专利名称：：治疗和/或预防动脉粥样硬化的免疫调节方法和系统，以及相关蛋白、肽和组合物的制作方法
技术领域：
：本公开物涉及特别适于治疗和/或预防动脉粥样硬化和/或与其相关的病症的免疫调节方法和系统，以及相关蛋白、肽和组合物。
背景技术：
：动脉粥样硬化现在被看作是一种与脂质相关的和免疫调节性的慢性动脉壁炎性疾病。已经鉴定了参与动脉粥样硬化的很多免疫成分，并且临床前研究已取得令人满意的结果，该结果提示靶向这些成分的免疫调节疗法可以减少动脉粥样硬化。MM本文提供了诱导个体免疫调节反应的方法和系统。在几个实施方案中，本公开物的方法和系统诱导的免疫调节反应对个体动脉粥样硬化或与其相关的病症产生了治疗或预防作用。根据第一个方面，描述了治疗和/或预防个体动脉粥样硬化的方法和系统。该方法包括抑制个体针对Ap0BlOO的CD4+T细胞反应，特别是通过施用治疗有效量的能够抑制所述反应的化合物。该系统包括适于抑制个体针对Ap0BlOO的CD4+T细胞反应的一种或多种试剂和适于检测个体中反应降低的一种或多种试剂。根据第二个方面，描述了治疗和/或预防个体动脉粥样硬化的方法和系统。该方法包括抑制个体T细胞受体β链可变区(Τcellreceptorbetavariable)31(TCRTRBV31)，特别是通过施用治疗有效量的能够抑制所述受体的化合物进行抑制。该系统包括适于抑制个体中T细胞受体β链可变区31的一种或多种试剂和适于检测个体中这种抑制的一种或多种试剂。可供选择地，该方法包括抑制个体的T细胞受体，该受体具有与TRBV31的序列高度同源的DNA序列，特别是通过施用治疗有效量的能够抑制所述受体的化合物进行抑制。该系统包括适于抑制个体中这种T细胞受体的一种或多种试剂和适于检测个体中这种抑制的一种或多种试剂。根据第三个方面，描述了治疗和/或预防个体动脉粥样硬化的方法和系统。该方法包括针对τ细胞受体β链可变区31免疫个体，所述免疫例如通过施用TCRTRBV31肽SEQIDNO1或其它TCRTRBV31免疫原性片段，尤其是来自CDR2可变区的TCRTRBV31免疫原性片段进行。该系统包括适于针对个体的T细胞受体β链可变区31免疫个体的一种或多种试剂和适于检测个体中这种免疫的一种或多种试剂。可供选择地，该方法包括针对与TRBV31高度同源的T细胞受体免疫个体，所述免疫例如通过施用同源(人)TCRTRBV304或TCRTRBV30免疫原性片段，尤其是来自⑶R2可变区的TCRTRBV30免疫原性片段进行。则该系统包括适于针对该个体的这种T细胞受体免疫个体的一种或多种试剂和适于检测个体中这种免疫的一种或多种试剂。根据第四个方面，描述了T细胞受体β链可变区31或其免疫原性片段，该T细胞受体β链可变区31，其用作药物。根据第五个方面，描述了T细胞受体β链可变区31或其免疫原性片段，该T细胞受体β链可变区31，其用于治疗动脉粥样硬化。根据第六个方面，与TRBV31的序列高度同源的T细胞受体，如同源人TCRTRBV30或TCRTRBV30免疫原性片段，尤其是来自⑶R2可变区的TCRTRBV30免疫原性片段，用于治疗动脉粥样硬化。根据第七个方面，与T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)或其免疫原性片段具有反应性的抗体，其用作药物。根据第八个方面，与TRBV31的序列高度同源的T细胞受体具有反应性的抗体，例如同源人TCRTRBV30或TCRTRBV30免疫原性片段，尤其是来自CDR2可变区的TCRTRBV30免疫原性片段，用作药物。根据第九个方面，与T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)或其免疫原性片段具有反应性的抗体用于治疗动脉粥样硬化。根据第十和第十一个方面，一种抗体用于治疗动脉粥样硬化，该抗体是与TRBV31的序列高度同源的τ细胞受体具有反应性的抗体，所述T细胞受体如同源人TCRTRBV30或TCRTRBV30免疫原性片段，尤其是来自⑶R2可变区的TCRTRBV30免疫原性片段。根据第十一个方面，描述了一种组合物，特别是疫苗，该组合物包含至少一个T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)，其免疫原性片段或抗体，连同佐剂和/或赋形剂。在一些实施方案中，该佐剂和/或赋形剂是药用的并且该组合物是药物组合物。根据第十二个方面，描述了一种组合物，特别是疫苗，该组合物包含至少一个T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)，其免疫原性片段或抗体，连同佐剂和/或赋形剂。在一些实施方案中，该佐剂和/或赋形剂是药用的并且该组合物是药物组合物。根据第十三个方面，描述了一种杂交瘤，其来自用oxLDL免疫且携带人类Ap0BlOO作为转基因(huB100t9)的小鼠，特别是已根据布达佩斯条约于2009年1月22日保藏TDSMZ-^MMWM^UMrjP'ij·(DeutscheSammlungvonMikro-organismenundZellkulturenGmbH),Inhofftenstrasse7B，38124不伦瑞克(Braunschweig)，德国，保藏号为DSMACC2986的杂交瘤克隆48_5。根据第十四个方面，使用已根据布达佩斯条约于2009年1月22日保藏于DSMZ-德国微生物菌种保藏中心，hhofftenstrasse7B，381不伦瑞克，德国，保藏号为DSMACC2986的杂交瘤克隆48-5鉴定抑制针对Ap0BlOO的⑶4+T细胞反应的化合物。根据其阻止48-5暴露于apoBlOO或其片段时活化的能力来鉴定该化合物。本文描述的方法和系统可用于这些应用，其中所述应用期望在个体中抑制针对ApoBlOO的CD4+T细胞反应，抑制⑶4+TRVB31与ApoBlOO结合，和/或对个体的动脉粥样硬化具有治疗或预防作用。附图和以下说明书中阐明了本发明公开内容的一个或多个实施方案的详情。根据说明书和附图，以及权利要求书，其它特征、目的和优点将很明显。附图简述引入附图并且其构成本说明书的一部分，和用来解释本发明公开内容的原理和实施过程的详细说明书和实施例部分，阐明本发明公开内容的一个或多个实施方案。ai显示了举例说明根据本文描述的实施方案，与T细胞识别天然LDL和Ap0BlOO相关的结果的图表。图2显示了举例说明根据本文描沭的实施方案，证明LDL的氧化和T细胞活化之间反相关的结果的图表。_显示了举例说明证明在本文所述的实施方案中杂交瘤反应是I-Ab限制性的结果的图表。Si显示了这样的图表，其举例说明证明在本文描述的实施方案中杂交瘤反应不依赖⑶1和MHC-I呈递的结果。_显示了证明在本文描述的实施方案中T细胞受体(TCR)基因型的实验的结^ο_显示了这样的图表，其举例说明在本文描述的实施方案中，与FACS评估的TCR表达相关的结果。Sl显示了这样的图表，其举例说明了根据本文描述的实施方案，表明胆固醇和甘油三酯血浆水平的结果。图8显示了这样的图表，其举例说明在本文描述的实施方案中，表明针对oxLDL和LDL的抗体滴度的结果。图9显示了这样的图表和相片，其表明在本文描述的实施方案中，TRVB31+细胞耗尽降低针对Ap0BlOO的T细胞反应。图10显示了这样的图表，其举例说明表明在本文描述的实施方案中，针对TRBV31的免疫诱导封闭性抗体的结果。图11显示了这样的图表，其举例说明表明在本文描述的实施方案中，针对TRBV31的免疫减少动脉粥样硬化的结果。优诜实施方案的详细说明本文提供了治疗和/或预防个体的动脉粥样硬化或与其相关的病症的方法和系统和相关产品和组合物。本文使用的术语“治疗(treating)或治疗(treatment)”表示任何这样的活动，该活动是以医药(medically)或外科手术方式对病症进行医疗护理的一部分，或以医药或外科手术方式处理病症。本文使用的术语“预防(preventing)或预防(prevention)”表示降低个体的病症死亡率或发病率负担的任何活动。这在一级、二级和三级预防水平进行，其中a)—级预防避免发生疾病；b)二级预防活动旨在疾病早期治疗，由此增加干预的机会来预防疾病进展和出现症状；和c)三级预防通过恢复功能和减少疾病相关并发症来降低已有疾病的负面影响。本文使用的术语“病症”通常表示个体身体的这样的身体状况(总体上或其一个或多个部位)，其不符合与完全的身体、精神以及可能地社会福利的状况有关的个体的身体状况(总体上或其一个或多个部位)。本文描述的状况包括但不限于紊乱和疾病，其中术语“紊乱”表示与身体或其任何部位的功能异常相关的有生命个体的状况，术语“疾病”表示有生命个体的这样的状况，该状况损害了身体或其任何部位的正常功能，并且典型地表现出显著的体征和症状。示例性的状况包括但不限于个体的损伤、失能、紊乱(包括精神和身体紊乱)、综合征、感染、异常行为，和个体的身体或身体部位的结构和功能的不典型变化。本文使用的关于两个项目的措辞“与……相关”表示两个项目之间的关系，以致于第一项的发生伴有第二项的发生，包括但不限于因-果关系和征兆/症状-疾病的关系。本文使用的术语“个体”表示单个生物体，如高等动物，特别是脊椎动物，如哺乳动物，更特别的是人类。动脉粥样硬化现在被看作是一种与脂质相关的和免疫调节性的慢性动脉壁炎性疾病。已经鉴定了参与动脉粥样化形成的很多免疫成分，并且临床前研究已经取得有前景的结果，该结果提示靶向这些成分的免疫调节疗法可以减少动脉粥样硬化。本文使用的术语“动脉粥样硬化”表示心血管病症，尤其是慢性炎性疾病，其特征为引起动脉壁内膜中炎性反应的脂蛋白累积。血管内膜(tunicaintima)(或仅内膜)是动脉或静脉的最内层。内膜典型地由一层内皮细胞构成并由内侧弹性膜(lamina)支撑。在内膜中，内皮细胞直接接触血流。使用克隆扩充T细胞群的适应性免疫反应有助于这个炎性过程，由巨噬细胞和其它细胞支持的先天免疫反应亦然。几个证据线索指向低密度脂蛋白(LDL)颗粒成分作为血管炎症触发物。本文使用的术语“低密度脂蛋白，，或“LDL”表示将胆固醇和甘油三酯从肝脏输送到外周组织的那种类型的脂蛋白。LDL是脂蛋白五个主族之一；这些族包括乳糜微粒、极低密度脂蛋白(VLDL)、中等密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白(HDL)。如同所有的脂蛋白一样，LDL能够使脂肪和胆固醇在血流的基于水的溶液中移动。典型地，天然LDL颗粒含有单个载脂蛋白B(apoB)分子，其使脂肪酸循环起来，保持它们溶于水性环境。LDL颗粒上的apoB在遍及全身的各种细胞中作为LDL受体的配体。该蛋白在血浆中主要以两种同工型ApoB48和Ap0BlOO存在。第一种只由小肠合成，第二种由肝脏合成。载脂蛋白B-100分子具有4536个氨基酸残基和约514kD的分子量。另外，LDL典型地具有高度疏水核心，该核心由被称为亚油酸的多不饱和脂肪酸和约1500个酯化胆固醇分子组成。这个核心被磷脂和未酯化胆固醇以及单一拷贝的ApoB-IOO的外壳围绕。LDL颗粒直径为大约22nm，质量有约3百万道尔顿。低密度脂蛋白受体位于多种类型细胞的外表面上，它们在那里接受在血流中循环的低密度脂蛋白并将它们输送到细胞中。一旦进入细胞，低密度脂蛋白就分解而释放胆固醇。然后胆固醇被细胞利用、储存或从身体清除掉。低密度脂蛋白受体脱离它们的负载物后，循环返回到细胞表面以接受更多低密度脂蛋白。当LDL颗粒渗入内膜，它们易于遭受氧化修饰。这种变化可能包括被髓过氧化物酶和脂肪加氧酶进行酶学攻击，以及非酶学氧化反应。作为氧化的最初结果，磷脂、胆留醇酯和甘油三酯中脂肪酸残基的双键被切开，产生反应性醛类和截短的脂类。在后者当中，修饰的磷脂如溶血卵磷脂和氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(ox-PAPC)可以活化内皮细胞、巨噬细胞和Bl型B细胞，从而启动先天免疫反应，包括粘附分子表达、产生趋化因子和分泌天然抗体。LDL的蛋白结构部分也是氧化修饰的目标。它们包括载脂蛋白B-100(Ap0BlOO)的赖氨酰残基上丙二醛(MDA)、4_羟基壬烯醛和其它分子种类的加合物形成。形成针对LDL颗粒的MDA-赖氨酸和其它氧化产生的表位的抗体(Ketelhuth，D.F.，Tonini,G.C.，Carvalho,M.D.,Ramos,R.F.,Boschcov,P.,禾口Gidlund,M.(2008).AutoantibodyresponsetochromatographicfractionsfromoxidizedLDLinunstableanginapatientsandhealthycontrols(在不稳定的绞痛患者和健康对照中针对来自氧化的LDL的色谱级分的自身抗体反应那个).kandJImmunol68，456-462)。这种抗体在外周血中循环，也可以在动脉粥样硬化病变中发现。与Bl细胞产生的氧化磷脂的天然抗体相比，抗MDA-ApoBlOO抗体主要是IgG分子(Yla-Herttuala,S.，Palinski,W.，Butler,S.W.，Picard,S.，Steinberg,D.,禾口Witztum,J.L.(1994).RabbitandhumanatheroscleroticlesionscontainIgGthatrecognizesepitopesofoxidizedLDL(兔禾口人的动脉粥样硬化病变包含识别氧化的LDL的表位的IgG)·ArteriosclerThromb14，32-40.)。这暗示T细胞的参与有助于激活B细胞同种型转变。在一些实施方案中，本文描述的治疗和/或预防个体动脉粥样硬化的方法包括抑制个体中针对ΑροΒΙΟΟ的⑶4+T细胞反应。本文使用的术语“T细胞”表示一组被称为淋巴细胞的白细胞，它们在细胞介导的免疫中起着重要作用，并且在它们的细胞表面存在一种称作T细胞受体(TCR)的特殊受体，由此可以与其他类型淋巴细胞，如B细胞和天然杀伤细胞区分开来。T细胞中缩写T代表胸腺，因为它是T细胞发育的主要器官。在高胆固醇血症小鼠和从人动脉粥样硬化病变分离的克隆中已经鉴定到T细胞，由于LDL颗粒和氧化过程的生化复杂性，对T细胞表位的分子特性了解甚少。抗体通常由浆细胞产生，浆细胞是在活化CD4+T淋巴细胞产生的各种细胞因子存在下，和通过T淋巴细胞-B淋巴细胞的直接相互作用，由B淋巴细胞成熟而来。当⑶4+T淋巴细胞遇到具有主要组织相容性复合体II类抗原呈递细胞例如B淋巴细胞和巨噬细胞的抗原性肽时，它们被活化。因此，T淋巴细胞识别主要组织相容性复合体II类肽复合体对于免疫反应的发展和抗体产生尤为重要。主要组织相容性复合体II类分子是高度多态的异源二聚膜糖蛋白，由α和β链组成。主要组织相容性复合体II类分子的功能是结合主要由胞外蛋白衍生的短肽结合，接着形成主要组织相容性复合体II类肽复合体，该复合体与CD4+T淋巴细胞合适的T细胞受体相互作用。成熟时，MHC分子锚定在细胞膜中，在那里它们通过T细胞受体(TCRs)对T细胞展示短多肽。所有MHC分子接受来自它们所属细胞内部的多肽，并在细胞外表面上展示它们，用于被T细胞识别。术语“Τ细胞受体或TCR”表示T淋巴细胞(或T细胞)表面发现的分子，通常它负责识别与主要组织相容性复合体(MHC)分子结合的抗原。TCR是异源二聚体，在95%的T细胞中，其由α和β链组成，而5%的T细胞的TCRs由γ和6链组成。TCR与抗原和MHC的接合通过由相关酶、共同受体和特异性辅助分子介导的一系列生化事件引起它的T淋巴细胞活化。TCRα链和β链的可变结构域都具有三个高变区或互补性决定区(CDRs)，而β链可变区具有另外的高变区域(HV4)，该区正常不接触抗原，因此不认为是CDR。CDR3是负责识别加工抗原的主要CDR，尽管α链的CDRl也可以与抗原性肽的N末端部分相互作用，以及β链的⑶Rl与该肽的C末端部分相互作用。⑶R2区与呈递该肽的MHC分子相互作用。MHC分子同时结合特异性共同受体增强了来自T细胞复合体的信号。本文使用的术语“CD4+T细胞”表示T细胞，尤其是辅助T细胞和调节T细胞，它们的细胞表面存在共同受体CD4。在辅助T细胞上，CD4只与II类MHC结合。共同受体不仅确保TCR对于正确呈递的抗原的特异性，而且允许延长抗原呈递细胞和T细胞之间接合，由此增加必需分子(例如Lck)在涉及活化T淋巴细胞的信号传导的细胞内募集。例如，抗原与T细胞受体(TCR)结合刺激IL-2和一些其它细胞因子的分泌，以及IL-2受体(IL-2R)表达。在一些实施方案中，⑶4+T细胞是存在T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)的⑶4+Τ细胞。本文使用的关于化合物或功能基团的术语“呈递”表示实施连接以保持所连接的该化合物或功能基团的化学和/或生物学反应性。因此，细胞上呈递的蛋白在合适的条件下能够执行一个或多个化学和/或生物学反应，该反应从化学和/或生物学上表征该蛋白。本文使用的术语“Τ细胞受体β链可变区31”或“TRVB31”表示携带T细胞受体β链可变区31的T细胞，本领域技术人员阅读本发明公开内容后可以认识到。本文使用的术语“Τ细胞受体β链可变区30”或“TRVB30”表示携带T细胞受体β链可变区30的T细胞，本领域技术人员阅读本发明公开内容时可以认识到。本文使用的术语“具有与TRBV31的序列高度同源的DNA序列的T细胞受体”表示其β链可变结构域是TRBV31的直向同源物的T细胞受体，TRBV31如www.treefam.org中所限定。例如，在人类中，TRBV31的直向同源物是TRBV30。在一些实施方案中，使用抑制针对Ap0BlOO的⑶4+T细胞反应的化合物。这种化合物可以是根据其防止杂交瘤克隆48-5暴露于apoBlOO或其片段时被活化的能力而鉴定的化合物。杂交瘤克隆48-5已经根据布达佩斯条约于2009年1月22日保藏在DSMZ-德国微生物菌禾中保藏中心(DeutscheSammlungvonMikro-organismenundZellkulturenGmbH),Inhofftenstrasse7B，38124不伦瑞克，德国，保藏号DSMACC2986。在一些实施方案中，抑制针对ApoBlOO的⑶4+T细胞反应通过抑制TCRTRVB31来进行。在一些实施方案中，抑制针对ApoBlOO的⑶4+T细胞反应通过抑制具有与TRBV31的序列高度同源的DNA序列的T细胞受体来进行。在一些实施方案中，治疗和/或预防个体的动脉粥样硬化和/或与其相关的病症可以通过施用治疗有效量的化合物来进行，该化合物抑制T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)与包含载脂蛋白B-100或其片段的分子结合。在一些实施方案中，治疗和/或预防个体的动脉粥样硬化和/或与其相关的病症可以通过施用治疗有效量的化合物来进行，该化合物抑制具有与TRBV31的序列高度同源的DNA序列的T细胞受体与包含载脂蛋白B-100或其片段的分子结合。在一些实施方案中，T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)与包含载脂蛋白Β-100或其片段的分子的结合被抑制。在一些实施方案中，具有与TRBV31的序列高度同源的DNA序列的T细胞受体与包含载脂蛋白Β-100或其片段的分子的结合被抑制。在一些实施方案中，抑制针对ApoBlOO的⑶4+T细胞反应通过针对TCRTVB31或其免疫原性片段免疫个体来进行。接种疫苗引起抗原特异性免疫调节是预防或治疗慢性炎性疾病的具有吸引力的方法。以抗原特异性方式动员保护性免疫反应，避免了由于宿主抗感染的防御受阻造成的副作用。因此，在慢性炎症性疾病，如动脉粥样硬化中，抗原特异性抑制病理性自身免疫性是令人感兴趣的。通过几种不同机制可以实现抗原特异性免疫保护，如产生保护性抗体，致病性T细胞克隆缺损或失活(无反应性)，或诱导由调节性T细胞(Treg)家族介导的抑制性细胞免疫。在一些实施方案中，可以用TCRTRVB31蛋白进行免疫。在一些实施方案中，可以用TCRTRVB31的片段，尤其是包括TCRβ链⑶R2可变区的部分(氨基酸残基45-62，ATGGTLQQLFYSITVGQV-SEQIDNO1)的TRBV31肽进行免疫，其在本文也表示为TRVB31肽。本文使用的术语“蛋白”或“多肽”表示由两个或更多氨基酸单体和/或其类似物组成的有机聚合物。术语“多肽”包括任何长度的氨基酸聚合物，包括全长蛋白和肽，以及其类似物和片段。三个或更多氨基酸的多肽也称作寡肽。本文使用的术语“氨基酸”、“氨基酸性单体”或“氨基酸残基”是指二十个天然存在的氨基酸中任何一个，包括具有非天然侧链的合成的氨基酸并且包括D和L光学异构体二者。术语“氨基酸类似物”是指其中一个或多个个体原子已经被不同的原子、同位素，或不同的功能基团所取代，但在其他方面等同于其天然氨基酸类似物的氨基酸。本文使用的术语“片段”表示任何长度的多肽的一部分。因此TCRTVBR31的抗原性片段是表现出抗原性特性的TCRTVBR31的一部分。本文描述的TCRTVBR31的抗原性片段也包括无论是合成的还是可能是其衍生的任何肽。本文使用的关于第一多肽的术语“衍生物”(例如TCRTVBR31抗原性片段)表示第二多肽，该第二多肽结构上与第一多肽有关并且通过修饰而衍生自第一多肽，这种修饰引入了第一多肽中不存在的特征，同时保留了第一多肽的功能特性。因此，TCRTVBR31的抗原性片段的衍生多肽，通过氨基酸序列的修饰，通常不同于原始多肽或其部分，这种修饰可能伴有或可能不伴有原始多肽或其部分中不存在的额外功能。然而TCRTVBR31的抗原性片段的衍生多肽保留了可与对于TCRTVBR31或其抗原性片段所描述的抗原特性相媲美的抗原特性。在一些实施方案中，描述了TCRTRBV31肽或其片段用作药物，尤其是用于治疗动脉粥样硬化。在一些实施方案中，可以用与T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)或其片段具有反应性的抗体进行免疫。在一些实施方案中，描述了与T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)或其片段具有反应性的抗体用作药物，尤其是用于治疗动脉粥样硬化。本文使用的术语“抗体”是指一种类型蛋白，该蛋白在抗原刺激后由活化B细胞产生并可以与抗原特异性结合，促进生物系统中的免疫反应。全部抗体典型地由四个亚单位组成，包括两条重链和两条轻链。该术语抗体包括天然的和合成的抗体，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体或其片段。示例性的抗体包括IgA、IgD、IgGUIgG2、IgG3、IgM等等。示例性的片段包括FabFv、Fab，F(ab')2等等。单克隆抗体是与另一种生物分子的单一特定空间和极性结构(术语称作“表位”)特异性结合并由此被解释为与其互补的抗体。在一些情形中，单克隆抗体也可以具有相同的结构。多克隆抗体是指不同的单克隆抗体的混合物。在一些情形中，多克隆抗体可以是单克隆抗体的混合物，其中这些单克隆抗体中至少两个与不同的抗原表位相结合。不同的抗原表位可以在相同的靶标、不同的靶标上，或其组合上。抗体可以通过本领域熟知的技术来制备，如宿主免疫和收集血清(多克隆的)，或通过制备连续杂交瘤细胞系和收集分泌的蛋白(单克隆的)。在一些实施方案中，本文描述的抑制T细胞反应的蛋白(包括抗体)、肽和/或试剂和合适的佐剂和/或赋形剂一起包含在组合物中。本文使用的术语佐剂表示改变其它试剂(例如药物、疫苗)的作用，而当施用它们本身时，直接作用即使有也很少的药物学或免疫学试剂。它们常常包括在疫苗中以增强接受者对所提供抗原的免疫反应，同时保持最少的注射外源物质。佐剂类型包括刺激免疫系统和增强对疫苗的反应，本身不具有任何特定抗原作用的免疫佐剂。本文使用的术语赋形剂表示用作药物活性成分的载体的非活性物质。示例性的赋形剂还可以用于使含有非常有效活性成分的制剂膨胀，以允许方便且精确的给药。除了它们在单剂量的量中的用途之外，赋形剂可以用在制备过程中以辅助有关活性物质的处理。根据给药途径和药物形式，本领域技术人员可认识到可以使用不同的赋形剂。在一些实施方案中，组合物包含TCRTRVB31的选定(免疫原性的)肽片段，可能的毒素/类毒素破伤风毒素、白喉类毒素、霍乱毒素B亚单位，以及BSA、HAS、rHSA、KLH、卵白蛋白。在一些实施方案中，佐剂和赋形剂是药物可接受的，所得组合物是药物组合物。在那些实施方案中的一些中，药物组合物是疫苗。本文公开的抑制CD4+T细胞对ΑροΒΙΟΟ反应和/或抑制TCRTRVB31与ΑροΒΙΟΟ结合的试剂，尤其是TCRTRVB31，其片段和/或相关抗体，可以提供作为系统的一部分来治疗和/或预防。该系统可以以成套阵列或试剂盒的形式提供。在成套试剂盒中，试剂和进行检测抑制和/或免疫的测定法的其它试剂可以分开包含在试剂盒中。试剂可以包括在一种或多种组合物中，并且每种试剂可以与合适的载体一起处于组合物中。本文使用的术语“检测”表示测定有限份空间中靶标的存在、出现或事实，该空间包括但不限于样品、反应混合物、分子复合体和底物。本文使用的“检测”可以包括测定靶标的化学和/或生物学特性，包括但不限于与其它化合物相互作用的能力，尤其是结合的能力，激活另一种化合物的能力，和本领域技术人员阅读本发明公开内容时可认识到的另外特性。检测可以是定量的或定性的。当检测涉及、关于或包括测量靶标或信号的量(也称作定量)时，这种检测是定量的，它包括但不限于目的是测定靶标或信号的量或比例的任何分析。当检测涉及、关于或包括依据与另外靶标或信号相比的相对丰度来鉴定靶标或信号的质量或类型时，这种检测是定性的，不是定量的。另外的组分可以包括标记分子，尤其是标记的多核苷酸、标记的抗体、标记、微流体芯片、比照标准，和本领域技术人员阅读本发明公开内容时可认识到的另外的组分。本文使用的作为复合体或分子组分的术语“标记”和“标记分子”是指能够检测的分子，包括但不限于放射性同位素、荧光团、化学发光染料、生色团、酶、酶底物、酶辅因子、酶抑制剂、染料、金属离子、纳米颗粒、金属溶胶、配体(如生物素、抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白或半抗原)等等。术语“荧光团”是指能够在可检测图像中显示出荧光的物质或其一部分。因此，本文使用的措辞“标记信号”表示允许标记检测的标记发出的信号，包括但不限于放射性、荧光、化学发光、酶反应结果中化合物的产生等等。11在一些实施方案中，抑制和/或免疫的检测可以通过基于荧光的读数来实施，其中标记抗体被荧光团标记，它包括但不仅仅是小分子染料、蛋白生色团、量子点和金纳米颗粒。另外的技术本领域技术人员在阅读本发明公开内容时可认识到，不再进一步详细讨论了。特别是，为了实施本文描述的方法，试剂盒的成分可以和合适的说明书和其它必需试剂一起提供。试剂盒中所含组合物通常处于分开的容器中。实施测定的说明书，例如在纸质或电子载体上的成文或音频说明书，例如磁带或CD-ROMs，通常也将包括在试剂盒中。根据所用的具体方法，试剂盒还可以含有其它包装试剂和材料(即洗涤缓冲液等等)。特别地，在一些实施方案中，公开了药物组合物，其含有本文描述的至少一种试剂，和一种或多种相容的和药物可接受载体，特别是药物可接受稀释剂或赋形剂。在那些药物组合物中，该试剂可以作为活性成分施用，用于治疗或预防个体的病症。在一些实施方案中，描述了来自用oxLDL免疫并携带人类转基因Ap0BlOO的小鼠(huB100t9)的杂交瘤用于鉴定抑制⑶4+T细胞对Ap0BlOO反应的合适试剂的用途。特别地，杂交瘤克隆48-5已经根据布达佩斯条约于2009年1月22日保藏在DSMZ-德国微生物菌种保藏中心，hhofftenstrasse7B，381不伦瑞克，德国，保藏号DSMACC2986，和相关的用途和系统。本领域技术人员在阅读本发明公开内容时可以认识到关于本文描述的杂交瘤、试剂、组合物、方法的实施，包括实施该方法的系统(该系统可以是成套试剂盒的形式)，以及相关组合物(该组合物包括试剂和其它试剂，和组合物的合适载体、试剂或辅助试剂)，和试剂盒的一般制备和包装的更多详细情况。实施例下列实施例进一步阐明本文描述的方法和系统，以举例说明方式提供这些实施例且并不意欲限制本发明。具体地，下列实施例阐明了示例性的方法和系统是基于用来自TCRTRVB31的特异性肽进行免疫来抑制针对Ap0BlOO的CD4+T细胞反应。本领域技术人员会认识到详细描述的关于下述内容的特征的适用范围，用来自TCRTRVB31的不同肽进行免疫，或抑制针对Ap0BlOO的CD4+T细胞反应的其它方法和系统，特别是根据本发明公开内容的存在TCRTRVB31的CD4+T细胞。在下列实施例中，数值以平均数士平均值的标准误差(SEM)表示，除非另有陈述。非参数的Marm-WhitneyU检验用于配对比较。ρ小于0.05被认为组间差异是显著的。实施例1:Τ细胞杂交瘤的天然人类LDL和ΑροΒ100_对于这些实验，使用HuBlOOtg小鼠(携带人类Ap0BlOO作为转基因的小鼠)表征针对oxLDL的T细胞反应。这些小鼠在肝脏以及肠中表达人类全长ΑροΒΙΟΟ，并显示出人源化脂蛋白谱。对于T细胞杂交瘤的产生，使用7周龄人类ΑροΒΙΟΟ雄性转基因小鼠huB100tg(C57BL/6,129-Apobtm2sgy,DNXTransgenics,Princeton,USA)。这些小鼠携带全长人APOB基因，其中密码子2153已由亮氨酸变为谷氨酰胺以防止ApoB48形成，仅允许ΑροΒΙΟΟ产生(Boren，J.，Lee,I.，Zhu,W.，Arnold,K.，Taylor,S.,禾口Irmerarity，Τ.L.(1998).Identificationofthelowdensitylipoproteinreceptor-bindingsiteinapolipoproteinBlOOandthemodulationofitsbindingactivitybythecarboxylterminusinfamilialdefectiveapo_B100(鉴定载月旨蛋白BlOO中的低密度脂蛋白受体结合位点并且通过家族缺陷型apo-ΒΙΟΟ中的羧基端调节其结合活性)·JClinInvestlOl,1084-1093；Linton，Μ.F.，Farese，RV.，Jr.，Chiesa，G.，Grass,D.S.，Chin，P.，Hammer,RE.，Hobbs，H.H.，禾口Young，S.G.(1993).TransgenicmiceexpressinghighplasmaconcentrationsofhumanapolipoproteinBlOOandlipoprotein^)(转基因小鼠表达高血浆浓度的人载脂蛋白BlOO和脂蛋白).JClinInvest92,3029-3037；Yao，Z.M.，Blackhart，B.D.，Johnson，D.F.，Taylor，S.Μ·，Haubold，K.W.，禾口McCarthy，B.J.(1992).EliminationofapolipoproteinB48formationinrathepatomacelllinestransfectedwithmutanthumanapolipoproteinBcDNAconstructs(在用突变的人载脂蛋白BcDNA构建体转染的大鼠肝癌细胞系中去除载脂蛋白B48的形成)·JBiolChem267，1175-1182.)。将50μg铜氧化人LDL(oxLDL)与完全弗氏佐剂(CFA)混合，皮下(s.c)首次免疫小鼠，2周后用与弗氏不完全佐剂(IFA)混合的50f.IgoxLDL对小鼠加强免疫。Havel等(Havel,RJ.,Eder,H.Α.,禾口Bragdon,J.H.(1955).Thedistributionandchemicalcompositionofultracentrifugallyseparatedlipoproteinsinhumanserum(在人血清中超速离心的脂蛋白的分布和化学组成).JClinInvest34，1345-1353)描述了氧化人LDL(oxLDL)如下制备用超速离心法从健康供体合并的血浆中分离LDL(d=1.019-1.063g/mL)。分离后，用PBS大面积透析LDL。一等分试样的LDL添加ImMEDTA用作未修饰的LDL。在20IJMCUS04存在下，37°C孵育ImLLDL(lmg/mL蛋白含量，用Bradford，Biorad，USA测定)1获得高度氧化的LDL。T细胞杂交瘤的产生在如上所述的oxLDL初次免疫和加强注射后，收集淋巴结(LN)细胞并与胸腺瘤细胞融合产生杂交瘤如下Kappler等(Kappler，J.W.，Skidmore,B.，White,J.，和Marrack,P.(1981).Antigen-inducible,H-2-restricted,interleukin-2-producingTcellhybridomas.LackofindependentantigenandH_2recognition(抗原可诱导的、H_2局限性的、产生白介素-2的T细胞杂交瘤。缺乏独立的抗原和H-2识别).JExpMed153，1198-1214)描述了聚乙二醇诱导5χIO7个淋巴结细胞(LN)和3χIO7个BW5147胸腺瘤细胞融合以产生T细胞杂交瘤。简言之，融合前3天期间用3μg/mloxLDL刺激来自免疫小鼠的LN细胞。融合后，添加1χIO6个胸腺细胞作为饲养细胞，将细胞混悬液接种在96孔板中并在3rC、7.5%CO2下温育。温育M小时后，向培养基中添加次黄嘌呤_氨基蝶呤_胸腺嘧啶核苷(HAT)以选择成功融合的细胞。在268个生长的杂交瘤培养物中，发现有117个表达CD3和CD4。接着，经有限稀释克隆23个HAT抗性单克隆杂交瘤并筛选它们针对天然LDL、铜oxLDL和纯化的未修饰ΑροΒΙΟΟ的反应性。筛选阳性克隆在同源的照射的抗原呈递细胞(APC)存在下，在23个HAT抗性单克隆杂交瘤暴露于推定的抗原(天然LDL、铜oxLDL和纯化的未修饰ApoBlOO)后，评估由它们产生的IL-2引起的活化(抗原与T细胞受体(TCR)结合刺激IL-2分泌)。这种细胞吸收并加工抗原，引起与MHC分子结合的抗原性肽的呈递。为了防止T细胞识别外来MHC分子作为抗原而活化，需要同源的APC，即来自携带与T细胞相同的MHC的小鼠的APC。以96孔测定法测定T细胞反应性，采用1χIO5个T杂交瘤细胞和4xl05个照射的(1.6Gy)APCs，采用不同的抗原。如实施例1中讨论的来制备LDL和oxLDL。如W^essel等以前描述的(Wessel，D.，和Flugge,U.I.(1984)Amethodforthequantitativerecoveryofproteinindilutesolutioninthepresenceofdetergentsandlipids(在存在去柜齐[J禾口月旨质时定量回收稀释溶液中的蛋白的方法)AnalBiochem138，141-143)并做少许变动获得Ap0BlOO。简言之，向0.ImlLDL(lmg/mL)中添加0.4ml甲醇、0.Iml氯仿和0.3ml水；接着用力混合混悬液并以9000xg离心1分钟。除去上相并向含沉淀蛋白的下相和分界面添加0.3ml甲醇，再次用力混合并以9000xg离心2分钟使蛋白沉淀。为了获得可溶且高度纯的ΑροΒΙΟΟ，将沉淀的蛋白重悬于最小体积的10%SDS(Bio-Rad实验室，Hercules,CA,USA)溶液中直至完全溶解。然后这些ΑροΒΙΟΟ制剂经受首次过滤，采用PD-10柱(GEHealthcare，以前的AmershamBiosciences,Uppsala,Sweden)以除去过量的SDS，随后使用大小排阻柱Superdex-200(0.5mL/min，在Tris-HCl中pH7.4)进行纯化。收集含ΑροΒΙΟΟ的第一峰，并丢弃含有来自LDL纯化步骤的污染蛋白的额外峰。当第二次注入Superdex-200柱(GEHealthcare,Uppsala,Sweden)评估时，ApoB100制剂显示出90%以上的纯度。最后，用Bradford测定法(Bio-RadLaboratories,Hercules,CA,USA)测定蛋白浓度。通过将脾脏在尼龙过滤器(1001-lm)上网筛，之后裂解红细胞并洗涤来制备APCs。用伴刀豆球蛋白A(c0ncavalin)(ConA)作为阳性对照。将细胞在补充5%胎牛血清(FCS)的Dulbecco's改良Eagle's培养基(DMEM)中，在3rC、7.5%C02下培养M小时。通过ELISA(R&DSystems，Abingdon，UnitedKingdom)测定培养物上清液的白介素2(IL-2)并将其作为T细胞活化的读数。结果可以参见图1A，其中二十三个HAT抗性单克隆杂交瘤中的每一个的1χIO5个杂交瘤细胞与4χIO5个照射的APCs连同40μg/mLLDL、oxLDL或ApoBlOO—起培养。用培养基作为阴性对照。明显地，所有23个检验的单克隆T细胞杂交瘤中，11个对天然人LDL和ΑροΒΙΟΟ起反应，但是没有一个对氧化LDL有反应。用聚合酶链式反应(PCR)对TCR进行基因分型用PCR对可以对天然LDL和ΑροΒΙΟΟ起反应的i^一个克隆进行基因分型。用RNeasymini试剂盒(Qiagen,Valencia,CA,USA)制备来自11个杂交瘤克隆的每一个的1χIO7个杂交瘤细胞的总RNA，并使用SuperscriptII(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)将其逆转录为cDNA，采用随机六核苷酸引物(pdN6)在RNasin(LifeTechnologies,CergyPontoise,France)存在下进行。用合适的Va家族特异性5‘引物(表1)连同恒定区Ca3'引物，或相关的νβ家族特异性5‘引物(表2)连同恒定区Ci33’引物扩增所产生的cDNA。表1用于TRAV的基因分型的引物权利要求1.一种治疗和/或预防个体中动脉粥样硬化的方法，所述方法包括施用治疗有效量的抑制个体中针对Ap0BlOO的CD4+T细胞反应的化合物。2.权利要求1的方法，其中抑制针对Ap0BlOO的CD4+T细胞反应的化合物是被鉴定具有阻止杂交瘤克隆48-5暴露于apoBlOO或其片段时活化的能力的化合物，其中所述杂交瘤克隆48-5是已根据布达佩斯条约于2009年1月22日保藏于DSMZ-德国微生物菌种保藏中心，Inhofftenstrasse7B,38124不伦瑞克，德国，保藏号为DSMACC2986的杂交瘤克隆。3.权利要求1或2的方法，其中所述CD4+T细胞是存在T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)的CD4+T细胞。4.权利要求1或2的方法，其中所述CD4+T细胞是存在这样的T细胞受体的CD4+T细胞，所述T细胞受体具有与TRBV31高度同源的β链可变区区段的DNA序列。5.权利要求1-4任一项的方法，其中所述CD4+T细胞是T辅助细胞。6.一种治疗和/或预防个体中动脉粥样硬化的方法，所述方法包括施用治疗有效量的抑制个体中T细胞受体β链可变区31的化合物。7.权利要求5的方法，其中所述抑制是通过抑制所述T细胞受体β链可变区31与Ap0BlOO或其片段结合而进行的。8.一种治疗和/或预防个体中动脉粥样硬化的方法，所述方法包括施用治疗有效量的抑制个体中T细胞受体的化合物，所述T细胞受体具有与TRBV31的序列高度同源的DNA序列。9.权利要求8的方法，其中所述抑制是通过抑制T细胞受体与Ap0BlOO或其片段结合而进行的，所述T细胞受体具有与TRBV31的序列高度同源的DNA序列。10.一种治疗和/或预防个体中动脉粥样硬化的方法，所述方法包括针对τ细胞受体β链可变区31免疫所述个体。11.权利要求10的方法，其中所述免疫是通过施用TCRTVRB31的⑶R2可变区的免疫原性片段而进行的。12.权利要求10或11的方法，其中所述免疫是通过施用具有SEQIDNO1的序列的肽或其免疫原性片段而进行的。13.一种治疗和/或预防个体中动脉粥样硬化的方法，所述方法包括针对T细胞受体β链可变区30免疫所述个体。14.权利要求13的方法，其中所述免疫是通过施用TCRTVRB30的⑶R2可变区的免疫原性片段而进行的。15.一种药物组合物，其包含能够抑制针对Ap0BlOO的⑶4+Τ细胞反应的试剂，以及药用佐剂和/或赋形剂。16.一种治疗和/或预防动脉粥样硬化的疫苗，所述疫苗包含T细胞受体β链可变区31的免疫原性试剂。17.权利要求16的疫苗，其中所述试剂是TCRTRVB31或其片段。18.权利要求17的疫苗，其中所述试剂是具有SEQIDNO1的序列的肽或其片段。19.权利要求16的疫苗，其中所述试剂是与T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)或其片段具有反应性的抗体。20.T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)或其片段，其用作药物。21.T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)或其片段，其用于治疗动脉粥样硬化。22.与T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)或其片段具有反应性的抗体，其用作药物。23.与T细胞受体β链可变区31(TCRTRBV31)或其片段具有反应性的抗体，其用于治疗动脉粥样硬化。24.一种治疗和/或预防动脉粥样硬化的疫苗，所述疫苗包含T细胞受体β链可变区30的免疫原性试剂。25.权利要求M的疫苗，其中所述试剂是TCRTRVB30或其片段。26.权利要求M的疫苗，其中所述试剂是与所述T细胞受体β链可变区30(TCRTRBV30)或其片段具有反应性的抗体。27.T细胞受体β链可变区30(TCRTRBV30)或其片段，其用作药物。28.T细胞受体β链可变区30(TCRTRBV30)或其片段，其用于治疗动脉粥样硬化。29.与T细胞受体β链可变区30(TCRTRBV30)或其片段具有反应性的抗体，其用作药物。30.与T细胞受体β链可变区30(TCRTRBV30)或其片段具有反应性的抗体，其用于治疗动脉粥样硬化。31.杂交瘤克隆48-5，其根据布达佩斯条约于2009年1月22日保藏于DSMZ-德国微生物菌种保藏中心，Inhofftenstrasse7B，381不伦瑞克，德国，保藏号为DSMACC2986032.—种治疗和/或预防个体中动脉粥样硬化的系统，所述系统包含一种或多种适于抑制所述个体的针对Ap0BlOO的CD4+T细胞反应的试剂和一种或多种适于检测所述个体中反应降低的试剂。33.一种治疗和/或预防个体中动脉粥样硬化的系统，所述系统包含一种或多种适于抑制所述个体的T细胞受体β链可变区31的试剂和一种或多种适于检测所述个体中这种抑制的试剂。34.一种治疗和/或预防个体中动脉粥样硬化的系统，所述系统包含一种或多种适于针对所述个体的T细胞受体β链可变区31免疫所述个体的试剂和一种或多种适于检测所述个体中这种免疫的试剂。35.一种治疗和/或预防个体中动脉粥样硬化的系统，所述系统包含一种或多种适于抑制所述个体的T细胞受体β链可变区30的试剂和一种或多种适于检测所述个体中这种抑制的试剂。36.一种治疗和/或预防个体中动脉粥样硬化的系统，所述系统包含一种或多种适于针对所述个体的T细胞受体β链可变区30免疫所述个体的试剂和一种或多种适于检测所述个体中这种免疫的试剂。全文摘要治疗或预防个体的动脉粥样硬化和/或与其相关的病症的免疫刺激方法和系统。文档编号A61P9/10GK102439035SQ201080020760公开日2012年5月2日申请日期2010年3月17日优先权日2009年3月17日发明者古兰·K·汉森申请人:佛斯卡专利公司