专利名称：一种萝卜种子提取物及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种萝卜种子提取物及其制备方法与应用。
背景技术：
寄生于皮肤角蛋白组织的浅部真菌称为皮肤癣菌。由其引起的皮肤癣， 尤其手足癣(俗称脚气)、股癣是人类最多见的真菌病，皮肤癣菌分为毛癣菌属 (Trichophyfon)、表皮痛菌属(Epidermophyfon)禾口小抱子菌属(Microsporum) 3 个属。 在我国引起皮肤性真菌病的主要是石膏样毛癣菌(Trichophyfon gypseum)、红色毛癣菌 (Trichophyfon purpureatum)、絮状表皮癣菌(Epidermophyfon floccosum)、奥杜安小 孢子菌(Microsporum audouini)、犬小孢子菌(Microsporum canis)禾口石膏样小孢子菌 (Microsporum gypseum)等。大多数皮肤感染用外用的抗真菌剂多是化学制剂，如咪唑类(咪康唑，克霉唑， 益康唑，酮康唑)，环吡酮胺(ciclopirox)，萘替芬或特比萘芬，较新的系统性药物包括伊 曲康唑和氟康唑，口服的三唑类以及特比萘芬等第二代的丙烯胺类药物。酮康唑是一种 广谱口服咪唑类衍生物，对皮肤癣菌感染有效，但是偶可产生肝毒性(可严重甚或致死)， 使其应用受限。伊曲康唑与许多常用的处方药会产生相互作用。特比萘芬使胃排空延迟， 3%-5%的病人出现胃肠道副作用，并且在用药前及用药后需定期查肝功能。灰黄霉素是系 统性抗真菌药物中应用最广泛的，但是随之而来的副作用，例如头痛，胃肠疼痛，光敏感，皮 疹或白细胞减少，血管性水肿。也可发生眩晕及较少的红斑狼疮的加重或短暂的听力减退。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种制备萝卜提取物的方法。本发明所提供的制备萝卜提取物的方法，包括如下步骤将消毒的萝卜种子与水 混合，将混合物打成勻浆，将得到的勻浆离心，取上清液，即得到萝卜提取物。所述方法中，在所述将混合物打成勻浆前，包括将所述混合物静置12h的步骤。上述过程中，所述水的pH值为7. O。上述过程中，所述消毒的萝卜种子与水的体积比为1 (4-6)或1 4或1 5 或 1 6。上述过程中，所述离心方式为以5000r/min-11000r/min或8000r/min或5000r/ min 或 11000r/min 的速度离心 5min，旋转半径为 80mm-150mm 或 80mm 或 IOOmm 或 150mm。上述过程中，所述消毒的萝卜种子是按照如下消毒方法得到的先用水将萝卜种 子浸泡30min-60min或30min或45min或60min，去掉水，依次用75%乙醇水溶液和水冲洗 浸泡后的种子，得到所述消毒的萝卜种子。 上述过程中，所述水为蒸馏水或无菌去离子水。 上述过程中，所述萝卜为萝卜属植物；或所述萝卜属植物为萝卜(Raphanus sativus L)ο
由上述任一所述的方法得到的萝卜提取物也属于本发明的保护范围。由上述任一所述的方法得到的萝卜提取物在制备抑菌剂中的应用也属于本发明 的保护范围。由上述任一所述的方法得到的萝卜提取物在制备治疗皮肤病药物中的应用也属 于本发明的保护范围。本发明的另一个目的是提供一种抑菌剂。本发明所提供的抑菌剂，其活性成分为由上述任一所述的方法得到的萝卜提取 物。上述抑菌剂中，所述抑菌剂为抑制如下菌的抑菌剂毛癣菌属(Trichophyfon) 菌、表皮癣菌属(Epidermophyfon)菌或小孢子菌属(Microsporum)菌；所述毛癣菌属(Trichophyfon)菌为石膏样毛癣菌(Trichophyfon gypseum)或 红色毛癣菌(Trichophyfon purpureatum)，所述表皮癣菌属(Epidermophyfon)菌为絮状 表皮癣菌(Epidermophyfon floccosum),所述小孢子菌属(Microsporum)菌为奥杜安小 孢子菌(Microsporum audouini)、犬小孢子菌(Microsporum canis)或石膏样小孢子菌 (Microsporum gypseum)。本发明的最后一个目的是提供一种治疗皮肤病药物。本发明所提供的治疗皮肤病药物，其活性成分为由上述任一所述的方法得到的萝 卜提取物。上述治疗皮肤病药物中，所述皮肤病为皮肤真菌病。所述皮肤真菌病可为皮肤癣。 所述皮肤癣为头癣、体癣、股癣、手足癣(俗称脚气)、花斑癣或甲癣。上述治疗皮肤病药物中，所述皮肤真菌病是由如下菌引起的毛癣菌属 (Trichophyfon)菌、表皮癣菌属(Epidermophyfon)菌或小孢子菌属(Microsporum)菌；所述毛癣菌属(Trichophyfon)菌为石膏样毛癣菌(Trichophyfon gypseum)或 红色毛癣菌(Trichophyfon purpureatum)，所述表皮癣菌属(Epidermophyfon)菌为絮状 表皮癣菌(Epidermophyfon floccosum),所述小孢子菌属(Microsporum)菌为奥杜安小 孢子菌(Microsporum audouini)、犬小孢子菌(Microsporum canis)或石膏样小孢子菌 (Microsporum gypseum).实验证明，本发明提取物具有抑制引起皮肤病的真菌的功能；抑菌圈实验表明，本发明提取物的抑菌圈直径明显大于对照组；皮肤病治疗实验表明，本发明提取 物的治疗效果明显好于对照组，疗效快，无痛无副作用。另外，本发明提取物的制备方法简 单，材料来源广泛，成本低。因此，本发明提取物在真菌性皮肤病治疗领域将有广阔的应用 前景。
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。萝卜种子为普通白萝卜的种子，中文名萝卜.学名Raphanus sativus L.。萝卜种子购自农贸市场。实施例1、萝卜种子提取物的制备及功能验证
一 .制备程序如下1、消毒先用无菌去离子水将萝卜种子浸泡45min以软化种子表面附着的杂物，去掉水， 用75%乙醇水溶液冲洗浸泡后的种子2次，而后用无菌去离子水冲洗种子2次，得到消毒的 萝卜种子。2、将消毒的萝卜种子与无菌去离子水按照1 5的体积比混勻，静置12h。将浸泡 容器内的所有物质一起打成勻浆，将得到的勻浆以8000r/min的速度离心5min，旋转半径 为100mm，取上清液，即得到萝卜种子提取物，密封保存。二、抑菌实验将实验一制备的萝卜提取物直接作为抑菌剂。以石膏样毛癣菌(Trichophyfon gypseum进行如下抑菌实验。石膏样毛癣菌(Trichophyfon gypseum)购自辽宁中医学院，产品目录号为 LZY8905.以石膏样毛癣菌(Trichophyfon gypseum)为例，描述抑菌实验，其他菌株的实验 方法相同。培养菌株沙氏琼脂培养基培养1周，温度27 °C，获得较多的石膏样毛癣菌菌丝 体，再将其移植到其它沙氏琼脂平板培养基上增殖，27°C培养1-2周。制备菌液用无菌去离子水清洗培养皿上的真菌孢子，获得菌液.制备菌板高温灭菌的沙氏琼脂培养基，在温度降到50-60°C时，将制备好的菌液 混入，摇勻，待其凝固之后即成为菌板。接种抑菌剂在培养皿中央打一直径0. 5cm的孔，往里面滴注100 μ L萝卜种子提 取物，然后密封培养，从第4天起可以观察到菌板中央出现明显的抑菌圈，抑菌圈外围则长 满菌丝。同时以市售常见抗真菌药品达克宁为对照。实验设3次重复，结果取平均数。抑菌圈大小结果如下对于石膏样毛癣菌(Trichophyfon gypseum)，实验组2· 5cm ；对照组2· 0cm.三、治疗皮肤病实验实验均经过志愿者同意。实验中志愿者患有脚癣，由石膏样毛癣菌引起，共5例，均为在校大学生，患病部 位均为脚丫，其中4例患病程度中等，仅局部溃烂，1例较为严重，脚趾间皮肤严重溃烂，气 味难闻。药用方法将人体患病部位清洗，然后直接涂抹萝卜种子提取物，涂抹剂量约 lml，每天1次，晚上睡前洗脚后涂抹，共3天。同时以涂抹达克宁霜剂为对照。从5名志愿者中选择2例患病程度中等、仅局部 溃烂的患者作为对照组.(1)疗效结果实验组经过3天，涂抹3次，治愈；对照组经过7天，涂抹7次，治愈。
(2)副作用结果实验组，副作用0，经随后6个月内不定期访问，未见复发；对照组，7天之后治愈，但随后1个月内跟踪访问，有复发，继续涂抹达克宁霜剂， 已无太明显治疗效果，说明前期未彻底治愈，后期治疗时，该类型真菌对药剂产生了耐受 性。四、耐酸性、耐碱性和热稳定性检测耐酸性、耐碱性检测将萝卜种子勻浆研磨提取的介质(即无菌去离子水)通过酸 碱度调节，达到PH值分别为4 (酸性)和10 (碱性)，然后再重复上述由二 三的实验步骤， 抑菌圈比原酸碱度为7. 0(中性)的介质减小约10%。热稳定性检测由步骤一得到的萝卜上清液，在80°C水浴60min，然后重复步骤 二，检测发现其抑菌圈大小没有发生变化。结论萝卜种子提取物在pH为4和10时，能保持90%的活性；在80°C水浴60min 能保持100%的活性。实施例2、萝卜种子提取物的制备及功能验证一、制备步骤如下1、消毒先用无菌去离子水将萝卜种子浸泡30min以软化种子表面附着的杂物，去掉水， 用75%乙醇水溶液冲洗浸泡后的种子2次，而后用无菌去离子水冲洗种子2次，得到消毒的 萝卜种子。2、将消毒的萝卜种子与无菌去离子水按照1 4的体积比混勻，静置12h。将浸泡 容器内的所有物质一起打成勻浆，将得到的勻浆以5000r/min的速度离心5min，旋转半径 为80mm，取上清液，即得到萝卜种子提取物，密封保存。二、抑菌实验方法与实施例1中所述一致。结果与实施例1中实验组结果无显著差异。三、治疗皮肤病实验志愿者的发病情况患病部位均为脚丫，患病程度中等，仅局部溃烂。结果与实施例1中实验组结果无显著差异。四、耐酸性、耐碱性和热稳定性检测方法与实施例1中所述一致。结果与实施例1中实验组结果无显著差异。实施例3、萝卜种子提取物的制备及功能验证一、制备步骤如下1、消毒先用无菌去离子水将萝卜种子浸泡60min以软化种子表面附着的杂物，去掉水， 用75%乙醇水溶液冲洗浸泡后的种子2次，而后用无菌去离子水冲洗种子2次，得到消毒的 萝卜种子。2、将消毒的萝卜种子与无菌去离子水按照1 6的体积比混勻，静置12h。将浸泡 容器内的所有物质一起打成勻浆，将得到的勻浆以llOOOr/min的速度离心5min，旋转半径 为150mm，取上清液，即得到萝卜种子提取物，密封保存。二、抑菌实验
方法与实施例1中所述一致。结果与实施例1中实验组结果无显著差异。三、治疗皮肤病实验志愿者的发病情况患病部位均为脚丫，患病程度中等，仅局部溃烂。结果与实施例1中实验组结果无显著差异。四、耐酸性、耐碱性和热稳定性检测方法与实施例1中所述一致。结果与实施例1中实验组结果无显著差异。
权利要求
一种制备萝卜提取物的方法，包括如下步骤将消毒的萝卜种子与水混合，将混合物打成匀浆，将得到的匀浆离心，取上清液，即得到萝卜提取物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中，在所述将混合物打成勻浆 前，包括将所述混合物静置12h的步骤。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述消毒的萝卜种子与水的体积比 为 1 (4-6)或 1 4或 1 5或 1 6;所述离心方式为以 5000r/min-11000r/min 或 8000r/min 或 5000r/min 或 11000r/min 的速度离心5min,旋转半径为80mm-150mm或80mm或IOOmm或150mm。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于所述消毒的萝卜种子是按照如 下消毒方法得到的先用水将萝卜种子浸泡30min-60min或30min或45min或60min，去掉 水，依次用75%乙醇水溶液和水冲洗浸泡后的种子，得到所述消毒的萝卜种子。
5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于所述水为蒸馏水或无菌去离子水。
6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于所述萝卜为萝卜属植物；所述萝 卜属植物为萝卜(Raphanus sativus L.)。
7.由权利要求1-6中任一所述的方法得到的萝卜提取物。
8.萝卜种子或权利要求7所述萝卜提取物在制备抑菌剂中的应用；萝卜种子或权利要 求7所述萝卜提取物在制备治疗皮肤病药物中的应用。
9.一种抑菌剂，其活性成分为萝卜种子或权利要求7所述萝卜提取物；或一种治疗皮 肤病药物，其活性成分为萝卜种子或权利要求7所述萝卜提取物。
10.根据权利要求8所述的应用或根据权利要求9所述的抑菌剂或药物，其特征在于 所述抑菌剂为抑制如下菌的抑菌剂毛癣菌属(Trichophyfon)菌、表皮癣菌属(Epidermophyfon)菌或小孢子菌属(Microsporum)菌；所述毛癣菌属(Trichophyfon)菌为石膏样毛癣菌(Trichophyfon gypseum)或红 色毛癣菌(Trichophyfon purpureatum),所述表皮癣菌属(Epidermophyfon)菌为絮状 表皮癣菌(Epidermophyfon floccosum),所述小孢子菌属(Microsporum)菌为奥杜安小 孢子菌(Microsporum audouini)、犬小孢子菌(Microsporum canis)或石膏样小孢子菌 (Microsporum gypseum)；所述皮肤病为皮肤真菌病；和/或，所述皮肤真菌病为皮肤癣；和/或，所述皮肤癣为 头癣、体癣、股癣、手足癣、花斑癣或甲癣；所述皮肤真菌病是由如下菌引起的毛癣菌属(Trichophyfon)菌、表皮癣菌属 (Epidermophyfon)菌或小孢子菌属(Microsporum)菌；所述毛癣菌属(Trichophyfon)菌为石膏样毛癣菌(Trichophyfon gypseum)或红 色毛癣菌(Trichophyfon purpureatum),所述表皮癣菌属(Epidermophyfon)菌为絮状 表皮癣菌(Epidermophyfon floccosum),所述小孢子菌属(Microsporum)菌为奥杜安小 孢子菌(Microsporum audouini)、犬小孢子菌(Microsporum canis)或石膏样小孢子菌 (Microsporum gypseum)。
全文摘要
本发明涉及一种萝卜提取物及其制备方法与应用。该制备萝卜提取物的方法，包括如下步骤将消毒的萝卜种子用水浸泡，将浸泡容器内的所有物质打成匀浆，将得到的匀浆离心，取上清液，即得到萝卜提取物。实验证明，本发明提取物具有抑制引起皮肤病的真菌的功能；抑菌圈实验表明，本发明提取物的抑菌圈直径明显大于对照组；皮肤病治疗实验表明，本发明提取物的治疗效果明显好于对照组，疗效快，无痛无副作用。另外，本发明提取物的制备方法简单，材料来源广泛，成本低。因此，本发明提取物在真菌性皮肤病治疗领域将有广阔的应用前景。
文档编号A61K36/31GK101982185SQ20101052057
公开日2011年3月2日 申请日期2010年10月20日 优先权日2010年10月20日
发明者余文刚, 宋希强, 徐诗涛, 杨泽秀, 杨逢春 申请人:海南珠峰园林科技有限公司