专利名称：：他克莫司眼用乳剂及其制备方法
技术领域：
：本发明属于药物领域，更具体涉及一种他克莫司眼用乳剂及其制备方法。
背景技术：
：各种原因引起的角膜病是目前国内最主要的致盲角膜病，每年患病人数达百万以上，角膜移植手术是治疗此类疾病的最主要方法，而角膜移植手术后的免疫排斥反应是目前的一大难题。糖皮质激素是防治术后移植排斥反应的主要手段，但其长期应用不仅可导致多种并发症，而且往往不能有效地抑制高危角膜移植术后的排斥反应。近年来环孢素A在眼科的应用越来越广泛，但是环孢素滴眼液溶剂为油性，其滴入眼后对眼睛有很强的刺激性，患者通常不能耐受，且有过敏现象发生。临床试验表明，他克莫司在心、肺、肠、骨髓等移植中的应用有很好的疗效。同时其在治疗自身免疫性眼病、眼过敏性疾患，以及角膜移植后的免疫排斥反应均有良好的疗效。其作用机制与环孢霉素A(CsA)相似，免疫抑制活性较环孢霉素A强IOO倍，而毒副反应发生率较低。他克莫司(Tacrolimus,FK506)是1984年日本学者在筑波地区从土壤真菌中提取的一种大环内酯类新型免疫抑制剂，由一个半酮基，a、e双酮基及23个环组成，其分子式为C44H69N012H20，分子量为822.5。室温下呈白色结晶或晶状粉末，不溶于水，水中溶解度l2yg'ml—1，溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯，略溶于己烷、石油醚。呈亲脂疏水性，其熔点为127129'C。他克莫司的结构式其作用机制是通过抑制相关细胞因子转录因子的活性来抑制淋巴细胞活化。他克莫司进入细胞后先与受体蛋白FKBP12结合为FK506-FKBP12，此复合物再与钙调磷酸酶高亲和性结合并抑制其活性，最终抑制IL-2的转录，阻断Ca2+依赖性细胞的活化途径，细胞因而受到抑制，从而发挥强大的免疫抑制作用。目前，已上市制剂主要为口服制剂和注射液，均为日本进口。但其全身给药常见不良反应有震颤、头痛、感染、感觉异常、神经毒性和肾功能减退。偶有腹泻、血肌酐增高、失眠、血糖增高、胸痛和恶心等其他不良反应。将他克莫司制备成眼用制剂，具有安全、高效、无全身毒副作用的特点，且目前尚无眼用制剂上市。目前他克莫司滴眼液为医院自制的油性滴眼液。而油性不适合临床直接应用于眼部疾病的治疗。如果将其直接滴入眼部，会对眼部产生刺激作用并引起视觉模糊和粘度不适感，还会加重某些眼部疾病，如干眼症。
发明内容本发明的目的是提供一种他克莫司眼用乳剂及其制备方法，解决现有技术中他克莫司为口服制剂和注射液而带来对人体较大毒副作用等问题，将他克莫司制备成眼用乳剂，其具有生物相容性好、对眼部刺激性小、长期使用无毒副作用等优点，是一种有效的眼用新药，能应用于临床，具有广阔的开发前景。本发明的他克莫司眼用乳剂，其特征在于所述他克莫司眼用乳剂的各原料组分包括他克莫司O.010.5g/ml;油相O.27.0g/ml;乳化剂O.110.0g/ml;辅助乳化剂02g/ml;渗透压调节剂O.110g/ml;抗氧剂00.5g/ml;防腐剂00.6g/ml;pH调节剂用量为调节乳剂的pH值至59;余量是注射用水。本发明的显著优点为本发明采用安全、无刺激性的表面活性剂作为乳化剂，适合应用到眼部敏感部位，具有舒适度高、无刺激性、生物相容性好、长期使用无毒副作用等优点。其应用于眼科角膜移植排斥反应、眼部角膜结膜干燥症(KC)、眼过敏性疾患等的治疗。本发明首次将他克莫司制备成眼用乳剂，眼用乳剂直接作用于患处，能充分有效地发挥作用，可减少口服药物引起的胃肠道刺激、神经毒性和其他副作用。本产品的开发成功，不仅可以填补国内外眼科用药的空白，还可带来很好的社会和经济效益。本发明采用超声剪切和高压均质工艺制备得到的他克莫司眼用乳剂乳滴平均粒径小于300nm，制备工艺简单，重复性良好；配料比例得当，可获得粒径均一范围在100nm的微粒；该体系均有相当好的热力学稳定性，可以反复灭菌；既适合于实验研究，又适合于工业大生产。经过其他药物试验表明该体系适合于作为难溶性药物的传递体及载体应用。图l为实施例1他克莫司眼用乳剂A粒径分布图。图2为实施例2他克莫司眼用乳剂B粒径分布图。图3为实施例3他克莫司眼用乳剂C粒径分布图。具体实施例方式本发明的他克莫司眼用乳剂，组分及含量质量比，他克莫司0.010.5g/ml;油相0.27.0g/ml;乳化剂O.110.0g/ml;辅助乳化剂02g/ml;渗透压调节剂O.110g/ml;抗氧剂00.5g/ml;防腐剂00.6g/ml;pH调节剂用量为调节乳剂的pH值至59;余量是注射用水。其中所述的油相为蓖麻油、玉米油、橄榄油、大豆油、芝麻油、棉籽油、花生油、核桃油、葵花籽油或中链脂肪酸甘油酯中的一种或一种以上的混合物；所述的他克莫司与油相质量比为l:201:0.2;所述的乳化剂为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、单甘油脂肪酸酯、三甘油脂肪酸酯、聚甘油硬脂酸酯、蔗糖单月桂酸酯、脂肪酸山梨坦、聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯脂肪醇醚类或聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物类中的一种或一种以上的混合物；所述的辅助乳化剂为甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸或硬脂醇中的一种或一种以上的混合物；所述的渗透压调节剂为氯化钠、葡萄糖、甘露糖醇、甘油、山梨醇或丙二醇中的一种或一种以上的混合物；所述的pH调节剂为氢氧化钠和/或盐酸、枸橼酸、枸橼酸钠、冰醋酸、三乙醇铵、硼酸缓冲液或磷酸盐缓冲液中的一种或一种以上的混合物；所述的抗氧剂为维生素E;所述的防腐剂为三氯叔丁醇、苯乙醇、苯氧乙醇、三梨酸、硫柳汞、依地酸钠、苯扎氯铵、苯扎溴铵、硝酸苯汞、氯化苯甲烃氨溶液、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯或尼泊金丙酯等中的一种或一种以上的混合物。本发明的他克莫司眼用乳剂的制备方法采用超声剪切乳化或剪切-高压均质工艺制备，其操作步骤为(1)称取油相、抗氧剂搅拌均匀，作为溶液①；(2)将乳化剂、辅助乳化剂加入溶液①中，加热至7(TC，搅拌至乳化剂、辅助乳化剂全部溶解后，加入他克莫司，继续加热搅拌至他克莫司完全溶解，作为溶液②；(3)将渗透压调节剂、防腐剂加入水中，加热至7(TC，搅拌，作为溶液③；(4)在磁力搅拌下将溶液②缓慢滴入溶液③中，滴完后再搅拌510min，转移至高剪切分散乳化机，10000rmin—工高速分散，形成初乳；(5)初乳再经超声剪切乳化515min;或者将初乳加入高压均质机内，收集经高压均质的乳液，即得终乳；(6)用注射用水稀释定容至所述浓度的体积量，以pH调节剂调节pH值至59;将所制备乳剂用220筛布过滤，充氮气后灭菌，分装，即得他克莫司眼用乳剂。(7)所制得他克莫司眼用乳剂用10(TC流通蒸汽灭菌，时间1545min;或者所制得产品用Co60灭菌，时间1560min;或者所制得产品用O.45微孔滤膜过滤。下面提供了本发明制剂的有代表性的实施例，这些实施例仅仅用于说明本发明，而不对保护范围造成限制。实施例l<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>制备工艺:称取蓖麻油、MCT、维生素E搅拌均匀，作为溶液①。将处方量蛋黄卵磷脂(S100)加入①中，加热至7(TC，搅拌至蛋黄卵磷脂全部溶解后，加入他克莫司，继续加热搅拌至他克莫司完全溶解，作为溶液②。将甘油、苯扎溴铵加入适量水中，加热至7(TC，作为溶液③。在磁力搅拌下将溶液②缓慢滴入溶液③中，滴完后再搅拌5min，转移至高剪切分散乳化机，10000rmin—工高速分散，形成初乳。初乳再经超声剪切匀化10min，即得终乳。用注射用水稀释定容至处方量，以O.lmolL—工氢氧化钠调节pH值至7.08.0。将所制备乳剂用220目筛布过滤，充氮气后灭菌，分装，即得。实施例2A/gB/gC/gD/g他克莫司0.050.10.250.5橄榄油0.72.54.57.0大豆卵磷脂0.11.01.55.0甘油1.82.23.03.5醋酸苯汞0.010.010.020.02维生素E0.010.010.020.02用磷酸盐缓冲液调节pH值8.0-8.58.0-8.58.0-8.58.0-8.5注射用水至全量100ml100ml100ml100ml制备工艺:称取橄榄油、维生素E搅拌均匀，作为溶液①。将处方量大豆卵磷脂加入①中，加热至7crc，搅拌至大豆卵磷脂全部溶解后，加入他克莫司，继续加热搅拌至他克莫司完全溶解，作为溶液②。将甘油、醋酸苯汞加入适量水中，加热至7(TC，作为溶液③。在磁力搅拌下将溶液②缓慢滴入溶液③中，滴完后再搅拌5min，转移至高剪切分散乳化机，10000r*min—工高速分散，形成初乳。初乳再经高压均质机匀化，即得终乳。用注射用水稀释定容至处方量，以磷酸盐缓冲液调节pH值至8.08.5。将所制备乳剂用220目筛布过滤，充氮气后灭菌，分装，即得。实施例3A/gB/gC/gD/g他克莫司0.050.10.250.5羟丙基甲基纤维素(5mPas)2.01.00.50.1芝麻油0.72.54.57.0聚氧乙烯脂肪酸酯0.11.01.55.0甘油1.82.23.03.5三梨酸0.080.120.150.2维生素E0.010.010.020.02用硼酸缓冲液调节pH值7.6-8.27.6-8.27.6-8.27.6-8.2注射用水至全量100ml100ml100ml100ml制备工艺:称取芝麻油、维生素E搅拌均匀，作为溶液①。将处方量聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯加入①中，加热至7(TC，搅拌至聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯全部溶解后，加入他克莫司，继续加热搅拌至他克莫司完全溶解，作为溶液②。将羟丙基甲基纤维素(HPMC)放入适量水中，加热至7(TC，搅拌，再将甘油、三梨酸加入HPMC溶液中，混匀，作为溶液③。在磁力搅拌下将溶液②缓慢滴入溶液③中，滴完后再搅拌5min，转移至高剪切分散乳化机，lOOOOr*min—工高速分散，形成初乳。初乳再经超声剪切匀化10min，即得终乳。用注射用水稀释定容至处方量，以硼酸缓冲液调节pH值至7.68.2。将所制备乳剂用220目筛布过滤，充氮气后灭菌，分装，即得。实施例4A/gB/gC/gD/g他克莫司0.050.10.250.5葵花籽油0.72.54.57.0蛋黄卵磷脂(E80)0.11.01.55.0聚山梨酯-80251015氯化钠0.90.80.90.5氯化苯甲烃氨溶液0.010.010.020.02维生素E0.010.010.020.02用O.lmolL—工氢氧化钠调节pH值7.0-8.07.0-8.07.0-8.07.0-8.0注射用水至全量100ml100ml100ml100ml制备工艺:称取葵花籽油、聚山梨酯-80、维生素E搅拌均匀，作为溶液①。将处方量蛋黄卵磷脂(E80)加入①中，加热至7(TC，搅拌至蛋黄卵磷脂(E80))全部溶解后，加入他克莫司，继续加热搅拌至他克莫司完全溶解，作为溶液②。将氯化钠、氯化苯甲烃氨溶液加入适量水中，加热至7(TC，作为溶液③。在磁力搅拌下将溶液②缓慢滴入溶液③中，滴完后再搅拌5min，转移至高剪切分散乳化机，10000rmin—工高速分散，形成初乳。初乳再经超高压均质机乳化，即得终乳。用注射用水稀释定容至处方量，以0.lmolL—工氢氧化钠调节pH值至7.08.0。将所制备乳剂用220目筛布过滤，充氮气后灭菌，分装，即得。实施例5<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>制备工艺:称取大豆油、MCT、维生素E搅拌均匀，作为溶液①。将处方量蛋黄卵磷脂(S100)加入①中，加热至7(TC，搅拌至蛋黄卵磷脂(S100)全部溶解后，加入他克莫司，继续加热搅拌至他克莫司完全溶解，作为溶液②。将氯化钠、苯乙醇、尼泊金乙酯加入适量水中，加热至7CTC，作为溶液③。在磁力搅拌下将溶液②缓慢滴入溶液③中，滴完后再搅拌5min，转移至高剪切分散乳化机，10000rmin—工高速分散，形成初乳。初乳再经高压均质机匀化，即得终乳。用注射用水稀释定容至处方量，以O.lmol工氢氧化钠调节pH值至7.88.5。将所制备乳剂用220目筛布过滤，充氮气后灭菌，分装，即得。他克莫司眼用乳剂对家兔眼部的刺激性实验l实验材料实验药物0.05%他克莫司眼用乳剂(实施例l);@0.05%他克莫司蓖麻油滴眼剂。实验动物清洁级白色家兔，雌雄各半，体重1.52.5kg，购自南京市江宁区青龙山动物繁殖场。受试动物眼睛保证无任何刺激症状、炎性反应和眼损伤。2试验方法以家兔为模型动物，根据化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则，用眼刺激性试验法评价他克莫司体温敏感眼用凝胶和他克莫司蓖麻油滴眼剂的粘膜刺激性。取家兔8只，雌雄各半，无眼疾，随机分为两组他克莫司眼用乳剂组和他克莫司蓖麻油滴眼剂组。采用动物同体左右侧自身对比法，一侧眼睛滴入他克莫司眼用乳剂和他克莫司蓖麻油滴眼剂各100y1，另一侧滴入生理盐水100yl作为对照。给药后使兔眼被动闭合10s，使药液与局部有充分接触。每日给药3次，连续给药2周。每天给药前及最后一次给药后l、2、4、24、48和72h对眼部进行检査。按表l的眼刺激反应评分标准对角膜、虹膜及结膜分别进行评分。将每一个观察时间每一动物的眼角膜、虹膜和结膜的刺激反应分值相加得总积分，将一组的积分总和除以动物数，即得该受试动物对眼刺激性的最后分值。然后按表2的评价标准，判断制剂是否具有刺激性。表l眼刺激反应评分标准眼刺激反应分值角膜混浊无混浊0散在或弥散性浑浊，虹膜清晰可见1半透明区易分辨，虹膜模糊不清2出现灰白色半透明区，虹膜细节不清，瞳孔大小勉强看清3角膜不透明，虹膜无法辨认4虹膜正常0皱褶明显加深，充血、肿胀、角膜周围有轻度充血，瞳孔对光仍有反应1出血/肉眼可见坏死/对光无反应(或其中一种)2结膜A、充血(系指睑结膜、球结膜部位)血管正常0血管充血呈鲜红色1血管充血呈深红色，血管不易分辨2弥散性充血呈紫红色3B、水肿无水肿0轻微水肿(含眼睑)1明显水肿伴有部分眼睑外翻2水肿至眼睑近半闭合3水肿至眼睑超过半闭合4c、分泌物无分泌物0少量分泌物1分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着2分泌物使整个眼区潮湿或粘着3最大总积分16分表2眼刺激性评价标准眼刺激性综合平均分值刺激性评价03无刺激性48轻度刺激性912中度刺激性1316强度刺激性3实验结果各实验时间点兔眼刺激分值见表3。表3各实验时间点兔眼刺激分值给药时间给药期间各时间点刺激性得分生理盐水他克莫司眼用乳剂他克莫司蓖麻油滴眼剂ld0042d0043d0044d004.55d00.254.56d00.2557d00.558d00.2559d00.25510d00.255.5lid00.55.512d00.5513d00.755.514d00.756lh00.7562h00.7564h00.55.524h00.254.548h00472h003.5无刺激性无刺激性轻度刺激性试验结果表明，他克莫司眼用乳剂连续给药14d对眼无刺激性。他克莫司蓖麻油滴眼剂连续给药14d后，虹膜、结膜充血，眼睑水肿，分泌物使整个眼区潮湿，经评分标准判定他克莫司蓖麻油滴眼剂对眼有刺激性。权利要求1.一种他克莫司眼用乳剂，其特征在于所述他克莫司眼用乳剂的各原料组分包括他克莫司0.01～0.5g/ml；油相0.2～7.0g/ml；乳化剂0.1～10.0g/ml；辅助乳化剂0～2g/ml；渗透压调节剂0.1～10g/ml；抗氧剂0～0.5g/ml；防腐剂0～0.6g/ml；pH调节剂用量为调节乳剂的pH值至5～9；余量是注射用水。2根据权利要求l所述他克莫司眼用乳剂，其特征在于所述的油相为蓖麻油、玉米油、橄榄油、大豆油、芝麻油、棉籽油、花生油、核桃油、葵花籽油或中链脂肪酸甘油酯中的一种或一种以上的混合物。3根据权利要求l所述他克莫司眼用乳剂，其特征在于所述的乳化剂为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、单甘油脂肪酸酯、三甘油脂肪酸酯、聚甘油硬脂酸酯、蔗糖单月桂酸酯、脂肪酸山梨坦、聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯脂肪醇醚类或聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物类中的一种或一种以上的混合物。4根据权利要求l所述他克莫司眼用乳剂，其特征在于所述的辅助乳化剂为甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸或硬脂醇中的一种或一种以上的混合物。5根据权利要求l所述他克莫司眼用乳剂，其特征在于所述的渗透压调节剂为氯化钠、葡萄糖、甘露糖醇、甘油、山梨醇或丙二醇中的一种或一种以上的混合物。6根据权利要求l所述他克莫司眼用乳剂，其特征在于所述的pH调节剂为氢氧化钠、或者盐酸、枸橼酸、枸橼酸钠、冰醋酸、三乙醇铵、硼酸缓冲液或磷酸盐缓冲液中的一种或一种以上的混合物。7根据权利要求l所述他克莫司眼用乳剂，其特征在于，其中所述的抗氧剂为维生素E。8.根据权利要求l所述他克莫司眼用乳剂，其特征在于，其中所述的防腐剂为三氯叔丁醇、苯乙醇、苯氧乙醇、三梨酸、硫柳汞、依地酸钠、苯扎氯铵、苯扎溴铵、硝酸苯汞、氯化苯甲烃氨溶液、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯或尼泊金丙酯中的一种或一种以上的混合物。9.一种如权利要求l、2、3、4、5、6、7或8所述的他克莫司眼用乳剂的制备方法，其特征在于采用超声剪切乳化或剪切-高压均质工艺制备，按照所述原料配比，操作步骤为(1)称取油相、抗氧剂搅拌均匀，作为溶液①；(2)将乳化剂、辅助乳化剂加入溶液①中，加热至7(TC，搅拌至乳化剂、辅助乳化剂全部溶解后，加入他克莫司，继续加热搅拌至他克莫司完全溶解，作为溶液②；(3)将渗透压调节剂、防腐剂加入水中，加热至7(TC，搅拌，作为溶液③；(4)在磁力搅拌下将溶液②缓慢滴入溶液③中，滴完后再搅拌510min，转移至高剪切分散乳化机，10000r/min高速分散，形成初乳；(5)初乳再经超声剪切乳化515min;或者将初乳加入高压均质机内，收集经高压均质的乳液，即得终乳；(6)用注射用水稀释定容至所述浓度的体积量，以pH调节剂调节pH值至59;将所制备乳剂用220筛布过滤，充氮气后灭菌，分装，即得他克莫司眼用乳剂。10.根据权利要求8所述的他克莫司眼用乳剂的制备方法，其特征在于，所制得产品用10(TC流通蒸汽灭菌，时间1545min;或者所制得产品用Co60灭菌，时间1560min;或者所制得产品用O.45微孔滤膜过滤。全文摘要本发明提供一种他克莫司眼用乳剂及其制备方法，属于药品制剂
技术领域：
，解决现有技术中现有技术中他克莫司为口服制剂和注射液而带来对人体较大毒副作用等问题，该乳剂由他克莫司、油相、乳化剂、辅助乳化剂、渗透压调节剂、抗氧剂、防腐剂、pH调节剂、注射用水配制，经超声剪切乳化或剪切-高压均质匀化工艺制备而成，应用于防治眼科角膜移植排斥反应、眼部角膜结膜干燥症(KC)、眼过敏性疾患等的治疗。本发明首次将他克莫司制备成眼用乳剂，其具有生物相容性好、对眼部刺激性小、长期使用无毒副作用等优点，能应用于临床，具有广阔的开发前景。文档编号A61K9/107GK101653413SQ20091030778公开日2010年2月24日申请日期2009年9月25日优先权日2009年9月25日发明者何仲贵,欣周,星唐,宋洪涛,晶张,娟王申请人:宋洪涛