专利名称：胰腺癌、卵巢癌和其它癌症的检测和治疗的制作方法
胰腺癌、卵巢癌和其它癌症的检测和治疗继续性本申请要求2008年4月11日提交的美国临时申请号61/044，457的权益，该申请 的公开通过引用整体并入本文。背景CD70是肿瘤坏死因子(TNF)家族的成员，肿瘤坏死因子是结合细胞膜并且分泌的 分子，其由多种正常和恶性细胞类型表达。CD70是跨膜II型蛋白，其羧基末端暴露给细 胞之外，其氨基末端被发现于质膜的胞质溶胶侧(Bowman et al.，1994，J. Immunol. 152 1756-61 ；Goodwin et al.，1993，Cell 73:447-56)。人 CD70 含有 20 个氨基酸的细胞质结 构域、18个氨基酸的跨膜结构域和155个氨基酸的细胞外结构域，具有两个潜在的N-连接 的糖基化位点(上文的Bowman et al.；上文的Goodwin et al.)。通过抗⑶70抗体对经 放射性标记的表达⑶70的细胞进行的特异性免疫沉淀产生了 ^kDa和50kDa的多肽(上 文的 Goodwin et al. ；Hintzen et al，1994，J. Immunol. 152 :1762-73)。基于其与 TNF-α 和 TNF-β 的同源性，预测 CD70 为三聚体结构(Petsch et al, 1995, Mol. Immunol. 32 761-72)。⑶70在人的正常组织上仅具有有限的表达。这使得⑶70成为有吸引力的癌症治 疗靶标。但是，仅在少数癌症(例如肾细胞癌、结肠癌、某些类型的非霍奇金淋巴瘤和多发 性骨髓瘤)上鉴定到了⑶70表达。典型地，使用与天然⑶70结合的抗体，例如通过免疫组 织化学来检测癌细胞上的CD70表达。由于缺乏针对CD70的足够特异性的品质不良的抗体， 在被固定的患者样品上检测⑶70表达已被证实为是有问题的。具体地，交叉反应性和背景 染色干扰了在被固定的样品中CD70的检测。本发明解决了该问题和其它需求。
发明内容
本发明提供了使用针对CD70的抗体对卵巢癌、胰腺癌和其它癌症进行诊断、预 后、预防和治疗以及监测治疗的方法。本发明还提供了对肺癌、头颈癌(喉或咽)、黑素瘤、 成胶质细胞瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(例如滤泡性淋巴瘤)、肾细 胞癌(包括透明细胞和乳突肾细胞癌)、结直肠癌和膀胱癌进行诊断、预后、预防和治疗以 及监测治疗的方法。在一个方面，本发明提供了相对与天然CD70的结合而言与变性的CD70特异性 结合的抗体。在一些实施方式中，相对与天然CD70的结合而言，抗体与被固定的、卵巢 SK-0V-3或胰腺PANC-I癌细胞系上的变性的CD70特异性结合。抗体可以是单克隆抗体，例 如嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。优选地，抗体特异结合经福尔马林固定的石蜡包埋的细 胞或组织上的变性的⑶70，所述结合具有与抗体SG-21. ICl (以分配的保藏号PTA-8733保 藏于ATCC的杂交瘤产生的)或抗体SG-21. 5D12 (以分配的保藏号PTA-8734保藏于ATCC 的杂交瘤产生的)相同或更好的特异性。具体地，抗体的非特异性交叉反应性小于抗体 SG-21. ICl或抗体SG-21. 5D12的非特异性交叉反应性。在一些实施方式中，该抗体可与抗 体SG-21. ICl或与抗体SG-21. 5D12竞争特异结合变性的CD70。
在另一方面，本发明提供了诊断试剂盒，所述试剂盒包含相对于与天然CD70的结 合而言与变性的CD70特异性结合的抗体。在一个相关方面，本发明提供了检测患者组织样 品中CD70表达的方法。该组织样品可以来自患者的胰腺、卵巢、肺、喉、咽、乳腺、肾、脑、结 肠、血或皮肤。该组织被固定，并且CD70蛋白被变性。将被固定的组织样品与相对于天然 CD70而言与变性的CD70特异性结合的抗体相接触，检测抗体与被固定的组织样品的结合， 以确定样品中是否有CD70表达。被固定的组织样品上CD70的表达表示患者可能患有表达 ⑶70的癌症。在一些实施方式中，用福尔马林固定样品，并将其包埋于石蜡中。在另一方面，本发明提供了对具有胰腺、卵巢、肺、喉、咽、乳腺或皮肤的癌症的患 者进行诊断、预后、确定治疗方案或监测治疗的方法。所述方法包括测定来自患者的胰腺、 卵巢、肺、喉、咽、乳腺或皮肤的样品细胞中CD70的表达，其中，可检测到的CD70表达的存在 用于患者的诊断、预后、确定治疗方案或监测治疗中。样品可以是经福尔马林固定的石蜡包 埋的样品。所述方法还可包括如果测定步骤表明可检测到的CD70水平，那么向患者施用 ⑶70抗体或⑶70抗体药物缀合物的有效剂量方案(regimen)。在另一方面，本发明提供了治疗CD70阳性癌症的方法。所述方法包括向患有具有 CD70的可检测表达的胰腺、卵巢、肺、喉、咽、乳腺或皮肤的癌症的患者施用CD70的结合试 剂的有效剂量方案，其中，所述结合试剂是抗体、抗体衍生物或抗体药物缀合物。抗体可具 有效应功能。患者可以之前经历过通过手术、放疗和/或用与CD70无关的试剂进行的化疗 所进行的治疗，但所述治疗没有诱导癌症减轻。在一些实施方式中，抗体是嵌合抗体、人源 化抗体或人抗体，例如单克隆抗体1F6或2F2的嵌合或人源化形式。抗体药物缀合物可包 括细胞毒性剂，例如抗微管蛋白剂、DNA小沟结合剂或DNA小沟烷基化剂。抗体药物缀合物 中的抗体可经由接头(例如，在细胞内条件下可被切割的接头)与细胞毒性剂或细胞抑制 剂缀合。在另一方面，提供了组合诊断性和药物试剂盒，其包含与变性的CD70特异性结合 的用于诊断的抗体，以及与天然CD70的细胞外结构域特异性结合的用于治疗的抗体。将参照下文中对示例性实施方式的详细描述，结合附图、图和表，最好地理解本发 明的多个方面。附图简述
图1显示了蛋白质提取物的蛋白质印迹，其中使用抗体SG-21. ICl和SG_21. 5D12 检测来自786-0、⑶70经转染细胞和未经转染细胞的蛋白提取物中的变性 CD70。图2显示了经福尔马林固定的石蜡包埋的(FFPE)胰腺细胞系PANC-I上⑶70蛋 白的表达，其中使用SG21. ICl抗体。图3显示了在卵巢细胞系0vcar-3、SK-0V-3, Ca_0v_3和T0V-21G中CD70蛋白的 表达，其中使用SG21. ICl抗体。图4显示了胰腺肿瘤样品中的⑶70蛋白表达，这是通过抗体SG-21. ICl或 SG-21. 5D12相对于对照mlgG检测的。图5显示了正常胰腺细胞和胰腺肿瘤细胞上的⑶70蛋白表达，这是使用色素原 Fast Red(较深色)通过SG-21. ICl抗体检测的。图6显示了对胰腺癌细胞中⑶70蛋白表达的评估。χ轴表示⑶70染色强度，y轴表示⑶70阳性的面积百分比。图7显示了对卵巢肿瘤中⑶70蛋白表达的评估。χ轴表示⑶70染色强度，y轴表 示⑶70阳性的面积百分比。图8显示了对多种人源化1F6抗体药物缀合物针对卵巢癌细胞系SK0V-3的体外 细胞毒性活性的评估。图9A-C显示了对人源化1F6抗体药物缀合物在下述细胞系上的体外细胞毒性活 性的评估(A)经⑶70转染的胰腺细胞系HPAFII ； (B)经⑶70转染的PANC-I胰腺细胞系； 和(C)经CD70转染的MiaPaCa-2细胞系。图10显示了对人源化1F6抗体药物缀合物在裸鼠中经Cd70转染的MiaPaCa胰腺 癌肿瘤上的体内效力的评估。定义除非另有指明，本文中使用的下述术语和短语旨在具有下述含义。术语“抗体”指(a)免疫球蛋白多肽和免疫球蛋白多肽的免疫活性部分，即，免 疫球蛋白家族的多肽或其含有与特异性抗原(例如CD70)免疫特异性结合的抗原结合位 点的片段，或(b)此类免疫球蛋白多肽或片段的保守取代衍生物，其与抗原(例如CD70) 免疫特异性结合。抗体被一般性描述于例如Harlow & Lane，Antibodies =A Laboratory Manual (ColdSpring Harbor Laboratory Press, 1988)中。除非上下文另有明显指示，提到 抗体还包括抗体衍生物或药物缀合物，将在下文中对其进行更详细地描述。“抗体衍生物”表示经异源分子共价连接(例如通过异源多肽的连接)来修饰或通 过正常情况下不与抗体相关的糖基化、去糖基化、乙酰化或磷酸化等来修饰的如上文定义 的抗体。术语“单克隆抗体”指源于单个细胞克隆(包括任何真核或原核细胞克隆或噬菌 体克隆)并且并非其生产方法的抗体。因此，术语“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术生 产的抗体。“抗原”是与抗体特异性结合的实体。术语“抑制”或“对......的抑制”表示降低了可测量的量，或者完全阻止。术语“试剂”表示元素、化合物或分子实体，包括例如药物性、治疗性或药理性化合 物。试剂可以是天然的或合成的或其组合。“治疗剂”是单独或与另外的试剂(例如，前药 转化酶组合前药)组合对癌细胞发挥治疗性(例如有益的)效果的试剂。典型地，可用于 本文所述的方法和组合物的治疗剂是施加细胞毒性或细胞抑制性效果的那些。在提到试剂对细胞的效果时，“细胞毒性效果”表示杀死细胞。“细胞抑制性效果”表示对细胞增殖的抑制。“细胞毒性剂”指对细胞具有细胞毒性或细胞抑制性效果由此分别减少 (depleting)或抑制细胞群体中细胞生长的试剂。在⑶70抗体对表达⑶70的细胞的作用的上下文中，术语“减少”表示表达⑶70的 细胞的数目减少或消失。在将用于根据本文所述的方法中的抗CD70抗体或其衍生物的上下文中，术语“功 能性”表示抗体或其衍生物(1)能与CD70结合，和/或( 单独或与细胞毒性剂缀合时， 减少或抑制表达CD70的细胞的增殖。
术语“预防”指在表达CD70的癌症的临床或诊断症状发作之前向受试者施用抗 CD70抗体-药物缀合物(ADC)或ADC衍生物(例如向具有患胰腺癌或卵巢癌的高风险倾 向的个体施用)，以(a)阻断表达CD70的癌症或其一种或多种临床或诊断症状的出现或发 作，(b)抑制表达CD70的癌症的发作严重性，或者(c)减少表达CD70的癌症的发作的可能性。术语“治疗”表示通过在表达CD70的癌症的临床或诊断症状发作之后在任何临 床阶段向受试者施用抗CD70抗体、抗体药物缀合物或ADC衍生物来减慢、停止或逆转患者 中表达CD70的癌症的进程，如通过疾病的临床或诊断症状的减少或消失来证实。治疗可包 括例如减少症状的严重性、症状的量或复发频率。术语“可药用”表示联邦或州政府管理机构许可的或美国药典或其它公认药典中 列出的用于动物的(更特别地，用于人类的)。术语“药物相容”成分表示与CD70抗体一起 施用的可药用的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体。在施用药物试剂的上下文中，术语“有效量”表示足以在患者中抑制表达⑶70的 胰腺癌或卵巢癌的一种或多种临床或诊断症状的出现或减轻所述症状的试剂的量。根据本 文所述的方法，在“有效剂量方案”中施用试剂的有效量。术语“有效剂量方案”是足以实 现对表达CD70的癌症的治疗的试剂的量和给药频率的组合。术语“患者”包括接受诊断、预防或治疗性治疗的人和其它哺乳动物受试者。缩写“AFP”指二甲基缬氨酸-缬氨酸-dolaisoleuine-dolaproine-苯丙氨酸-对 苯二胺。缩写“MMAE” 是单甲基 auristatin E。缩写“AEB”表示通过用auristatin E与对乙酰苯甲酸反应产生的酯。缩写“AEVB”表示通过用auristatin E与苯甲酰戊酸反应产生的酯。"MMAF" ^^ dovaline- ^MM -dolaisoleunine-dolaproine- ￥MM@I。缩写“fk”和“phe-lys”表示二肽苯丙氨酸_赖氨酸。缩写“VC”和“val-cit”表示二肽缬氨酸_瓜氨酸。治疗剂典型地可基本不含不想要的污染物。这意味着试剂典型地至少为大约50% w/w(重量/重量)纯度，以及基本上不含干扰性蛋白质和污染物。有时试剂至少为大约 80% w/w纯，更优选至少90或大约95% w/w纯度。但是，使用常规的蛋白纯化技术，也可获 得至少99%纯度w/w的同质肽。发明详述I. 一般性本发明提供了使用针对CD70的抗体对卵巢癌和胰腺癌进行诊断、预后、预防和治 疗以及监测治疗的方法。本发明还提供了对肺癌、头颈癌(喉或咽)、黑素瘤、成胶质细胞 瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(例如滤泡性淋巴瘤)、肾细胞癌(包括 透明细胞和乳突肾细胞癌)、结直肠癌和膀胱癌进行诊断、预后、预防和治疗以及监测治疗 的方法。所述方法部分取决于实施例中示出的结果，其显示CD70在某些癌症中以升高的水 平表达。使用特异性结合变性的CD70的抗体，在来自卵巢和胰腺癌组织的经福尔马林固定 的石蜡包埋的(FFPE)样品中检测到升高的表达。此外，还使用针对变性的CD70细胞外结 构域的抗体，在来自其它癌症组织的经福尔马林固定的石蜡包埋的(FFPE)样品中检测到升高的⑶70表达。虽然本发明的实施不依赖于对机制的理解，但我们相信，在特别是卵巢和胰腺组 织以及一般而言其它癌症中的FFPE样品中成功检测到CD70是因为使用了相对于天然CD70 而言优先结合这些样品中变性的CD70的抗体。虽然在胰腺和卵巢癌中可检测到的CD70的 频率和/或其水平没有CD70此前已关联的一些其它癌性组织中那么高，但相对于正常组 织而言，它们对癌性组织仍然是非常特异的。因此，在具有其中可检测到CD70的卵巢癌或 胰腺癌的患者中，CD70可作为特别有用的靶标，用于将毒性选择性导向癌细胞。类似地， 在具有其它癌症(例如，肺癌、头颈癌(喉或咽)、黑素瘤、成胶质细胞瘤、多发性骨髓瘤、霍 奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(例如滤泡性淋巴瘤)、肾细胞癌(包括透明细胞和乳突肾细 胞癌)、结直肠癌和膀胱癌)的患者中，本发明提供了在来自此类患者的经固定样品中检测 ⑶70表达的易行方法。II.针对CD70的抗体下述说明首先考虑可应用于检测卵巢和胰腺癌中的CD70以及对其加以治疗的针 对CD70的抗体的性质，然后关注与用于各应用的抗体的优选性质。A.针对⑶70的抗体的一般性描述抗Cd70抗体包括单克隆、嵌合(具有人恒定区和小鼠可变区)、人源化、贴面 (veneered)或人抗体；单链抗体等等。免疫球蛋白分子可以是任何类型或类别(例如IgG、 IgE、IgM、IgD、IgA 和 IgY)的或亚类(例如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)的。抗CD70抗体可以是结合抗原的抗体片段，例如Fab，F(ab' ),F(ab' )2，Fd链，单 链Fv (scFv)，单链抗体，二硫键连接的Fv (sdFv)，包含\或Vh结构域的片段，包括纳米抗体 或来自骆驼、美洲驼(llama)等的片段，或Fab表达文库产生的片段，或上文所述的任何抗 体的CD70结合片段。结合抗原的抗体片段(包括单链抗体)可包含单独的可变区或与下 述全部或部分组合的可变区铰链区、CH1、CH2、CH3和CL结构域。此外，结合抗原的片段还 可包含可变区与铰链区、CH1、CH2、CH3和CL结构域的任何组合。典型地，抗体是人、啮齿类 (例如小鼠和大鼠)、驴、绵羊、兔、山羊、豚鼠、驼类(camelid)、马或鸡的抗体。抗体可以是单特异性、双特异性、三特异性或更多特异性的。多特异性抗体可 以是对CD70不同的表位特异的，或者可以对CD70以及异源蛋白两者均特异(见例如WO 93/17715 ；WO 92/08802 ；WO 91/00360 ；W092/05793；Tutt et al.，1991，J. Immunol. 147 60-69 ；美国专利号 4，474，893 ；4，714，681 ；4，925，648 ；5，573，920 和 5，601，819 ；Kostelny et al.，1992，J. Immunol. 148 :1547-1553.)。可用于实施本文所述的方法的多特异性抗体 (包括双特异性和三特异性抗体)是与CD70以及第二细胞表面受体或受体复合物(例如， 免疫球蛋白基因超家族成员、TNF受体超家族成员、整联蛋白、细胞因子受体、趋化因子受 体、主要组织相容性蛋白、凝集素(C型、S型或I型)或补体控制蛋白)二者均免疫特异性 结合的抗体。还可按照它们与CD70 的结合亲和力(1(Γ7Μ、5χ1(Γ8Μ、1(Γ8Μ、5Χ1(Γ9Μ、1(Γ9Μ、5Χ10,Μ、 10^ 、5110力]\1、10^]\1、511042]\1、1042]\1、5110力]\1、10^]\1、511044]\1、1044]\1、51104呦或 I(T15M)来 描述抗⑶70抗体。抗CD70抗体可以是嵌合抗体。嵌合抗体是这样的分子，其中抗体的不同部分源 于不同的动物物种，例如，具有源于鼠单克隆抗体的可变区和人免疫球蛋白恒定区的抗体。用于产生嵌合抗体的方法是本领域已知的(见例如，Morrison, Science, 1985, 229 :1202 ； Oi et al.，1986，BioTechniques4 :214 ；Gillies et al.，1989，J. Immunol. Methods 125 191-202 ；美国专利号 5，807，715 ；4，816，567 和 4，816，397)。抗⑶70抗体还可以是人源化抗体，包括贴面抗体。人源化抗体是这样的抗体分 子，其结合想要的抗原，并且具有来自非人物种的一个或多个互补决定区(CDRs)和来自人 免疫球蛋白分子的构架和恒定区。通常，人构架区中的构架残基将被来自CDR供体抗体的 相应残基取代，以改变，或优选以改善抗原结合。通过本领域公知的方法来鉴定这些构架 取代，例如，通过构建⑶R和构架残基的相互作用模型来鉴定对于抗原结合来说重要的构 架残基，以及通过序列比较以鉴定出具体位置上的不寻常的构架残基(见例如Queen et al.，美国专利号 5，585，089 ；Riecbmann et al.，1988，Nature 332 :323)。可使用本领域 已知的多种技术来对抗体进行人源化，例如⑶R移植(EP 0 239 400 ；WO 91/09967 ；美国 专利号 5，225，539 ;5，530，101 和 5，585，089)、贴面或重塑表面(EP 0 592 106 ；EP 0 519 596 ；Padlan, Molecular Immunology,1991,28(4/5) :489-498 ；Studnicka et al.，1994， Protein Engineering 7(6) :805-814 ；Roguska et al.，1994，PNAS91 :969-973)和链改组 (美国专利号5，565，332)(所有这些参考文献都通过引用并入本文)。抗⑶70抗体还可以是人抗体。可通过本领域已知的多种方法来制造人抗体，例如 噬菌体展示方法(见上文)，其中使用源于人免疫球蛋白序列的抗体文库。还见例如，美国 专利号 4，444，887 和 4，716，111 ；WO 98/46645, WO 98/50433，WO 98/24893，WO 98/16654， WO 96/34096, WO 96/33735和WO 91/10741。此外，可使用被称为“引导选择”的技术，来 产生识别选择的表位的人抗体，其中，使用选择的非人单克隆抗体，例如，小鼠抗体，来引导 识别相同表位的完全人抗体的选择(见例如Jespers et al.，1994，Biotechnology 12: 899-90 。还可使用表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠来产生人抗体。可使用杂交瘤技 术，从经免疫的转基因小鼠获得针对抗原的单克隆抗体。关于产生人抗体的技术的综述， 见 Lonberg and Huszar，1995，Int. Rev. Immunol. 13 65-930 关于产生人抗体和人单克隆 抗体的该技术以及用于产生此类抗体的方案的详细讨论，见例如PCT公开W098/24893 ；WO 92/01047 ；WO 96/34096 ；WO 96/33735 ；欧洲专利号 0 598，877 和美国专利号 5，413，923 ； 5，625，126 ；5，633，425 ；5，569，825 ；5，661，016 ；5，545，806 ；5，814，318 ；5，885，793 ； 5，916，771 和 5，939，598。可通过已知方法测定抗体与CD70的特异性结合，所述方法例如，竞争性和非竞争 性免疫测定系统，使用诸如蛋白质印迹、放射免疫测定、ELISA(酶联免疫吸附测定)、“夹层” 免疫测定、免疫沉淀测定、沉淀素反应、凝胶扩散沉淀素反应、免疫扩散测定、凝集测定、补 体固定测定、免疫放射分析测定、荧光免疫测定、蛋白A免疫测定(见例如Ausubel et al.， eds. , Short Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons, Inc. , NewYork,4th ed. 1999) ；Harlow & Lane,Using Antibodies :A LaboratoryManual(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. ,1999.))。此外，可通过竞争性结合测定法来测定抗体与⑶70的结合亲和性以及抗体⑶70 相互作用的解离速率(off-rate)。竞争性结合测定的一个例子是放射免疫测定，包括在 存在增加量的未经标记的⑶70的情况下，将经标记的⑶70 (例如3H或125I)与目的抗体一 起孵育，并且检测与经标记的⑶70结合的抗体。然后可通过katchard作图分析，从数据来确定抗体对CD70的亲和性和结合解离速率。还可使用放射免疫测定来测定与第二抗体 的竞争。在这种情况下，在存在增加量的未经标记的第二抗体的情况下，将CD70与缀合到 经标记的化合物(例如M或125I)上的目的抗体一起孵育。或者，可通过表面等离振子共振 来测定抗体与CD70的结合亲和性以及抗体-CD70相互作用的结合和解离速率。可根据抗体类型，通过标准方法，从CD70蛋白的含有抗原的片段来制备抗 体(见例如，Kohler，et al, Nature, 256 :495, (1975) ；Harlow & Lane，Antibodies, A Laboratory Manual (C. S. H. P. , NY, 1988) ；Queen et al. , Proc. Natl. Acad. Sci USA 86 10029-10033(1989)和 WO 90/07861 ；Dower et al. , WO 91/17271 和 McCafferty et al.， WO 92/01047(每份文献都为了所有目的通过引用并入本文))。例如，可使用多种技术来 制备单克隆抗体，例如，使用杂交瘤、重组以及噬菌体展示技术或者它们的组合。杂交瘤技 术在例如上文的 Harlow et al.禾口 Hammerling, et al. , In MonoclonalAntibodies and T-Cell Hybridomas, pp. 563-681 (Elsevier, N. Y.，1981)中有一般性讨论。可用于制造抗 CD70 抗体的噬菌体展示方法包括，例如 Briinnan et al. , 1995, J. Immunol. Methods 182 41-50 ；Ames et al. ,1995, J. Immunol. Methods 184 :177-186 ；Kettleborough et al., 1994，Eur.J. Immunol. 24 :952-958 ；Persic et al.，1997，Gene 187 :9-18 ；Burton et al.，1994，Advances in Immunology 57 :191-280 ；PCT 申请号 PCT/GB91/01 134 ；PCT 公 开 TO 90/02809 ；WO 91/10737；WO 92/01047；WO 92/18619 ；W093/11236 ；WO 95/15982 ； WO 95/20401 和美国专利号 5，698，426 ；5，223，409 ；5，403，484 ；5，580，717 ；5，427，908 ； 5，750，753 ；5，821，047 ；5，571，698 ；5，427，908 ；5，516，637 ；5，780，225 ；5，658，727 ； 5，733，743和5，969，108中公开的那些(这些文献的公开内容都通过引用并入本文)。用于产生识别特定表位的抗体片段的技术也是本领域公知的。例如，可通过使 用木瓜蛋白酶(以产生Fab片段)或胃蛋白酶(以产生F(ab' )2片段)，对免疫球蛋 白分子进行蛋白水解切割，来产生Fab和F(ab' )2片段。F(ab' )2片段含有可变区、 轻链恒定区和重链的ChI结构域。还可使用例如WO 92/22324 ；Mullinax et al.，1992， BioTechniques 12(6) :864-869禾口 Sawai et al.，1995，AJRI 34 :26-34禾口Better et al.， 1988,Science240 :1041-1043 (这些文献的公开内容都通过引用并入本文)中公开的方法， 使用重组产生!^atKFab'和F(ab' )2片段的技术。可用于生产单链Fvs和抗体的技术的例子包括美国专利号4，946，778和 5,258,498 ；Huston et al.，1991，Methods in Enzymology 203:46-88 ；Shuet al.，1993， Proc. Natl. Acad. Sci USA 90 :7995-7999 和 Skerra et al.，1988，Science 240:1038-1040 中描述的那些。还可通过重组表达技术来生产可用于本发明方法中的抗⑶70抗体及其衍生 物。与⑶70结合和/或减少或抑制表达⑶70的细胞增殖的抗体或其衍生物的重组表达 需要构建含有编码所述抗体或其衍生物的核酸的表达载体。一旦获得了编码此类蛋白的 核酸，即可使用本领域公知的技术，通过重组DNA技术，来生产用于生产蛋白质分子的载 体。可使用标准技术，例如 Sambrook and Russell, Molecular Cloning :A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. , 3rd ed., 2001) ；Sambrook et al. ,Molecular Cloning :A Laboratory Manual(ColdSpring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. , 2nd ed. ,1989) ；Ausubel et al. , ShortProtocols in Molecular Biology (John Wiley &Sons,New York, 4th ed. , 1999)禾口Glick & Pasternak, MolecularBiotechnology :Principles and Applications of Recombinant DNA (ASMPress, Washington, D. C, 2nd ed.，1998)中描述的那些技术，用于重组核酸方法、核 酸合成、细胞培养、转基因掺入和重组蛋白质表达。例如，为重组表达抗⑶70抗体，表达载体可编码与启动子有效连接的其重链或轻 链或重链或轻链可变区。表达载体可包括，例如，编码抗体分子的恒定区的核苷酸序列(见 例如WO 86/05807 ；WO 89/01036和美国专利号5，122，464)，并且抗体的可变结构域可被克 隆进此类载体，用于表达整条重链或轻链。通过已知技术将表达载体转入宿主细胞，然后培 养经转染的细胞以产生抗CD70抗体。典型地，为表达双链抗体，编码重链和轻链的载体可 在宿主细胞中共表达，以表达整个免疫球蛋白分子。可利用多种原核和真核宿主表达载体系统来表达抗⑶70抗体或其衍生物。典型 地，真核细胞(特别是对于整个重组的抗CD70抗体分子而言)被用于表达重组蛋白。例如， 与载体(例如来自人巨细胞病毒的主要中间早期基因启动子元件或中国仓鼠卵巢EF-I α 启动子)结合的哺乳动物细胞，例如，中国仓鼠卵巢细胞(CHO)(例如DG44或CH0-S)，是生 产抗CD70抗体及其衍生物的有效表达系统(见例如!decking et al.，1986，Gene45 :101 ； Cockett et al. , 1990, Bio/Technology 8 :2 ;Allison，美国专利号 5，888，809)。其它宿主表达系统包括细菌细胞中的基于质粒的表达系统(见例如Ruther et al.,1983,EMBO 1,2 :1791 ；Inouye & Inouye，1985，Nucleic AcidsRes. 13 :3101-3109 ；Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24 :5503-5509)；昆虫表达系统，例如，在草地贪夜 蛾(Spodopterafrugiperda)细胞中使用苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)核型 多角体病毒(AcNPV)表达载体；以及哺乳动物中的基于病毒的表达系统，例如，基于腺病毒 的系统(见例如 Logan & Shenk，1984，Proc. Natl. Acad. SciUSA 81 :355-359 ；Bittner et al.，1987，Methods in Enzymo1. 153 :51-544)。B.用于检测⑶70的抗体对用于检测方法中的针对CD70的抗体的选择取决于是否通过需要检测变性的 ⑶70或天然⑶70 (细胞上表达的)的技术来检测⑶70。在其中靶标⑶70是变性的方法 (例如蛋白质印迹或免疫组织化学检测)中，优选使用与变性形式的CD70(例如，人或猕猴 CD70)结合的抗体。典型地，较之天然形式(即，自然界中存在的CD70，或者当在没有暴露 于变性条件(例如，溶剂、去污剂或升高的温度(例如超过50°C))下分离的)而言，此类抗 体优先结合变性的形式。可使用变性的CD70免疫原(例如人或猕猴CD70)或其来自细胞 外部分的免疫原性片段，产生此类抗体。可通过用SDS(例如0. 5% )处理免疫原以及任选 地加热至80 °C来实现变性。还可通过简单地从用于纯化免疫原的SDS凝胶洗脱免疫原来实 现变性。或者，可使用来自CD70的细胞外结构域的合成肽作为免疫原，来生产优先结合变 性CD70的抗体。一些此类肽太短，以至于无法保留天然肽的相应区段的构象。合成肽可以 被变性，但是通常无须变性即可用作为免疫原。针对相对天然⑶70而言优先结合变性的⑶70，来筛选通过这些或其它方法产生 的抗体。可通过相同测定法或通过不同测定法来测定变性的和天然的CD70抗原。特别地， 如果使用后一种方法，可使用已知结合天然CD70的对照抗体，例如下文所述的治疗性抗体 (例如，人源化1F6或2F2 ；见美国专利申请公开号2006-0233794和2006—0083736以及国际专利公开WO 06/113909)来进行筛选。如果抗体较之对照抗体的比例显示出相对天然 CD70来说与变性CD70结合的更高比例的话，该抗体优先与变性CD70结合。用于在胰腺和卵巢癌中检测CD70的优选抗体是与用福尔马林固定并且包埋于石 蜡中的(FFPE)胰腺癌或卵巢癌样品上的CD70特异性结合的那些抗体。较之未受处理的胰 腺癌或卵巢癌细胞上的天然⑶70抗原而言，这些抗体优先识别被FFPE处理暴露的⑶70上 的表位。此类抗体被称为FFPE特异性抗CD70抗体。此类抗体缺乏与天然CD70的可检测到 的特异性结合。优选地，抗体的特异性结合与抗体SG-21. ICl或SG-21. 5D12相同或更好。 特别地，通过蛋白质印迹或对固定细胞的染色进行测定时，在特异性结合条件下，所述抗体 较之抗体SG-21. ICl或SG-21. 5D12而言优选具有相同或更低的可检测到的与其它细胞蛋 白的交叉反应性。用于在其它癌症(如下文实施例中所述)中检测CD70的优选抗体是与用福尔马 林固定并且包埋于石蜡中的(FFPE)这些癌症样品中的CD70特异性结合的那些抗体。较 之未受处理的胰腺癌或卵巢癌细胞上的天然⑶70抗原而言，这些抗体优先识别被FFPE处 理暴露的⑶70上的表位。此类抗体缺乏与天然⑶70的可检测到的特异性结合。优选地， 抗体的特异性结合与抗体SG-21. ICl或SG-21. 5D12相同或更好。特别地，通过蛋白质印迹 或对固定细胞的染色进行测定时，在特异性结合条件下，所述抗体较之抗体SG-21. ICl或 SG-21. 5D12而言优选具有相同或更低的可检测到的与其它细胞蛋白的交叉反应性。一些示例性FFPE特异性抗CD70抗体是mAbs SG-21. ICl (也被称为 SG-21. 1C1-B3)和 SG-21. 5D12. C3(也被称为 SG-21. 5D12. C3)。其它一些优选的抗体与 SG-21. 1C1. B3或SG-21. 5D12. C3竞争与变性的CD70的特异性结合。其它一些优选的抗体 包含含有来自SG-21. 1C1. B3的重链的三个CDRs的重链和含有来自SG-21. 1C1. B3的轻链 的三个⑶Rs的轻链。其它一些优选的抗体包含含有来自SG-21. 5D12. C3的重链的三个 ⑶Rs的重链和含有来自SG-21. 5D12. C3的轻链的三个⑶Rs的轻链。其它一些优选的抗体 包含与SG-21. 1C1. B3的成熟重链可变区具有至少90%序列同一性的成熟重链可变区和 与SG-21. 1C1. B3的成熟轻链可变区具有至少90%序列同一性的成熟轻链可变区。其它一 些优选的抗体包含与SG-21. 5D12. C3的成熟重链可变区具有至少90%序列同一性的成熟 重链可变区和与SG-21. 5D12. C3的成熟轻链可变区具有至少90%序列同一性的成熟轻链 可变区。C.用于治疗性应用的针对⑶70的抗体用于治疗性应用的抗体与胰腺癌或卵巢癌细胞上天然CD70抗原的细胞外结构域 特异性结合。用于治疗性应用的抗体还可与肺癌、头颈癌(喉或咽)、黑素瘤、成胶质细胞 瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(例如滤泡性淋巴瘤)、肾细胞癌(包括 透明细胞和乳突肾细胞癌)、结直肠癌和膀胱癌上的天然CD70抗原的细胞外结构域特异性 结合。对于CD70与其配体CD27的结合而言，抗体可以是激动性的、非激动性的或拮抗性的。 虽然本发明的实施并不依赖于对机制的理解，但我们相信，抗体可由于与CD70结合并且内 化于细胞中，或者通过与CD70并且在细胞之外积累，而发挥细胞毒性或细胞抑制效果。在 这两种事件的任一种中，可通过将抗体与细胞毒性或细胞抑制剂缀合来促进细胞毒性或细 胞抑制效果。与CD70结合的抗体从细胞之外发挥的细胞毒性或细胞抑制性效果可被抗体 恒定(效应)功能额外或替代性促进。抗体恒定结构域介导多种Ig效应功能，例如抗体参与抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)和/或抗体依赖性细胞吞噬 (ADCP)。任选地，可通过W02006/113909中描述的多种方法，增大⑶70结合试剂的效应功 能。还可通过阻断⑶70与其配体⑶27的相互作用，来促进抗体发挥的细胞毒性或细胞抑 制性效果。优选的抗CD70抗体是mAb 1F6或2F2或其嵌合或人源化形式，如WO 2004/073656 和公开的美国申请号2006-0233794中和W02006/113909中所述。优选的重链成熟可变区 具有SEQ ID NO 1的序列，优选的轻链成熟可变区具有SEQ ID NO 2的序列。其它有用的抗体包含分别与SEQ ID NO :1和2具有至少90%以及优选至少95% 或99%序列同一性的成熟重链和轻链可变区。W02006/113909提供了关于需要哪些可变区 构架残基用于结合的教导。其它有用的抗CD70抗体或其衍生物可竞争性抑制mAb 1F6或 2F2与CD70的结合，如通过免疫测定法所测定的。竞争性抑制表示，当抗体以至少两倍以及 优选五倍过量存在时，其将1F6或2F2与⑶70的结合抑制至少50%，更典型地，至少60%， 还更典型地，至少70%，最典型地，至少75%，或者，抗体将1F6或2F2与⑶70的结合竞争 性抑制至少80 %，至少85 %，至少90 %或至少95 %。其它一些优选抗体包含含有来自1F6的重链可变区的三个⑶Rs的重链和含有来 自1F6的轻链可变区的三个⑶Rs的轻链。其它一些优选的抗体包含与2F2的成熟重链 可变区具有至少90%序列同一性的成熟重链可变区和与2F2的成熟轻链可变区具有至少 90%序列同一性的成熟轻链可变区。其它一些优选的抗体包含与1F6的成熟重链可变区 具有至少90、95或99%序列同一性的成熟重链可变区和与1F6的成熟轻链可变区具有至 少90、95或99%序列同一性的成熟轻链可变区。其它一些优选的抗体包含与2F2的成熟 重链可变区(SEQ ID NO 3)具有至少90、95或99%序列同一性的成熟重链可变区和与2F2 的成熟轻链可变区(SEQ ID NO 4)具有至少90、95或99%序列同一性的成熟轻链可变区。例如美国专利申请公开号2005-0191299和国际公开号WO 07/038637中描述了大 量其它针对CD70的抗体。可按照下文所述，针对其单独或作为衍生物和/或缀合物的适合 度，来筛选与CD70的细胞外结构域结合的其它抗体。筛选可使用经标记的抗体来评估向表 达CD70的细胞中的内化。筛选还可评估细胞毒性。还可在胰腺癌或卵巢癌或其它癌症的 动物模型上进行其它筛选。例如，可使用SK0V-3卵巢癌细胞系、AN3CA子宫内膜癌细胞系、 T0V21G卵巢癌细胞。此外，可使用PANCl和MiaPaca2胰腺细胞系。抗CD70抗体的衍生物还可用于实施本发明的方法。典型的修饰包括，例如，糖基 化、去糖基化、乙酰化、peg化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护基团进行的衍生化、蛋白水 解切割、与细胞配体或其它蛋白的连接等等。可进行多种化学修饰中的任一种，例如，通过 特异性化学切割、乙酰化、甲酰化或衣霉素存在下的代谢合成。此外，衍生物可含有一个或 多个非典型氨基酸。抗体衍生物可以是包含一个或多个单体的多聚体，例如二聚体，其中每个单体包 括(i)抗CD70抗体的抗原结合区域或源于其的多肽区域(例如通过一个或多个氨基酸的 保守取代)和(ii)多聚化(例如二聚化)多肽区域，使得抗体衍生物形成与CD70特异性 结合的多聚体(例如同源二聚体)。典型地，抗CD70抗体的抗原结合区域或者源于其的多 肽区域与异源蛋白重组或化学融合，其中所述异源蛋白包含二聚化或多聚化结构域。在为 了治疗或预防表达CD70的癌症的目的将抗体衍生物施用给受试者之前，令衍生物经历允许形成同源二聚体或异源二聚体的条件。异源二聚体可包含相同的二聚化结构域但是包含 不同的CD70抗原结合区域，包含相同的CD70抗原结合区域但是不同的二聚化结构域，或者 包含不同的CD70抗原结合区域和二聚化结构域。可通过将抗⑶70抗体与第二抗体缀合来形成抗⑶70抗体衍生物(“抗体异源缀 合物”)(见例如美国专利号4，676，980)。可用于实施本发明的方法的异源缀合物包含与 CD70结合的抗体(例如具有单克隆抗体1F6或2F2的CDRs和/或重链的抗体)以及与表 面受体或受体复合物(例如免疫球蛋白基因超家族成员、TNF受体超家族成员、整联蛋白、 细胞因子受体、趋化因子受体、主要组织相容性蛋白、凝集素(C型、S型或I型)或补体控 制蛋白)结合的抗体。针对CD70的抗体及其衍生物可与细胞毒性或细胞抑制性部分缀合，形成抗体药 物缀合物(ADC)。特别适合与抗体或抗体衍生物缀合的部分是化学治疗剂、前体药物转化 酶、放射性同位素或化合物或者毒素。例如，抗CD70抗体或其衍生物可与细胞毒性剂，例如 化学治疗剂或毒素(例如，细胞抑制性或杀细胞性试剂，例如，相思豆毒蛋白、蓖麻毒蛋白 A、假单胞菌外毒素或白喉毒素)缀合。抗CD70抗体或其衍生物可与前体药物转化酶缀合。可使用已知方法，将前体药物 转化酶与抗体或其衍生物重组融合，或者以化学方法缀合。示例性的前体药物转化酶是羧 肽酶G2、β -葡糖醛酸糖苷酶、青霉素-V-酰胺酶、青霉素-G-酰胺酶、β -内酰胺酶、β -葡 糖苷酶、硝基还原酶和羧肽酶Α。用于将治疗剂与蛋白质(特别是与抗体)缀合的技术是公知的。(见例如， Arnon et al. , Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy(ReisfeIdet al. eds. , Alan R. Liss, Inc.,1985)中的"Monoclonal Antibodies ForImmunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy, “ ；Hellstrom et al. , Controlled Drug Delivery(Robinson et al. eds. ,Marcel Dekker, Inc. , 2nded. 1987)中的"Antibodies For Drug Delivery,“； Thorpe,MonoclonalAntibodies' 84 :Biological And Clinical Applications(Pinchera et al. eds. , 1985)中的"Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy AReview“ ；Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy(Baldwin et al. eds. , Academic Press, 1985)中的"Analysis, Results, andFuture Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody InCancer Therapy,“禾口 Thorpe et al.，1982，Immunol. Rev. 62 :119_58。还见例如 PCT 公开 WO 89/12624.)。治疗剂可以以降低其活性的方式缀合，除非从抗体切除(例如通过水解、通过抗 体降解或通过切割试剂)。此类治疗剂通过可切割的接头(其对表达CD70的细胞的细胞内 环境中的切割敏感，但是对细胞外环境基本上不敏感)与抗体或其衍生物连接，使得当它 被表达CD70的癌细胞内化时缀合物被从抗体或其衍生物上切割下来(例如，在内体中，或 者，例如通过PH敏感性或蛋白酶敏感性，在溶酶体环境中或者在胞膜窖环境中)。典型地，ADC包含治疗剂和抗⑶70抗体或其衍生物之间的接头区域。如上文所提 到的，典型地，接头在细胞内条件下可被切割，从而，在细胞内环境中，接头的切割从抗体释 放出治疗剂(例如，在溶酶体或内体或胞膜窖内)。接头可以是例如，被细胞内肽酶或蛋白 酶(包括溶酶体或内体的蛋白酶)切割的肽基接头。典型地，肽基接头长度为至少两个氨 基酸或至少三个氨基酸。切割试剂可包括组织蛋白酶B和D和纤溶酶(见例如Dubowchikand Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123)。最典型的是可被表达 CD70 的细胞 中存在的酶切割的肽基接头。例如，可使用可被硫醇依赖性蛋白酶——组织蛋白酶B(在癌 性组织中高水平表达的)切割的肽基接头(例如，包含Phe-Leu或Gly-Phe-Leu-Gly肽的 接头)。其它此类接头描述于例如美国专利号6，214，345中。在一些特定的实施方式中， 可被细胞内蛋白酶切割的肽基接头包含Val-Cit接头或Wie-Lys 二肽(见例如美国专利 6，214，345，其描述了对具有Val-Cit接头的阿霉素的合成)。使用细胞内蛋白水解释放治 疗剂的一个优点是所述试剂在缀合时通常被解毒，并且缀合物的血清稳定性通常很高。可切割的接头可以是pH敏感的，S卩，对某些pH值下的水解敏感。典型地，pH敏 感的接头是可在酸性条件下水解的。例如，可使用可在溶酶体中水解的酸不稳定接头(例 如腙、缩氨基脲、缩氨基硫脲、顺乌头酰胺、原酸酯、缩醛、缩酮等等)(见例如美国专利号 5, 122, 368 ；5, 824, 805 ；5, 622, 929 ；Dubowchik and Walker,1999, Pharm. Therapeutics 83 :67-123 ；Neville et al.，1989，Biol. Chem. 264 14653-14661.)。此类接头在中性 pH 条件下(例如血中)相对稳定，但是它们在低于PH 5.5或？!1 5.0(溶酶体的近似邱)下不 稳定。在某些实施方式中，可水解的接头是硫醚接头(例如通过酰基腙键与治疗剂连接的 硫醚(见例如美国专利号5，622，929))。其它接头可在还原条件下被切割(例如二硫化物接头)。二硫化物接头包括可使 用SATA (N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基硫代乙酸酯)、SPDP (N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基 二硫代)丙酸酯)、SPDB (N-琥珀酰亚胺基-3- (2-吡啶基二硫代)丁酸酯)和SMPT (N-琥 珀酰亚胺基-氧基羰基-α -甲基-α - O-吡啶基-二硫代)甲苯)、SPDB和SMPT形成的 那些(见例如 Thorpe et al.，1987，Cancer Res. 47 :5924-5931 ；Wawrzynczak et al.，In Immunoconjugates :Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer(C. W. Vogel ed.，Oxford U. Press, 1987。还见美国专利号 4，880，935.)。接头还可以是丙二酸酯接头(Johnson et al.，1995，Anticancer Res. 15 1387-93)、马来酰亚胺苯甲酰接头(Lau et al.，1995，Bioorg-Med-Chem. 3 (10) 1299-1304)或 3，-N-酰胺类似物(Lau et al. , 1995, Bioorg-Med-Chem. 3 (10) :1305-12)。接头还可以是不可切割的接头，例如与药物单元直接连接的马来酰亚胺基-亚烷 基接头或马来酰亚胺-芳基接头。活性药物接头通过抗体的降解而释放。典型地，接头对细胞外环境基本上不敏感，这意味着当ADC或ADC衍生物存在 于细胞外环境(例如血浆)中时，ADC样品中接头的不超过大约20%，典型地不超过大约 15%,更典型地不超过大约10%，进一步更典型地不超过大约5%，不超过大约3%或者不 超过大约被切割。可例如通过将(a)ADC或ADC衍生物(“ADC样品”)和(b)等摩尔 量的未经缀合的抗体或治疗剂(“对照样品”)二者与血浆一起独立孵育预定的时间(例如 2、4、8、16或M小时)，然后将ADC样品中存在的未经缀合的抗体或治疗剂与对照样品中的 相比(例如通过高效液相色谱来测量)，来确定接头是否对细胞外环境基本上不敏感。接头还可促进细胞内化。当接头与治疗剂缀合时(即，在本文所述的ADC或ADC衍 生物的接头-治疗剂部分的环境中)，其可促进细胞内化。或者，当接头与治疗剂或抗CD70 抗体或其衍生物两者均缀合时(即，在本文所述的ADC或ADC衍生物的环境中)，其可促进 细胞内化。WO 2004-010957中描述了多种可用于本发明组合物的接头，其具有下述形式
权利要求
1.一种抗体，其相对与天然⑶70的结合而言与被固定的卵巢SK-0V-3或胰腺PANC-I 癌细胞系上变性的CD70特异性结合。
2.权利要求1的抗体，其是嵌合的或人源化抗体。
3.权利要求1的抗体，其以特异性结合结合经福尔马林固定的石蜡包埋的细胞或组织 上的变性CD70，所述特异性结合与以指定的保藏号PTA-8733保藏于ATCC的杂交瘤产生的 抗体SG-21. ICl或以指定的保藏号PTA-8734保藏于ATCC的杂交瘤产生的抗体SG-21. 5D12 的相同或更好。
4.权利要求1的抗体，所述抗体与以指定的保藏号PTA-8733保藏于ATCC的杂交瘤 产生的抗体SG-21. ICl或以指定的保藏号PTA-8734保藏于ATCC的杂交瘤产生的抗体 SG-21. 5D12竞争特异性结合变性的CD70。
5.权利要求4的抗体，其是以指定的保藏号PTA-8733保藏于ATCC的杂交瘤产生的抗 体SG-21. ICl或以指定的保藏号PTA-8734保藏于ATCC的杂交瘤产生的抗体SG-21. 5D12。
6.权利要求4的抗体，其包含与抗体SG-21.ICl的重链可变区具有至少90%序列同一 性的重链可变区和与抗体SG-21. ICl的轻链可变区具有至少90%序列同一性的轻链可变 区。
7.权利要求4的抗体，其包含与抗体SG-21.5D12的重链可变区具有至少90%序列同 一性的重链可变区和与抗体SG-21. 5D12的轻链可变区具有至少90%序列同一性的轻链可变区。
8.权利要求4的抗体，其包含具有抗体SG-21.ICl的重链可变区的⑶Rs的氨基酸序列 的重链可变区互补决定区(CDRs)和具有抗体SG-21. ICl的轻链可变区的CDRs的氨基酸序 列的轻链可变区CDRs。
9.权利要求4的抗体，其包含具有抗体SG-21.5D12的重链可变区的⑶Rs的氨基酸序 列的重链可变区CDRs和具有抗体SG-21. 5D12的轻链可变区的CDRs的氨基酸序列的轻链 可变区⑶Rs。
10.诊断试剂盒，其包含权利要求1-9中任意一项的抗体和使用所述抗体辅助对胰腺、卵巢、肺、喉、咽、乳腺或 皮肤的癌症进行诊断、预后或监测的说明书。
11.在患者的组织样品中检测CD70表达的方法，所述方法包括从所述患者获得胰腺、 卵巢、肺、喉、咽、乳腺或皮肤的组织样品；固定所述组织样品，并且对所述组织样品中的⑶70进行变性；将被固定的组织样品与权利要求1-9中任意一项的抗体接触；并检测所述抗体与所述被固定的组织样品的结合，以确定CD70是否在所述样品中表达；其中，所述被固定的组织样品上CD70的表达表明所述患者可能患有表达CD70的癌症。
12.权利要求11的方法，还包括相对于对照组织样品而言，基于CD70在所述样品中的 表达诊断癌症患者。
13.权利要求11的方法，还包括相对于对照组织样品而言，基于CD70的表达对所述患 者中癌症的存在进行预后。
14.权利要求11的方法，还包括确定所述患者的治疗方案，其中CD70的可检测到的表 达表明所述治疗方案包括用CD70抗体或抗体药物缀合物进行治疗。
15.权利要求11的方法，其中所述样品经福尔马林固定并且包埋于石蜡中。
16.对具有胰腺、卵巢、肺、喉、咽、乳腺或皮肤的癌症的患者进行诊断、预后、确定治疗 方案或监测治疗的方法，所述方法包括测定在来自所述患者的胰腺、卵巢、肺、喉、咽、乳腺 或皮肤的样品的细胞中CD70的表达，其中可检测到的CD70表达的存在用于所述患者的诊 断、预后、确定治疗方案或监测治疗。
17.权利要求16的方法，其中测定在经福尔马林固定的石蜡包埋的样品中细胞上的 ⑶70表达。
18.权利要求16的方法，其中通过与针对编码CD70的核酸的探针的杂交测定CD70表达。
19.权利要求16的方法，还包括如果所述测定步骤表明可检测到的CD70水平，那么 向所述患者施用CD70抗体或CD70抗体药物缀合物的有效剂量方案。
20.权利要求19的方法，其中施用⑶70抗体。
21.权利要求19的方法，其中施用CD70抗体药物缀合物。
22.权利要求16的方法，其中⑶70的表达作为所述样品中表达可检测到的⑶70的细 胞的百分比来测定。
23.权利要求16的方法，其中CD70的表达作为所述样品中细胞的平均表达水平来测定。
24.治疗CD70阳性癌症的方法，所述方法包括向具有CD70的可检测表达的胰腺、卵巢、 肺、喉、咽、乳腺或皮肤的癌症的患者施用CD70结合试剂的有效剂量方案，其中所述结合试 剂是抗体、抗体衍生物或抗体药物缀合物。
25.权利要求对的方法，其中所述结合试剂是具有效应功能的抗体。
26.权利要求对的方法，其中所述结合试剂是抗体药物缀合物。
27.权利要求M的方法，其中所述患者已经历过通过手术、放疗和/或用与CD70无关 的试剂化疗而没有导致癌症减轻的治疗。
28.权利要求M的方法，其中所述抗体是单克隆抗体1F6或2F2或其嵌合或人源化形 式。
29.权利要求M的方法，其中所述抗体是嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。
30.权利要求沈的方法，其中所述抗体药物缀合物包含选自由抗微管蛋白试剂、DNA小 沟结合试剂和DNA小沟烷基化试剂组成的组的细胞毒性剂。
31.权利要求沈的方法，其中所述抗体药物缀合物包含选自由auristatins、烯二炔 类、lexitropsin、多卡米星、紫杉烷、嘌呤霉素、多拉司他汀、美登木素生物碱和长春花生物 碱组成的组的细胞毒性剂。
32.权利要求30的方法，其中所述抗体药物缀合物包含抗微管蛋白试剂。
33.权利要求32的方法，其中所述抗微管蛋白试剂是auristatins、长春花生物碱、鬼 臼毒素、紫杉烷、浆果赤霉素衍生物、cryptophysin、美登木素生物碱或考布他汀。
34.权利要求33的方法，其中所述抗微管蛋白试剂是AFP、MMAP、MMAE、AEB、AEVB、 au r i s t a t i η E、长春新碱、长春碱、长春地辛、长春烯碱、VP -16、喜树碱、紫杉醇、多西 他赛、埃坡霉素Α、埃坡霉素B、洛可达唑、秋水仙素、colcimid、雌莫司汀、西马多丁、 discodermolide、美登素、DM-I 或 eleutherobin。
35.权利要求沈的方法，其中所述抗体通过接头与所述细胞毒性或细胞抑制剂缀合。
36.权利要求35的方法，其中所述接头在细胞内条件下是可切割的。
37.权利要求36的方法，其中所述可切割的接头包含可被细胞内蛋白酶切割的肽。
38.权利要求37的方法，其中所述肽是二肽。
39.权利要求38的方法，其中所述二肽是val-cit接头或phe-lys接头。
40.权利要求36的方法，其中所述可切割的接头在低于5.5的pH下是可水解的。
41.权利要求40的方法，其中所述可水解的接头是腙接头。
42.权利要求36的方法，其中所述可切割的接头是二硫化物接头。
43.权利要求对的方法，其中所述患者具有胰腺癌，并且所述胰腺癌是腺癌。
44.权利要求对的方法，其中所述患者具有卵巢癌，并且所述卵巢癌是上皮细胞的卵 巢癌。
45.权利要求M的方法，其中所述患者是人。
46.组合诊断和药物试剂盒，所述试剂盒包含用于诊断的权利要求1-9任意一项的抗 体，以及用于治疗的与天然CD70的细胞外结构域特异性结合的抗体。
47.在患者的组织样品中检测⑶70表达的方法，所述方法包括 获得肾、脑或血液的组织样品；固定所述组织样品，并且将所述组织样品中的⑶70蛋白质变性；将被固定的组织样品与权利要求1-9任意一项的抗体接触；以及检测所述抗体与所述被固定的组织样品的结合，以确定CD70是否在所述样品中表达；其中所述被固定的组织样品上CD70的表达表明所述患者可能患有表达CD70的癌症。
全文摘要
本申请提供了使用特异性结合变性的CD70的抗体诊断、预后、预防和治疗卵巢癌、胰腺癌和其它癌症的方法。
文档编号A61K39/395GK102056626SQ200980121463
公开日2011年5月11日 申请日期2009年4月10日 优先权日2008年4月11日
发明者M·L·史密斯, M·赖安 申请人:西雅图遗传学公司