专利名称：从半边莲中提取的半边莲多糖及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，特别是一种从半边莲中提取的半边莲多糖及其应用。
背景技术：
随着对中药综合研究的深入，原生药中的活性成分被分别提取、开发出来并逐见成效，为天然药物化学的发展注入生机，其中多糖类成分就是极其重要的一部分。近年来， 各国学者对多糖的研究发展很快，已由最初仅对菌类多糖探讨发展到对高等植物多科属、 多组织、多器官的研究。其中以其促进和恢复机体的免疫功能的研究尤为突出。研究表明， 多糖作为一种免疫促进和调节剂，是许多天然药物的主要免疫活性物质，普遍具有抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老且对正常细胞无毒副作用的优点，因而基于各种药用植物中多糖类成分活性的报道屡见不鲜。半边莲始载于《滇南本草》，后李时珍在《本草纲目》中亦有记载[1]，具有清热解毒， 利尿消肿之功效。临床主要用于治疗面足浮肿，痈肿疔疮，蛇虫咬伤，晚期血吸虫病腹水[2] 等症。目前，对于中药半边莲的研究仍止步于其所含生物碱、黄酮甙、皂甙及氨基酸成分，对其含量丰富的多糖类成分的提取分离以及增强人体免疫功能未见公开报道。
发明内容
基于上述情况，为进一步开发半边莲药材的药用、经济价值，填补这方面的研究空白，为克服现有技术的缺陷，本发明的目的就是提供一种从半边莲中提取的半边莲多糖及其应用。本发明解决的技术方案是取半边莲药材，按药材重量计，加入药材重量20-40倍的水，70 90°C水浴提取2 3次，每次1 3h，过滤，合并滤液，浓缩至药材重量体积的 1-2倍，得多糖浓缩液，重量体积是指固体药材以g计，液体水以ml计(重量体积表示为W/ V)，再加入质量浓度为90%以上的乙醇至含醇量达到80%，静置12 Mh，离心得多糖沉淀物，该沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚作洗涤液进行洗涤，每l_5g沉淀物，无水乙醇、丙酮、乙醚用量均为80-150ml，对洗涤后的沉淀物进行干燥，得米白色、粉末状的半边莲多糖， 有效用于制备增强人体免疫功能的药物，实现半边莲在制备增强人体免疫功能的药物中的应用，开辟半边莲药材的应用新前景。本发明半边莲提取物还可用于制备保健品，实现半边莲在制备保健品中的应用，有巨大的社会、经济效益。
具体实施例方式以下结合具体情况和实施例对本发明的具体实施方式
作详细说明。按上述发明内容给出，将半边莲药材粉碎成半边莲药材粉末，取半边莲药材粉末， 按药材粉末与水，料液重量体积比1:20-40的比例，在药材粉末中加入水，搅勻；70 90°C 水浴提取1 3次，每次1 3h，过滤；合并滤液，浓缩滤液至半边莲药樯重量体积的1-2 倍，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中缓慢加入质量浓度为90%以上的乙醇并充分搅拌，直至含醇量达到80%，密封，4°C冷藏静置；12 24h后离心得多糖沉淀物，所述沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，洗涤1 5g沉淀物无水乙醇、丙酮、乙醚用量均为80ml 150ml， 至离心上清液澄清透明，达到除去部分杂质，对洗涤后的沉淀物进行干燥，得米白色、粉末状半边莲多糖，多糖得率为20. 28% 22. 78%，经苯酚-硫酸法(常规测定方法，是公知技术) 测定糖含量为72. 78% 77. 41%。所述半边莲药材粉末是指粉碎后过2号药典筛的粉末。下面通过实施例来对本发明作进一步描述。实施例1
将半边莲药材粉碎成半边莲药材粉末，取半边莲药材粉末，按药材粉末与水料液重量体积比1:20的比例，在药材粉末中加入水，搅勻；70°C水浴提取3次，每次lh，过滤；合并滤液，浓缩滤液至半边莲药樯重量体积的1倍，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中缓慢加入质量浓度为90%乙醇并充分搅拌，直至含醇量达到80%，密封，4°C冷藏静置；1 后离心得多糖沉淀物，所述沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，洗涤Ig沉淀物无水乙醇、丙酮、乙醚用量均为80ml，至离心上清液澄清透明，达到除去部分杂质，对洗涤后的沉淀物进行干燥，得米白色、粉末状半边莲多糖，多糖得率为21. 38%，经苯酚-硫酸法测定糖含量为75. 23%。实施例2
将半边莲药材粉碎成半边莲药材粉末，取半边莲药材粉末，按药材粉末与水料液重量体积比1:30的比例，在药材粉末中加入水，搅勻；80°C水浴提取2次，每次1. 5h，过滤；合并滤液，浓缩滤液至半边莲药樯重量体积的1. 5倍，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中缓慢加入质量浓度为95%乙醇并充分搅拌，直至含醇量达到80%，密封，4°C冷藏静置；24h后离心得多糖沉淀物，所述沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，洗涤3g沉淀物无水乙醇、丙酮、乙醚用量均为100ml，至离心上清液澄清透明，达到除去部分杂质，对洗涤后的沉淀物进行干燥，得米白色、粉末状半边莲多糖，多糖得率为22. 01%,经苯酚-硫酸法测定糖含量为 74. 57%。实施例3
将半边莲药材粉碎成半边莲药材粉末，取半边莲药材粉末，按药材粉末与水料液重量体积比1:40的比例，在药材粉末中加入水，搅勻；90°C水浴提取3次，每次池，过滤；合并滤液，浓缩滤液至半边莲药樯重量体积的2倍，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中缓慢加入质量浓度为95%乙醇并充分搅拌，直至含醇量达到80%，密封，4°C冷藏静置；20h后离心得多糖沉淀物，所述沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，洗涤5g沉淀物无水乙醇、丙酮、乙醚用量均为150ml，至离心上清液澄清透明，达到除去部分杂质，对洗涤后的沉淀物进行干燥，得米白色、粉末状半边莲多糖，多糖得率为22. 32%，经苯酚-硫酸法测定糖含量为76. 26%。上述仅是给出的几个实施例，在研制中，发明人经反复多次，每次至少重复3次， 均取得了相同或相近似的结果，提取物稳定，方法可靠，并对提取物进行反复的试验均取得了满意的技术效果，充分表明半边莲多糖具有增强免疫的作用，已经为动物实验充分证明， 具体实验情况如下
一.试验材料
1.试验动物18 22g昆明种清洁剂小鼠，雌雄各半。由河北省实验动物中心提供。2.实验试药半边莲多糖，瑞士染液，香菇多糖(湖北广仁药业有限公司)，环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司)，枸橼酸钠，氯化钙，氯化钠，酒石酸钾钠，氯化钾，葡萄糖， 磷酸氢二钾，磷酸二氢钾，酚红。二.试验方法
1.半边莲多糖对正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
取小鼠50只，体重18 22g，雌雄各半，随机均勻分为5组。分别灌服小、中、大剂量的半边莲多糖水溶液(10mg/ml，20mg/ml，40mg/ml ；0. 2ml/10g)，香菇多糖混悬液(5mg/ml ； O.anl/lOg)及同体积的生理盐水(0.2ml/10g)。每天给药1次，连续给药7天。于7天早上各组小鼠均腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水混悬液0. 5ml。于第7天灌胃给药后池，注射 5%鸡红细胞4h后，脱颈椎处死小鼠，腹腔注入汉氏液2. 5ml，轻揉小鼠腹部；然后剪开小鼠腹部皮肤，在腹膜上剪一小孔，用吸管吸取腹腔液2ml置于试管中，混勻；吸取少许腹腔液滴于载玻片上，液点大小约为1. 5cmX2cm。将载玻片放在铺有湿纱布的糖瓷盘中，37°C孵育 30min，生理盐水冲去附着的细胞，瑞氏染液染色，自来水冲洗晾干；显微镜下观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬情况，并计算吞噬百分率和吞噬指数。
表1腹腔巨噬细胞吞噬功能结果(士 S)
组别动物数(只)剂量(gAg)吞噬百分率(％)吞噬指数空白对照组1031. 0±4. 00. 323±0. 005香菇多糖组100. 154. 7 + 7. 4林0. 614±0. 004林小剂量多糖组100. 262. 1±5. 9林0. 711 ±0. 007林中剂量多糖组100. 458. 5 ±5. 4林0. 692 ±0. 009林大剂量多糖组100. 850. 1±4. 9*0. 578±0. 010*
**表示与空白组比P<0. 01，*表示与空白组比P<0. 05
从表1可以看出，与空白对照组比，大剂量组可提高小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率，可提高腹腔巨噬细胞的吞噬指数(p<0. 05)；小、中剂量组及香菇多糖组均能显著提高吞噬百分率及吞噬指数(P<0. 01)，其中尤以小剂量半边莲多糖组作用为最强。2.半边莲多糖对正常小鼠溶血素形成的影响
取小鼠50只，体重18 22g，雌雄各半，随机均勻分为5组。分别灌服小、中、大剂量的半边莲多糖水溶液(10mg/ml，20mg/ml，40mg/ml ；0. 2ml/10g)，香菇多糖混悬液(5mg/ml ； O.anl/lOg)及同体积的生理盐水(0.2ml/10g)。每天给药1次，连续给药7天。同时，给药第1天各组小鼠均腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水混悬液0. 2ml/只，进行免疫，于最后1次给药后池，小鼠眼眶取血，离心，分离血清。用生理盐水1 100稀释后，取Iml稀释液与 5%鸡红细胞混悬液0. 5ml、10%补体0. 5ml (豚鼠血清，用鸡红细胞预先饱和6h)混勻，37°C 孵育30min，冰水中终止反应。另设不加补体的空白管作对照，吸取各管上清液于UV-2201 型分光光度计MOnm处比色，测定各组溶血素形成情况。3.半边莲多糖对正常小鼠溶血空斑形成的影响
取小鼠50只，体重18 22g，雌雄各半，随机均勻分为5组。分别灌服小、中、大剂量的半边莲多糖水溶液(10mg/ml，20mg/ml，40mg/ml ；0. 2ml/10g)，香菇多糖混悬液(5mg/ml ； O.anl/lOg)及同体积的生理盐水(0.2ml/10g)。每天给药1次，连续给药7天。同时，给药第1天各组小鼠均腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水混悬液0. 2ml/只，进行免疫，于最后1次给药后2h，脱颈椎处死并解剖小鼠，取出脾脏，同组两个小鼠脾脏为一例；勻浆，并调整脾细胞混悬液中脾细胞数为5X IO6个/ml。取脾细胞混悬液1. 0ml，与0. 2%鸡红细胞混悬液0.5ml和1 10的豚鼠血清0.5ml混勻。另设不加补体的空白管，37°C孵育lh，离心，取上清液于UV-2201型分光光度计413nm处比色，测各组溶血空斑形成情况。
表2溶血素、溶血空斑形成结果(士 S)
权利要求
1.一种从半边莲中提取的半边莲多糖，其特征在于，取半边莲药材，按药材重量计，加入药材重量20-40倍的水，70 90°C水浴提取2 3次，每次1 池，过滤，合并滤液，浓缩至药材重量体积的1-2倍，得多糖浓缩液，重量体积是指固体药材以g计，液体水以ml计， 再加入质量浓度为90%以上的乙醇至含醇量达到80%，静置12 Mh，离心得多糖沉淀物， 该沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚作洗涤液进行洗涤，每l_5g沉淀物，无水乙醇、丙酮、 乙醚用量均为80-150ml，对洗涤后的沉淀物进行干燥，得米白色、粉末状的半边莲多糖。
2.根据权利要求1所述的从半边莲中提取的半边莲多糖，其特征在于，将半边莲药材粉碎成半边莲药材粉末，取半边莲药材粉末，按药材粉末与水料液重量体积比1:20的比例，在药材粉末中加入水，搅勻；70°C水浴提取3次，每次lh，过滤；合并滤液，浓缩滤液至半边莲药樯重量体积的1倍，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中缓慢加入质量浓度为90%乙醇并充分搅拌，直至含醇量达到80%，密封，4°C冷藏静置；1 后离心得多糖沉淀物，所述沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，洗涤Ig沉淀物无水乙醇、丙酮、乙醚用量均为80ml，至离心上清液澄清透明，达到除去部分杂质，对洗涤后的沉淀物进行干燥，得米白色、粉末状半边莲多糖，多糖得率为21. 38%，经苯酚-硫酸法测定糖含量为75. 23%。
3.根据权利要求1所述的从半边莲中提取的半边莲多糖，其特征在于，将半边莲药材粉碎成半边莲药材粉末，取半边莲药材粉末，按药材粉末与水料液重量体积比1:30的比例，在药材粉末中加入水，搅勻；80°C水浴提取2次，每次1. 5h，过滤；合并滤液，浓缩滤液至半边莲药樯重量体积的1. 5倍，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中缓慢加入质量浓度为 95%乙醇并充分搅拌，直至含醇量达到80%，密封，4°C冷藏静置；24h后离心得多糖沉淀物， 所述沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，洗涤3g沉淀物无水乙醇、丙酮、乙醚用量均为100ml，至离心上清液澄清透明，达到除去部分杂质，对洗涤后的沉淀物进行干燥，得米白色、粉末状半边莲多糖，多糖得率为22. 01%,经苯酚-硫酸法测定糖含量为74. 57%。
4.根据权利要求1所述的从半边莲中提取的半边莲多糖，其特征在于，将半边莲药材粉碎成半边莲药材粉末，取半边莲药材粉末，按药材粉末与水料液重量体积比1:40的比例，在药材粉末中加入水，搅勻；90°C水浴提取3次，每次池，过滤；合并滤液，浓缩滤液至半边莲药樯重量体积的2倍，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中缓慢加入质量浓度为95%乙醇并充分搅拌，直至含醇量达到80%，密封，4°C冷藏静置；20h后离心得多糖沉淀物，所述沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，洗涤5g沉淀物无水乙醇、丙酮、乙醚用量均为150ml，至离心上清液澄清透明，达到除去部分杂质，对洗涤后的沉淀物进行干燥，得米白色、粉末状半边莲多糖，多糖得率为22. 32%，经苯酚-硫酸法测定糖含量为76. 269L
5.权利要求1-4所述的从半边莲中提取的半边莲多糖在制备增强免疫功能药物中的应用。
6.权利要求1-4所述的从半边莲中提取的半边莲多糖在制备保健品中的应用。
全文摘要
本发明涉及从半边莲中提取的半边莲多糖及其应用，其解决的技术方案是取半边莲药材，加水，水浴提取2～3次，过滤，合并滤液，浓缩至药材重量体积的1-2倍，再加入质量浓度为90%以上的乙醇至含醇量达到80%，静置12～24h，离心得多糖沉淀物，该沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚作洗涤液进行洗涤，每1-5g沉淀物，无水乙醇、丙酮、乙醚用量均为80-150ml，对洗涤后的沉淀物进行干燥，得米白色、粉末状的半边莲多糖，有效用于制备增强人体免疫功能的药物，实现半边莲在制备增强人体免疫功能的药物中的应用，开辟半边莲药材的应用新前景，本发明半边莲提取物还可用于制备保健品，实现半边莲在制备保健品中的应用，有巨大的社会、经济效益。
文档编号A61P37/04GK102204946SQ201110134569
公开日2011年10月5日 申请日期2011年5月24日 优先权日2011年5月24日
发明者李晓坤, 杨云, 董晶晶, 郝鹏飞 申请人:河南中医学院