专利名称：去氢木香内酯在制备抑制血管生成药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中草药单体的应用，具体地说，是一种中草药单体去氢木香内酯 在制备抑制血管生成药物中的应用。
背景技术：
血管生成是一个涉及多种细胞的多种分子的复杂过程，包括内皮细胞分泌蛋白酶 降解基底膜、内皮细胞的增殖和迁移、新生毛细血管官腔结构的形成，募集周细胞以稳定新 形成的毛细血管网、通过原始血管的重塑和扩展形成成熟的血管网。抑制血管生成分子和促进血管生成分子间的动态平衡被认为是调控血管生成的 “开关”。大多数情况下，两者处于平衡，血管生成机制关闭；而当二者的平衡被破坏时，血管 生成机制被开启，从而导致疾病的发生与发展。血管生成也在胚胎发育、生殖、创伤修复以 及女性的生理周期等机体正常生理过程中发挥着重要作用。一些疾病如各种原因引起的肿 瘤、眼部新血管形成、关节炎、皮肤疾患、动脉粥样硬化等疾病的发生与发展，都与血管生成 有关。恶性肿瘤是严重威胁人类健康的重大疾病，肿瘤血管为肿瘤的生长提供必须的营 养成分并帮助排出代谢废物，肿瘤血管形成与肿瘤生长、复发、转移的密切关系被认为是上 世纪肿瘤学理论的重大突破之一，而肿瘤抗血管生成治疗被认为是治疗恶性肿瘤具有重大 医学价值的策略之一。去氢木香内酯(Dehydrocostus lactone)是一种植物倍半萜类化合物，来自于云 木香(Saussurea lappa)的干燥根。其分子式为C15H18O2，分子量为230. 30。对去氢木香内酯 药理学活性的研究表明去氢木香内酯具有抗分支杆菌活性，也是细胞毒性T淋巴细胞的 有效抑制剂。该化合物还具有抗肿瘤作用，能诱导人前列腺癌细胞DU145凋亡，增强TNF- α 诱导人白血病细胞HL60凋亡等药理学活性。但目前还没有去氢木香内酯抑制新生血管形 成并作为血管形成抑制剂使用的报道。中国专利文献CN:100577180C公开了一种藤黄酸在制备抑制血管生成药物中的 应用。该发明提供了藤黄酸在制备抑制血管生成药物中的应用，特别是在制备抑制肿瘤、 关节炎、视网膜病、血管瘤、银屑病等疾病的病变组织血管生成的药物中的应用。中国专利 文献CN :1511531A公开了高三尖杉酯碱和三尖杉酯碱在抑制血管生成中的应用。该发明 公开了高三尖杉酯碱和三尖杉酯碱在抑制血管生成中的新用途，研究表明，高三尖杉酯碱 和三尖杉酯碱具有抑制血管生成的作用，同时具有特异性、剂量小、疗效高、副作用小和不 易产生耐药性等优点。中国专利文献CN :101342214A公开了一种木香总内酯药物组合物 及其制备方法。该发明提供了一种木香总内酯药物组合物及其制备方法，还提供了一种木 香总内酯药物组合物在制备治疗或预防胃运动障碍的药物中的应用。中国专利文献CN: 101073590A公开了一种从中药木香中提取得到的总内酯提取物及其制备方法，还提供了一 种该提取物用于制备药物或功能性食品的应用。但是关于去氢木香内酯在抑制血管生成中 的应用目前还未见报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种去氢木香内酯在制备抑制血管 生成药物中的应用。为实现上述目的，本发明采取的技术方案是去氢木香内酯在制备抑制血管生成 药物中的应用。所述的去氢木香内酯作为单一成分或与其他药学上可接受的成分构成组合物以 制备抑制血管生成的药物。所述的其他药学上可接受的成分可以是与去氢木香内酯没有拮抗作用的药物，也 可以是药学上允许的任一一种或多种辅料。所述的抑制血管生成的药物剂型为胶囊剂、片剂、口服制剂、微囊制剂、注射剂、栓 剂、喷雾剂或软膏剂。所述的抑制血管生成的药物的给药方式为注射、口服、胃肠外、吸入式喷雾或透皮给药。所述的抑制血管生成药物为抑制肿瘤血管新生的药物。所述的血管生成为肿瘤病变组织的血管新生和肿瘤导致的血管新生。所述的肿瘤为实体肿瘤。所述的实体肿瘤为原发性或继发性实体肿瘤。所述的肿瘤血管新生包括白血病、淋巴瘤和骨髓瘤血液癌症的血管新生。所述的抑制血管生成药物为抑制银屑病病变组织血管新生的药物。所述的抑制血管生成药物为抑制I^aget’ s疾病血管新生的药物。所述的抑制血管生成药物为抑制良性血管增生疾病的血管新生的药物。所述的抑制血管生成药物为抑制关节炎病变组织的血管新生的药物。所述的抑制血管生成药物为抑制动脉粥样硬化病变处的血管新生的药物。所述的抑制血管生成药物为抑制新生血管性眼病的血管生成的药物。所述的新生血管性眼病为原发性或继发性新生血管性眼病。
本发明优点在于
本发明提供了去氢木香内酯新的用途，首次发现去氢木香内酯抗血管生成作用，首次 发现去氢木香内酯可有效抑制血管内皮细胞的增殖、迁移和小管形成，说明去氢木香内酯 具有抗血管生成活性，可作为血管生成抑制剂使用，能够作为血管生成抑制剂应用于血管 生成药物的制备以治疗肿瘤、关节炎、银屑病、眼科疾病、动脉粥样硬化等新生血管依赖性 和新生血管相关性疾病。
附图1是去氢木香内酯抑制HUVEC的增殖的照片。附图2是去氢木香内酯抑制HUVEC Transwell小室迁移的照片。附图3是去氢木香内酯抑制HUVEC小管形成的照片。
具体实施例方式下面结合附图对本发明提供的具体实施方式
作详细说明。实施例1去氢木香内酯抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖实验
采用CCK-8法检测HUVEC的增殖。CCK-8试剂中含有WST - 8 (2-(2-甲氧基-4-硝基 苯基)-3- (4-硝基苯基)-5- (2，4- 二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐)，它在电子载体I-Methoxy PMS (1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有 高度水溶性的黄色甲臜(Formazan)产物。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用 酶联免疫检测仪在450 nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。通过该方法可 评价药物对HUVCE增殖的影响。方法HUVEC细胞接种于96孔板中培养。待细胞生长达到80%融合后，将去氢木 香内酯按以下浓度1、3、10、30、100 μΜ加入孔中，作用48 h后每孔加与孔内体积比为1 10 体积的CCK-8溶液，置于37 ！培养箱继续孵育2 h，用可调波长式微孔酶标仪在450 nm处 检测OD值。以未加去氢木香内酯的孔作为对照。以含细胞培养液和CCK-8溶液但不含细 胞的孔做为空白。按如下公式计算细胞活力
细胞活力(％)= (ODsample -ODblank) / (ODcontrol-ODblank) X 100% 结果与结论请参照附图1，附图1是去氢木香内酯抑制HUVEC的增殖的照片。如图1 所示，去氢木香内酯对HUVEC的增殖抑制作用呈剂量依赖关系。去氢木香内酯的浓度为3 μ M时，HUVEC的细胞活力为44%，10 μ M浓度以上时的HUVEC的增殖被完全抑制，细胞活力 为0。与对照组(去氢木香内酯的浓度为0 μ Μ)相比具有极显著性差异< 0.01)。实施例2去氢木香内酯抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移实验
Transwell法检测HUVEC迁移。"Transwell是一种实验技术，这项技术的主要材料 是Transwell小室(chamber)，小室的底层有一层通透性的膜(一般常用的是聚碳酸酯膜 (polycarbonate membrane)，这层膜带有孔径大小0. 1 — 12. 0 Mm的微孔，实验中细胞置于 小室上，在小室下含有的趋化因子或生长因子的作用下，细胞透过聚碳酸酯膜，从而进行共 培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多方面的研究。方法下室加入600 μ 含有20 ng/ml的VEGF165的HUVEC培养液。上室中加入含 有不同浓度去氢木香内酯的HUVEC (细胞密度为2X 105/ml)，置于(X)2细胞培养箱中培养8 h。未加去氢木香内酯的组为对照。8 h后，从培养箱取出培养板，弃去孔中培养液，加入600 μ 戊二醛常温固定15 min，用棉签轻轻擦去上室未迁移的细胞，然后加入200 μ 0.1% 结晶紫染色，最后用PBS漂净多余的结晶紫染料。在正置显微镜(Olympus)下观察拍照。结果与结论迁移后的细胞经结晶紫染色后显紫红色。请参照附图2，附图2是去 氢木香内酯抑制HUVEC Transwell小室迁移的照片。由图2所示，与对照组相比，去氢木香 内酯的浓度为30 μ M时，仅见少数迁移的细胞，HUVEC的迁移能力被明显抑制。实施例3去氢木香内酯抑制HUVEC小管形成实验
运用Matrigel胶检测HUVEC的小管形成作用。人工基膜Matrigel胶是从小鼠EHS肉 瘤中提取的基膜成分，在37 °C下可自发形成凝胶状的人工基膜，具有天然基膜的生物学作 用。人脐静脉内皮细胞可以在Matrigel胶上粘附成管，从而可用于研究药物对内皮细胞小 管形成作用的影响。
方法取50 μ 1 Matrigel胶溶液加入到预冷的96孔培养板中，然后放置于37 °C 培养箱孵育1 h，使胶固化。将含有不同浓度去氢木香内酯的HUVEC (细胞密度为IXlO5/ ml)分别加入铺有Matrigel的96孔板中，置于CO2细胞培养箱中培养10 h。未加去氢木 香内酯的组为对照。10 h后在倒置光学显微镜下观察血管形成。结果与结论人脐静脉内皮细胞可在Matrigel上延伸生长呈管状并相互连接，形 成三维网状结构。请参照附图3，附图3是去氢木香内酯抑制HUVEC小管形成的照片。由图 3所示，与对照组相比，去氢木香内酯的浓度为3 μΜ时HUVEC的小管形成能力受到显著抑 制，浓度增至30 μ M时，细胞散在存在，未见小管形成，HUVEC小管形成能力被完全抑制。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为 本发明的保护范围。
权利要求
1.去氢木香内酯在制备抑制血管生成药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的去氢木香内酯作为单一成分或与 其他药学上可接受的成分构成组合物以制备抑制血管生成的药物。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的其他药学上可接受的成分可以是 与去氢木香内酯没有拮抗作用的药物，也可以是药学上允许的任一一种或多种辅料。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制血管生成的药物剂型为胶囊 剂、片剂、口服制剂、微囊制剂、注射剂、栓剂、喷雾剂或软膏剂。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制血管生成的药物的给药方式 为注射、口服、胃肠外、吸入式喷雾或透皮给药。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制血管生成药物为抑制肿瘤血 管新生的药物。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的血管生成为肿瘤病变组织的血管 新生和肿瘤导致的血管新生。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为实体肿瘤。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的实体肿瘤为原发性或继发性实体 肿瘤。
10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤血管新生包括白血病、淋巴 瘤和骨髓瘤血液癌症的血管新生。
11.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制血管生成药物为抑制银屑病 病变组织血管新生的药物。
12.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制血管生成药物为抑制 Paget' s疾病血管新生的药物。
13.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制血管生成药物为抑制良性血 管增生疾病的血管新生的药物。
14.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制血管生成药物为抑制关节炎 病变组织的血管新生的药物。
15.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制血管生成药物为抑制动脉粥 样硬化病变处的血管新生的药物。
16.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制血管生成药物为抑制新生血 管性眼病的血管生成的药物。
17.根据权利要求16所述的应用，其特征在于，所述的新生血管性眼病为原发性或继 发性新生血管性眼病。
全文摘要
本发明涉及一种去氢木香内酯在制备抑制血管生成药物中的应用。本发明优点在于本发明提供了去氢木香内酯新的用途，首次发现去氢木香内酯抗血管生成作用，首次发现去氢木香内酯可有效抑制血管内皮细胞的增殖、迁移和小管形成，说明去氢木香内酯具有抗血管生成活性，可作为血管生成抑制剂使用，能够作为血管生成抑制剂应用于血管生成药物的制备以治疗肿瘤、关节炎、银屑病、眼科疾病、动脉粥样硬化等新生血管依赖性和新生血管相关性疾病。
文档编号A61P35/02GK102058579SQ20111000421
公开日2011年5月18日 申请日期2011年1月11日 优先权日2011年1月11日
发明者方超, 於得红, 王超, 白帆, 赵梅, 陆琴, 陈红专 申请人:上海交通大学医学院