专利名称：灵芝三萜提取物的自微乳化纳米组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种灵芝三薛提取物的自微乳化纳米组合物，该纳米组合物 将水不溶性药物灵芝总三辟提取物制备成为自微乳化制剂，本发明还涉及这
种自微乳化纳米组合物的制备方法。
背景技术：
灵芝为多孔菌科真菌，有几千年的药用历史，收载于中国最早的本草学
专著《神农本草经》。两千多年以来，人们一直用灵芝来预防、治疗肿瘤； 现代科学研究也表明，灵芝有较强的抗肿瘤作用。
灵芝三萜类成分被公认为灵芝抗肿瘤的有效成分之一。但其水溶性很 差，影响其口服吸收及药效发挥。
目前市场上灵芝的剂型以传统制剂为主，比如片剂、胶嚢剂、颗粒剂、 咀嚼片、口服液等，甚至直接将灵芝打成细粉服用。如中国专利 2005102000612.6 7〉开了一种灵芝三辟类成分咀嚼片的制备方法，用环糊精 包合技术，将灵芝三萜类物质等包合在环糊精分子内，解决了灵芝三萜类成 分味苦的问题。
虽然这些传统剂型具有一定的疗效，但是灵芝中的主要活性组分灵芝总 三碎类组分是脂溶性成分，水溶性不好，生物利用度较低，这些传统剂型并 不能使灵芝三萜类成分的抗肿瘤作用发挥到极致。自微乳给药系统可以适合 灵芝三碎类成分更好的发挥药效。自微乳给药系统(self-microemulsifying dmg delivery system, SMEDDS ) 是一种新型给药模式。它具有多方面的优势，是一种理想的给药剂型。该药 物剂型的出现，给中药制剂的研究开辟了新的领域。SMEDDS基本特征是 在环境温度(通常指在体温37。C)条件下，遇到胃肠液后，可在胃肠道的蠕 动下自发形成0/W型微乳，进入体内后， 一旦分散它们的体内行为和微乳 一致。
与普通乳剂或微乳相比，SMEDDS的优势主要有能在胃肠道条件下 自发形成微乳；对难溶性或脂溶性药物具有较高的增溶能力；能够过滤灭菌， 可作为静脉给药制剂；有较高的物理稳定性；可以被填充到硬胶嚢或^:胶嚢 中，制备工艺简单，容易进行工业生产。此外，还可以在自微乳中加入适当 的赋形剂，制备相应的固体自微乳制剂，这些固体自微乳制剂可以提高药物 的溶出度，并有利于改善生物利用度。
SMEDDS和传统的片剂和胶嚢剂相比，药物可快速吸收。对于良好的 自微乳化系统来说，与胃液接触时可形成包含有溶解药物的小乳滴，因此， 微乳乳滴中的药物具有较大的界面积，且药物在肠中可维持溶解状态，从而 更好的分散透过细胞膜。
在药学领域众多自微乳化制剂的研究中，除中药单体有所涉及外，对中 药有效组分的研究较少。由于中药组分组成复杂，即使是同一类别组分也含 有多种化学成分，因此中药有效组分自微乳研究较为困难。所以目前尚未有 灵芝三薛类组分自微乳制剂的研究报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种灵芝三萜提取物的自微乳化纳米组合物(自微乳制剂)，该纳米組合物从灵芝三碎提取物的特点和抗肿瘤作用出发，将 水不溶性药物灵芝总三薛提取物制备成为自微乳化制剂，可以提高药物的溶
出度，促进药物吸收，并有利于改善生物利用度；同时药物具有较大的界面
积，且药物在肠中可维持溶解状态，从而更好的分散透过细胞膜，进而提高 药物的药效。本发明制备的灵芝三薛自微乳给药系统与现在常规混悬剂相 比，体内抗肿瘤效果增强。
本发明的另一目的在于提供这种灵芝三萜提取物的自微乳化纳米组合 物的制备方法。
本发明的技术方案是， 一种灵芝三萜提取物的自微乳化纳米组合物(自 微乳制剂)，以灵芝三薛提取物作为原料药，采用表面活性剂、助表面活性
剂和油相组成的混合物作为药物载体，其特征在于，各组分重量份如下 灵芝三碎提取物10份，表面活性剂50~400份，助表面活性剂100~800
份，油相15 600份。
各组分重量份的优化比例是
灵芝三薛提取物10份，表面活性剂100-300份，助表面活性剂200~600 份，油相40 400份。
各组分重量份的更为优化的比例是
灵芝三辟提取物10份，表面活性剂150-200份，助表面活性剂300~500 份，油相100~200份。
上述的灵芝总三萜提取物是将灵芝子实体通过超临界C02萃取的方法萃
取得到。(参见宋师花，贾晓斌，陈彦，等。超临界C02萃取灵芝子实体 中的总三萜类组分[J].中国中药杂志，2008， 33(17):2104-2107.)上述的表面活性剂可选自下列之一或它们的组合脂肪酸山梨坦，聚山 梨酯，聚氧乙烯40脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚，聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚 物，卵磷脂，或OP乳化剂。
上述的脂肪酸山梨坦选自下列之一或它们的组合司盘20、司盘40、司 盘60、司盘65、司盘80，或司盘85。
上迷的聚山梨酯选自下列之一或它们的组合聚山梨酯20 (吐温20)， 聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯65、聚山梨酯80,或聚山梨酯85。
上述的聚氧乙烯脂肪醇醚选自下列之一或它们的组合汴泽30、汴泽35、 西土马哥(Cetomacrogol),平平加O (PerogolO)或Cremophore EL (聚氧 乙烯蓖麻油甘油醚)
上述的聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物选自下列之一或它们的组合 Poloxamer 124(泊洛沙姆124 ), Poloxamer 188(泊洛沙姆188 ), Poloxamer237 (泊洛沙姆237), Poloxamer338 (泊洛沙姆338),或Poloxamer407 (泊洛 沙姆407 )。
上述的助表面活性剂可选自下列之一或它们的组合物乙醇、异丙醇、1, 2-丙二醇、丙三醇、正丁醇、正辛醇、正庚醇、聚乙二醇300,或聚乙二醇 400。
上述的油相可选自下列之一或它们的组合物油酸、油酸乙酯、花生油、 豆油、蓖麻油、橄;f览油、亚油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、丙烯乙二醇单辛酸 酯、丙烯乙二醇双辛酸酯，或甘油单辛酸酯。
本发明的灵芝三萜提取物的自微乳化纳米组合物(灵芝三萜自微乳化制 剂)的制备方法，步骤如下(1) .按比例取灵芝三薛提取物放于容器中；
(2) .再加入表面活性剂、助表面活性剂，磁力搅拌混匀，使药物溶解；
(3) .再加入油相，磁力搅拌混匀，即得灵芝三薛自微乳制剂。 本发明制备灵芝三萜微乳是用磁力搅拌器搅拌即可形成。
为了便于患者服用，可将本发明的自微乳化的灵芝三碎口服制剂组合物 采用本领域公知的方法灌装于胶嚢中，获得胶嚢剂。
或将本发明的自微乳化的灵芝三萜口服制剂组合物与医药学上可接受 的载体，采用本领域公知的方法制备成片剂、软胶嚢剂、口服液、颗粒剂等。
与常规乳剂和亚乳剂(粒径一般在0.1 10 pm)相比，自微乳、微乳粒 径更小(lOOmn以下)，属于热力学稳定体系；微乳处方中由于存在大量的 水(0/W)，难以制成固体(如软胶嚢)制剂，临床一般采用液体型给药， 给包装、运输、储藏、携带等带来诸多不便；而自微乳则即可制成液体剂型， 又可以灌装于软胶嚢或可充入硬胶嚢中制成固体制剂应用。而且，自^:乳制 剂易于制备，不需特殊设备即可大量生产、稳定性好且易工业化，因此具有 良好的产业化前景。
体内抗肿瘤动物实验表明灵芝三萜微乳能够增强药物疗效，提高抗肺 瘤效果。
本发明所制备的灵芝三萜自微乳化制剂及其制备方法的有益效果表现在 如下几方面
1、 本发明制备的制剂制备方法简单，无需特殊设备即可完成，容易实现 工业化大生产。
2、 本发明所选用的表面活性剂，具有安全、无毒 无刺激性等优点，且乳化性能好，通过体外乳化实验后发现其乳化粒径较小，在10 100nm之间，
达到纳米级，有利于吸收，抗肿瘤效果较好。
图1为实施例1制备的灵芝三萜自微乳化形成的溶液的粒径分布图。
具体实施例方式
下面结合实例对本发明作进一步详细说明，但应注意本发明的范围并不受这些实例的任何限制。实施例1
处方灵芝总三萜提取物30mg,吐温-20 1200 mg,异丙醇2400 mg,油酸1800 mg。
将灵芝总三萜提取物、吐温-20、异丙醇放入西林瓶中，通过磁力搅拌充分混合均匀，待药物完全溶解后，加入油酸，再磁力搅拌10 min后，便可得到灵芝三萜提取物自微乳化组合物。
实施例2
处方灵芝总三萜提取物100mg，司盘-20 1000mg,乙醇6000mg，油酸乙酯500 mg。
制备方法同实施例1。实施例3
处方灵芝总三萜提取物50mg,磷脂-20 250 mg,乙醇500 mg,肉豆蔻酸异丙酯75mg。
制备方法同实施例1。实施例4处方灵芝总三萜提取物40mg， CremophoreEL800mg,乙醇1600 mg，大豆油1200 mg。
制备方法同实施例1。实施例5
处方灵芝总三萜提取物80mg， Poloxamer 188 2400 mg, 1， 2-丙二醇4000 mg,亚油酸乙酯3200mg。制备方法同实施例1。
实施例6.灵芝三碎提取物自微乳的体内抗肿瘤实验选择"l矣种7d,生长良好的荷Heps肝癌小鼠，颈推脱臼处死，无菌抽取腹水，以无菌生理盐水按l: 4比例稀释成2xl(^个/mL的瘤细胞悬液，接种于健康小鼠右前肢皮下，每只0.2mL。接种次日，按体重随机分为6组，分别为生理盐水空白对照组；环磷酰胺阳性对照组；灵芝三薛提取物自微乳高低剂量组(5.0g生药.kg-、cT1、 2.5g生药.kg"'cT1)、灵芝三萜提取物混悬液高低剂量组(5.0 g生药.kg十cT1、 2.5 g生药.kg"《1 )。环磷酰胺阳性对照组为腹腔注射(20 mg.kg".cT1),其它组为灌胃给药，均为每日l次，连续7d。期间，每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。与末次给药后24 h后颈推脱臼处死小鼠剥取瘤组织，同时剖取小鼠脾脏、胸腺，称重，计算抑瘤率、脾指数、胸腺指数，结果见表l、表2。
抑瘤率(％) = (l-治疗组平均瘤重/对照组平均瘤重)xioo%;脾指数=脾重(mg) /小鼠体重(g);胸腺指数=胸腺重(mg) /小鼠体重(g)。实验结果显示，灵芝三萜自微乳可抑制肿瘤的生长，其高低2个剂量组和环磷酰胺阳性对照组的肿瘤重量明显低于生理盐水对照组，灵芝自微乳
高、低剂量组抑瘤率分别为52.34%, 37.66%。灵芝三萜自微乳组与混悬液组比较，抑瘤率有显著性提高(尸<0.05),实验结果见表l 。
表1.灵芝三萜自微乳对Heps肿瘤小鼠的抑制作用 (x±s)
组别肿瘤重(g)》 桥 锲 乾
生理盐水组2.48±0.37
环磷酰胺组0.71土0.125^71.45
空白溶剂组2.42±0.352.62
灵芝三萜混悬液高剂量组1.48±0.27*40.16
灵芝三萜混悬液低剂量组1.86±0.33*25.04
灵芝三萜提取物自l(乳高剂量组1.18±0.34 52.34
灵芝三萜提取物自微乳低剂量组1.55±0.35 A*37.66
注与生理盐水组比较*尸<0.05
与对应的混悬药物组比较AP<0.05
给药后小鼠的脾指数、胸腺指数与模型生理盐水对照组比较无显著性差异，对免疫器官脾脏和胸腺无影响；混悬药物组与微乳组比较，脾指数和胸腺指数也无显著性差异，可见灵芝三萜纟敬乳对免疫器官脾脏和胸腺无影响。实验结果见表2。
本实验以灵芝三萜自微乳为研究对象，对其抗肿瘤作用进行了探索性研
究。实验结果初步提示灵芝三萜自微乳对Heps肿瘤小鼠均具有较好的抑制作用。其抗肿瘤作用与混悬液比较，具有显著性的增强作用(尸<0.05)。表2灵芝三萜自微乳对Heps肿瘤小鼠脾和胸腺的影响(x±S)
组别脾指数(mg-g-l)胸腺指数(mg*g-l)
生理盐水组7.57±1.363.53±0.52
环磷酰胺组5.96±1.29*2.09±0.66*
空白溶剂组7.37±0.973.48±0.51
灵芝三:砲混悬液组高剂量组7.68±0.723.37±1.06
灵芝三:萜混悬液组低剂量组7.35±1.123.47±1.31
灵芝:三萜自微乳高剂量组7.61±1.823.52±0.89
灵芝:三萜自微乳低剂量组7.25±1.303.50±0.83
注与生理盐水对照组比较*P<0.05
实施例7,与实施例l基本相同，但各組分重量份如下灵芝三碎提取
物10份，表面活性剂100，助表面活性剂200,油相40份。
所述的表面活性剂可以选自下列之一或它们的组合脂肪酸山梨坦，聚
山梨酯，聚氧乙烯40脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚，聚氧乙烯-聚氧丙烯共
聚物，卵磷脂，或OP乳化刺；
所述的助表面活性剂可以选自下列之一或它们的组合物乙醇、异丙醇、
1, 2-丙二醇、丙三醇、正丁醇、正辛醇、正庚醇、聚乙二醇300,或聚乙二
醇400;
所述的油相可以选自下列之一或它们的组合物油酸、油酸乙酯、花生油、豆油、蓖麻油、梯:榄油、亚油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、丙烯乙二醇单辛酸酯、丙烯乙二醇双辛酸酯，或甘油单辛酸酯。
实施例8,与实施例l基本相同，但各组分重量份如下灵芝三踪提取物10份，表面活性剂300份，助表面活性剂600份，油相400份。
实施例9,与实施例l基本相同，但各组分重量份如下灵芝三辟提取物10份，表面活性剂150份，助表面活性剂300，油相100份。
表面活性剂中所述的聚山梨酯选自下列之一或它们的组合聚山梨酯20，聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯65、聚山梨酯80，或聚山梨酯85;
表面活性剂中所述的聚氧乙烯脂肪醇醚选自下列之一或它们的组合汴泽30、汴泽35、西土马哥，平平加O或聚氧乙烯蓖麻油甘油醚；
表面活性剂中所述的聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物选自下列之一或它们的
组合泊洛沙姆124，泊洛沙姆188,泊洛沙姆237,泊洛沙姆338,或泊洛沙姆術。
实施例10,与实施例l基本相同，但各组分重量份如下灵芝三薛提取物10份，表面活性剂200份，助表面活性剂500份，油相200份。
权利要求
1、一种灵芝三萜提取物的自微乳化纳米组合物，以灵芝三萜提取物作为原料药，采用表面活性剂、助表面活性剂和油相组成的混合物作为药物载体，其特征在于，各组分重量份如下灵芝三萜提取物10份，表面活性剂50～400份，助表面活性剂100～800份，油相15～600份。
2、 根据权利要求1所述的灵芝三碎提取物的自微乳化纳米组合物，其特 征在于，所述各组分的重量份比例是灵芝三萜提取物10份，表面活性剂100 300份，助表面活性剂200-600 份，油相40-400份。
3、 根据权利要求2所述的灵芝三薛提取物的自微乳化纳米组合物，其特 征在于，所述各组分的重量份比例是灵芝三碎提取物10份，表面活性剂150-200份，助表面活性剂300-500 份，油相画 200份。
4、 根据权利要求l所述的灵芝三辟提取物的自微乳化纳米组合物，其特 征在于，所述的灵芝总三碎提取物是指将灵芝子实体通过超临界C02萃取 的方法萃取得到的灵芝总三辟提取物。
5、 根据权利要求1或2或3或4所述的灵芝三辟提取物的自微乳化纳米 组合物，其特征在于，所述的表面活性剂选自下列之一或它们的组合脂肪酸山梨坦，聚山梨酯，聚氧乙烯40脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚，聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物， 卯磷脂，或OP乳化剂；所述的助表面活性剂选自下列之一或它们的组合物乙醇、异丙醇、1， 2-丙二醇、丙三醇、正丁醇、正辛醇、正庚醇、聚乙二醇300，或聚乙二醇 400;所述的油相选自下列之一或它们的组合物油酸、油酸乙酯、花生油、 豆油、蓖麻油、橄榄油、亚油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、丙烯乙二醇单辛酸 酯、丙烯乙二醇双辛酸酯，或甘油单辛酸酯。
6、 根据权利要求5所述的灵芝三碎提取物的自微乳化纳米组合物，其特 征在于，表面活性剂中所述的脂肪酸山梨坦选自下列之一或它们的组合司盘 20、司盘40、司盘60、司盘65、司盘80，或司盘85;表面活性剂中所述的聚山梨酯选自下列之一或它们的组合聚山梨酯 20,聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯65、聚山梨酯80，或聚山梨酯85;表面活性剂中所述的聚氧乙烯脂肪醇醚选自下列之一或它们的组合汴 泽30、汴泽35、西土马哥，平平加O或聚氧乙烯蓖麻油甘油醚；表面活性剂中所述的聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物选自下列之一或它们的 组合泊洛沙姆124,泊洛沙姆188，泊洛沙姆237,泊洛沙姆338，或泊洛 沙姆407。
7、 一种权利要求1所述的灵芝三薛提取物的自微乳化纳米组合物的制备 方法，其特征在于，步骤如下(1).按比例取灵芝三碎提取物放于容器中；U).再加入表面活性剂、助表面活性剂，磁力搅拌混匀，使药物溶解； (3).再加入油相，磁力搅拌混匀，即得灵芝三碎自微乳制剂。
8、 根据权利要求7所述的灵芝三辟提取物的自微乳化纳米组合物的制备 方法，其特征在于，所述各组分的重量份比例是灵芝三碎提取物10份，表面活性剂50 400份，助表面活性剂100~800 4分，油相15 60(H分；所述的表面活性剂选自下列之一或它们的组合脂肪酸山梨坦，聚山梨 酯，聚氧乙烯40脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚，聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物， 卵磷脂，或OP乳化剂；所述的助表面活性剂选自下列之一或它们的组合物乙醇、异丙醇、1， 2-丙二醇、丙三醇、正丁醇、正辛醇、正庚醇、聚乙二醇300，或聚乙二醇 400;所述的油相选自下列之一或它们的组合物油酸、油酸乙酯、花生油、 豆油、蓖麻油、橄榄油、亚油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、丙烯乙二醇单辛酸 酯、丙烯乙二醇双辛酸酯，或甘油单辛酸酯。
9、 根据权利要求7或8所述的灵芝三碎提取物的自微乳化纳米组合物的 制备方法，其特征在于，所述各组分的重量份比例是灵芝三碎提取物10份，表面活性剂100 300份，助表面活性剂200-600 份，油相40~400份；所述的脂肪酸山梨坦选自下列之一或它们的组合司盘20、司盘40、司 盘60、司盘65、司盘80,或司盘85;所述的聚山梨酯选自下列之一或它们的组合聚山梨酯20,聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯65、聚山梨酯80,或聚山梨酯85;所述的聚氧乙烯脂肪醇醚选自下列之一或它们的组合汴泽30、汴泽35、 西土马哥，平平加O或聚氧乙烯蓖麻油甘油醚；所述的聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物选自下列之一或它们的组合泊洛沙姆 124,泊洛沙姆188,泊洛沙姆237，泊洛沙姆338,或泊洛沙姆407。
10、根据权利要求7或9所述的灵芝三萜提取物的自微乳化纳米组合物 的制备方法，其特征在于，所述各组分的重量份比例是灵芝三萜提取物10份，表面活性剂150-200份，助表面活性剂300 500 份，油相100-200份。
全文摘要
灵芝三萜提取物的自微乳化纳米组合物制备方法，自微乳化纳米组合物是以灵芝三萜提取物作为原料药，采用表面活性剂、助表面活性剂和油相组成的混合物作为药物载体，其特征在于，各组分重量份如下灵芝三萜提取物10份，表面活性剂50～400份，助表面活性剂100～800份，油相15～600份。所述的灵芝总三萜提取物是指将灵芝子实体通过超临界CO<sub>2</sub>萃取的方法萃取得到的灵芝总三萜提取物。本发明将水不溶性药物灵芝总三萜提取物制备成为自微乳化制剂，可提高药物的溶出度，促进药物吸收，有利于改善生物利用度；且药物在肠中可维持溶解状态，从而更好的分散透过细胞膜，进而提高药物的药效，体内抗肿瘤效果增强。
文档编号A61K9/107GK101601695SQ20091003199
公开日2009年12月16日 申请日期2009年6月26日 优先权日2009年6月26日
发明者宋师花, 贾晓斌, 彦 陈 申请人:江苏省中医药研究院