专利名称：一种从木醋液中连续提取抗菌物质和抗氧化物质的方法
技术领域：
本发明属于天然产物提取领域，特别涉及一种从木醋液中连续提取抗菌物质和抗
氧化物质的方法，具体地说是先用有机溶剂从木醋液中萃取出有机酸、酚类等具有抗菌和 抗氧化活性的有机物质混合物，通过调节萃取液的酸碱度以改变萃取液中抗菌物质和抗氧 化物质的存在形式(离子与分子形式间的转化)，再用有机溶剂分别萃取出抗菌物质和抗 氧化物质的一种方法。
背景技术：
木醋液是以木质材料为原料(如木材、木材加工废弃物或森林抚育采伐所产生的 枝桠等)干馏得到的冷凝液经澄清分离出沉淀木焦油后所形成的红褐色或深褐色液体。随 着制炭工业的发展，除木材以外的植物(如竹材、玉米核、松塔、棕榈核、核桃壳、杏核壳和 椰壳等)也可以通过干馏得到与木醋液性质相似的液体。 木醋液来源于天然植物原料，制取过程不污染环境，产品对人畜无毒害作用，属绿 色化学产品。木醋液较好的抗菌、抗氧化作用与其中含有丰富的活性物质有关，其中含量最 多的是有机酸和酚类物质，占有机物总量的60 80%，是木醋液抗菌和抗氧化作用的主要 物质。但由于木醋液中水分含量高，抗菌和抗氧化能力与其它抗菌剂、抗氧化剂比较不够突 出，因而影响了其实际应用。现有技术中虽有利用减压蒸馏法从竹醋液中提取杀菌抑菌物 质，但在提取时去掉了含量较高且具有较强抗氧化作用的酚类物质。
发明内容
针对上述现有技术中木醋液具有水分含量高、抗菌、抗氧化效果差、提取时不能同
时得到抗菌物质和抗氧化物质的不足，本发明提供了一种从木醋液中连续提取抗菌物质和
抗氧化物质的方法。该方法可连续获得抗菌物质和抗氧化物质，同时还大大增加了木醋液
中抗菌物质和抗氧化物质的浓度，提高了木醋液的抗菌活性和抗氧化活性。
实现上述发明目的的技术方案是一种从木醋液中连续提取抗菌物质和抗氧化物
质的方法，其特征在于，包括下列步骤 i)将木醋液原液用体积比为o.3 : i i : i的乙酸乙酯或二氯甲烷或氯仿或乙
醚萃取至无色，萃取液用0. 5 0. 8mol/L NaHC03溶液以1 : 1体积比萃取至少3次，合并 NaHC03萃取液； 2)调节萃取液至原木醋液pH值，以体积比为0.3 : 1 1 : l的乙酸乙酯萃取至 少3次，所得萃取液经减压蒸馏、干燥得到固体即所述的抗菌物质； 3)将萃取后余下的溶液用0. 4 0. 7mol/L Na2C03溶液或0. 7 1. 3mol/LNaOH溶 液以1 : 1体积比萃取至少3次，合并Na2C03或Na0H萃取液； 4)调节萃取液至原木醋液pH值，以体积比为0. 3 : 1 1 : 1的二氯甲烷萃取至 少3次，所得萃取液经常压蒸馏、干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 本发明的方法中所选用的木醋液为高温干馏核桃壳所产生的气体冷凝而成的液体。 本发明的方法中调节萃取液至原木醋液pH值所选用的试剂是3mol/L 1^04溶液。
本发明的方法中提取抗菌物质时其减压蒸馏的条件为4(TC、真空度为0. lMPa， 干燥条件为在常压下、7(TC ;提取抗氧化物质时其常压蒸馏的条件为4(TC，干燥条件为
常压下、5(TC。 本发明从木醋液中连续提取抗菌物质和抗氧化物质的方法的原理是有机酸具有 较强的抗菌活性，酚类具有较强的抗氧化活性。在木醋液原液中，有机酸和酚类物质以分子 形式存在于溶液中，先用有机溶剂(乙酸乙酯或二氯甲烷)将其从木醋液中萃取出，以弱 碱(NaHC03溶液)调节木醋液萃取液的pH值使其中的有机酸(强酸)以离子形式转入到 NaHC03溶液中(而酚类等物质仍留在有机溶剂中)，用H2S04溶液调节至原木醋液pH值时， 有机酸又以分子形式游离出，则可采用有机溶剂(乙酸乙酯)萃取出。木醋液原液萃余液 以强碱(Na2C03溶液或Na0H溶液)萃取时，酚类物质(弱酸)以离子形式转入到Na2C03溶 液或NaOH溶液中，用H2S04溶液调节至原木醋液pH值时，酚类物质又以分子形式游离出，则 可采用有机溶剂(二氯甲烷)萃取出。 本发明通过抗菌试验和抗氧化试验以及有机酸和酚类物质的含量对提取方法进 行了验证；本发明方法的抗菌试验是采用常规的细菌、霉菌和植物病原菌的测试方法，采用 的菌种为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黑曲霉菌、苹果腐烂病原菌和葡萄炭疽病原菌。本发 明方法的抗氧化试验是采用清除DPra 自由基能力和对Fe2+的还原能力的FRAP测定方 法。本发明方法的有机酸含量是采用GC-MS(气相色谱-质谱)分析，酚类物质含量是采用 Folin-Ciocalteu法测定。 与现有技术相比，本发明的方法具有以下优点 1)采用本发明方法可以连续从木醋液中提取出抗菌物质和抗氧化物质； 2)本发明方法是利用溶剂萃取、分配的方法连续从木醋液中提取抗菌物质和抗氧
化物质； 3)从木醋液中提取出的抗菌物质对食品腐败菌和植物病原菌的抑菌效果大大增 强； 4)从木醋液中提取出的抗氧化物质清除DPPH，自由基能力和对Fe"的还原能力 大大增强。 5)本发明方法简单，易操作。
具体实施例方式
以下通过发明人给出的具体实施例对本发明进行进一步描述，以说明本发明的有 益效果，但本发明的保护范围并不仅限于此。 以下实施所采用的试剂均为分析纯。所用的溶液有0. 5 0. 8mol/L的NaHC03溶 液；3mol/L的H2S04溶液；0. 4 0. 7mol/L的Na2C03溶液；0. 7 1. 3mol/L的Na0H溶液； 乙酸乙酯；二氯甲烷。对细菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌)、霉菌(黑曲霉菌)和植物病 原菌(苹果腐烂病原菌、葡萄炭疽病原菌)的抗菌活性测定根据常规的方法(见试验例1) 进行；抗氧化活性测定采用清除DPra 自由基能力的测定方法(见试验例2)和对Fe2+的 还原能力的FRAP测定方法(见试验例3);有机酸含量采用GC-MS (气相色谱-质谱)分析(见试验例4-5);总酚含量采用Folin-Ciocalteu法测定(见试验例6)。
木醋液是以当年生产的核桃壳为原料通过高温干馏所产生的气体冷凝而成的液 体。减压蒸馏设备是BC-R型数字旋转薄膜蒸发仪，干燥设备是实验室常用的鼓风干燥箱。
实施例1 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用体积比为0.5 : 1的乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用0.6mol/L 的NaHC03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/LH2S04溶液调节至 原木醋液pH值，以体积比为0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为 0. lMPa条件下减压蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述O. 6mo1/ L NaHC03萃取后余下的溶液用0. 6mol/L Na2C03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并Na2C03 萃取液并以3mol/LH2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.5 : 1 二氯甲烷萃取3次，所得萃 取液在4(TC条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进 行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大48. 07%、52. 98%、75. 56% ;对测试的 葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小75. 15%和 76. 95%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化 活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大42.03X，对F^+的还原能力比木醋液原液大43. 11%。可 知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例2 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用体积比为1 : 1的乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用0. 7mol/L的 NaHC03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/LH2S04溶液调节至原木 醋液pH值，以体积比为l : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条 件下减压蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.7mol/L NaHC03 萃取后余下的溶液用0.5mol/LNa^03溶液以l : 1体积比萃取3次，合并化20)3萃取液并以 3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以1 : 1 二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40°C 条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进 行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大48. 21%、52. 63%、75. 77% ;对测试的 葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小75. 61 %和 76. 55%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化 活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大41. 33X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大42. 23%。可 知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例3 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用体积比为0. 3 : 1的乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用0. 5mol/L的NaHC03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/LH2S04溶液调节至 原木醋液pH值，以体积比为0.3 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为 0. lMPa条件下减压蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述O. 5mo1/ L NaHC03萃取后余下的溶液用0. 4mol/L Na2C03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并Na2C03 萃取液并以3mol/LH2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.3 : 1 二氯甲烷萃取3次，所得萃 取液在4(TC条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行 抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠 杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大46. 58%、50. 63%、73% ;对测试的葡萄炭疽 病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。 (mg/mL)比木醋液原液小73. 91 %和75. 21 % 。 可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。 按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化 活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大41. 16X，对F^+的还原能力比木醋液原液大42.01X。可 知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例4 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用体积比为0.5 : 1的乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用0.8mol/L 的NaHC03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/LH2S04溶液调节至 原木醋液pH值，以体积比为0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为 0. lMPa条件下减压蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述O. 8mo1/ L NaHC03萃取后余下的溶液用0. 7mol/L Na2C03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并Na2C03 萃取液并以3mol/LH2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.7 : 1 二氯甲烷萃取3次，所得萃 取液在4(TC条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进 行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大47. 11%、50. 03%、72. 51% ;对测试的 葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小73. 51 %和 74. 03%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化 活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大41. 79X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大42. 81%。可 知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例5 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用0. 5 : 1的二氯甲烷萃取至无色，萃取液用0. 6mol/L的NaHC03 溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液 pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压 蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.6mol/L NaHC03萃取后余 下的溶液用0. 6mol/L Na2C03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并Na2C03萃取液并以3mo1/ L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.5 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大47. 97%、52. 65%、75. 09% ;对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小74. 22 %和75. 74%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. OlOmg/mL)对DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大41. 93X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大42. 63%。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例6 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用1 : 1的二氯甲烷萃取至无色，萃取液用0. 7mol/L的NaHC03溶液以l : l体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H^04溶液调节至原木醋液pH值，以l : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0. 7mol/L NaHC(^萃取后余下的溶液用0. 5mol/L Na2C03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并Na2C03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以1 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大48. 11%、52. 97%、75. 27% ;对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小74. 62%和75. 96%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大41. 03X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大41. 85%。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例7 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用0. 3 : 1的二氯甲烷萃取至无色，萃取液用0. 5mol/L的NaHC03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.3 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.5mol/L NaHC03萃取后余下的溶液用0. 4mol/L Na2C03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并Na2C03萃取液并以3mo1/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.3 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大46. 21%、50. 39%、72. 77% ;对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小73. 39 %和74. 91%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。 按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. OlOmg/mL)对DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大41. 08X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大41. 93%。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例8 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用0. 5 : 1的二氯甲烷萃取至无色，萃取液用0. 8mol/L的NaHC03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.8mol/L NaHC03萃取后余下的溶液用0. 7mol/L Na2C03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并Na2C03萃取液并以3mo1/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.7 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大46. 91%、50. 68%、72. 97% ;对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小73. 57 %和
75. 11%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。 按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大41. 91X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大42. 59%。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例9 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用0. 5 : 1的氯仿萃取至无色，萃取液用0. 6mol/L的NaHC03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.6mol/L NaHC03萃取后余下的溶液用1. 3mol/L NaOH溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.5 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大45. 57%、51. 22%、73. 09% ;对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小74. 01 %和75. 31%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大42. 75X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大43. 69%。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例10 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用1 : 1的氯仿萃取至无色，萃取液用0. 7mol/L的NaHC03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以l : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0. 7mol/L NaHC(^萃取后余下的溶液用1. Omol/L NaOH溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以l : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大45. 91%、51. 38%、73. 23% ;对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小74. 19%和75. 52%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大43. 13X，对F^+的还原能力比木醋液原液大43.91X。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例11 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用0. 3 : 1的氯仿萃取至无色，萃取液用0. 5mol/L的NaHC03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.3 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.5mol/L NaHC03萃取后余下的溶液用0. 9mol/L NaOH溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.3 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大44. 37%、50. 67%、73. 26% ;对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小73. 15%和74. 75%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大41. 51X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大42. 43%。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例12 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用O. 5 : 1的氯仿萃取至无色，萃取液用O. 8mol/L的NaHC03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.8mol/L NaHC03萃取后余下的溶液用0. 7mol/L NaOH溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.7 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大43. 33%、50. 26%、71. 29% ;对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小72. 56 %和73. 18%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大42. 67X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大43. 61%。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例13 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用O. 5 : 1的乙醚萃取至无色，萃取液用0.6mol/L的NaHC03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.6mol/L NaHC03萃取后余下的溶液用1. 3mol/L NaOH溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以0.5 : 1的二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大41. 62%、46. 36%、70. 56% ;对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小70. 11%和71. 97%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大40. 02X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大41. 52%。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例14 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用1 : 1的乙醚萃取至无色，萃取液用0. 7mol/L的NaHC03溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以l : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0. 7mol/L NaHC(^萃取后余下的溶液用1. Omol/L NaOH溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值，以l : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大42. 58%、48. 63%、71.79% ;对测试的 葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小71. 14%和 72. 21%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化 活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大43. 66X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大43. 49%。可 知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例15 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用0. 3 : 1的乙醚萃取至无色，萃取液用0. 5mol/L的NaHC(^溶液以 1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值， 以0.3 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压蒸馏、 在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.5mol/L NaHC03萃取后余下的 溶液用0. 9mol/L NaOH溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2S04 溶液调节至原木醋液pH值，以0.3 : 1的二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下常 压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进 行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大40. 97%、42. 65%、68. 09% ;对测试的 葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小68. 22 %和
69. 74%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。 按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化 活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大39. 83X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大40. 37%。可 知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例16 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用O. 5 : 1的乙醚萃取至无色，萃取液用0.8mol/L的NaHC03溶液以 1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液pH值， 以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压蒸馏、 在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.8mol/L NaHC03萃取后余下的 溶液用0. 7mol/L NaOH溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2S04 溶液调节至原木醋液pH值，以0.7 : 1的二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下常 压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进 行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大40. 12%、41.05%、68. 31% ;对测试的 葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小69. 62 %和
70. 23%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。 按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化 活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自由基的清除率比木醋液原液大41. 52X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大41. 89%。可 知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例17 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用1 : 1的二氯甲烷萃取至无色，萃取液用0. 6mol/L的NaHC03溶 液以l : l体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H^04溶液调节至原木醋液pH 值，以l : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压蒸馏、 在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.6mol/L NaHC03萃取后余下的 溶液用0. 9mol/L NaOH溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2S04 溶液调节至原木醋液pH值，以1 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下常压蒸 馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进 行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大49. 12%、53. 15%、75. 19% ;对测试的 葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小74. 39 %和 75. 03%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化 活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大42. 71X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大43. 55%。可 知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例18 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用0. 5 : 1的二氯甲烷萃取至无色，萃取液用0. 7mol/L的NaHC03 溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液 pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压 蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.7mol/L NaHC03萃取后余 下的溶液用1. lmol/L NaOH溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H^(^溶液调节至原木醋液pH值，以0.5 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下 常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进 行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大47. 21%、52. 39%、74. 77% ;对测试的 葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小74. 39%和 75. 91%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化 活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大43. 96X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大43. 91%。可 知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例19 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用1 : 1的乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用0. 6mol/L的NaHC03溶 液以l : l体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H^04溶液调节至原木醋液pH值，以l : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压蒸馏、 在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.6mol/L NaHC03萃取后余下的 溶液用1. 3mol/L NaOH溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2S04 溶液调节至原木醋液pH值，以1 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下常压蒸 馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进 行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大48. 21%、53. 39%、75. 77% ;对测试的 葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小75. 39 %和 76. 91%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化 活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大43. 36X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大43. 81%。可 知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例20 :抗菌物质和抗氧化物质的提取 将木醋液原液用0. 5 : 1的乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用0. 5mol/L的NaHC03 溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液 pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压 蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.5mol/L NaHC03萃取后余 下的溶液用0. 7mol/L NaOH溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H^(^溶液调节至原木醋液pH值，以0.5 : 1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在4(TC条件下 常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。 按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进 行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大48. 35%、53. 04%、75. 82% ;对测试的 葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC5。(mg/mL)比木醋液原液小75. 27 %和 76. 36%。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化 活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0. 010mg/mL)对DPffl 自 由基的清除率比木醋液原液大41. 75X，对Fe"的还原能力比木醋液原液大42. 48%。可 知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
试验例1 :抗菌试验测定方法 细菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌)培养基蛋白胨6g，牛肉膏2.5g，酵母膏3g， 琼脂20g，水1000mL， pH7. 0 ; 霉菌(黑曲霉菌)培养基马铃薯200g，葡萄糖20g，氯化钠5g，琼脂20g，水 1000mL，自然pH。 菌悬液或孢子悬液制备预先将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌菌种分 别用其适宜的斜面培养基进行活化，然后各挑取四环菌苔，用无菌水分别制成含菌数约 1Q9cfu/mL的菌悬液，备用。
将固体培养基溶化倒入各培养平皿，待冷却凝固后，加入0. lmL金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌悬液以及黑曲霉菌孢子悬液，然后用无菌涂布棒涂布均匀。将直径为6mm的消毒 滤纸片放入木醋液原液及其提取物(样液)中浸泡12小时后，再等距离、平稳地将3个浸 泡有样液的滤纸片放在含菌的固体培养基平面上，以无菌水作为对照。每个处理重复3次， 最后将各皿放入各种菌适宜的温度培养。金黄色葡萄球菌和大肠杆菌采用37t:，培养24h ; 黑曲霉菌采用2『C，培养72h。取出后，测量抗菌圈直径。
抗菌圈直径(cm)=测量直径平均值-0. 6 ; 以上方法参考文献程丽娟，薛泉宏，2000微生物学实验技术，西安世界图书出 版社出版所述方法进行。 对葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的抑制作用采用菌丝生长速率法。将木醋液 原液及其木醋液提取物用无菌水配制成一定浓度的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基。对照 样培养基为同等体积的无菌水和PDA培养基混合。在预实验的基础上，选择合适的5个质量 浓度梯度，每个设3次重复，接入生长旺盛的直径为6mm的葡萄炭疽病原菌(Gloeosporium fructige皿m)、苹果腐烂病原菌(Valsa ceratosperma)菌饼，在25"C条件下培养，定期观 察并测定菌落直径，每个菌落十字交叉测2个直径，以其平均数代表菌落大小。用下列公式 计算菌丝生长抑制率 菌落直径(cm)=测量菌落直径平均值-0. 6 ;抗菌率(％ )=(对照菌落直径-样液处理菌落直径)/对照菌落直径X100 所得数据经Finney机率值分析法用DPS统计软件求出EC5。值，对各种植物病原菌 的抑制效果以ECs。表示。 以上方法参考文献慕立义，1994，植物化学保护研究方法.北京中国农业出版 社出版所述方法进行。
试验例2:清除DPra 自由基能力测定 在2. OmL 60iimol/L DPK1 无水乙醇溶液中分别加入3mL—定浓度的木醋液原 液或木醋液提取物，用力摇匀后于室温下放置30min，测定其在517nm下的吸光值(As);以 3mL水代替样品为空白对照(A。)；以3mL样品与2mL无水乙醇混合液为样品对照(Ax)，以消 除样品本身颜色的影响；以3mL水和2mL无水乙醇的混合液调仪器零点。每个样品每个浓 度重复3次，取平均值。清除率按下式计算
DPPH 清除率(% ) = [A。-(As_Ax)]/A。X100% 以上方法参考文献牛鹏飞，仇农学，杜寅.2008.苹果渣中不同极性多酚的分离 及体外抗氧化活性研究，农业工程学报，24(3) :237-242所述方法进行。
试验例3 :FRAP法测定木醋液的还原能力 取一定浓度的木醋液原液或木醋液提取物各2mL，加入3mL TPTZ工作液，混合后 于37t:反应，30min后，于593nm处测定吸光度值和还原力标准曲线，计算FeS04浓度，以 FeS04浓度(mg/L)表示木醋液的还原能力大小。 以上方法以及TPTZ工作液的配制和还原力标准曲线的制作参考文献牛鹏飞，仇 农学，杜寅.2008.苹果渣中不同极性多酚的分离及体外抗氧化活性研究.农业工程学报， 24(3) :237-242所述方法进行。
试验例4 :木醋液原液的化学组成
采用气-质联用仪(GC-MS)测定了原木醋液的化学组成。气-质联用测定条件 将脱水木醋液或木醋液提取物用乙醚稀释后，直接进行GC-MS分析。气相色谱条件DB-WAX 毛细管柱(30mX0. 25mmXO. 25 y m)，进样口温度220°C ，柱温60°C ，恒温2min后，以6. 0°C / min速度升温至24(TC，恒温8min。分流进样80 : 1。载气流速1. OmL/min。质谱条件EI 源，电子能量70eV，离子源温度25(TC，质量扫描范围35 400amu。质谱标准库NIST库。
结果见表5。由表5可以看出，木醋液原液中含量最多的是有机酸和酚类物质，其 中有机酸含量为32. 46%。 表5木醋液原液化学成分的GC-MS分析结果
:0127]序号化合物名称 相对含量/%
:0128] 1 酮类(Ketones) 6.42
:0129] 2 有k酸类(organic acid) 32.46
:0130] 3 呋喃及其衍生物(Furan and pyran derivatives) 5.56
:0131] 4 酯类(esters) 0.98
:0132] 5 酚类(Phenol and derivatives) 39.34
:0133] 6 醇(Alcohols) 0.40
:0134] 7 醛(Aldehydes) 0. 37
:0135] 8 烷芳醚(Alkyl aryl ether) 7.9
:0136] 9 含氮化合物(Nitrogenated compounds) 0.33 试验例5从木醋液中提取的抗菌物质的化学组成 将木醋液原液用0. 5 : 1的乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用0. 6mol/L的NaHC03 溶液以1 : 1体积比萃取3次，合并NaHC03萃取液并以3mol/L H2S04溶液调节至原木醋液 pH值，以0.5 : 1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在4(TC、真空度为0. lMPa条件下减压 蒸馏、在常压、7(TC下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将此物质采用上述试验例4相同的 气-质联用测定条件测定了化学组成，结果见表6。由表6可以看出，提取出的抗菌物质中 有机酸含量提高到78. 21%，其它物质的含量都有很大程度降低。
表6从木醋液中提取出的抗菌物质的GC-MS分析结果序号化合物名称相对含1酮类(Ketones)4. 352有机酸类(organic acid)78. 213呋卩南及其衍生物(Furan and pyran derivatives)1. 714酯类(esters)0. 355酷类(Phenol and derivatives)13. 61 试验例6木醋液原液及其提取的抗氧化物质的总酚含量 将试验例5中0. 6mol/L NaHC03萃取后余下的溶液用0. 6mol/L Na2C03溶液以 1 : 1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并调节至原木醋液pH值，以0.5 : l二氯甲烷萃取 3次，所得萃取液在4(TC条件下常压蒸馏，在常压、5(TC下干燥得到固体即所述的抗氧化物 质。按照Folin-Ciocalteu法(参考文献钱华等，竹醋液中酚类化合物Folin-Ciocalteu 法测定[J].林产化学与工业.2007,10(27) :105-108)测定了此物质的总酚含量。
结果见表7。由表7可以看出，提取出的抗氧化物质中酚类物质的含量比木醋液原
液有很大程度提高。 表7总酚含量测定结果
样品总酚浓度/(mg/g)木醋液原液462. 170.4mol,化20)3萃取液1036.210.5mol,化20)3萃取液1168.840.6mol,化20)3萃取液1247. 990.7mo1,化20)3萃取液1121. 010.7mo1,Na0H萃取液1186.320.9mo1,Na0H萃取液1197. 591.Omol,Na0H萃取液1398.781.lmol,Na0H萃取液1288.751.3mo1,1Na0H萃取液1186.9权利要求
一种从木醋液中连续提取抗菌物质和抗氧化物质的方法，其特征在于，包括下列步骤1)将木醋液原液用体积比为0.3∶1～1∶1的乙酸乙酯或二氯甲烷或氯仿或乙醚萃取至无色，萃取液用0.5～0.8mol/L NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取至少3次，合并NaHCO3萃取液；2)调节萃取液至原木醋液pH值，以体积比为0.3∶1～1∶1的乙酸乙酯萃取至少3次，所得萃取液经减压蒸馏、干燥得到固体即所述的抗菌物质；3)将萃取后余下的溶液用0.4～0.7mol/L Na2CO3溶液或0.7～1.3mol/LNaOH溶液以1∶1体积比萃取至少3次，合并Na2CO3或NaOH萃取液；4)调节萃取液至原木醋液pH值，以体积比为0.3∶1～1∶1的二氯甲烷萃取至少3次，所得萃取液经常压蒸馏、干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
2. 根据权利要求1所述的一种从木醋液中连续提取抗菌物质和抗氧化物质的方法，其 特征在于，所述的木醋液为高温干馏核桃壳所产生的气体冷凝而成的液体。
3. 根据权利要求1所述的从木醋液中连续提取抗菌物质和抗氧化物质的方法，其特征 在于，调节萃取液至原木醋液pH值所用的试剂是3mol/L H2S04溶液。
4. 根据权利要求1所述的从木醋液中连续提取抗菌物质和抗氧化物质的方法，其特征 在于，步骤2)中所述的减压蒸馏的条件为4(TC、真空度为0. lMPa ;所述的干燥条件为在 常压下、7(TC。
5. 根据权利要求1所述的从木醋液中连续提取抗菌物质和抗氧化物质的方法，其特征在于，步骤4)中所述的常压蒸馏的条件为4(TC ;所述的干燥条件为在常压下、5(TC。
全文摘要
本发明公开了一种从木醋液中连续提取抗菌物质和抗氧化物质的方法，该方法是将木醋液原液用乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取至少3次，合并NaHCO3萃取液并调节至原木醋液pH值，以1∶1的乙酸乙酯萃取至少3次，所得萃取液经减压蒸馏、干燥得到固体即抗菌物质，将余下的溶液用Na2CO3溶液以1∶1体积比萃取至少3次，合并Na2CO3萃取液并调节至原木醋液pH值，用二氯甲烷萃取至少3次，所得萃取液经常压蒸馏、干燥得到固体即抗氧化物质。本发明提取出的抗菌物质和抗氧化物质比木醋液原液具有更强的抑菌和抗氧化效果，可广泛应用于农业、食品、日化、医药等领域。
文档编号A61P31/04GK101697738SQ200910218609
公开日2010年4月28日 申请日期2009年10月27日 优先权日2009年10月27日
发明者刘胜臣, 尉芹, 张珊珊, 施琳, 薛雷, 马希汉 申请人:西北农林科技大学