专利名称：：一种治疗慢性肾小球肾炎的药物组合物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，特别是涉及一种治疗慢性肾小球肾炎的药物组合物及其制备方法。
背景技术：
：慢性肾小球肾炎(chronicglomerulon印hritis)简称慢性肾炎，是由多种病因引起、具有不同病理改变、原发于肾小球的一组免疫性炎症性疾病，临床起病隐匿，病情迁延、进展缓慢，病程较长；临床表现以蛋白尿、血尿、高血压及水肿为主，并伴有不同程度的肾功能减退，最终发展为慢性肾衰竭。国际肾脏学会预测，全球每10人中就有一人患有慢性肾病。预计2015年全球约3600万人死于慢性肾脏病引起的心血管疾病。在发达国家，普通人群的患病率为6.5%%—16°/。，美国慢性肾脏病人数己经超过2000万。在我国目前尚缺乏慢性肾病的全国性流行病学调査分析，但北京地区慢性肾病流行病学调查结果显示，慢性肾病患病率为9.3%，知晓率不足10%。表明我国慢性肾病患者人数也异常庞大，慢性肾炎已成为包括中国在内的全球共同关注的重大健康问题。西医治疗慢性肾炎主要采取控制血压、抗凝、激素及免疫抑制剂进行治疗，但激素及免疫抑制剂易反复，毒副作用较大，越来越来的患者开始排斥此疗法。抗凝与控制血压虽然能在一定程度上缓解病情，但无法从根本上解决问题，患者仍然会不可避免地发展至慢性肾衰，导致透析或死亡。
发明内容本发明目的在于提供一种治疗慢性肾小球肾炎的药物组合物及其制备方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明药物组合物的原料药组成为黄蔑450-550重量份，当归200-300重量份，穿山龙330-430重量份，柴胡200-300重量份，石韦250-350重量份，猪苓250-350重量份，水蛭50-100重量份。本发明药物组合物的原料药组成优选为黄芪503重量份，当归252重量份，穿山龙377重量份，柴胡252重量份，石韦302重量份，猪苓302重量份，水蛭76重量份；黄芪470重量份，当归280重量份，穿山龙340重量份，柴胡290重量份，石韦260重量份，猪苓340重量份，水蛭60重量份；黄芪530重量份，当归210重量份，穿山龙420重量份，柴胡210重量份，石韦340重量份，猪苓260重量份，水蛭90重量份。本发明药物组合物制备方法为-黄芪、石韦、猪苓、水蛭加水煎煮2-4次，每次加10-15倍量，煎煮l-2小时，合并煎煮液，滤过，减压浓縮得稠膏；当归、穿山龙、柴胡加50-70%乙醇浸渍提取三次，每次加4-6倍量，浸泡2-4天，合并提取液，减压浓縮得稠膏；将上述两种稠膏合并，按照常规工艺，加入常规辅料制成丸剂、散剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂、注射剂等剂型。本发明药物组合物制备方法优选为黄芪、石韦、猪苓、水蛭加水煎煮3次，每次加12倍量，煎煮1.5小时，合并煎煮液，滤过，减压浓縮得稠膏。当归、穿山龙、柴胡加60%乙醇浸渍提取三次，每次加5倍量，浸泡3天，合并提取液，减压浓縮得稠膏；将上述两种稠膏合并，按照常规工艺，加入常规辅料制成丸剂、散剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂、注射剂等剂型。图l:本发明提取物组对模型大鼠24尿蛋白的影响图2:本发明提取物对模型大鼠血压的影响图3:本发明提取物对模型大鼠肾组织病理改变的影响下述实验例及实施例对本发明做进一步解释，但不构成本发明的限制。(下述实验例中样品均为实施例1方法制备的产品)实验例1本发明药物组合物治疗慢性肾炎的疗效研究1.实验材料动物健康SD大鼠，雄性，体重180220g，SPF级，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号药物本发明药物组合物、无猪苓石韦药物组合物均由中日友好医院临床医学研究所药物药理室提供。仪器代谢笼(苏州市冯氏实验动物设备有限公司)；BV-100血液流变仪(北京泰诺德新技术研究所)，RBP-1大鼠血压记录仪(中日友好医院临床医学研究所)；CD-1000全自动生化分析仪(美国雅培公司);滑走式切片机(日本樱花公司)，BX-51显微镜及DP70图像采集系统(日本奥林巴斯公司)。2.实验方法1.Thyl.1单克隆抗体的制备从液氮中取出冻存的0X-7杂交瘤细胞，快速解冻后加入30ml无血清培养基混匀，离心1000r/分，8min，弃上清加入含10%胎牛血清的1640培养液，吹打混匀，接种到500ml培养瓶，放入37°C，5%0)2温箱培养。当细胞浓度达到2X107ml时，将细胞悬液分装入50ml离心管，离心3000r/min，10min，收集上清液，30000g离心，7min，留取上清，滤器过滤除去细菌及杂质，与上样缓冲液(磷酸钠0.1mo1/1，氯化钠O.15mol/l，pH7.4)按照l:2比例混合；并用100ml上样缓冲液冲洗层析柱；用30ml洗脱缓冲液(甘氨酸0.2mo1/1，pH2.85)洗脱目的抗体；将纯化的抗体，置于Millipore15ml超滤管，离心3000g，4°C，lh，浓縮后的抗体溶解于PBS缓冲液中，并采用考马斯亮蓝G-250染色法(具体操作见尿蛋白的测定)测定蛋白浓度，将其近似作为抗体浓度，保存于-2(TC备用。2.分组与给药实验大鼠40只，适应性喂养1周后随机分为空白组，模型组，本发明药物组合物组，无猪苓石韦药物组合物组4组，每组10只，空白组尾静脉注射生理盐水，其余各组以2.5mg/kg的剂量尾静脉注射ThyL1单克隆抗体，每周1次，连续4周，从造模第1周起，本发明药物组合物组按1.lg/kg、无猪苓石韦药物组合物组按0.8g/kg的剂量灌胃给药，空白组与模型组给予同容积的蒸馏水，每日1次，连续4周，实验结束时各组动物禁食不禁水8-12h，水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，分两份，一份置EDTA抗凝管中保存，另一份离心，分离血清，取肾脏，纵剖为2片，置10%中性福尔马林中固定24h以上进行病理组织学检査。3.检测指标1)24h尿蛋白分别于造模第l，2，3，4周时将大鼠置代谢笼中，收集24h尿液，并记录尿量，将各时间点收集的尿液以3000转/分离心10min，吸取上清，用考马斯亮蓝法检测尿蛋白浓度，根据尿量计算24h尿蛋白。2)血压分别于造模第l，2，3，4周时，使用大鼠血压测量仪测定大鼠血压，按照血压仪说明书操作，连续测定3次，取平均值。3)血生化检测用全自动血生化分析仪测定血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)。4)血液流变学用EDTA抗凝管保存的血浆用血液流变仪测定全血粘度(高切)、全血粘度(低切)、血浆粘度及红细胞压积。5)病理组织学检查取出在10%中性福尔马林液中固定24h以上的肾组织，脱水，包埋，切片，进行PAS与Masson染色，光镜观察肾脏病理改变，并通过评分法进行半定量分析。统计学方法所有计量资料以均数士标准差G±s)表示，应用统计软件SPSS13.0进行0ne-WayAN0VA单因素方差分析，组间两两比较采用LSD检验，P<0.05表示组间差异有统计学意义。4.结果4.1本发明药物组合物对大鼠24h尿蛋白的影响模型组24h尿蛋白从实验第1周起即显著高于空白组，P<0.01，一直持续至第4周，本发明药物组合物与无猪芬石韦药物组合物均能显著降低模型大鼠24h尿蛋白，且本发明药物组合物起效时间与降尿蛋白效果均优于无猪苓石韦药物组合物。与模型组比，*尸<0.05，**尸<0.014.2本发明药物组合物对大鼠血压的影响模型组血压水平与空白组相比从第1周开始显著升高，随时间延长差异不断增加，至第4周时差异最大，本发明药物组合物从第1周起可显著降低模型大鼠血压，而无猪苓石韦药物组合物组仅在第4周对模型大鼠血压有显著降低作用，表明在改善血压方面，本发明药物组合物优于无猪苓石韦药物组合物。与模型组比，*尸<0.05，**尸<0.014.3本发明药物组合物对大鼠血脂的影响与空白组比较，模型组TC与TG水平均显著升高(户<0.01)。本发明药物组合物组和无猪苓石韦药物组合物组的TC与TG水平与模型组相比显著降低，但本发明药物组合物在改善血脂紊乱方面效果更为显著。表l本发明药物组合物对大鼠血脂的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>与模型组比，*尸<0.05，**尸<0.014.4本发明药物组合物对大鼠血液流变学指标的影响模型组大鼠全血粘度高切与低切、血浆粘度及红细胞压积与空白组相比均显著升高，本发明药物组合物组和无猪苓石韦药物组合物组对上述血液流变学指标均有显著改善作用，且本发明药物组合物效果优于无猪苓石韦药物组合物，结果见表2。表2本发明药物组合物对大鼠血液流变学指标的影响组别/7全血粘度(高切)全血粘度(低切)血浆粘度红细胞压积空白组104.52±0.57**15.79±1.98**1.39±0.06**40.24±3.34**模型组107.68±1.0828.13±5.661,55±0.1055.06土5.56本发明组105.33±0.89**18.00±3.58**1.40±0.11**44.28±3.91**无猪苓石组106.14±1.14*22.91±3.66*1.45±0,07*49.59±4.00*与模型组比，*尸<0.05，**尸<0.014.5本发明药物组合物对大鼠总蛋白、白蛋白及肾功的影响与空白组相比，模型组大鼠血总蛋白与白蛋白水平显著降低，血尿素氮与肌酐水平则显著升高，本发明药物组合物组和无猪苓石韦药物组合物能够显著升高模型大鼠的血总蛋白与白蛋白水平，对模型大鼠的血尿素氮与肌酐水平有显著降低作用，本发明药物组合物效果要优于无猪苳石韦药物组合物。表3本发明药物组合物对大鼠总蛋白、白蛋白及肾功的影响组别/2总蛋白白蛋白尿素氮肌酐空白组1061.94±1.31**31.30±0.98**5.38±0.54**65.12±8.24林模型组1057.76±2.7227.70±1.496.87±1.0483.92土11.23本发明药物组合物组1060.99±1,24**30.38±0.76**5.51±0.53**69.68±8.88**无猪苓石韦药物组合物组1059.93±1.32*29.64±1.51*5.76±0.76*71.95±8.40*与模型组比，*尸<0.05，**尸<0.014.6本发明药物组合物对大鼠肾组织病理改变的影响空白组肾小球结构清晰，未见系膜基质扩张及基底膜增厚，肾小管结构8正常，排列整齐，未见扩张及萎縮，间质无炎症和纤维化。模型组大鼠肾小球球囊部分粘连，囊腔增大，肾小球内系膜基质明显扩张，呈弥漫性或结节状，部分肾小球出现局灶节段性硬化，基底膜显著增厚，；部分肾小管扩张，管腔内可见蛋白样物质或蛋白管型，部分区域出现肾小管萎縮。间质可见散在或成片淋巴细胞和单核细胞浸润及纤维化。本发明药物组合物组肾小球改变轻微，系膜轻度扩张，少数肾小管轻度扩张或萎縮，个别区域少量炎性细胞浸润，偶见蛋白管型，未见明显纤维化形成。无猪苓石韦药物组合物组肾小球系膜基质轻度扩张，个别肾小球球囊轻度粘连，部分区域肾小管明显扩张，轻度灶状炎性细胞浸润，少数区域可见有小管萎縮。间质纤维化区域与模型组相比明显减轻，但没有本发明药物组合物组改变明显(见附图)。4.7肾组织病理评分结果模型组大鼠肾小球硬化指数及肾小管纤维化指数与空白组相比显著升高，均为尸<0.01，本发明药物组合物组与无猪苓石韦药物组合物组均可显著降低模型组大鼠的肾小球硬化指数及肾小管纤维化指数，尸L01;且以本发明药物组合物组效果为佳，结果见表6。表4大鼠肾组织病理评分结果(x土s)组别n肾小球硬化指数肾小管间质纤维化指数空白组100.29±0.09**0.18±0.10**模型组102.77±0.422.36±0.63本发明药物组合物组101.20±0.54**1.21±0.55**无猪苓石韦药物组合物组101.74±0.40**1.68±0.56**与模型组比，*尸<0.05，**尸<0.01由结果可以看出，与无猪苓石韦药物组合物相比，本发明药物组合物治疗肾炎作用更为明显，其降压，降脂及改善血液流变学方面均优于无猪苓石韦药物组合物组。实验例2本发明药物组合物利尿作用的比较1.实验材料动物清洁级Wistar大鼠，雄性，体重180220g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号药物本发明药物组合物与无猪苓石韦药物组合物均由中日友好医院临床医学研究所药物药理室提供。仪器代谢笼(苏州冯氏实验动物设备有限公司)2.方法与结果1.分组与给药实验大鼠的筛选大鼠适应性喂养1周后，使其适应代谢笼环境1-2日，观察自由饮水条件下尿量是否稳定，实验前18h，动物禁食不禁水，给药前按2.5ml/100g的剂量以蒸馏水口服2.灌胃，使大鼠体内水平衡，收集2h尿液，筛选尿量超过40%水负荷的动物进行正式实验。分组与给药取筛选合格大鼠40只，随机分为空白组，模型组，无猪苓石韦药物组合物组，本发明药物组合物组，每组10只，空白组与模型组从实验前8天起按lml/100g的剂量给予蒸馏水灌胃，本发明药物组合物组按1.lg/kg的剂量，无猪苓石韦药物组合物组按0.8g/kg的剂量灌胃给药，每日l次，直至实验结束。3.模型制作与指标观察空白组以5ml/100g的剂量予蒸馏水灌胃给药，其余各组给予同剂量的P認aCl溶液，然后压迫大鼠下腹，使其膀胱内余尿排尽，置代谢笼内，收集lh，3h,5h，7h的尿液，记录尿量。4.统计学分析所有计量资料以均数土标准差(3c士s)表示，应用统计软件SPSS13.0进行One-WayANOVA单因素方差分析，组间两两比较采用LSD检验，P〈0.05表示组间差异有统计学意义。5.结果结果显示，模型组大鼠在lh排尿量和总排尿量显著低于空白组，本发明药物组合物与模型组相比，在3h，5h，7h的排尿量与总排尿量显著升高，无猪苓石韦药物组合物仅在3h的排尿量和总排尿量与模型组比有显著升高作用，且效果不如本发明药物组合物。表5不同发明组合物对水负荷大鼠排尿量的影响组别排尿时间(h)总排尿量/;0-11-33-55-7空白组109.81土1.55**2.48±0.70*0.73±0.300.24±0.1913.26±1.87林模型组105.02±1.073.30±0.741.10±0,470.49±0.569.91±1.52本发明组合物组104,26±0.826.95±1.03**2.42±1.03**1.67±0.50**15.31±1.96**无猪苓石韦组104.18±0.794.84±1.71*1.74±0.831.05±0.5911.82±1.96*与模型组比，*尸<0.05，**尸<0.0具体实施方式实施例1:黄芪503g，当归252g，穿山龙377g，柴胡252g，石韦302g，猪苓302g，水蛭76g;黄芪、石韦、猪苓、水蛭加水煎煮3次，每次加12倍量，煎煮1.5小时，合并煎煮液，滤过，减压浓縮得稠膏。当归、穿山龙、柴胡加60%乙醇浸渍提取三次，每次加5倍量，浸泡3天，合并提取液，减压浓縮得稠膏。将上述两种稠膏合并，干燥，粉碎，得干粉，加入1.4倍量的糊精，混匀，加75%乙醇适量制粒，干燥，制成颗粒剂，口服一次8g，每日2次。实施例2:黄芪470g，当归280g，穿山龙340g，柴胡290g，石韦260g，猪茶340g，水蛭60g;黄芪、石韦、猪苓、水蛭加水煎煮4次，每次加10倍量，煎煮l小时，合并煎煮液，滤过，减压浓縮得稠膏。当归、穿山龙、柴胡加70%乙醇浸渍提取3次，每次加6倍量，浸泡4天，合并提取液，减压浓縮得稠膏。将上述两种稠膏合并，干燥，粉碎，得干粉，加入适量辅料，制成片剂，口服每日3次，每次3-6片。实施例3:黄芪530g，当归210g，穿山龙420g，柴胡210g，石韦340g，猪苓260g，水蛭90g;黄芪、石韦、猪苓、水蛭加水煎煮2次，每次加15倍量，煎煮2小时，合并煎煮液，滤过，减压浓縮得稠膏。当归、穿山龙、柴胡加50%乙醇浸渍提取3次，每次加4倍量，浸泡2天，合并提取液，减压浓縮得稠膏。将上述两种稠膏合并，干燥，粉碎，得干粉，加入适当辅料，制成软胶囊，口服每次2-4粒，每日3次。实施例4:黄芪450g，当归200g，穿山龙330g，柴胡200g，石韦280g，終320g，水蛭60g;黄芪、石韦、猪苓、水蛭加水煎煮2次，每次加12倍量，煎煮2小时，合并煎煮液，滤过，减压浓縮得稠膏。当归、穿山龙、柴胡加60%乙醇浸渍提取3次，每次加6倍量，浸泡2天，合并提取液，减压浓縮得稠膏。将上述两种稠膏合并，干燥，粉碎，得干粉，加入1.4倍量的糊精，混匀，加75%乙醇适量制粒，干燥，装胶囊，制成胶囊剂，每日3次，每次3-6粒。实施例5:黄芪470g，当归280g，穿山龙340g，柴胡290g，石韦260g，猪苳340g，水蛭60g;按照常规工艺，加入常规辅料制成丸剂。实施例6:黄芪530g，当归210g，穿山龙420g，柴胡200g，石韦290g，猪苓260g，水蛭100g;按照常规工艺，加入常规辅料制成糖浆剂。实施例7:黄芪450g，当归200g，穿山龙330g，柴胡200g，石韦280g，猪苓320g，水蛭60g;按照常规工艺，加入常规辅料制成滴丸剂。实施例8:黄芪503g，当归252g，穿山龙377g，柴胡252g，石韦302g，猪苓302g，水蛭76g;按照常规工艺，加入常规辅料制成气雾剂。实施例9:黄芪503g，当归252g，穿山龙377g，柴胡252g，石韦302g，猪苓302g，水蛭76g;黄芪、石韦、猪苓、水蛭加水煎煮3次，每次加12倍量，煎煮1.5小时，合并煎煮液，滤过，减压浓縮得稠膏。当归、穿山龙、柴胡加60%乙醇浸渍提取三次，每次加5倍量，浸泡3天，合并提取液，减压浓縮得稠膏。将上述两种稠膏合并，按照常规工艺，加入常规辅料制成注射剂。实施例10:黄芪503g，当归252g，穿山龙377g，柴胡252g，石韦302g，猪苓302g，水蛭76g;黄芪、石韦、猪苓、水蛭加水煎煮3次，每次加12倍量，煎煮1.5小时，合并煎煮液，滤过，减压浓縮得稠膏。当归、穿山龙、柴胡加60%乙醇浸渍提取三次，每次加5倍量，浸泡3天，合并提取液，减压浓縮得稠膏；将上述两种稠膏合并，按照常规工艺，加入常规辅料制成软胶囊剂。权利要求1、一种治疗慢性肾小球肾炎的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为黄芪450-550重量份，当归200-300重量份，穿山龙330-430重量份，柴胡200-300重量份，石韦250-350重量份，猪苓250-350重量份，水蛭50-100重量份。2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为黄贫503重量份，当归252重量份，穿山龙377重量份，柴胡252重量份，石韦302重量份，猪苓302重量份，水蛭76重量份。3、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为黄芪470重量份，当归280重量份，穿山龙340重量份，柴胡290重量份，石韦260重量份，猪苓340重量份，水蛭60重量份。4、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为黄芪530重量份，当归210重量份，穿山龙420重量份，柴胡210重量份，石韦340重量份，猪苓260重量份，水蛭90重量份。5、如权利要求1—4任一所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为黄芪、石韦、猪苓、水蛭加水煎煮2-4次，每次加10-15倍量，煎煮1-2小时，合并煎煮液，滤过，减压浓縮得稠膏；当归、穿山龙、柴胡加50-70%乙醇浸渍提取三次，每次加4-6倍量，浸泡2-4天，合并提取液，减压浓縮得稠膏；将上述两种稠膏合并，按照常规工艺，加入常规辅料制成丸剂、散剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂或注射剂。6、如权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为黄芪、石韦、猪苓、水蛭加水煎煮3次，每次加12倍量，煎煮L5小时，合并煎煮液，滤过，减压浓縮得稠膏；当归、穿山龙、柴胡加60%乙醇浸渍提取三次，每次加5倍量，浸泡3天，合并提取液，减压浓縮得稠膏；将上述两种稠膏合并，按照常规工艺，加入常规辅料制成丸剂、散剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂或注射剂。7、如权利要求l一4任一所述的药物组合物在制备治疗慢性肾小球疾病的药物中的应用。8、如权利要求7所述的应用，其中所述的治疗慢性肾小球疾病是治疗慢性肾小球肾炎，IgA肾病或慢性肾功能不全。全文摘要本发明公开一种治疗慢性肾小球肾炎的药物组合物及其制备方法，本发明药物组合物的原料药组成为黄芪450-550重量份，当归200-300重量份，穿山龙330-430重量份，柴胡200-300重量份，石韦250-350重量份，猪苓250-350重量份，水蛭50-100重量份。本发明药物组合物治疗慢性肾小球肾炎疗效显著，可以升高全血粘度高切与低切、血浆粘度及红细胞压积；降低血总蛋白与白蛋白水平，升高血尿素氮与肌酐水平；改善血液流变；升高3h排尿量和总排尿量。文档编号A61K36/88GK101632772SQ20091009191公开日2010年1月27日申请日期2009年9月1日优先权日2009年9月1日发明者张浩军,平李,赵世萍申请人:中日友好医院