专利名称：野生人参总皂甙、皂苷元的提取方法及检测方法
技术领域：
本发明涉及一种中药材提取方法，即野生人参总皂甙、皂苷元的提取方法及检测方法。
背景技术：
在现有技术中，野山参系五加科( Araliaceae)，野山参属植物人参(Panax ginseng C. A. Meyer)为我国东北特产名贵中药。我国最早本草书《神农本草经》将其列为上品，认为人参“补五脏、安精神、定魂魄、止惊悸、除邪气、名目开心益智，久服轻身延年”。 在汉.张仲景《伤寒论》中，全书112放，其中应用人参的处方就占21处，并认为有温补、滋润、强壮、强精、保温、增强视力、安定精神等作用。近代中医常用人参补气救脱、益血复脉， 养心安神，生沣止渴，补肺定喘，健脾止泻，脱毒合疮。对心血管疾病具有明显治疗效果。有关野山参的化学成分的研究已有很多报导。在野山参根中含有13种以上的皂甙(Sapo-inin)，人参根挥发油中，其低沸点部分为β -榄香烯(β-Eiemene)，是人参特异香气的来源。高沸点部分为人参炔醇(Panaxynol)。从人参根醚浸出物种分离出β-谷甾醇及其葡萄糖甙(Glaucostetrin)。野山参根中还含有胆碱、胆胺、精胺和多种氨基酸及维生素A、Bi、B2、C、F等。此外，还含有葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖和人参三糖A、B、C、D等， 以及多糖类的淀粉和果胶质。国家野山参标准中，野山参总皂甙>4%。野山参总皂甙中含有齐墩果酸(Oleanoil Aaid)、野山参二醇(Panaxadiol)和野山参三醇(Panaxatroil)。 野山参总皂甙的不同提取方法其收率不同。本发明的目的是针对上述不足而提供一种收率高、收率可靠的野生人参总皂甙、 皂苷元的提取方法及检测方法。本发明的技术解决方案是野生人参总皂甙的提取方法，其步骤如下取野山参的根或根与茎，加10倍量乙醚回流脱脂后，继续以10倍量的甲醇水浴回流提取8次，合并提取液，于65°C回收甲醇，得甲醇提取物；将其溶于相当投样量得2倍的水中，继以用水饱和的正丁醇提取6次，合并正丁醇提取液，减压回收溶剂，得正丁醇提取物，即为人参粗制总皂甙；将粗制总皂甙溶于甲醇中，过滤后缓缓的倾倒10倍量的丙酮中沉淀，滤集黄白色沉淀物，即为人参总皂甙；回收丙酮母液的溶剂，再倾入到新备的丙酮中沉淀，如此反复操作直至无黄白色沉淀物为止，合并沉淀，干燥得精制人参总皂甙，其收得率为5. 22 % 士0.3。野山参总皂苷经酸(弱盐酸)水解后得总皂苷元。野生人参总皂甙的鉴别方法，其步骤如下取精制的野山参总皂甙，溶于甲醇中， 作为薄层层析的试样，吸附剂为硅胶G，推进剂选用两组溶剂系统分别点样，各自分别用A 溶剂(正丁醇-乙酸乙酯-水=15 1 14)及B溶剂(氯仿-甲醇-水=60 35 10) 系统展开的薄层板可检出9个紫色斑点；各斑点的RF值由低向高的次序排列为0. 072， 0. 154,0. 20,0. 263,0. 390,0. 490,0. 580,0. 681,0. 721.按 Shibata 命名法并与文献核对， 各斑点依次为人参皂甙-Ro，-Ra，-Rb，-Re, -Rd, -Re, -Rf，-Rg, -Rh ；用B溶剂系统展开的薄层板，可检出13个紫色斑点，其中RF值0. 080,0. 232,0. 330,0.610,0. 656，各斑点依次为人参皂甙-Ro，-Rb1, -Rb2+。，-Rg1, -Rg2。本发明的优点是能够把野山参茎、根提取的总皂甙含量纯度可以达到 85% -90%以上，回收率高，节约原材料，降低提取成本。下面将结合实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。
具体实施例方式野生人参总皂甙的提取方法步骤如下取野山参的根或根与茎，加10倍量乙醚回流脱脂后，继续以10倍量的甲醇水浴回流提取8次，合并提取液，于65°C回收甲醇，得甲醇提取物；将其溶于相当投样 量得2倍的水中，继以用水饱和的正丁醇提取6次，合并正丁醇提取液，减压回收溶剂，得正丁醇提取物，即为人参粗制总皂甙；将粗制总皂甙溶于甲醇中， 过滤后缓缓的倾倒10倍量的丙酮中沉淀，滤集黄白色沉淀物，即为人参总皂甙；回收丙酮母液的溶剂，再倾入到新备的丙酮中沉淀，如此反复操作直至无黄白色沉淀物为止，合并沉淀，干燥得精制人参总皂甙，其收得率为5. 22%。总皂甙的水溶液具有强烈持久性泡沫反应；Liebrmrm-Burchard反应显红色；三氯化锑-氯仿饱和溶液反应显紫红色。野山参总皂甙的检测按Shibata. S.方法，取精制的野山参总皂甙，溶于适量的甲醇中，作为薄层层析的试样。吸附剂为硅胶G。推进剂选用两组溶剂系统分别点样，各自分别用A溶剂(正丁醇-乙酸乙酯-水=15 1 14)及 B溶剂(氯仿-甲醇-水=60 35 10)系统展开的薄层板可检出9个紫色斑点(显色剂10%硫酸乙醇溶)。各斑点的RF值由低向高的次序排列为0. 072,0. 154,0. 20，0. 263， 0. 390,0. 490,0. 580,0. 681,0. 721。按Shibata命名法并与文献核对，各斑点依次为人参皂甙-Ro, -Ra, -Rb，-Re, -Rd, -Re, -Rf，-Rg, -Rh。用B溶剂系统展开的薄层板，可检出13个紫色斑点(显色剂:10 %硫酸乙醇溶)，其中RF值0. 080，0. 232,0. 330,0. 610,0. 656各斑点，依次为人参皂甙-Ro，-Rb1, -Rb2+。，-Rg1, -R&。两个薄层层析谱于文献核对，斑点个数位置(Rf值)颜色、大小以及相对的次序几乎完全相同或近似。野山参总皂苷经酸水解后得总皂苷元，其收率为原生药的2. 16%。经薄层层析并用标准品检出，总皂甙元中，含野山参二醇(Panaxadiol)、野山参三醇(Panaxatriol)和齐墩果酸(Oleanoil Aaid)。将人参总皂甙元通过硅胶进行柱层析，分离得到三个结晶体，分别暂称为结晶0、结晶D和结晶T。结晶0为无色针状，Liebrmann-Bu-rchard反应呈红色，三氯化锑和氯仿溶液反应呈紫色。熔点299-301°C，于已知齐墩果酸标准品混融，熔点不下降；红外光谱分析IRv Kbrmax 3301cm_l (波长为 3. 03u)示有羟基(-0H)，1700cm_l (波长 5. 88u)示有羰基(C =0)。于已知标准品齐墩果酸核对，红外光谱完全一致。核磁共振波谱于文献核对亦相同， 故证明皂甙元结晶0为齐墩果酸(Oleanoil Aaid)。结晶D为无色长针状，Liebrmann-Bu-rchard反应呈紫红色，于三氯化锑饱和氯仿溶液反应呈紫色。熔点246-250°C，于已知野山参二醇混融，熔点不下降；红外光谱分析IRv Kbrmax 3301cm_l (波长6. 15u)示有双键(C = C)，于已知人参二醇标准品核对，红外光谱完全一致。核磁共振波谱5 5. 30相当于双键结合的=CH2基的吸收峰。1. 851. 631. 240. 91 分别于羟基，甲基及骨架上H质子相对应，与文献报导的野山参皂甙水解后得到的皂甙元 A2的核磁共振波谱波谱一致，证明皂甙元结晶D为野山参二醇(Panaxadiol)。
结晶T为无色棱柱状，Liebrmann-Burchard反应呈紫色，于三氯化锑氯仿溶液反应呈紫色。熔点240-241 ，于已知野山参三醇混融，熔点不降低；薄层鉴定其Rf值与野山参三醇标准品相一致；其红外光谱于已知野山参三醇核对完全一致；核磁共振波谱于文献报导的野山三醇的波谱亦相似。因此，证明结晶T为野山参三醇(Panaxatroil)。
权利要求
1.一种野生人参总皂甙的提取方法，其特征在于步骤如下取野山参的根或根与茎， 加10倍量乙醚回流脱脂后，继续以10倍量的甲醇水浴回流提取8次，合并提取液，于65°C 回收甲醇，得甲醇提取物；将其溶于相当投样量得2倍的水中，继以用水饱和的正丁醇提取 6次，合并正丁醇提取液，减压回收溶剂，得正丁醇提取物，即为人参粗制总皂甙；将粗制总皂甙溶于甲醇中，过滤后缓缓的倾倒10倍量的丙酮中沉淀，滤集黄白色沉淀物，即为人参总皂甙；回收丙酮母液的溶剂，再倾入到新备的丙酮中沉淀，如此反复操作直至无黄白色沉淀物为止，合并沉淀，干燥得精制人参总皂甙，其收得率为5. 22% 士0. 3。
2.一种野生人参皂甙元的提取方法，其特征在于步骤如下取野山参的根或根与茎， 加10倍量乙醚回流脱脂后，继续以10倍量的甲醇水浴回流提取8次，合并提取液，于65°C 回收甲醇，得甲醇提取物；将其溶于相当投样量得2倍的水中，继以用水饱和的正丁醇提取 6次，合并正丁醇提取液，减压回收溶剂，得正丁醇提取物，即为人参粗制总皂甙；将粗制总皂甙溶于甲醇中，过滤后缓缓的倾倒10倍量的丙酮中沉淀，滤集黄白色沉淀物，即为人参总皂甙；回收丙酮母液的溶剂，再倾入到新备的丙酮中沉淀，如此反复操作直至无黄白色沉淀物为止，合并沉淀，干燥得精制人参总皂甙，其收得率为5. 22% ；野山参总皂苷经酸水解后得总皂苷元。
3.如权利要求1所述的野生人参总皂甙的鉴别方法，其特征在于步骤如下取精制的野山参总皂试，溶于甲醇中，作为薄层层析的试样，吸附剂为硅胶G，推进剂选用两组溶剂系统分别点样，各自分别用A溶剂正丁醇-乙酸乙酯-水=15 1 14及B溶剂氯仿-甲醇-水=60 35 10系统展开的薄层板可检出9个紫色斑点；各斑点的RF值由低向高的次序排列为 0. 072,0. 154,0. 20,0. 263,0. 390,0. 490,0. 580,0. 681,0. 721.按 Shibata 命名法并与文献核对，各斑点依次为人参皂甙-Ro，-Ra, -Rb，-Re, -Rd, -Re, -Rf，-Rg, -Rh ；用 B溶剂系统展开的薄层板，可检出13个紫色斑点，其中RF值0. 080,0. 232,0. 330,0. 610， 0. 656，各斑点依次为人参皂甙-Ro，-Rb1, -Rb2+。，-Rg1, -R&。
全文摘要
本发明涉及一种中药材提取方法，即野生人参总皂甙、皂苷元的提取方法及检测方法。取野山参的根或根与茎，加10倍量乙醚回流脱脂后，继续以10倍量的甲醇水浴回流提取8次，合并提取液，于65℃回收甲醇，得甲醇提取物；将其溶于相当投样量得2倍的水中，继以用水饱和的正丁醇提取6次，合并正丁醇提取液，减压回收溶剂，得正丁醇提取物，即为人参粗制总皂甙；将粗制总皂甙溶于甲醇中，过滤后缓缓的倾倒10倍量的丙酮中沉淀，滤集黄白色沉淀物，即为人参总皂甙；野山参总皂苷经酸水解后得总皂苷元。能够把野山参茎、根提取的总皂甙含量纯度可以达到85％-90％以上，回收率高，节约原材料，降低提取成本。
文档编号A61K36/258GK102178715SQ20111011142
公开日2011年9月14日 申请日期2011年5月1日 优先权日2011年5月1日
发明者宋玉华, 滕利荣 申请人:吉林省通化博祥药业股份有限公司