人参皂苷Rh₂提取物及制备方法

专利名称：人参皂苷Rh₂提取物及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取物及其制备，特别涉及人参皂苷他2提取物及其制备。
背景技术：
人参在治疗心脑血管疾病方面，有许多报道。人参次苷类成分，可治疗冠心病和缺血性中风。人参皂苷他2为人参类皂苷经水解产生的次级皂苷，药效学研究表明人参皂苷 他2对肝癌、黑色素瘤B16、宫颈癌及肉瘤S180等癌细胞的增殖有显著的特异性的抑制作 用。其作用机理为在癌细胞增殖过程中，经人参皂苷他2作用，使癌细胞停止在一定的增 殖期，并促使其逆转为正常细胞。现有技术分离人参皂苷Μι2的效果不佳，本发明人在对人参皂苷Μι2提取物进行 研究过程中，采用新的分离技术，试验出一组新的人参皂苷他2提取物及其制备方法，制备 的人参皂苷他2提取物具有疗效高，纯度高，吸收好，质量稳定，同时制备方法分离效果佳， 含量高，工艺简单，操作方便，成本低廉，适合工业化生产。

发明内容
本发明提供一种人参皂苷他2提取物。本发明的人参皂苷他2提取物，制备方法如下步骤1、含有人参皂苷类成分的药材用水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，用乙 醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得总皂苷；步骤2、步骤1得到的总皂苷溶于酸溶液中反应，反应完成后调节PH至中性，收集 沉淀物；步骤3、沉淀物用乙醇溶解，拌入反相硅胶中，进行反相硅胶柱层析，用乙腈水混合 液进行洗脱，收集富含人参皂苷他2的流份，浓缩即得；其中，步骤1中所述大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂，所述乙醇范 围为 30-95% ；步骤2中所述的酸溶液选自盐酸、硫酸或乙酸溶液，步骤3所述乙腈水混合液的比例为10-80 %。优选的制备方法如下步骤1、选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参或人参叶等含有人参皂苷类成 分的药材经水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用 70-95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至干得总皂苷；步骤2、、将总皂苷溶于ΡΗ1.0左右的酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应完成后调 节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、沉淀物用乙醇溶解，拌入反相硅胶中，进行反相硅胶柱层析，用30-80%的 乙腈水混合液进行洗脱，收集富含人参皂苷他2的流份，浓缩即得。
更优选的制备方法如下步骤1、选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参或人参叶等含有人参皂苷类成 分的药材用水提取2-3次，每次1-2小时，每次加水8-12倍量，提取液通过大孔吸附树脂 柱，先用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用80-90%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至干 得总皂苷；步骤2、将总皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应完 成后调节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的反相硅胶中，进行反相 硅胶柱层析，用40-70%的乙腈水混合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参 皂苷他2的流份，浓缩即得。本发明还包括人参皂苷他2提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明最优选的制备方法在本发明实施例中。本发明还包括用本发明的人参皂苷他2提取物制备的药物组合物，所述药物组合 物是用上述人参皂苷他2提取物作为药物活性成分制备成的药物制剂。本发明的药物组合 物，根据需要可以含有药物可接受的载体，其中人参皂苷他2提取物作为药物活性成分，其 在制剂中所占重量百分比可以是0. 1-99.9%，其余为药物可接受的载体。本发明的药物制 剂组合物，以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊 的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋，注射剂的每支等。本发明的药物组合物可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括片剂、糖衣片剂、 薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸 剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴 剂、贴剂。本发明的药物组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充 剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包 括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬 脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。可通过混合，填充，压片等常用 的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那 些组合物中。口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂， 或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含 有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基 纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉 伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性 酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需 要，可含有常规的香味剂或着色剂。对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体 和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载 体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉齐U、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这 种组合物冰冻，并在真空下将水除去。本发明的药物组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载 体，所述药物可接受的载体选自甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐 酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA 二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋 酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、 麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及 其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性 剂、聚乙二醇、环糊精、β -环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。本发明的药物组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服三次，每 次1-20剂，如1-20袋或粒或片，每剂Img-IOOOmgo以下通过实验数据说明本发明的有益效果。人参皂苷他2注射液经药效学实验证明对小鼠多种移植实验性肿瘤有明显的抑 制作用，50、25、12. 5mg/kg人参皂苷Rh2注射液对小鼠肉瘤(S180)、肝癌A22 (Hep · A22)、 艾氏腹水癌(ESC)、肺癌(Lewis)均有明显的抑制作用；人参皂苷Μι2注射液对荷瘤小鼠 腹腔巨噬细胞吞噬功能和体液免疫功能均有明显的增强作用，并可显著提高NK细胞活性， 40mg/kg人参皂苷他2注射液既可促进脾细胞淋转，又可明显提高白细胞介素-2(IL-2)活 性。有关试验表明，本发明的人参皂苷他2提取物比现有技术疗效高，纯度高，产率 高，吸收好，质量稳定，用途新颖，同时制备方法工艺简单，操作方便，成本低廉，适合工业化生产。
具体实施例方式下面以具体来说明本发明，实施例是为了便于理解本发明，而不以任何方式限制 本发明的权利要求和核心内容。实施例1人参皂苷他2提取物的制备步骤1、西洋参叶用水提取2次，每次2小时，每次加水10倍量，提取液通过大孔吸 附树脂柱，先用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用85%乙醇洗脱，收集85%乙醇洗脱液， 浓缩至干得总皂苷；步骤2、将总皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的盐酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应 完成后调节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的反相硅胶中，进行反相 硅胶柱层析，用45%的乙腈水混合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷 Rh2的流份，浓缩即得。实施例2人参皂苷他2提取物的制备步骤1、西洋参用水提取3次，每次1小时，每次加水10倍量，提取液通过大孔吸附 树脂柱，先用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用30%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至干 得总皂苷；步骤2、将总皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的盐酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应完成后调节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗 品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的反相硅胶中，进行反相硅胶柱层析，用60%的乙腈水混 合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷Μι2的流份，浓缩即得。实施例3人参皂苷他2提取物的制备步骤1、三七叶用水提取2次，每次2小时，每次加水10倍量，提取液通过大孔吸附 树脂柱，先用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用95 %乙醇洗脱，收集95 %乙醇洗脱液，浓 缩至干得总皂苷；步骤2、将总皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的盐酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应 完成后调节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的反相硅胶中，进行反相 硅胶柱层析，用50%的乙腈水混合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷 Μι2的流份，浓缩即得。实施例4人参皂苷他2提取物的制备步骤1、三七用水提取1次，每次3小时，每次加水10倍量，提取液通过大孔吸附树 脂柱，先用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用75 %乙醇洗脱，收集75 %乙醇洗脱液，浓缩 至干得总皂苷；步骤2、将总皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的盐酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应 完成后调节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的反相硅胶中，进行反相 硅胶柱层析，用60%的乙腈水混合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷 Rh2的流份，浓缩即得。实施例5人参皂苷他2提取物的制备步骤1、人参叶用水提取2次，每次2小时，每次加水8倍量，提取液通过大孔吸附 树脂柱，先用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用90 %乙醇洗脱，收集90 %乙醇洗脱液，浓 缩至干得总皂苷；步骤2、将总皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的盐酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应 完成后调节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的反相硅胶中，进行反相 硅胶柱层析，用70%的乙腈水混合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷 Rh2的流份，浓缩即得。实施例6人参皂苷他2提取物的制备步骤1、人参用水提取3次，每次1小时，每次加水12倍量，提取液通过大孔吸附树 脂柱，先用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用75 %乙醇洗脱，收集75 %乙醇洗脱液，浓缩 至干得总皂苷；步骤2、将总皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的盐酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应 完成后调节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗 品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的反相硅胶中，进行反相硅胶柱层析，用55%的乙腈水混 合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷Μι2的流份，浓缩即得。实施例7人参皂苷他2提取物的制备
步骤1、人参叶经水提取，提取液通过AB-8大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，洗脱至 流出液近无色，继用40%乙醇洗脱，收集40%乙醇洗脱液，浓缩至干得总皂苷；步骤2、将总皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的盐酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应 完成后调节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的反相硅胶中，进行反相 硅胶柱层析，用50%的乙腈水混合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷 Rh2的流份，浓缩即得。实施例8人参皂苷他2提取物的制备步骤1、西洋参叶经水提取，提取液通过DlOl大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，洗脱 至流出液近无色，继用70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，浓缩至干得总皂苷；步骤2、将总皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的盐酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应 完成后调节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的反相硅胶中，进行反相 硅胶柱层析，用40%的乙腈水混合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷 Rh2的流份，浓缩即得。实施例9人参皂苷他2提取物的组合物以本发明的人参皂苷他2提取物为药物活性成分，根据制剂学常规技术，制备成 人参皂苷他2提取物的药物制剂组合物，如片剂，胶囊，注射剂等。实施例10本发明人参皂苷Μι2提取物的含量测定本发明的实施例1的人参皂苷他2提取物，人参皂苷Rh2含量为40 %。实施例11本发明人参皂苷他2提取物的抗肿瘤活性比较试验分两组，用现有技术中的提取方法得到的人参皂苷他2提取物和本发明最优 选的人参皂苷Rh2提取物进行抗肿瘤活性对比，证明本发明的人参皂苷Μι2提取物在小鼠 肉瘤(S180)、肝癌A22 0fep*A22)、艾氏腹水癌(ESC)、肺癌(Lewis)等何瘤小鼠上抗肿瘤活 性更高。
权利要求
1.一种人参皂苷他2提取物，其特征在于，制备方法如下步骤1、含有人参皂苷类成分的药材用水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，用乙醇洗 脱，收集洗脱液，浓缩至干，得总皂苷；步骤2、步骤1得到的总皂苷溶于酸溶液中反应，反应完成后调节PH至中性，收集沉淀物；步骤3、沉淀物用乙醇溶解，拌入反相硅胶中，进行反相硅胶柱层析，用乙腈水混合液进 行洗脱，收集富含人参皂苷他2的流份，浓缩即得；其中，步骤1中所述大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂，所述乙醇范围为 30-95% ；步骤2中所述的酸溶液选自盐酸、硫酸或乙酸溶液， 步骤3所述乙腈水混合液的比例为10-80%。
2.权利要求1的人参皂苷Μι2提取物，其特征在于，制备方法如下步骤1、选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参或人参叶等含有人参皂苷类成分 的药材经水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用 70-95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至干得总皂苷；步骤2、、将总皂苷溶于PHI. 0左右的酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应完成后调节 PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、沉淀物用乙醇溶解，拌入反相硅胶中，进行反相硅胶柱层析，用10-80 %的乙腈 水混合液进行洗脱，收集富含人参皂苷他2的流份，浓缩即得。
3.权利要求1的人参皂苷Μι2提取物，其特征在于，制备方法如下步骤1、选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参或人参叶等含有人参皂苷类成分的 药材用水提取2-3次，每次1-2小时，每次加水8-12倍量，提取液通过大孔吸附树脂柱，先 用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用80-90%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至干得总皂 苷；步骤2、将总皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应完成后 调节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的反相硅胶中，进行反相硅胶 柱层析，用50-80%的乙腈水混合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷 Μι2的流份，浓缩即得。
4.含权利要求1的人参皂苷Μι2提取物的药物组合物。
5.权利要求1的人参皂苷Μι2提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
6.权利要求1的人参皂苷Μι2提取物的制备方法，其特征在于，步骤如下步骤1、含有人参皂苷类成分的药材用水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，用乙醇洗 脱，收集洗脱液，浓缩至干，得总皂苷；步骤2、步骤1得到的总皂苷溶于酸溶液中反应，反应完成后调节PH至中性，收集沉淀物；步骤3、沉淀物用乙醇溶解，拌入反相硅胶中，进行反相硅胶柱层析，用乙腈水混合液进 行洗脱，收集富含人参皂苷他2的流份，浓缩即得；其中，步骤1中所述大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂，所述乙醇范围为30-95% ；步骤2中所述的酸溶液选自盐酸、硫酸或乙酸溶液， 步骤3所述乙腈水混合液的比例为10-80%。
7.权利要求6的制备方法，其特征在于，步骤如下步骤1、选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参或人参叶等含有人参皂苷类成分的 药材经水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用85% 乙醇洗脱，收集85%乙醇洗脱液，浓缩至干得总皂苷；步骤2、、将总皂苷溶于PHI. 0左右的酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应完成后调节 PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、沉淀物用乙醇溶解，拌入反相硅胶中，进行反相硅胶柱层析，用40-70 %的乙腈 水混合液进行洗脱，收集富含人参皂苷他2的流份，浓缩即得。
8.权利要求6的制备方法，其特征在于，步骤如下步骤1、选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参或人参叶等含有人参皂苷类成分的 药材用水提取2-3次，每次1-2小时，每次加水8-12倍量，提取液通过大孔吸附树脂柱，先 用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用85%乙醇洗脱，收集85%乙醇洗脱液，浓缩至干得总 皂苷；步骤2、将总皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应完成后 调节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的反相硅胶中，进行反相硅胶 柱层析，用40-70%的乙腈水混合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷 Μι2的流份，浓缩即得。
9.权利要求6的制备方法，其特征在于，步骤如下步骤1、选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参或人参叶等含有人参皂苷类成分的 药材用水提取2次，每次2小时，每次加水10倍量，提取液通过大孔吸附树脂柱，先用水洗 脱，洗脱至流出液近无色，继用85%乙醇洗脱，收集85%乙醇洗脱液，浓缩至干得总皂苷；步骤2、将总皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的盐酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应完成 后调节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的反相硅胶中，进行反相硅胶 柱层析，用45-60%的乙腈水混合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷 Μι2的流份，浓缩即得。
10.权利要求6的制备方法，其特征在于，步骤如下步骤1、选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参或人参叶等含有人参皂苷类成分的 药材用水提取3次，每次2小时，每次加水10倍量，提取液通过大孔吸附树脂柱，先用水洗 脱，洗脱至流出液近无色，继用85%乙醇洗脱，收集85%乙醇洗脱液，浓缩至干得总皂苷；步骤2、将总皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的盐酸溶液中，在40°C搅拌反应4h，反应完成 后调节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的反相硅胶中，进行反相硅胶 柱层析，用50%的乙腈水混合液进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷他2 的流份，浓缩即得。 全文摘要
本发明涉及一种中药提取物及其制备，特别涉及人参皂苷Rh2提取物及其制备。所述制法包括以下步骤步骤1、含有人参皂苷类成分的药材用水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得总皂苷；步骤2、步骤1得到的总皂苷溶于酸溶液中反应，反应完成后调节pH至中性，收集沉淀物；步骤3、沉淀物用乙醇溶解，拌入反相硅胶中，进行反相硅胶柱层析，用乙腈水混合液进行洗脱，收集富含人参皂苷Rh2的流份，浓缩即得。制备得到的人参皂苷Rh2提取物比现有技术疗效高，纯度高。
文档编号A61K36/258GK102058646SQ20091022846
公开日2011年5月18日 申请日期2009年11月17日 优先权日2009年11月17日
发明者周水平, 宋兆辉, 张兰兰, 朱永宏, 林万里, 蔡楠, 黄芝娟 申请人:天津天士力制药股份有限公司