专利名称：肉桂酰胺衍生物及其作为脑神经保护剂的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及的通式(I)取代的肉桂酸衍生物与二苯甲基哌嗪类化合物缩合成取代的肉桂酰胺衍生物的制备方法可由合成示意
图1～3表示 a.取代的苯甲醛与丙二酸缩合得到取代的肉桂酸衍生物(见合成示意图1)； b.取代的二苯甲酮经还原、卤代、取代得到取代的二苯甲基哌嗪(见合成示意图2)； c.将取代的肉桂酸衍生物与氯化亚砜反应制备相应的酰氯，与取代的二苯甲基哌嗪缩合(见合成示意图3)； d.将缩合所得产物用无水乙醇重结晶，得目标化合物。
合成示意图1
合成示意图2
合成示意图3
本发明的有益效果 目前，脑神经保护活性的筛选动物实验按常规方法是采用颈内动脉线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)局灶性脑缺血模型评价抗脑缺血药物的药效。实验数据(详见实施例21)表明预防性给予本发明部分化合物，大鼠脑指数明显降低，梗死面积明显减少，神经功能评分值降低，病理检查表明脑水肿及坏死症状明显改善，说明这些化合物对MCAO局灶性脑缺血具有较好的保护作用。
具体实施例方式 下面的实施例可使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1 (E)-3-(3，4-二乙酰氧基苯基)丙烯酸 向装有回流冷凝管的250ml的圆底烧瓶中加入3，4-二羟基苯甲醛(13.8g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氢吡啶(1.8ml)，加热至95℃反应3小时。冷却，减压蒸除溶剂，残余物倒入浓盐酸(68ml)和冰(150ml)的混合液中，搅拌，析出类白色固体。过滤，无水乙醇重结晶，得类白色粉末咖啡酸6.4g，收率35.2％，mp205.9-209.5℃。
咖啡酸(5.2g，0.029mol)，乙酸酐(24ml)，吡啶(20ml)加到反应瓶中，室温搅拌过夜。减压蒸除溶剂，残余物倒入冰水中，得淡黄色固体，无水乙醇重结晶，得白色固体6.5g，收率85.9％，mp197.1-199.7℃。
实施例2 (E)-3-(3-甲氧基-4-乙酰氧基苯基)丙烯酸 制备方法同实施例1，香兰素(15.2g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氢吡啶(1.8ml)，加热至95℃反应，得阿魏酸9.2g，收率47.4％，mp170.7-172.4℃。
阿魏酸(5.6g，0.029mol)，乙酸酐(12ml)，吡啶(20ml)室温反应，得白色固体6.1g，收率89.1％，mp168.5-169.9℃。
实施例3 (E)-3-(4-氟苯基)丙烯酸 制备方法同实施例1，4-氟苯甲醛(12.4g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氢吡啶(1.8ml)，加热至95℃反应，得白色固体13g，收率78.3％，mp209.1-210.8℃。
实施例4 (E)-3-(4-甲基苯基)丙烯酸 制备方法同实施例1，4-甲基苯甲醛(12.0g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氢吡啶(1.8ml)，加热至95℃反应，得白色固体12.3g，收率75.9％，mp195.1-196℃。
实施例5 (E)-3-(4-乙酰氧基苯基)丙烯酸 制备方法同实施例1，4-羟基苯甲醛(12.2g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氢吡啶(1.8ml)，加热至95℃反应，得(E)-3-(4-羟基苯基)丙烯酸6.4g，收率39％，mp210-213℃。
(E)-3-(4-羟基苯基)丙烯酸(4.74g，0.029mol)，乙酸酐(12ml)，吡啶(20ml)室温反应，得白色固体5.4g，收率90.7％，mp157.3-158.5℃。
实施例6 (E)-3-(4-甲氧基苯基)丙烯酸 制备方法同实施例1，4-甲氧基苯甲醛(13.6g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氢吡啶(1.8ml)，加热至95℃反应，得白色固体12.6g，收率70.8％，mp173.2-174.4℃。
实施例7 (E)-3-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)丙烯酸 制备方法同实施例1，胡椒醛(15.0g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氢吡啶(1.8ml)，加热至95℃反应，得白色固体13.1g，收率68.2％，mp241.5-244.4℃。
实施例8 (E)-3-(4-氯苯基)丙烯酸 制备方法同实施例1，4-氯苯甲醛(14.5g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氢吡啶(1.8ml)，加热至95℃反应，得白色固体13.2g，收率72.3％，mp238.3-240.5℃。
实施例9 (E)-3-(4-溴苯基)丙烯酸 制备方法同实施例1，4-溴苯甲醛(18.4g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氢吡啶(1.8ml)，加热至95℃反应，得白色固体15.9g，收率70％，mp246.3-248.3℃。
实施例10 1-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪 向装有回流冷凝管的500ml的圆底烧瓶中加入氢氧化钾(52.5g)，二-(4-甲氧基苯基)甲酮(84g，0.347mol)，锌粉(70g)，95％乙醇(350ml)，回流搅拌反应3小时。趁热过滤，滤液冷却，得白色固体。用无水乙醇重结晶，得白色针状晶体二-(4-甲氧基苯基)甲醇66.8g，收率78.9％，mp68.9-69.8℃。
将二-(4-甲氧基苯基)甲醇(10g，0.041mol)，二氯甲烷(120ml)，氯化亚砜(4ml)加入反应瓶中，室温搅拌3小时。减压浓缩，得淡红色油状物二-(4-甲氧基苯基)氯甲烷。
向上述油状液中加入环己烷(160ml)，无水哌嗪(10.8g，0.125mol)，搅拌回流16h。减压浓缩得淡黄色固体，加入二氯甲烷(120ml)搅拌溶解，滤去不溶物。滤液中加入1MNaOH溶液(100ml)，搅拌，分液，浓缩有机层，得白色蜡状固体，用乙腈重结晶，得白色针状晶体8.6g，收率67.3％，mp130-132℃。
实施例11 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-(3，4-二乙酰氧基苯基)-丙-2-烯-1-酮(WB-501) 向装有直型干燥管的50ml圆底烧瓶中加入(E)-3-(3，4-二乙酰氧基苯基)丙烯酸(1.056g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亚砜(1.5ml)，吡啶(1滴)，室温搅拌3.5小时。减压蒸除溶剂，残余物加无水丙酮(15ml)溶解，将所得溶液缓慢滴入装有1-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪(1.87g，6mmol)，丙酮(15ml)，三乙胺(5ml)的50ml圆底烧瓶中，搅拌过夜。过滤，所得滤液减压浓缩，残余物用无水乙醇重结晶，得淡黄色固体1.0g，收率44.8％，mp193.2-195.1℃。ESI-MS(m/z)559.2(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.39-2.42(m，4H，N(CH2)2)；2.81(s，6H，CH3COO*2)；3.63-3.71(m，4H，CON(CH2)2)；3.77(s，6H，CH3O*2)；4.18(s，1H，CH(Ph)2)；6.64-6.69(d，1H，＝CHCO)；6.78-7.31(m，11H，Ph)；7.56-7.61(d，1H，Ph-CH＝)。
实施例12 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-[(3-甲氧基-4-乙酰氧基)苯基]-丙-2-烯-1-酮(WB-502) (E)-3-(3-甲氧基-4-乙酰氧基苯基)丙烯酸(0.944g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亚砜(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同实施例12。得淡黄色固体1.3g，收率61.3％，mp185.0-186.2℃。ESI-MS(m/z)531.2(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.30(s，3H，CH3COO)；2.40-2.42(m，4H，N(CH2)2)；3.62-3.72(m，4H，CON(CH2)2)；3.76(s，6H，CH3O*2)；3.84(s，3H，CH3O)；4.19(s，1H，CH(Ph)2)；6.74-6.77(d，1H，＝CHCO)；6.81-7.31(m，11H，Ph)；7.57-7.60(d，1H，Ph-CH＝)。
实施例13 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-(4-氟苯基)-丙-2-烯-1-酮(WB-503) (E)-3-(4-氟苯基)丙烯酸(0.664g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亚砜(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同实施例12。得淡黄色固体1.2g，收率65.2％，mp148.1-150.4℃。ESI-MS(m/z)461.2(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.43-2.45(m，4H，N(CH2)2)；3.65-3.76(m，4H，CON(CH2)2)；3.79(s，6H，CH3O*2)；4.22(s，1H，CH(Ph)2)；6.76-6.79(d，1H，＝CHCO)；6.84-7.51(m，12H，Ph)；7.62-7.65(d，1H，Ph-CH＝)。
实施例14 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-(4-甲基苯基)-丙-2-烯-1-酮(WB-504) (E)-3-(4-甲基苯基)丙烯酸(0.648g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亚砜(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同实施例12。得淡黄色固体1.3g，收率71.3％，mp105.6-107.1℃。ESI-MS(m/z)457.3(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.35(s，3H，CH3)；2.39-2.42(m，4H，N(CH2)2)；3.64-3.73(m，4H，CON(CH2)2)；3.76(s，6H，CH3O*2)；4.18(s，1H，CH(Ph)2)；6.76-6.80(d，1H，＝CHCO)；6.81-7.39(m，12H，Ph)；7.59-7.64(d，1H，Ph-CH＝)。
实施例15 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-(4-乙酰氧基苯基)-丙-2-烯-1-酮(WB-505) (E)-3-(4-乙酰氧基苯基)丙烯酸(0.824g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亚砜(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同实施例12。得淡黄色固体0.9g，收率45.0％，mp171.2-173.1℃。ESI-MS(m/z)501.3(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.31(s，3H，CH3COO)；2.39-2.42(m，4H，N(CH2)2)；3.64-3.74(m，4H，CON(CH2)2)；3.76(s，6H，CH3O*2)；4.18(s，1H，CH(Ph)2)；6.76-6.79(d，1H，＝CHCO)；6.87-7.41(m，12H，Ph)；7.61-7.64(d，1H，Ph-CH＝)。
实施例16 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-(4-甲氧基苯基)-丙-2-烯-1-酮(WB-506) (E)-3-(4-甲氧基苯基)丙烯酸(0.712g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亚砜(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同实施例12。得淡黄色固体0.9g，收率47.7％，mp146.1-148.3℃。ESI-MS(m/z)473.2(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.39-2.42(m，4H，N(CH2)2)；3.65-3.73(m，4H，CON(CH2)2)；3.76(s，6H，CH3O*2)；3.84(s，3H，CH3O)；4.18(s，1H，CH(Ph)2)；6.67-6.72(d，1H，＝CHCO)；6.75-7.46(m，12H，Ph)；7.58-7.63(d，1H，Ph-CH＝)。
实施例17 (E)-3-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-1-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-丙-2-烯-1-酮(WB-507) (E)-3-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)丙烯酸(0.768g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亚砜(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同实施例12。得淡黄色固体1.1g，收率56.6％，mp145.1-146.0℃。ESI-MS(m/z)487.3(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.38-2.42(m，4H，N(CH2)2)；3.62-3.74(m，4H，CON(CH2)2)；3.76(s，6H，CH3O*2)；4.18(s，1H，CH(Ph)2)；5.97(s，2H，OCH2O)；6.63-6.68(d，1H，＝CHCO)；6.77-7.32(m，11H，Ph)；7.53-7.59(d，1H，Ph-CH＝)。
实施例18 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-(4-氯苯基)-丙-2-烯-1-酮(WB-508) (E)-3-(4-氯苯基)丙烯酸(0.73g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亚砜(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同实施例12。得淡黄色固体1.3g，收率68.2％，mp114.2-116.0℃。ESI-MS(m/z)477.3(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.39-2.43(m，4H，N(CH2)2)；3.52-3.73(m，4H，CON(CH2)2)；3.76(s，6H，CH3O*2)；4.18(s，1H，CH(Ph)2)；6.77-6.82(d，1H，＝CHCO)；6.78-7.43(m，12H，Ph)；7.56-7.61(d，1H，Ph-CH＝)。
实施例19 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-(4-溴苯基)-丙-2-烯-1-酮(WB-509) (E)-3-(4-溴苯基)丙烯酸(0.908g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亚砜(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同实施例12。得淡黄色固体1.0g，收率48.0％，mp122.4-124.0℃。ESI-MS(m/z)521.1(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.39-2.43(m，4H，N(CH2)2)；3.62-3.73(m，4H，CON(CH2)2)；3.76(s，6H，CH3O*2)；4.19(s，1H，CH(Ph)2)；6.79-6.84(d，1H，＝CHCO)；6.80-7.54(m，12H，Ph)；7.54-7.59(d，1H，Ph-CH＝)。
实施例20 实施例中目标化合物对急性脑缺血小鼠生存时间的影响。
目标化合物及阳性对照药尼莫地平临用前用0.5％羧甲基纤维素钠配成所需浓度的混悬液；试验动物为ICR小鼠，体重19-25g，雌雄各半。将小鼠按性别随机分组，每组10只，雌雄各半。分别灌胃给予受试药物0.2ml/10g，空白对照组给予等容量NS，阳性对照组给予等容量尼莫地平80mg/Kg，给药后1小时乙醚麻醉，固定后颈部正中切开，分离两侧颈总动脉及迷走神经并结扎，记录小鼠存活时间(每分钟呼吸次数小于或等于5次，即认为小鼠死亡)。
与NS组比较，*P＜0.05 上述试验结果表明，化合物WB-502、WB-503、WB-508、WB-509可明显延长急性脑缺血小鼠的的生存时间，可能具有一定的抗脑缺血作用，其中化合物WB-502、WB-503作用较强。
实施例21 实施例中目标化合物对大脑中动脉阻断脑缺血(MCAO)大鼠的影响。
取SD大鼠60只，按性别体重随机分为6组，每组10只，雌雄各半。试验前3天及试验后1天分别灌胃给予目标化合物36、12、4mg/Kg及尼莫地平6mg/Kg，给药容积均为2ml/Kg。
按上述方法进行分组给药，末次给药后1小时，10％水合氯醛0.5g/Kg ip(即0.5ml/100g)麻醉，仰卧位固定，分离右侧颈总动脉、颈外动脉及颈内动脉，结扎颈总动脉近心端，在颈总动脉与颈外动脉的分支处作一切口，用4-0号尼龙线(头端烧成圆形，外端约为0.2mm)由颈外动脉插入沿颈内动脉进入大脑中动脉，线栓总长约2cm。脑缺血2小时后，去除线栓，结扎动脉，缝合切口。假手术组大鼠只进行手术而不进行线栓。
造模后4、8、24观察大鼠行为改变，进行神经症状评分，评分标准如下(1)提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称伸向地面，计为0分，如手术对侧前肢出现腕曲、肘屈曲、肩内旋、既有肘屈曲又有肩内旋者，分别计为1、2、3、4分。(2)将动物置于平地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力，如双侧阻力对等且有力者计为0分，如向手术的对侧推动时阻力下降者，根据下降程度不同分为轻、中、重度，分别计为1、2、3分。(3)将动物双前肢置于一金属网上，观察双前肢的肌张力。双前肢肌张力对等且有力者计为0分，同样根据手术对侧肌张力下降程度不同分别计为1、2、3分。(4)动物有不停向一侧转圈者，计为1分。根据评分标准，满分为11分，分数越高，动物行为障碍越严重。
造模后24小时后再给药1次，给药后1小时将大鼠以10％水合氯醛0.5g/Kg ip(即0.5ml/100g)麻醉后断头处死取出脑组织，去掉嗅球、小脑和低位脑干后称重，计算脑指数(脑指数＝g脑重量/100g体重)。将大脑放入冰冷盐水中20min，切成5片冠状脑片，第一刀在脑前极与视交叉连线中点处，第二刀在视交叉部位，第三刀在漏斗柄部位，第四刀在漏斗柄与叶尾极之间，置于2％TTC溶液中，37℃光孵育30min。梗塞区呈现白色，非梗塞区呈红色。拍摄数码照片后用图像分析软件计算梗塞面积及脑片面积，计算梗塞面积百分率(梗塞面积百分率＝梗塞面积/脑片面积×100％)。取第三脑片用4％多聚甲醛固定后，用石蜡包埋，HE染色，在光学显微镜下观察神经细胞的病理改变。
脑指数及梗塞面积以均数±标准差表示，用SPSS统计学软件进行统计学分析，各组数据使用ANOVA分析，用SNK检验进行组间均数的比较，以P≤0.05为差异有显著性统计学意义。神经症状分级组间整体平均秩和检验用Kruskal-Wallis法检验，组间两两比较采用重复测量资料的广义估计方程完成，以P≤0.05为差异有显著性统计学意义。
*P＜0.05与MACO组比较，##P＜0.01与假手术组比较 线栓法复制大鼠大脑中动脉阻断脑缺血(MCAO)模型被广泛用于评价抗脑缺血药物的药效，预防性给予WB-502、WB-503大鼠脑指数明显降低，梗死面积明显减少，神经功能评分值降低，病理检查表明脑水肿及坏死症状明显改善，说明化合物WB-502、WB-503对MCAO局灶性脑缺血具有较好的保护作用。
权利要求
1.一类取代的肉桂酰胺衍生物，其特征在于，该衍生物为具有下述通式(I)化合物的游离碱或盐
所说的盐为盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐或甲磺酸盐中的一种。
其中，R1、R2、R3、R4和R5相同或不同，各自独立地代表H、卤素、硝基、氨基、腈基、羟基、烷氧基、烃基、芳烃基、杂环基、芳基、取代烃基、取代芳烃基、取代杂环、取代芳基；
R6和R7相同或不同，各自独立地代表H、卤素、烃基、卤素取代的烃基、硝基、氨基、腈基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、杂环烷氧基。
2.根据权利要求1所述通式(I)化合物，其特征在于R1、R2、R3、R4、R5、R6或R7代表的芳基、芳烃基或芳烷氧基中的芳基，为苯、联苯或萘，或者为F、Cl、Br、I、C1～10烷基、C1～10烷氧基、硝基或氨基取代的苯、联苯或萘。
3.根据权利要求1所述通式(I)化合物，其特征在于R1、R2、R3、R4、R5、R6或R7代表的烃基、芳烃基中的烃基，指具有1-10个碳原子的直链或支链的烷基，或2-10个碳原子的直链或支链的烯基，或3-10个碳原子的直链或支链的环烷基；烷氧基或芳烷氧基或杂环烷氧基中的烷基指具有1-10个碳原子的直链或支链的烷基。
4.根据权利要求3所述通式(I)化合物，其特征在于其中烷基是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基；烯基是乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁烯基、异丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基；环烷基是环丙基、环丁基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基。
5.根据权利要求1所述通式(I)化合物，其特征在于R1、R2、R3、R4、R5、R6或R7代表的杂环基、取代杂环或杂环烷氧基中的杂环基指含有从氧、氮、硫原子中任选的一个或一个以上的杂原子的饱和杂环或芳香杂环。
6.根据权利要求1所述通式(I)化合物，其特征在于R1、R2、R3、R4、R5、R6或R7代表的卤素为F、Cl、Br或I。
7.根据权利要求1所述通式(I)化合物，其特征在于R1、R2、R3、R4、R5、R6或R7中取代的烃基、芳烃基、杂环基、芳基，其取代基是卤素、硝基、氨基、羟基、醚基、羧基、酯基和酰胺基。
8.根据权利要求1所述通式(I)化合物，其特征在于氨基为NH2、R8NH、R9R10N；其中R8、R9或R10为权利要求3所述的烃基，或者R9R10N为含氮原子的三元～八元杂环。
9.权利要求1～8项中任一所述的衍生物在制备治疗缺血性脑卒中的脑神经元保护剂中的应用。
10.用于治疗缺血性脑卒中的药物组合物，其特征在于，该组合物中含有治疗有效量的权利要求1～8任一所述的衍生物和医学上可以接受的载体。
全文摘要
本发明公开了一类取代的肉桂酰胺衍生物及其作为脑神经保护剂在制药中的应用。本发明涉及的取代的肉桂酰胺衍生物是具有的结构为通式(I)化合物的游离碱和盐。本发明的化合物在动物实验中显示出对动物脑缺血模型具有治疗作用。本发明的化合物对缺血性脑卒中后的脑神经有保护作用，可用于制备缺血性脑卒中后的脑神经保护剂，用于治疗缺血性脑卒中。
文档编号A61P9/10GK101759668SQ20091026412
公开日2010年6月30日 申请日期2009年12月30日 优先权日2009年12月30日
发明者吴斌, 许逸, 李萍, 张晓平, 李飞, 王秀珍 申请人:南京医科大学