外，本申请是2006年11月10日提交的美国专利申请 No. 11/595，808和2007年12月27日提交的美国专利申请No. 11/568,936的部分继续，这 两个是2004年4月21日提交的美国专利申请No. 10/830, 190的部分继续。上面提到的案 列全文在此结合作为参考。关于政府资助的研究或开发的声明在美国政府的均由美国国家科学基金会授予的NSF资金No. 0401627和NSF ERC 资金No. EEC9731643支持下完成了本发明。美国政府在本发明中具有一定权利。
背景技术：
在受损脉管系统和微脉管系统中，血管可能显示通过血管壁增加的泄漏。其中脉 管系统可能受损的疾病可包括癌症、中风、动脉瘤和内出血。对用于识别泄漏脉管的组合物 和方法的开发将有益于这种状况的早期检测和预测。目前，缺乏清楚地且非侵入地识别和 刻画泄漏和受损脉管系统的特征的适当的临床工具。存在对可用于病人特定的、定制的肿瘤描绘和治疗的组合物和方法的相关需要。 存在用于许多疾病，特别是肿瘤的诊断和治疗的纳米系统。纳米系统提供多功能的可能性， 并且正被积极开发用于活体成像、生物标记的生物分子仿形(profiling)和靶向给药。这 种系统通过增加在肿瘤点的药物聚集、减少健康组织的曝光或两者，提供增强抗癌试剂的 治疗指数的可能性。大多数固态肿瘤需要复杂的微脉管系统网络用于它们的生长。该微血管网络包括 密集的发育不完全的血管系统，具有高扭曲度和通过脉管壁的增加的泄漏。对于固态肿瘤 的化学治疗纳米试剂治疗的成功至少部分依赖于这些试剂必须经由所谓的肿瘤的泄漏脉 管系统进入肿瘤。目前，上述纳米系统的开发和有效性是有限的，因为缺乏适当的临床工 具，其用于清楚地和非侵入地预测肿瘤的血管是否经得起以个体的、病人特定的方式的纳 米载体介导的治疗，即，确定肿瘤是否具有泄漏脉管系统。此外，缺乏适当的临床工具，其用于将治疗剂或抗癌试剂与非放射性对比增强剂 共同封装，以允许对治疗剂或抗癌试剂在对象身体内的生物分布进行直接X射线可视化。
发明内容
在一个实施方式中，提供了一种用于评估对象的脉管系统完整性的方法，该方法 包括将组合物引入对象的脉管系统，该组合物包括脂质体，该脂质体封装一个或多个非 放射性对比增强剂，并且该脂质体包括胆固醇，至少一种磷脂，他至少一种聚合物链衍生 的磷脂，其中脂质体的平均直径小于150nm ；生成对象的脉管系统的图像；以及分析该图像 以检测对象的脉管系统中的泄漏。在另一个实施方式中，提供了一种用于区分恶性损害和良性损害的方法，该方法包括将组合物引入感兴趣的损害中，该组合物包括脂质体，多个脂质体包括至少一种 第一类脂或磷脂；至少一种由一种或多种聚合物衍生的第二类脂或磷脂；以及至少一种能 够稳定脂质体的位阻大体积赋形剂(stericallybulky excipient)，其中脂质体的平均直 径小于150nm，并且其中多个脂质体封装至少一种非放射性对比增强剂；生成感兴趣的损 害的图像；以及分析该图像以确定组合物在感兴趣的损害中的聚集程度。在另一个实施方式中，提供了一种用于评估肿瘤对纳米尺寸的治疗剂的可达性的 方法，该方法包括将组合物引入肿瘤中，该组合物包括脂质体，各脂质体包括至少一种 第一类脂或磷脂；至少一种由一种或多种聚合物衍生的第二类脂或磷脂；以及至少一种能 够稳定脂质体的位阻大体积赋形剂，其中脂质体的平均直径小于150nm，并且其中各脂质体 封装至少一种非放射性对比增强剂；生成肿瘤的图像；以及分析该图像以确定组合物在肿 瘤中的聚集程度。在另一个实施方式中，提供了一种组合物，该组合物包括具有平均直径小于 150nm的脂质体，该脂质体包括第一类脂或磷脂；由一种聚合物衍生的第二类脂或磷脂； 以及能够稳定脂质体的位阻大体积赋形剂；其中脂质体将非放射性对比增强剂和至少一种 生物活性剂共同封装。
附示了各种示意性组合物、方法、结果等等，并仅仅用于图示各种示意性实施 方式，所述附图并入说明书中并构成说明书的一部分。图1示出费希尔344大鼠中的13762MAT BIII乳腺癌肿瘤生长曲线。图2示出在施用导致肿瘤点和正常组织的脉管系统可视化的“高”剂量 (1，244mgl/kg)的示意性纳米探针之前(a)和1分钟之后(b)，使用临床数字乳腺X光成像 系统获得的在其右肋有胸部肿瘤的大鼠的全身图像。采用“低”剂量(455mgl/kg)的示意 性纳米探针注射的不同大鼠的72小时后对比图像(c)显示肿瘤和脾中的纳米探针的聚集， 同时脉管系统不可见。图3示出在施用“低”剂量(455mgl/kg)的示意性纳米探针之前和24、72和120小 时之后，使用临床数字乳腺X光成像系统获得的大鼠(图4所标的大鼠3)的全身图像。图4示出通过临床乳腺X光成像系统成像的在5天中7只大鼠的胸部肿瘤吸收示 意性纳米探针(a)与在相同期限中相同7只大鼠的正常组织吸收示意性纳米探针(b)的比较。图5示出对示意性纳米探针具有高吸收性的胸部肿瘤(大鼠3)和对示意性纳米 探针具有中等吸收性的胸部肿瘤(大鼠4)在5天的时间内的乳腺X光成像图像的示例。图6示出使用临床数字乳腺X光成像系统获得的大鼠的全身图像，该大鼠注射有 容量与示意性纳米探针的容量相同的盐水。时间点与纳米探针的大鼠的前和后对比图像一致。图7示出使用临床数字乳腺X光成像系统获得的、在施用“高”剂量的(1，344mgl/ kg)的常规对比剂(碘海醇)之前和10、32、63、125、182、315、430和578秒之后的大鼠的全
身图像。图8示出将“高”剂量的(1，344mgl/kg)的常规对比剂(碘海醇)施用到大鼠上的示意性结果，其显示出由于快速肾清除率而可忽略的肿瘤增强。图9示出由临床乳腺X光成像系统成像的、在3天的时段内15只大鼠的胸部肿瘤 吸收示意性纳米探针的比较。图10示出对照(未治疗)组和利用脂质体阿霉素治疗的组的肿瘤生长曲线。图11示出对照(未治疗)组和利用脂质体阿霉素治疗的组的肿瘤生长曲线。
具体实施例方式提供了纳米刻度对比剂(或“纳米探针”)的设计、制造、描述和应用。通常的纳米探针包括脂质体组合物，其包括类脂或磷脂、如胆固醇的稳定赋形 剂和聚合物衍生的类脂或磷脂。例如，在美国专利申请No. 10/830，190、11/595，808和 11/568，936中提到了类脂或磷脂、稳定赋形剂和聚合物衍生的类脂或磷脂的适当示例。脂质体组合物通常地封装对比增强剂。适当的对比增强剂例如包括非放射性的碘 化化合物，例如为在美国专利申请No. 10/830，190、11/595，808和11/568,936中所述的碘 海醇和碘克沙醇。纳米探针可以携带大量的碘化对比剂。例如，纳米探针可以携带高达每 mL脂质体组合物130-200mg的碘化化合物。碘化化合物的通常的浓度可以是大约155mg/
mLo根据需要或期望，可以包括本领域已知的其它适合的对比增强剂以通过其它 成像技术实现成像，如例如超声波成像、电子束(EBT)、磁共振成像(MRI)、磁共振脉管 成像(MRA)、定位发射X射线成像和光学成像，包括荧光和生物发光。例如，在某些实施 方式中，适当的对比剂可以包括荧光染料(如例如荧光素同族硫氰酸盐(fluorescein iso-thiocynate))和MRI对比剂，包括镧系元素氨基羧化物配合物(如钆(III)DTPA及其 变体)。纳米探针的平均直径通常地大约或近似为lOOnm，但是平均直径可位于从大约15 到大约150nm的范围内。因此，适当的脂质体平均直径可以小于大约150nm，小于大约120nm 和小于大约lOOnm。纳米探针通常地具有长的血液循环时间(例如，在大鼠为t1/2 ^ 18h)。例如可以通过美国专利申请No. 10/830, 190、11/595，808和11/568，936中以及下 面的实施例1中公开的方法准备纳米探针。一般来说，纳米探针可以使用以下X射线诊断技术的至少一个来检测计算机断 层成像(CT)、微CT、乳腺X射线成像和胸部X射线。在其它实施方式中，纳米探针可以使用 MRI、磁共振波谱学、生物发光成像、超声、光学成像和光谱学的至少一个来成像。在一个实施方式中，提供了一种用于评估对象的脉管系统完整性的方法。在下面 的实施例2中例示的方法包括将组合物(纳米探针)引入对象的脉管系统，该组合物包 括脂质体，各脂质体封装一个或多个非放射性对比增强剂，并且各脂质体包括胆固醇、 至少一种磷脂，并且至少一种由聚合物链衍生的磷脂，其中脂质体的平均直径小于150nm ； 生成对象的脉管系统的X射线图像；以及分析该X射线图像以检测对象的脉管系统中的泄 漏。根据该方法的一个实施方式，纳米探针可以使用基于X射线的成像技术，非侵入地探询 并量化血管完整性的程度。在该方法的一个实施方式中，分析X射线图像包括从具有很少或没有X射线信号 的区域区分具有增强的X射线信号的区域。在该方法的另一个实施方式中，该组合物的特
6征在于当在对象的脉管系统中存在泄漏时，与对象的脉管系统的脉管内区域相比，该组合 物聚集在对象的脉管系统的脉管外区域，从而在脉管外区域中获得增强的X射线信号。在 该方法的一个实施方式中，包含少量非放射性碘化化合物的低纳米探针剂量可以实现泄漏 脉管系统的脉管外空间的X射线信号增强，同时碘化纳米探针的低脉管内水平产生很少或 不产生信号增强。在该方法的另一个实施方式中，生成X射线图像包括使用CT、微CT、乳腺X射线成 像和胸部X射线的至少一个生成X射线图像。在一个实施方式中，泄漏指示肿瘤、炎症、中风、动脉瘤、伤口恢复或其它修复过 程、以及外伤的至少一个。这样，在一个实施方式中，纳米探针可便于检测由各种疾病(如 癌症、炎症、中风、动脉瘤)、由于外伤的内出血和由于再生过程(如伤口恢复)的血管新生 产生的受伤的、泄漏的血管。在另一个实施方式中，提供一种用于区分恶性损害和良性损害。该方法包括将组 合物(例如，纳米探针)引入感兴趣的损害中，该组合物包括脂质体，该脂质体包括至少 一种第一类脂或磷脂；至少一种由一种或多种聚合物衍生的第二类脂或磷脂；以及至少一 种能够稳定脂质体的位阻大体积赋形剂，其中脂质体的平均直径小于150nm，并且其中该脂 质体封装至少一种非放射性对比增强剂。在该方法的一个实施方式中，组合物特征可在于 该组合物在恶性损害中比良性损害中聚集程度更大，因为恶性肿瘤对5-200nm大型的微粒 具有增加的渗透性。该方法还包括对感兴趣的损害生成X射线图像，并且分析该X射线图 像以确定在感兴趣的损害中组合物的聚集程度。在另一个实施方式中，提供了一种用于评估肿瘤对纳米尺寸的治疗剂的可达性。 在下面的实施例4中例示的方法包括将组合物(纳米探针)引入感兴趣的肿瘤中，该组合 物包括脂质体，多个脂质体包括至少一种第一类脂或磷脂；至少一种由一种或多种聚合 物衍生的第二类脂或磷脂；以及至少一种能够稳定脂质体的位阻大体积赋形剂，其中脂质 体的平均直径小于150nm，并且其中多个脂质体封装至少一种非放射性对比增强剂；生成 肿瘤的X射线图像；以及分析该X射线图像以确定组合物在肿瘤中的聚集程度。在又一个实施方式中，提供了一种组合物。该组合物，在下面实施例5中提供了其 示例，可包括具有小于150nm的平均直径的脂质体，各脂质体包括第一类脂或磷脂；由一 种聚合物衍生的第二类脂或磷脂；以及至少一种能够稳定脂质体的位阻大体积赋形剂；其 中各脂质体封装非放射性对比增强剂和至少一种生物活性剂，其包括但不限于化疗剂、基 因、蛋白质、小分子和肽。在组合物的一个实施方式中，第一类脂或磷脂包括1，2_ 二棕榈酰 基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC)。在组合物的另一个实施方式中，能够稳定脂质体的位 阻大体积赋形剂包括胆固醇。在组合物的另一个实施方式中，由聚合物衍生的第二类脂或 磷脂包括1，2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚(乙二醇))-000] (mPEG2000-DSPE)。在组合物的另一个实施方式中，第一类脂或磷脂、由聚合物衍生的第二 类脂或磷脂和能够稳定脂质体的位阻大体积赋形剂以55 40 5的比率存在。在组合物 的另一个实施方式中，化疗剂包括阿霉素。在组合物的另一个实施方式中，脂质体具有大约 IOOnm的平均直径。在一个实施方式中，组合物可以允许活体或实时监视纳米探针生物分布，从而允 许患者特定的治疗。在另一个实施方式中，当如上关于组合物所述将治疗剂与对比剂共同封装在纳米探针内时，与可以实现治疗剂的非侵入式药物动力学。在另一个实施方式中，纳 米探针进一步为多功能性的，其中纳米探针可以经由抗体和肽有效定位。
可适于共同封装的一种示意性治疗剂是蒽环类抗生素。已经开发了脂质体蒽环类 抗生素以通过在改进安全性的同时保持抗癌功效来增加蒽环类抗生素的治疗指数。包括 阿霉素的蒽环类抗生素是最有效的化疗剂之一。然而，该化疗剂族例证了许多有效的抗癌 药物的局限在于它们受到有严重问题的系统毒性的限制，这导致骨髓抑制、急性反胃和呕 吐、口腔炎和心脏毒性。聚乙二醇覆盖(PEGylated)的脂质体阿霉素，具有长的血液循环 (t1/2 ^ 55h)的IOOnm类脂囊已经在美国被批准用于临床使用，用于治疗难治愈的Kaposi 氏肉瘤和卵巢癌。还研究将PEGylated脂质体阿霉素用于乳癌治疗，并且与常规阿霉素 相比已经显示类似的功效和显著较低的心脏毒性。许多装入脂质体中的其它药物已经被 批准或正进行用于癌症治疗的临床试验，并且可适于在此描述的共同封装，其包括但不限 于长春新碱(vineristine)、勒托替康(Iurtotecan)、全反式维甲酸(alltransretinoic acid)、钼化合物、annamycin和DNA质粒编码HLA-B7和β 2小球蛋白。
在某些实施方式中，用于检测组合物的适当的成像技术可以例如包括下面的X射 线诊断技术的至少一种计算机断层成像(CT)、微CT、乳腺X射线成像和胸部X射线。在其 它实施方式中，纳米探针可以使用MRI、超声和光学成像的至少一种成像或检测，该光学成 像包括荧光或生物发光成像。实施例实施例1-示意性纳米探针的准备和描绘在70°C连续搅拌和加热下，通过将碘克沙醇粉末(从GE Healthcare的Visapaque 320冷冻脱水)溶解到超纯水准备高浓度碘(600mgl/mL)。脂质体酒精溶液在70°C与碘溶 液水合，该脂质体酒精溶液包含摩尔比55 40 5的1，2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷 酸胆碱(DPPC)、胆固醇和1，2_ 二棕榈酰基-sn-甘油_3_磷酸乙醇胺_N_[甲氧基(聚 (乙二醇))_2000] (Mpeg2OOO-DSPE)，然后在 LipexThermoline 挤压机(Northern Lipids, Vancouver，加拿大)上顺序挤压。这得到聚乙二醇稳定(PEGylated)的脂质体的中心水核 心内的碘溶液的封装。针对使用100，000MWC0渗析管的300mM NaCl，通过使用与脂质体的 内部碘化相相同渗透压的盐溶液(300mM NaCl)进行两天渗析替换自由的未封装的碘克沙 醇。接下来通过使用具有50nm截止孔径的MicroKros模块(Spectrum Laboratories，力口禾Ij 福尼亚)渗滤而浓缩，脂质体碘和类脂含量分别测量为155mg/ml (全部封装的)和165mM。 脂质体的平均直径通过动态光散射确定为96mm(sd = 8nm)。配方设计的596m0sm/kg水同 渗重摩允许静脉注射，因为脂质壁可以维持期望在等渗环境中出现的等渗压。实际上，在针 对等渗的磷酸盐缓冲盐水的微晶泄漏体外试验中，显示了在三天的时间内封装碘的可忽略 的泄漏(小于初始有效载荷的5% )。实施例2-使用实施例1的纳米探针的成像研究在通过将乳腺癌细胞(来自ATCC的13762MAT Bill)移植到费希尔母大鼠的右肋 形成的大鼠胸部肿瘤模型中测试实施例1的纳米探针。成像研究在肿瘤移植后七天开始 (肿瘤体积大约440mm3，参见图1的肿瘤生长曲线)。肿瘤体积(η = 15)通过测径法获得。利用商业化的数字乳腺X光成像系统(Senographe 2000D, GE Healthcare)，在 49kVp和63mAs，利用铑靶和0. 3mm厚度的额外铜过滤器，进行对比增强的乳腺X光成像。这些设置用于成形X射线，以具有对碘优化的能量。在这些条件下，获得优化的X射线频谱，其 包含具有能量在碘的k边缘上的最大数量的X射线，同时与标准乳腺X光成像相比，X射线 剂量显著减少。利用高剂量的纳米探针执行初始研究以获得脉管图像。在尾部静脉注射纳 米探针后1、5、10和15分钟后，获取前对比图像(图2(a))和后对比图像。在获得20mgl/ mL的血液浓度的1，300mgl/kg的纳米探针体重剂量，血管清楚可见(图2(b))。在成人的 情况中，这将对应于大约654ml的纳米探针的剂量(假设5升的血管体积)，这是人类使用 的最高限度。然而，该高剂量用于清楚可视化血管使乳腺X光成像系统能够检测。在监视纳米探针研究结果的过程中，在施用455mgl/kg体重剂量的纳米探针后 24,72和120小时后获得后对比图像和前对比图像(指示为t = 0)。这对应于195mg类脂 /kg体重，这比用于临床实践中时的脂质体药物的最高类脂剂量大约高两倍。图2(c)示出 注射纳米探针72h后的动物图像。在正常组织中看不见血管(与图2(b)中观察的增强脉 管系统相比)，同时脾和肿瘤被增强。脾增强是期望的，因为肿瘤的脉管外空间内的脂质体 提供用于纳米探针的检测(当期望血管循环中的最大碘时)，因为血液中的碘水平在可检 测阈值之下。图3显示对于5天的时间段纳米探针在肿瘤损害内的聚集的时间线。以相同方式， 在显示类似行为的后_对比定义的时间点，对一组动物(η = 7)进行成像和监视。图4(a) 通过使用ImageJ软件(NIH，Bechesda，马里兰)量化损害的灰度级概括了肿瘤增强的时间 过程。通过从其肿瘤减去每个后对比值(t > 0)计算标准化肿瘤增强，其示出所述增强在 120h时间过程期间缓慢逐渐增加(图4(a)中指示为大鼠2和6)，而其它肿瘤显示较快的 增加(图4(a)中指示为大鼠3，4和5)。另一肿瘤在t = 24h显示了初始的快速增强，然后 是稳定状态。在t = 120h，存在具有低增强的损害和具有高很多的增强的损害。该差异表 示泄漏到每个肿瘤中的不同量的纳米探针。由纳米探针引起的肿瘤增强的模式绘制在图4(b)中，并且与相同组中的动物的 正常组织或展现统计差异的对照组的肿瘤点(不注射试剂)比较。在正常组织中没有观察 到增强，表示血液中的纳米探针水平低于乳腺X光成像的可检测阈值，并且暗示肿瘤组织 的内生变化不会产生这种显著增强，正如在没有探针的损害的情况所见的那样。图5示出 了具有高吸收的肿瘤损害和具有中等吸收的肿瘤损害的乳腺X光成像图像的示例。实施例3-比较实施例(对照组)图6示出了没有注射对比剂的大鼠(对照组)的全身乳腺X光成像。另一对照组 以等效于1，344mgl/mL的高剂量纳米探针的碘剂量注射常规碘化试剂(碘海醇)。(见图 7)。在注射后的第一分钟内，普通脉管系统和肿瘤损害显示轻微的增强，但是碘化试剂经由 肾快速清除。(见图8)实施例4-纳米化疗成功的非侵入式预测在通过将乳腺癌细胞(来自ATCC的13762MAT Bill)移植到费希尔母大鼠的右肋 形成的大鼠胸部肿瘤模型中测试纳米探针的预测精确度。在肿瘤移植后6天开始成像研 究。利用商业化的数字乳腺X光成像系统(Senographe2000D，GE Healthcare)，在49kVp和 63mAs，利用铑靶和0.3mm厚度的额外铜过滤器，执行对比增强的乳腺X光成像。对动物(η =15)注射455mgl/kg体重量的示意性纳米探针。图9从其与对比值(t = 0)开始，通过 使用ImageJ软件量化损害的灰度级来概括肿瘤增强的时间过程(t > 0)。可观察到增强曲线显示不同的模式。紧接在成像期之后(在肿瘤移植后9天)，以IOmg阿霉素每kg体重的 剂量给动物注射脂质体阿霉素。通过使用测径器测量肿瘤的大小来评估肿瘤对药物的反应。图10概括了通过测 径法获得的所有动物的肿瘤生长曲线。各生长曲线显示了高可变性，暗示每个肿瘤对化疗 反应不同。显示较高的纳米探针吸收性的动物对治疗反应较好(较小的肿瘤体积)。为了量化纳米探针预测对治疗反应的关系，将肿瘤生长曲线(图10)拟合成单一 指数函数(即，dv/dt = K—M Xt，其中V是肿瘤体积)，以便计算生长率常数，Kim0 从图9计算纳米探针吸收曲线的曲线下面积(AUCstt)。在图11中对于每个动物的AUC· 绘制每个动物的Kwsi气高AUCsm意味着纳米探针的高肿瘤内聚集性，预测纳米化疗的高 成功性，而低K ws^i意味着慢肿瘤生长或对治疗的好的反应。棚列5-椒碰丨丨減麵德白句讓本隨細刮本聯会在70°C，包含摩尔比为55 40 5的DPPC、胆固醇和mPEG (2000)-DSPE的脂质 体酒精溶液与300mM硫酸铵碘溶液(iohexol :350mgl/ml)水合，然后在Lipex Thermoline 挤压机(Northern Lipids，Vancouver，加拿大)上顺序挤压。这得到PEGylated脂质体的 中心水核心内的碘溶液的封装。与使用100，000MWC0渗析管的300mM NaCl相反，使用两 天渗析将与自由的未封装的碘克沙醇从脂质体的外相中移除。然后，针对磷酸盐缓冲盐水 (PBS)溶液，利用IOOkDaMWCO渗析管渗析12h，以建立阿霉素加载的硫酸铵梯度。脂质体配方通过硫酸铵梯度有效地加载阿霉素。简单来说，脂质体和阿霉素以 脂质体中每Img DPPC有0. Img阿霉素的比率混合。脂质体-阿霉素悬浮液在35°C加热 25分钟。脂质体在室温下放置一个晚上，并且在IOOkDa MWCO膜中针对PBS分析两次，以 移除未封装的阿霉素。接下来通过使用具有50nm截止孔径的MicroKros模块(Spectrum Laboratories，加利福尼亚)渗滤而浓缩，脂质体碘和阿霉素含量分别测量为91mg/mL和 1. 2mg/mL (完全封装)。脂质体的平均直径通过动态光散射确定为102mm (sd = 6nm)。当然，不可能为了描述在此提供的组合物、方法等的目的而描述组合物或方法的 每一种可预期的组合。另外的优点和修改对于本领域技术人员将是显然的。因此，本发明 在其更宽的方面不限于示出和描述的具体细节和说明性示例。因此，可以偏离这种细节而 不偏离申请人的一般发明性构思的精神或范围。本领域普通技术人员将容易认识到，优化 或操作这些变量的任何一个可以或将要求或使得这些变量的其它的一个或多个变得可能， 并且这种优化或操作在本实施例的精神和范围内。尽管提出本发明的宽度范围的数字范围和参数是近似的，但是尽可能精确地告之 了在具体实施例中提到的数值。然而，任何数值固有地包含由它们各自的测试测量结果中 发现的标准差必然导致的一定误差。要注意的是，术语“大约”可以意味着高达并且包括所 述值的士 10%。例如，“大约10”可以意味着从9到11。此外，尽管已经通过描述实施例说明了组合物、方法等，并且尽管已经相当详细地 描述了各实施例，但是申请人意图不在于将权利要求的范围限定，或以任何方式限制为这 么详细。因此，本申请意图在于包括落入权利要求范围内的替换、修改和变形。前述描述并 非意味着限制本发明的范围。而是，本发明的范围由随附权利要求及其等效体来确定。最后，对于在详细描述和权利要求中采用的术语“包括”或“具有”的程度，意图在 于以类似于术语“包含”的方式是包含的，如该术语在用作权利要求中的过渡词使用时所解释的。此外，对于权利要求中采用的术语“或”(例如，A或B)，意图在于意味着“Α或B或 两者”。当申请人意图指示“只有A或B，但没有两者”时，将采用术语“只有A或B而没有 两者”。类似地，当申请人意图指示A、B或C中的“一个并只有一个”时，申请人将采用短 语“一个并只有一个”。因此，在此术语“或”的使用是包含的，而不是排他使用。见Bryan A. Garmer, ADictionary ofModerη Legal Usage 624 (第二片反，1995)。
权利要求
一种用于评估对象的脉管系统完整性的方法，该方法包括将组合物引入对象的脉管系统，该组合物包括脂质体，多个脂质体封装一个或多个非放射性对比增强剂，并且多个脂质体包括胆固醇、至少一种磷脂，和至少一种由聚合物链衍生的磷脂，其中脂质体的平均直径小于150nm；生成对象的脉管系统的图像；以及分析该图像以检测对象的脉管系统中的泄漏。
2.如权利要求1所述的方法，其中生成图像包括生成X射线图像。
3.如权利要求1所述的方法，其中生成图像包括在将组合物引入对象的脉管系统之前 和之后生成图像。
4.如权利要求1所述的方法，其中分析图像包括从具有很少或没有信号的区域区分具 有增强的信号的区域。
5.如权利要求1所述的方法，其中该组合物的特征在于当在对象的脉管系统中存在 泄漏时，与对象的脉管系统的脉管内区域相比，该组合物在对象的脉管系统的脉管外区域 中聚集，从而增强在脉管外区域中的信号。
6.如权利要求2所述的方法，其中生成X射线图像包括使用计算机断层成像、微型计算 机断层成像、乳腺X光成像和胸部X射线中的至少一个生成X射线图像。
7.如权利要求1所述的方法，其中生成图像包括使用MRI、超声和光学成像的至少一种 生成图像，该光学成像包括荧光或生物发光成像。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述泄漏指示癌症、中风、动脉瘤、愈合以及外伤的 至少一个。
9.一种用于区分恶性损害和良性损害的方法，该方法包括将组合物引入感兴趣的损害中，该组合物包括脂质体，各脂质体包括至少一种第一 类脂或磷脂；至少一种由一种或多种聚合物衍生的第二类脂或磷脂；以及至少一种能够稳定脂质体的位阻大体积赋形剂，其中脂质体的平均直径小于150nm，并 且其中各脂质体封装至少一种非放射性对比增强剂；生成感兴趣的损害的图像；以及分析该图像以确定组合物在感兴趣的损害中的聚集程度。
10.如权利要求9所述的方法，其中该组合物特征在于该组合物在恶性损害中比良性 损害中聚集程度更大。
11.如权利要求9所述的方法，其中生成图像包括使用计算机断层成像、微型计算机断 层成像、乳腺X光成像和胸部X射线的至少一个生成X射线图像。
12.一种用于评估肿瘤对纳米尺寸治疗剂的可达性的方法，该方法包括将组合物引入所述肿瘤，该组合物包括脂质体，该脂质体包括至少一种第一类脂或 磷脂；至少一种由一种或多种聚合物衍生的第二类脂或磷脂；以及至少一种能够稳定脂质 体的位阻大体积赋形剂，其中脂质体的平均直径小于150nm，并且其中脂质体封装至少一种 非放射性对比增强剂；生成肿瘤的图像；以及分析该图像以确定组合物在肿瘤中的聚集程度。
13.如权利要求12所述的方法，其中生成图像包括使用计算机断层成像、微型计算机 断层成像、乳腺X光成像和胸部X射线的至少一个生成X射线图像。
14.一种组合物，包括具有小于150nm的平均直径的脂质体，多个脂质体包括第一类脂或磷脂；由聚合物衍生的第二类脂或磷脂；以及能够稳定脂质体的位阻大体积赋形剂；其中多个脂质体将非放射性对比增强剂和至少一种生物活性剂共同封装。
15.如权利要求14所述的组合物，其中第一类脂或磷脂包括DPPC。
16.如权利要求14所述的组合物，其中由聚合物衍生的第二类脂或磷脂包括 mPEG (2000)-DSPE。
17.如权利要求14所述的组合物，其中第一类脂或磷脂、由聚合物衍生的第二类脂或 磷脂和能够稳定脂质体的位阻大体积赋形剂以55 40 5的比率存在。
18.如权利要求14所述的组合物，其中生物活性剂包括阿霉素。
19.如权利要求14所述的组合物，其中脂质体具有大约IOOnm的平均直径。
20.如权利要求14所述的组合物，其中脂质体具有小于120nm的平均直径。
21.如权利要求14所述的组合物，其中非放射性对比增强剂包括碘化合物。
22.如权利要求14所述的组合物，其中生物活性剂包括化疗剂、基因、蛋白质、小分子 和肽的至少一种。
23.如权利要求14所述的组合物，其中能够使用以下的至少一种检测该组合物CT、微 CT、乳腺X光成像和胸部X射线、MRI、磁共振频谱、生物发光成像、超声、光学成像和光谱。
全文摘要
本发明公开了一种用于评估对象的脉管系统完整性的组合物和方法，用于区分恶性损害和良性损害，用于评估肿瘤对纳米尺寸治疗剂的可达性，用于治疗肿瘤，并且用于活体或实时监视纳米探针的生物分布。
文档编号A61B6/00GK101951835SQ200880119329
公开日2011年1月19日 申请日期2008年12月5日 优先权日2007年12月5日
发明者A·安娜普拉加达, E·卡拉萨纳西斯, R·M·勒波维奇, R·贝拉姆康达 申请人:马维尔生物科学公司