专利名称：草鱼细菌性烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗及其制备方法
技术领域：
本发明属于微生物工程领域，涉及预防草鱼细菌性烂鳃病、败血病、赤皮病的疫苗，本 发明还涉及该疫苗的制备方法。
背景技术：
根据本项目委托广东省科技情报研究所查新检索国外文献、专利结果未见有草鱼病疫 苗或有关鱼虾烂鳃、败血、赤皮等病疫苗的研发应用报导。国内从70年代开始，珠江水产研 究所首先利用病鱼肝、胰、肾等组织制备组织疫苗，免疫草鱼能有效预防草鱼出血、烂鳃、 赤皮、肠炎等病发生，但是该法存在一定缺点1、必须取材于发病鱼，原材料受限；2、质 量不稳定。80年代后在全国范围开始草鱼出血病灭活疫苗、活疫苗研发，并获得成功。四川 大学、广东省药物研究所与广东省水产养技术推广总站、武汉市水产科学研究所、湖南草鱼 免疫技术协作组等单位研发过草鱼细菌性烂鳃病、赤皮病、肠炎病疫苗；并投入过中试，试 用后养殖成活率提高至70%以上。但是，涉及本项草鱼细菌性烂鳃、败血、赤皮三联灭活 疫苗的研究与应用未见报导。
发明内容
为了解决草鱼细菌性烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗纯正抗原培育，"三病"抗原及佐剂 的合理配制；克服全菌灭活疫苗免疫力低的不足。本发明提供一种草鱼细菌性烂鳃、败血、 赤皮三联灭活疫苗，包括抗原和佐剂，其特征在于所述抗原为如下抗原组合物柱状屈桡杆 菌培养物、嗜水气单胞菌培养物、萤光极毛杆菌培养物，所述佐剂为MONTANIDE ISA 763A VG和白油，其中柱状屈挠杆菌培养物20 30亿CFU/ml， 30 39%，嗜水气单胞菌培养物 80亿CFU/ml ， 8%，萤光极毛杆菌培养物80亿CFU/ml ， 10%，佐剂MONTANIDE ISA 763A VG 14%和白油10%。
本发明还提供该种草鱼细菌性烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗的制备方法，其特征在于 该方法包括
(1)柱状屈桡杆菌培养物的制备 a菌种复苏、复壮将冻干菌种启封后，接入液体胰蛋白胨培养基培养；
b种子鉴定及扩大培养取培养菌种，划线接种于胰蛋白胨琼脂平板若干个，28"C培养 48h，挑取至少5个假树根状菌落，接种于胰蛋白胨液体培养基，置28'C扩大培养成菌种；C制苗菌液培养将检验合格的菌种按胰蛋白胨培养基量2%接种到培养罐，以恒温28°C、 6M2/h的通气量培养20 24h收获20 30亿CFU/ml培养物；
d纯粹检验、活菌计数在培养菌液中，取样，分别接种适宜生长培养基斜面和硫乙醇 酸盐培养基小管各二支，每种培养基其中一支置37。C,另一支置25t:培养，观察3 5天， 菌种生长应纯粹，采用IO倍系列稀释，选择适宜稀释度接种适宜生长琼脂平板，每个稀释度 接种3个，每个接种0.2ml，使菌液均匀分布，晾干后翻转平板，28'C培养48h;选择菌落在 40 200个之间计数，然后将平板平均数乘以稀释倍数除以2，作为配苗参考；
e灭活按细菌培养物体积比(V/V)加入终浓度为0.02%的硫柳汞溶液，30'C灭活2天。
f灭活检验取经灭活的细菌培养物样品，每个样品lml，接种于50ml胰蛋白胨培养基 中，28°C ，培养2天，再从培养物中取样，接种胰蛋白胨培养基琼脂斜面2支，每支接种0.2ml， 28'C下培养3 5天，应无菌生长；
(2) 嗜水气单胞菌培养物的制备
A菌种复苏、复壮用少许蛋白胨培养基将冻干的嗜水气单胞菌稀释后，接种于蛋白胨 悟养基培养；
b种子鉴定及扩大培养取复壮种子划线接种于蛋白胨琼脂平板若干个，置28'C培养 48h，挑取单个形成圆整、隆起、平滑和透明的菌落，由灰白至淡黄色，并有特殊气味，不产 色素的菌落至小5个，接种于蛋白胨培养基，28'C下扩大培养成菌种；
c制苗菌液培养将检验合格的种子按培养基量2%接种量接种置种子罐，以恒温28'C、 40L/min的通气量，搅拌培养20h，再接种置发酵罐,10M3/h通气量，搅拌培养20h，收获 80亿CFU/ml以上培养物；
d纯粹检验、活菌计数与"柱状屈桡杆菌培养物纯粹、活菌计数"方法相同；
e灭活按嗜水气单胞菌菌液体积比(V/V)加入终浓度为0.2%的甲醛溶液，37t灭活2天。
f灭活检验取经灭活的嗜水气单胞菌菌液，每个样品lml，接种于50ml蛋白胨培养基 中，28'C下培养3天，再从蛋白胨培养物中取样，接种蛋白胨琼脂斜面2支，每支接种0.2ml 在28'C下培养3 5天，应无菌生长。
(3) 萤光极毛杆菌培养物的制备
A菌种复苏、复壮用少许蛋白胨培养基将冻干萤光极毛杆菌种稀释后，接种于蛋白胨
5培养基培养；
b种子鉴定及扩大培养取复壮的种子，划线接种于蛋白胨琼脂平板若干个培养，挑取
置28'C培养48h，挑取单个圆形微凸，表面光滑，边缘整齐，灰白色或黄白色菌落至少5个， 接种于蛋白胨液体培养基，28'C，扩大培养成菌种；
c制苗菌液培养将检验合格的种子按蛋白胨培养基量2%接种量接种置种子罐，以恒温 28°C、 40L/min通气量，搅拌培养后20h，再接种置发酵罐，10M3/h通气量，拌搅培养20h 收获80亿CFU/ml以上培养物；
d纯粹检验、活菌计数与"柱状屈桡杆菌培养物纯粹、活菌计数"方法相同； e灭活按菌液体积比(V/V)加入甲醛溶液，使甲醛溶液最终浓度为0.24%， 37°C，灭 活3天；
f灭活检验与"嗜水气单胞菌灭活检验"方法和结果相同；
(4)配苗、乳化在水相罐中配备生理盐水28% 19%,加入检验合格的30 39%柱 状屈桡杆菌培养物，8%嗜水气单胞菌培养物、10%萤光极毛杆菌培养物，搅拌均匀后；加入 灭菌的14。/。MONTANIDEISA763AVG和10%白油混合佐剂，充分混匀后用管线式剪切机乳 化成烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗。
本发明的有益效果是，能批量提供安全、有效、质量可控的草鱼烂鳃、败血、赤皮三联 灭活疫苗。该疫苗为白色油乳剂，注射免疫草鱼能延长抗原在组织内的贮存时间，使抗原缓 慢降解和释放，增强抗原所激发的抗体应答；同时促进免疫细胞的协同作用，从而增强草鱼 对烂鳃病、败血病和赤皮病综合免疫功能，免疫草鱼后烂鳃、败血、赤皮的免疫保护率都达 80%以上。
具体实施方式
实施例1 :
疫苗批号2009001 产量400L
1.制造疫苗的菌种
(1) 柱状屈桡杆菌(Cyo; /2"ga Co/www^)由珠江水产研究所鉴定、保存。1998重新 鉴定检验，验证该菌种可作草鱼烂鳃病疫苗生产菌种。生产使用菌种代次为B代内。保存条 件冻干菌种在4'C保存期为8年。由珠江水产研究所鱼病中心保存，发放；
(2) 嗜水气单胞菌"m^omw/^t/ra;7Mfl) 2002年珠江水产研究所从广东省增城市三， 江镇患病草鱼中分离、鉴定、保存；生产用菌种代次为25代内。保存条件冻干菌种在4'
6C环境中8年。由珠江水产研究所鱼病中心保存，发放；
(3)萤光极毛杆菌(Pwwfito附o"ay ^Zwwece附)1998年从江西南昌县坝上分离到草鱼赤 皮病病原菌萤光极毛杆菌JP802菌株，由珠江水产研究所鉴定和检验，菌种可作草鱼赤皮疫 苗生产菌种；使用代次为引进后第25代内。保存条件冻干菌种在4'C，保存期为8年。由 珠江水产研究所鱼病中心保存，发放。
2. 细菌培养基
(1) 柱状屈桡杆菌培养基按重量百分比计胰蛋白胨0.5%,酵母粉0.05%，牛肉膏 0.02%,乙酸钠0.02%，碳酸氢钠调节pH值至7.4。胰蛋白胨琼脂斜面培养基加入2%琼脂粉；
(2) 嗜水气单胞菌培养基按重量百分比计蛋白胨1%、牛肉膏0。3%、氯化钠0.25%、 酵母粉0.05%、葡萄糖0.5%，磷酸氢二钾0.1%， pH7.4，蛋白胨琼脂斜面培养基加入2%琼脂 粉；
(3) 萤光极毛杆菌培养基按重量百分比计蛋白胨1%、牛肉膏0.4%、氯化钠0.3%、 葡萄糖0.5%，磷酸氢二钾0.1%，酵母粉0.05%、 pH7.5，蛋白胨琼脂斜面培养基加入2%琼脂 粉。
3. 疫苗制造及半成品检验 (1)柱状屈桡杆菌菌液制备
a菌种复苏、复壮将冻干菌种启封后，接入液体胰蛋白胨培养基，28t:下培养24h，再 置摇床振动培养24h;
b种子鉴定及扩大培养取液状菌种，划线接种于胰蛋白胨琼脂平板若干个，置28'C培 养48h，挑取至少5个单独，黄色、假树根状扩散型的菌落，接种于胰蛋白胨液体培养基， 置28"C,扩大培养成3L种菌；
c菌种的纯粹检验菌种取样后置4'C冰箱暂存，样品分别接种于胰胨培养基斜面，硫乙 醇酸盐培养基(T.G)小管各二支，胰蛋白胨培养基斜面、乙醇酸盐培养基小管各一支置37。C; 另一支置25'C,培养3 5天，观察生长纯粹；
d制苗菌液培养配胰蛋白胨培养150L，加入0.1%植物油消泡剂。116'C下灭菌30min, 待罐中培养基温度下降到29。C，接入3L菌种。然后输入过滤除菌空气，气量6M2/11， 28±1°C， 培养21h。收获柱状屈桡杆菌培养物；
e制苗菌液纯粹检验和活菌计数将柱状屈桡杆菌培养物样品，接种于T.G小管、胰蛋 白胨斜面各二支，每支0.2ml。 T.G小管、胰蛋白胨斜面各一支置37t:， 一支置25'C培养， 另取样0.2ml接种酪胨琼脂培养基(G.P)置25'C，均培养观察3 — 5天，生长应纯粹。取柱状屈桡杆菌培养物lml,用灭菌蒸馏水作10倍系列稀释，选择第6、第7管稀释管，各接胰 胨琼脂平板3个，每个接种0.2ml，使菌液均匀分布，晾干后翻转平板，28'C培养48h。选择 第7管，平均50个菌落，乘以稀释倍数除以2得25亿CFU/ml;
f柱状屈桡杆菌培养物灭活按菌液体积比(V/V)加入硫柳汞钠溶液，使硫柳荥的最 终浓度为0.02%，在3(TC灭活2天。灭活期间灭活罐抖搅；
g柱状屈桡杆菌培养物灭活检验抽取lml灭活菌液，接种于50ml， 0.5%胰蛋白胨培 养基小瓶，置28"C下培养3天，然后从50ml小瓶取样移植接种胰胨培养基斜面二支，每支 接种0.2ml， 28'C下培养5天，观察无菌生长。 (2)嗜水气单胞菌菌液制备
a菌种复苏、复壮用少许蛋白胨培养基将冻干的嗜水气单胞菌稀释后，接种于蛋白胨 培养基的斜面若干支；28'C培养24h;
b种子鉴定及扩大培养取斜面菌种，划线接种于蛋白胨琼脂平板若干个，置28'C培养 24h，挑取至少5个单独，形成圆整、隆起、平滑和透明的菌落，由灰白至淡黄色，并有特殊 气味，不产色素的菌落，接种于蛋白胨培养基，28'C下扩大培养成0.7L种子；
c菌种的纯粹检验菌种取样后置4C冰箱保存，样品接种蛋白胨琼脂斜面、接种硫乙酸 盐培养基小管T.G小管各二支，蛋白胨培养基斜面、乙醇酸盐培养基小管各一支置37'C;另 一支置25。C，培养3 5天，观察生长纯粹；
d制苗用菌液制备配蛋白胨培养基35L，加入1%消泡剂，116'C下灭菌30min，待罐中 培养基温度下降到29'C，接入0.7L菌种。然后输入过滤除菌空气，40L/min的通气量，搅拌 培养，28±1°C，培养20h。收获嗜水气单胞菌培养物；
e纯粹检验及活菌计数将嗜水气单胞菌培养物样品，接种于T.G小管、蛋白胨斜面各 二支，每支0.2ml。 T.G小管、蛋白胨斜面各一支置37°C， 一支置25'C培养，另取样0.2ml 接种G,P培养基置25t;，均培养观察3 — 5天，生长应纯粹。取嗜水气单胞菌培养物lml，用 灭菌生理盐水作10倍系列稀释,选择第7管稀释管，接蛋白胨琼脂平板3个，每个接种0.2ml， 使菌液均匀分布，晾干后翻转平板，28'C培养48h。选择第7管，平均186个菌落，乘以稀 释倍数除以2得93亿CFU/ml;
f嗜水气单胞菌培养物灭活接嗜水气单胞菌培养物体积比(V/V)加入甲醛溶液，使甲 醛溶液最终浓度为0.2%，在37'C下灭活2天；
g嗜水气单胞菌培养物灭活检验取灭活的嗜水气单胞菌培养物样品lml，接种于50ml 蛋白胨培养基中，28'C下培养3天，再从蛋白胨培养物中取样，接种蛋白胨琼脂斜面2支，
8每支接种0.2ml在28'C下培养3 5天，无菌生长。
(3) 萤光极毛杆菌菌液制备
a菌种复苏、复壮用少许蛋白胨培养基将冻干的萤光极毛杆菌稀释后，接种于蛋白胨 培养基的斜面若千支；28' C培养24h;
b种子鉴定及扩大培养取斜面菌种，划线接种于蛋白胨琼脂平板若干个，置28'C培养 24h，挑取至少5个单独，圆形微凸，表面光滑，边沿整齐灰白色或黄白色菌落，接种于蛋白 胨培养基，28'C下扩大培养成0.8L种子；
c菌种的纯粹检验菌种取样后置4'C冰箱保存，样品接种蛋白胨琼脂斜面、接种硫乙酸 盐培养基小管(T.G)小管各二支，蛋白胨培养基斜面、乙醇酸盐培养基小管各一支置37'C; 另一支置25'C，培养3 5天，观察生长纯粹；
d制苗用菌液制备配蛋白胨培养基40L，加入1%消泡剂，116'C下灭菌30min，待罐中 培养基温度下降到29'C，接入0。8L菌种。然后输入过滤除菌空气，40L/min的通气量，搅拌 培养，28±rC，培养20h。收获嗜水气单胞菌培养物；
e纯粹检验及活菌计数将萤光极毛杆菌培养物样品，接种于T.G小管、蛋白胨斜面各 二支，每支0.2ml。 T.G小管、蛋白胨斜面各一支置37°C， 一支置25'C培养，另取样0.2ml 接种(G.P)置25。C，均培养观察3 — 5天，生长应纯粹。取萤光极毛杆菌培养物lml，用灭 菌生理盐水作10倍系列稀释，选择第7管稀释管，接蛋白胨琼脂平板3个，每个接种0.2ml， 使菌液均匀分布，晾干后翻转平板，28'C培养48h。选择第7管，平均178个菌落，乘以稀 释倍数除以2得89亿CFU/ml;
f萤光极毛杆菌培养物灭活接萤光极毛杆菌培养物体积比(V/V)加入甲醛溶液，使甲 醛溶液最终浓度为0.24%， 37'C灭活3天；
g萤光极毛杆菌培养物灭活检验取灭活的萤光极毛杆菌养物样品lml，接种于50ml蛋 白胨培养基中，28'C下培养3天，再从蛋白胨培养物中取样，接种蛋白胨琼脂斜面2支，每 支接种0,2ml在28'C下培养3 5天，无菌生长。
(4) 配苗、乳化
a油相罐灭菌将56L MONTANIDE ISA 763AVG， 40L白袖，司本1L灌入油相罐中拌 匀后12rC灭菌30min，冷却至15'C;
b水相罐灭菌配生理盐水86L，加入吐温1L拌匀后121'C灭菌30min，冷却至15'C;
c配苗将144L柱状屈桡杆菌培养物、32L嗜水气单胞菌培养物、40L萤光极毛杆菌培 养物加入置水相罐中与生理盐水充分混匀后，加入至乳化罐中与MONTANIDE ISA763A VG和白油混合佐剂混合；
d乳化分装开动管线式剪切机乳化60min后，定量分装置疫苗，加盖密封，4'C保存。
4.疫苗成品检验
物理性状白色均匀乳剂，静置一段时间后，上层白色乳剂、底部为水沁出层。振摇后 呈均匀乳状液。
无菌检验按《中华人民共和国兽药典》2005年版、第三部附录15页进行，检验结果无 菌生长。
汞类残留量测定按《中华人民共和国兽药典》2005年版、第三部附录24页进行，检验
结果汞类残留量0.0074%。
甲醛含量测定按《中华人民共和国兽药典》2005年版、第三部附录25页进行，检验结
果甲醛残留量0.011%。
安全检验每批疫苗随机抽样3瓶，混合均匀后，以0,2ml/尾，腹腔注射体重13g/尾
草鱼20尾，放水簇箱饲养观察15天，免疫鱼应全部存活，没有不良反应。
效力检验用13g左右的健康草鱼60尾，各肌肉或腹腔注射草鱼细菌性烂鳃、败血、赤
皮三联灭活疫苗0.2ml，在28'C的水体中饲养9天后，连同条件相同的对照草鱼60尾，各随
机分成三个攻毒试验组；每个攻毒试验组，免疫鱼20尾、对照鱼20尾。
草鱼烂鳃病效力检验免疫9天后用柱状屈桡杆菌强毒株腹腔注射攻毒，每尾注射0.88
亿个菌，对照鱼组草鱼死亡18尾，死亡率90%;免疫鱼组死亡2尾，死亡率10%;用以下
公式计算免疫鱼组免疫保护率为88.8%。
免疫保护率=对照组鱼的死亡率-免疫组的死亡^ 100% 光仅 对照组鱼的死亡率
草鱼败血病效力检验免疫12天后用嗜水气单胞菌强毒株腹腔注射攻毒，每尾注射O。
14亿个活菌，对照组草鱼死亡15尾，死亡率75%;免疫鱼组死亡l尾，死亡率5%;用以上
,入
草鱼赤皮病效力检验免疫12天后用萤光极毛杆菌强毒株腹腔注射攻毒，每尾注射l亿
个活菌对照组草鱼死亡13尾，死亡率65%;免疫鱼组死亡l尾，死亡率5%;用以上公式计 算免疫鱼组免疫保护率为92.3%。
么、式计算免疫鱼组免疫保护率为93.3%
10
权利要求
1.一种草鱼细菌性烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗，包括抗原和佐剂，其特征在于所述抗原为如下抗原组合物柱状屈桡杆菌培养物、嗜水气单胞菌培养物、萤光极毛杆菌培养物。
2. 权利要求1所述一种草鱼细菌性烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗，其特征在于所述佐剂为MONTANIDE ISA 763A VG和白油。
3. 权利要求2所述一种草鱼细菌性烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗，其特征在于所述组 分按体积百分比计如下-柱状屈桡杆菌培养物20 30亿CFU/ml， 30 39%， 嗜水气单胞菌培养物80亿CFU/ml ， 8%， 萤光极毛杆菌培养物80亿CFU/ml ， 10%， MONTANIDE ISA 763A VG 14%, 白油10%。
4. 一种草鱼细菌性烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤将柱状 屈桡杆菌培养物，嗜水气单胞菌培养物、萤光极毛杆菌培养物按比例混合，加入生理盐水搅拌均匀后，加入MONTANIDE ISA 763A VG和白油混合佐齐U，充分混匀后乳化成烂鳃、败血、 赤皮三联灭活疫苗。
5. 权利要求4所述一种草鱼细菌性烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗的制备方法，其特征 在于所述柱状屈桡杆菌培养物的制备包括以下步骤-a菌种复苏、复壮将冻干菌种启封后，接入液体胰蛋白胨培养基培养；b种子鉴定及扩大培养取培养菌种，划线接种于胰蛋白胨琼脂平板，28"C培养48h，挑 取至少5个假树根状菌落，接种于胰蛋白胨液体培养基，置28'C扩大培养成菌种；c制苗菌液培养将检验合格的菌种按胰蛋白胨培养基量2%接种到培养罐，以恒温28°C、 6M2/h的通气量培养20 24h收获20 30亿CFU/ml培养物；d灭活按细菌培养物体积比(V/V)加入终浓度为0.02%的硫柳汞溶液，3(TC灭活2天。
6. 权利要求4所述一种草鱼细菌性烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗的制备方法，其特征 在于所述嗜水气单胞菌培养物的制备包括以下步骤a菌种复苏、复壮用少许蛋白胨培养基将冻干的嗜水气单胞菌稀释后，接种于蛋白胨 te"养基培养；b种子鉴定及扩大培养取复壮种子划线接种于蛋白胨琼脂平板若干个，置28'C培养 48h，挑取单个形成圆整、隆起、平滑和透明的菌落，由灰白至淡黄色，并有特殊气味，不产色素的菌落至小5个，接种于蛋白胨培养基，28'C下扩大培养成菌种；c制苗菌液培养将检验合格的种子按培养基量2%接种量接种置种子罐，以恒温28'C、 40L/min的通气量，搅拌培养20h，再接种置发酵罐，10M3/h通气量，搅拌培养20h，收获 80亿CFU/ml以上培养物；d灭活加入甲醛溶液，使其终浓度为0.2%， 37'C灭活2天。
7.权利要求4所述一种草鱼细菌性烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗的制备方法，其特征 在于所述萤光极毛杆菌培养物的制备包括以下步骤a菌种复苏、复壮用少许蛋白胨培养基将冻干萤光极毛杆菌种稀释后，接种于蛋白胨 悟养基i酋养；b种子鉴定及扩大培养取复壮的种子，划线接种于蛋白胨琼脂平板若干个培养，挑取置28'C培养48h，挑取单个圆形微凸，表面光滑，边缘整齐，灰白色或黄白色菌落至少5个， 接种于蛋白胨液体培养基，28°C，扩大培养成菌种；c制苗菌液培养将检验合格的种子按蛋白胨培养基量2%接种量接种置种子罐，以恒温 28°C、 40L/min通气量，搅拌培养后20h，再接种置发酵罐，10M3/h通气量，拌搅培养20h 收获80亿CFU/ml以上培养物；d灭活加入甲醛溶液，甲醛溶液最终浓度为0.24%， 37°C，灭活3天。
全文摘要
本发明涉及预防草鱼细菌性烂鳃、败血、赤皮的疫苗及其制备方法。该疫苗包括柱状屈桡杆菌培养物、嗜水气单胞菌培养物、萤光极毛杆菌培养物，MONTANIDE ISA 763A VG和白油。一种草鱼细菌性烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗的制备方法，将柱状屈桡杆菌培养物，嗜水气单胞菌培养物、萤光极毛杆菌培养物按比例混合，加入生理盐水搅拌均匀后；加入MONTANIDE ISA 763A VG和白油，充分混匀后乳化成烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗。本发明的有益效果是，能批量提供安全、有效、质量可控的草鱼烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗；增强抗原所激发的抗体应答，促进免疫细胞的协同作用，从而增强草鱼对烂鳃病、败血病和赤皮病综合免疫功能，免疫草鱼后烂鳃、败血、赤皮的免疫保护率都达80％以上。
文档编号A61K39/02GK101574516SQ20091003986
公开日2009年11月11日 申请日期2009年5月31日 优先权日2009年5月31日
发明者江小燕, 白岳强, 霞 罗, 许淑英, 邓国成, 黄志斌 申请人:中国水产科学研究院珠江水产研究所