专利名称：一种青阳参皂苷的提取方法
技术领域：
本发明天然产物分离领域，尤其是涉及一种采用酶解和膜分离提取青阳参皂苷方法。
背景技术：
青阳参为萝摩科隔山消属植物，彝药名为肉已勃齐，汉药名为青阳参、西河参、小白蔹、脱骨参，云南又称闹狗药。分布于云南、贵州、湖南、广西等地，秋季采根入药。《彝药志》记载益肾强筋、健脾和胃，祛风除湿、解毒、镇静、驱虫。《滇南本草》记载民间用作壮腰健肾，强筋壮骨。现代医学表明，青阳参主要药效成分是皂苷类成分，具有平肝补肾，豁痰镇痉，定痫。用于治疗癫痫，头昏头痛，眩晕，耳鸣，腰膝酸软等症。现有成药青阳参总苷片临床主要与苯妥英钠或苯巴比妥等抗癫痫药合用治疗顽固性癫痫或难治性癫痫，亦可单独用于治疗一般性癫痫。青阳参皂苷主要是三萜皂苷和留体皂苷，水溶性较差。现有提取青阳参皂苷的工艺有，甲醇提取、氯仿萃取或酸性醇溶液提取，大孔树脂分离。国内药厂分离纯化青阳参皂苷采用甲醇浸提、浓缩除去甲醇后用氯仿萃取，将萃取液浓缩干燥即得产品，其纯度最高为60% (可见光分光光度法)。该工艺采用有毒、高成本的氯仿作为溶剂提取青阳参中总皂苷，产品得率低，有机溶剂残留高、生产成本高。如专利(申请号200810068894) “从青阳参中分离提纯青阳参总甙的方法”，该专利公开的方法以青阳参为原料，加入甲醇水溶液和盐酸，回流提取，将提取的溶液调节至中性，用硅藻土过滤，滤液进行浓缩，再加水上大孔树脂柱进行分离，上柱后先水洗至无色，再用低浓度乙醇洗脱除杂，然后用高浓度乙醇洗脱并收集洗脱液，真空浓缩至干，即得高纯度的青阳参总甙固体粉末。由于青阳参总苷多为留体皂苷水溶性较差，浓缩液在水中分散较难，容易析出，堵塞大孔树脂，上柱较难，污染严重。还有文献“青阳参皂苷分离纯化工艺及其分散片的研究”，该文献提取青阳参皂苷工艺路线是数为料液比为1 10，提取液为含 0. 05molHCL的50%乙醇溶液，于70°C加热回流提取2h，大孔吸附树脂DM130吸附，以蒸馏水、30%乙醇、95%乙醇依次洗脱，收集95%乙醇洗脱部位作为青阳参总苷部位。
发明内容
本发明要解决技术问题是提供一种操作简单、污染小的青阳参皂苷的提取方法。为解决上述问题，本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种青阳参皂苷的提取方法，其特征在于包含以下步骤1)酶解取青阳参粉碎40-80目，加入2-5%。生物酶自然酶解，制得酶解原料；2)提取把上述酶解原料加入5-10倍量低碳醇溶液微波提取2-3次，提取液加入超滤膜过滤，得滤液；
3)萃取滤液减压浓缩，浓缩液加入水饱和正丁醇萃取2-3次，收集正丁醇层浓缩回收正丁醇，浓缩液加少许乙醚沉淀；3)柱分离滤出上述沉淀物，加95%乙醇回流溶解，溶解液过氧化铝活性炭混合短柱，下柱液回收乙醇，减压干燥得青阳参皂苷。所述步骤1)酶解条件生物酶可选纤维素酶、淀粉酶和果胶酶中的两种以上的酶，添加量为原料的2-5%。，用pH3-5酸性水溶解与原料拌湿，常温酶解36-M小时。所述步骤幻中的低碳醇为90-100%甲醇或乙醇溶液，超滤膜为截留分子量 6000-10000的管式复合膜。所述步骤4)中的氧化铝活为120-200目中性氧化铝，活性炭为针剂类药用活性炭，混合比例5-8 1。本发明优势在于a).发明采用生物酶酶解，可以破坏植物纤维，切断皂苷和大分子多糖的键合，提高收率。b).发明采用微波提取，提取时间短，提取效率高，能耗低。c).发明采用膜分离除杂，属于物理方法，周期短，产品损失小。d).发明采用氧化铝活性炭混合短柱，过柱速度快，比单纯的活性炭吸附效果好。f).整个工艺操作简单，易于放大，无大量废液产生，利于环保。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1 取青阳参lkg，粉碎40目，取2g纤维素酶和2g淀粉酶溶于100mlpH4的盐酸水溶液，加入原料中拌勻，室温酶解36小时，得酶解原料。酶解原料投入微波提取罐，加入 10L90%甲醇溶液提取30分钟，提取液滤出，再加10L90%甲醇溶液提取30分钟，合并两次滤液，经400目滤网过滤，滤液加入截留分子量6000的管式复合膜超滤，压力控制在5kpa， 收集透过液，滤液减压浓缩，加适量水得浓缩液150ml。浓缩液加入300ml水饱和正丁醇搅拌均勻，倒入分液漏斗，分层后收集正丁醇层，萃取3次，萃取液浓缩回收正丁醇，浓缩液加少许乙醚沉淀，得沉淀物35g。沉淀物加95%乙醇回流溶解，完全溶解后，过氧化铝活性炭混合短柱(混合比6 1)，收集下柱液，减压浓缩干燥得青阳参皂苷类白色粉末21g，含量 89. 7%。实施例2 取青阳参1kg，粉碎60目，取3g纤维素酶和Ig淀粉酶溶于100mlpH5的硫酸水溶液，加入原料中拌勻，室温酶解M小时，得酶解原料。酶解原料投入微波提取罐，加入 10L90%乙醇溶液提取30分钟，提取液滤出，再加10L90%乙醇溶液提取30分钟，合并两次滤液，经500目滤网过滤，滤液加入截留分子量10000的管式复合膜超滤，压力控制在6kpa， 收集透过液，滤液减压浓缩，加适量水得浓缩液200ml。浓缩液加入400ml水饱和正丁醇搅拌均勻，倒入分液漏斗，分层后收集正丁醇层，萃取2次，萃取液浓缩回收正丁醇，浓缩液加少许乙醚沉淀，得沉淀物32g。沉淀物加95%乙醇回流溶解，完全溶解后，过氧化铝活性炭混合短柱(混合比5 1)，收集下柱液，减压浓缩干燥得青阳参皂苷类白色粉末17. 91g，含量 92. 5%o实施例3 取青阳参1kg，粉碎80目，取Ig淀粉酶和2g果胶酶溶于100mlpH3的盐酸水溶液， 加入原料中拌勻，室温酶解36小时，得酶解原料。酶解原料投入微波提取罐，加入10L95% 乙醇溶液提取30分钟，提取液滤出，再加10L95%乙醇溶液提取30分钟，合并两次滤液，经 500目滤网过滤，滤液加入截留分子量6000的管式复合膜超滤，压力控制在5kpa，收集透过液，滤液减压浓缩，加适量水溶解得浓缩液120ml。浓缩液加入300ml水饱和正丁醇加热搅拌均勻，倒入分液漏斗，分层后收集正丁醇层，萃取3次，萃取液浓缩回收正丁醇，浓缩液加少许乙醚沉淀，得沉淀物^g。沉淀物加95%乙醇回流溶解，完全溶解后，过氧化铝活性炭混合短柱(混合比8 1)，收集下柱液，减压浓缩干燥得青阳参皂苷类白色粉末1.7g，含量 91. 4%。实施例4:取青阳参10kg，粉碎80目，取15g纤维素酶和15g果胶酶酶和lLpH5的盐酸水溶液，加入原料中拌勻，室温酶解48小时，得酶解原料。酶解原料投入微波提取罐，加入 100L90%甲醇溶液提取30分钟，提取液滤出，再加100L90%甲醇溶液提取30分钟，合并两次滤液，过500目滤网过滤，滤液加入截留分子量6000的管式复合膜超滤，压力控制在 6kpa,收集透过液，滤液减压浓缩，加适量水得浓缩液15L。浓缩液加入3L水饱和正丁醇加热搅拌均勻，倒入分液漏斗，分层后收集正丁醇层，萃取3次，萃取液浓缩回收正丁醇，浓缩液加少许乙醚沉淀，得沉淀物338g。沉淀物加95%乙醇回流溶解，完全溶解后，过氧化铝活性炭混合短柱(混合比7 1)，收集下柱液，减压浓缩干燥得青阳参皂苷类白色粉末223g， 含量88. 1%ο实施例5 取青阳参50kg，粉碎80目，取70g纤维素酶和60g果胶酶酶和5LpH5的盐酸水溶液，加入原料中拌勻，室温酶解M小时，得酶解原料。酶解原料投入微波提取罐，加入 400L90%乙醇溶液提取30分钟，提取液滤出，再加400L90%乙醇溶液提取30分钟，合并两次滤液，经500目滤网过滤，滤液加入截留分子量6000的管式复合膜超滤，压力控制在 6kpa，收集透过液，滤液减压浓缩，加适量水，得浓缩液7L。浓缩液加入15L水饱和正丁醇加热搅拌均勻，倒入分液漏斗，分层后收集正丁醇层，萃取2次，萃取液浓缩回收正丁醇，浓缩液加少许乙醚沉淀，得沉淀物16Mg。沉淀物加95%乙醇回流溶解，完全溶解后，过氧化铝活性炭混合短柱(混合比6 1)，收集下柱液，减压浓缩干燥得青阳参皂苷类白色粉末 1098g，含量 90. 1% ο
权利要求
1.一种青阳参皂苷的提取方法，其特征在于包含以下步骤1)酶解取青阳参粉碎至40-80目，加入2-5%。生物酶自然酶解，制得酶解原料；2)提取把上述酶解原料加入5-10倍量低碳醇溶液微波提取2-3次，提取液加入超滤膜过滤，得滤液；3)萃取滤液减压浓缩，浓缩液加入水饱和正丁醇萃取2-3次，收集正丁醇层浓缩回收正丁醇，浓缩液加少许乙醚沉淀；4)柱分离滤出上述沉淀物，加95%乙醇回流溶解，溶解液过氧化铝活性炭混合短柱， 下柱液回收乙醇，减压干燥得青阳参皂苷。
2.如权利要求1所述青阳参皂苷的提取方法，其特征在于所述步骤1)酶解条件生物酶可选纤维素酶、淀粉酶和果胶酶中的两种以上的酶，添加量为原料的2-5%。，用pH3-5酸性水溶解和原料拌湿，常温酶解36-M小时。
3.如权利要求1所述青阳参皂苷的提取方法，其特征在于所述步骤2)中的低碳醇为 90-100%甲醇或乙醇溶液，超滤膜为截留分子量6000-10000的管式复合膜。
4.如权利要求1所述青阳参皂苷的提取方法，其特征在于所述步骤4)中的氧化铝活性炭柱为120-200目中性氧化铝，活性炭为针剂类药用活性炭，混合比例5-8 1。
全文摘要
本发明涉及了一种青阳参皂苷的提取方法，采用生物酶解、膜分离、氧化铝短柱纯化青阳参皂苷，产品收率高，含量高，具体步骤为取青阳参粉碎40-80目，加入2-5‰生物酶自然酶解，得酶解原料，酶解原料加入5-10倍量低碳醇溶液微波提取2-3次，提取液加入超滤膜过滤，滤液减压浓缩，浓缩液加入水饱和正丁醇萃取2-3次，收集正丁醇层浓缩回收试剂，浓缩液加少许乙醚沉淀，滤出上述沉淀物，加95％乙醇回流溶解，溶解液过氧化铝活性炭混合短柱，下柱液回收乙醇，减压干燥得青阳参皂苷。本方法工艺操作简单，能耗低、污染小，适合工业化生产。
文档编号A61P25/08GK102462718SQ201010549779
公开日2012年5月23日 申请日期2010年11月19日 优先权日2010年11月19日
发明者刘东锋, 李法庆, 杨成东 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司