专利名称：一种治疗糖尿病肾病的中药提取物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗糖尿病肾病的复方中药提取物及其制备方法。
背景技术：
糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是临床常见和多发的糖尿病并发症，也是糖尿病最严重的并发症之一。糖尿病肾病为糖尿病主要的微血管并发症，主要指糖尿病性肾小球硬化症，一种以血管损害为主的肾小球病变。早期多无症状，血压可正常或偏高， 其发生率随着糖尿病的病程延长而增高。糖尿病早期肾体积增大，肾小球滤过率增加，呈高滤过状态，以后逐渐出现间断性蛋白尿或微量白蛋白尿，随着病程的延长出现持续蛋白尿、 水肿、高血压、肾小球滤过率降低，进而肾功能不全、尿毒症。据报道DN的发病率在1型糖尿病中约为40 50%，2型糖尿病中DN发生率约为30 40%。糖尿病肾病已是终末期肾脏病(ESRF)中最重要的原因，也是糖尿病患者致死的主要原因之一，对此国内外进行了大量的研究，但至今发病机制尚未完全阐明，尚无有效的药物阻止其发生与恶化。
发明内容
本发明的目的是提供一种安全有效的治疗糖尿病肾病的中药提取物及其制备方法。本发明所提供的中药提取物是以下述质量份的七味中药为原料提取得到的黄芪600g-1000份、芡实400g-600份、金樱子400g-600份、倒扣草600g_1000份、女贞子 400g-480份、鬼箭羽400g-480份和大黄320g_480份。所述原料可进一步由如下质量份的中药组成黄芪600-1000份、芡实400-480 份、金樱子400-480份、倒扣草600-1000份、女贞子400-480份、鬼箭羽400-480份和大黄 320-480 份。上述原料中黄芪、芡实、金樱子、女贞子、大黄均符合中国药典2010年版一部正文各药材项下的有关规定。倒扣草符合《广东省中药材标准》(第一册)2004版第162页倒扣草项下的有关规定。鬼箭羽符合北京市中药材标准1998年版第220页鬼箭羽项下的有关规定。本发明的中药的提取物的制备方法包括下述步骤1)将黄芪用质量浓度为60% -70%乙醇水溶液回流提取，收集提取液，记为提取液1 ；2)将芡实和女贞子混合后，加入质量浓度为80% -90%乙醇水溶液回流提取，收集提取液，记为提取液2;3)将金樱子、倒扣草、鬼箭羽和大黄混合，加水煎煮，收集煎煮液；4)将所述提取液1、提取液2和煎煮液合并，即得到所述治疗糖尿病肾病的中药提取物溶液；其中，步骤1)- 不分先后顺序。上述步骤1)中所述回流提取至少进行2次；每次提取时，所述质量浓度为60% -70%乙醇水溶液的加入量为黄芪质量的6倍-7倍；每次提取的时间为1-2小时；优选提取条件为所述回流提取进行2次，合并2次提取液；每次提取时，质量浓度为60%乙醇水溶液的加入量为黄芪质量的6倍；每次提取的时间为2小时。步骤2、中所述回流提取至少进行2次；每次提取时，所述质量浓度为80% -90% 乙醇水溶液的加入量为女贞子和芡实质量之和的5-6倍；每次提取的时间为1-2小时；优选提取条件为所述回流提取进行4次，合并4次提取液；每次提取时，质量浓度为80%乙醇水溶液的加入量为女贞子和芡实质量之和的5倍；每次提取的时间为1小时。步骤幻中所述加水煎煮至少进行2次；每次煎煮时，加水量为金樱子、倒扣草、 鬼箭羽和大黄质量之和的12-13倍，每次煎煮的时间为1. 5-2小时；所述煎煮的温度为 100-120°C。优选条件为所述加水煎煮进行3次，合并3次煎煮液；每次煎煮时，加水量为金樱子、倒扣草、鬼箭羽和大黄质量之和的12倍，每次煎煮的时间为1. 5小时。所述方法还包括下述步骤将提取液1、提取液2和煎煮液的合并液浓缩至70°C测定相对密度为1. 35 1. 38的浸膏、减压干燥，即得所述治疗糖尿病肾病的中药提取物；或将所述提取液1和提取液2合并，浓缩至70°C测定相对密度为1. 35 1. 38的浸膏；将煎煮液浓缩至70°C测定相对密度为1. 35 1. 38的浸膏；将所述浸膏合并、减压干燥，即得所述治疗糖尿病肾病的中药提取物。本发明还提供了上述中药提取物的应用。本发明所提供的应用是所述中药提取物在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。
本发明还保护一种用于治疗糖尿病肾病的中药组合物。所述中药组合物，其含有本发明提供的中药提取物，以及药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、 吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。含有本发明中药提取物的中药组合物可以制成片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。以制备颗粒剂为例进行说明。将干燥后的中药提取物粉碎成细粉，取500g，加入 500g可溶性淀粉与糊精的混合物(质量比1 l)、10g甜菊苷混勻，用质量浓度为80%的乙醇水溶液制粒，干燥、整粒，制成颗粒1000g。分装成Sg/袋。用法与用量开水冲服，一次1袋，一日3次。上述颗粒剂具有益气固肾，化瘀降浊的功效。主治早期及临床期糖尿病肾病，证属肾元亏虚、肾气不固，肾络瘀阻、浊毒内停者。上述细粉符合2010版药典对细粉的规定指能全部通过五号筛，并含能通过六号筛不少于95%的粉末。本发明发明人通过古今文献整理及大量DN患者临床观察认为，糖尿病肾病是消渴病日久，久病入络所引起的尿浊、水肿、腰疼、关格等肾系并发症，病位在肾，继发于消渴病，因此称为消渴病肾病。并将中医络病理论引入中医药防治DN的研究，认为络病是广泛存在于消渴病肾病早、中、晚期的病理状态。消渴病肾病的病因是消渴病日久，久病及肾而致肾元亏虚、肾气不固，久病入络而致肾络瘀阻、浊毒内停。其病机特点为肾元亏虚、肾气不固为本，肾络瘀阻、浊毒内停为标。肾元亏虚，肾气不固，开阖失司，则出现水肿、尿浊、腰痛； 肾络瘀阻，浊毒内停，壅塞三焦，则出现吐逆、肿满、关格。针对DN肾元亏虚、肾气不固，肾络瘀阻、浊毒内停的病机特点，提出益气固肾、化瘀降浊的治法，本发明提供的复方颗粒就是在益气固肾，化瘀降浊的治则指导下研制的中药复方制剂。本发明采用国际统一的糖尿病肾病(DN)诊断标准，按照随机对照原则与洛汀新对照观察，结果表明该复方颗粒①可改善DN患者临床症状。②可明显减少早期DN尿白蛋白及临床期糖尿病肾病尿蛋白，保护肾功能，从而有效的阻止早期DN的进展。③调整脂代谢紊乱。根据制定的疗效评价标准，中药复方颗粒组总有效率86.7%，明显优于对照组。另外在整个试验中对所有的患者都详细记录了不良反应及血常规，肝、肾功能检查，均未出现任何不良反应及毒副作用。本研究结果表明，该复方颗粒在保护肾功能、减少尿白蛋白等方面疗效确切，无毒副作用，是治疗早期及临床期糖尿病肾病安全有效的药物，有着广阔的应用前景。
具体实施例方式下面通过具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可通过商业途径获得。下述实施例中所用的黄芪、芡实、金樱子、女贞子、大黄均符合中国药典2010年版一部正文各药材项下的有关规定。倒扣草符合《广东省中药材标准》(第一册)2004版第 162页倒扣草项下的有关规定。鬼箭羽符合北京市中药材标准1998年版第220页鬼箭羽项下的有关规定。投料前，通过鉴定，各味药材实物与名称相符，质量符合标准。实施例1、制备用于治疗糖尿病肾病的中药复方颗粒原料组成黄芪600g、芡实400g、金樱子400g、倒扣草600g、女贞子400g、鬼箭羽 400g和大黄320g。以上七味中药，黄芪加质量浓度为60 %乙醇水溶液加热回流提取二次，每次加醇量为黄芪质量的6倍，回流提取2小时，合并提取液，滤过。将女贞子、芡实混合，加质量浓度为80%乙醇水溶液加热回流提取4次，每次加醇量为女贞子和芡实质量的5倍，回流提取1 小时，合并提取液，滤过，与上述滤液合并，回收乙醇，浓缩至相对密度为1. 35-1. 38 (700C ) 浸膏，备用。将鬼箭羽、大黄、金樱子、倒扣草加水煎煮三次，煎煮的温度为100-12(TC，每次加水量为药材质量的12倍，每次煎煮1. 5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为 1.35-1. 38 (70°C )浸膏，与上述浸膏合并，减压干燥，粉碎成细粉，得中药提取物。取500g上述中药提取物加入500g可溶性淀粉与糊精的混合物(质量比1 1)、 IOg甜菊苷混勻，用质量浓度为80%的乙醇水溶液制粒，干燥、整粒，制成颗粒1000g。分装成8g/袋。实施例2、用于治疗糖尿病肾病的中药复方颗粒的临床效果试验1.研究对象1. 1病例选择本研究中病例来自北京中医药大学东方医院门诊病人及住院病人共150例。其中男性74例，女性76例。
1.2西医诊断标准按WHO诊断分类标准(1999)确诊的2型糖尿病。合并早期糖尿病肾病者。糖尿病肾病(DN)诊断按照国际公认的Mogensen诊断分期标准(早期DN即Mogensen分期的 III期)。早期DN诊断标准3个月内尿检查连续两次尿白蛋白排泄率(UAE) 20 200 μ g/ min(30 300mg/Mh)，并排除原发性高血压、心力衰竭、泌尿系感染、酮症酸中毒等引起尿白蛋白增加的因素。1.3中医辨证标准按照中华中医药学会糖尿病(消渴病)分会制定的辨证标准，证属气阴两虚、肾虚血瘀者(具备气虚、阴虚、肾虚、血瘀辨证标准者即为气阴两虚、肾虚血瘀证)。气虚、阴虚、 肾虚、血瘀的辨证标准如下1. 3. 1气虚①神疲乏力；②少气懒言；③易有自汗；④舌胖有印；⑤脉细无力。具备其中二项可诊断。1. 3. 2阴虚①怕热汗多或有盗汗；②手足心热或五心烦热；③舌瘦红裂；④口干咽燥；⑤脉象细数。具备其中二项可诊断。1. 3. 3肾虚①腰腿酸疼；②耳鸣耳聋；③齿摇、发落；④性功能减退或有遗精、早泄、阳萎。具备其中二项可诊断。1. 3. 4血瘀①肌肤甲错②口唇舌暗，或紫暗、瘀斑、舌下静脉紫暗怒张。具备其中一项可诊断。1. 4纳入病例标准凡诊断为糖尿病肾病、中医辨证符合气阴两虚、肾虚血瘀者，年龄在25 75岁之间，可纳入试验病例。1.5排除病例标准1. 5. 1年龄小于25岁或大于75岁；妊娠或哺乳期妇女，对本药过敏者。1. 5. 2同时患有其它疾病或合并症者，如充血性心力衰竭、血清转氨酶升高、原发性高血压或合并其它严重原发性疾病；6个月前有恶性高血压或心肌梗塞、脑血管意外病史者；近1个月内糖尿病酮症酸中毒及泌尿系统感染者。1. 5. 3因各种原因而不合作者，未按规定用药，无法判断疗效或资料不全等影响疗效或安全性判断者，或因患有精神病未能合作者。2.研究方法根据中华人民共和国中医药行业标准《中医病证诊断疗效标准》及中华中医药学会消渴病分会制定的消渴病(糖尿病)中医分期辨证疗效评定标准设计出DN的中医证候
学量表。2. 1症状计分方法症状积分评定采用尼莫地平方法，即(治疗前积分-治疗后积分)+治疗前积分X 100%，以百分数表示。2. 2治疗方法2. 2. 1调整阶段共1个月，所有受试者均接受糖尿病(DM)教育，采用低盐低脂优质低蛋白饮食，优质蛋白0.8g/kg/d、选用糖适平或注射胰岛素控制血糖。血糖控制在 (FBS) < 8mmol/L，餐后 2 小时血糖(PBS) < 10mmol/L, HbAlC <8%。
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2. 2. 2治疗阶段1个月调整阶段结束后血糖控制在规定范围内。随机分为两组， 即治疗组和对照组各75例。治疗组在基础治疗同时加服实施例1制备的中药复方颗粒， 每次8克，每日2次，口服。对照组在基础治疗同时加服洛汀新10mg，每日1次。基础治疗包括所有受试者均接受DM教育，采用低盐低脂优质低蛋白饮食，优质蛋白8g/kg/d、选用糖适平或注射胰岛素控制血糖。血糖控制在(FBQ <8mmol/L，餐后2小时血糖(PBS) < 10mmol/L, HbAlC <8%。2. 3观察指标2. 3. 1安全性指标血常规、肝功能、肾功能及详细记录用药期间的不良反应。2. 3. 2疗效性指标①临床症状参见下述症状计分表，以症状积分减少的百分比评价疗效，具体计算内容见“症状计分方法”。2周观察1次。症状计分表
症状记分症状分级计分标准神疲乏力0分无2分易疲倦、可坚持体力劳动。4分精神疲乏、勉强支持日常劳动。6分四肢无力，不能坚持日常劳动。口干咽燥0分无2分口稍干，饮水量比平常略有增加。4分口干咽燥，饮水量比平常增加，日饮水量3 5升 6分口干咽燥不能忍受，口渴喜饮，日饮水量>5升。腰膝酸软0分无1分腰膝酸软，可坚持体力劳动。2分腰膝酸软，勉强支持日常劳动。3分腰膝酸软，不能坚持日常劳动。少气懒g0分无1分少气、不喜多言、不问不答。2分少气疲乏，懒于言语，多问少答。3分气短不足以息，问而不答。自汁0分无1分不动则皮肤微潮，稍动则更甚。2分不动则皮肤潮湿，稍动则汗出。3分平素即汗出，动则汗出水渍。盗汗0分无1分头部汁出，偶而出现。2分胸背部潮湿，反复出现。3分周身潮湿如水洗，经常出现。五心烦热0分无1分身体燥热不明显，偶有心烦不影响日常工作和生活。2分身体燥热，手足欲露衣被外，心烦明显，部分影响日常工作和生活。3分五心烦热，手足欲握冷物，严重影响日常工作和生活。口唇色暗0分无1分口唇淡暗。2分口唇暗。3分口唇紫暗。总积分
②血糖采用罗氏乐康全-2血糖仪，以检查空腹及餐后2小时血糖情况。每2周检查一次。③糖化血红蛋白(HbA1C)采用德国拜耳公司生产的糖尿病专分析仪(DCA2000+) 及试剂盒，治疗前后各检测一次。④尿微量白蛋白排泄率(UAE)采用德国拜耳公司生产的糖尿病专用分析仪(DCA2000+)及试剂盒。治疗前后各检测一次。⑤内生肌酐清除率(Ccr) 男性 Ccr(ml/min) = (140-年龄)x 体重(kg)/7 血肌酐(mg/ml)，女性 Ccr (ml/min)= (140-年龄)χ 体重(kg) /85x 血肌酐(mg/ml)。2. 3. 3疗程8周为一个疗程。2. 4疗效判定标准目前尚无国际国内统一的DN疗效评价标准。研究中采用的疗效评价方法，制定四级疗效评定标准。2. 4. 1完全缓解中医临床症状、体征消失或基本消失，证候积分减少> 95%，尿白蛋白排出率、Ccr均恢复正常。2. 4. 2显效中医临床症状、体征明显改善好转，总积分减少> 70%，尿白蛋白排泄率降低彡50%, Ccr正常。2. 4. 3有效中医临床症状、体征均有好转，总积分减少> 30 %，尿白蛋白排泄量率降低彡20%, Ccr正常。2. 4. 4无效各项指标达不到以上标准。2. 5统计学处理应用SPSS 11.0软件，计量资料采用t检验，计数资料用χ2检验，等级资料用Ridit 检验。3.结果1.分组处理两组一般资料包括性别、年龄、病程、收缩压、舒张压、体重指数(BMI)、尿白蛋白排泄率(UAE)、合并症治疗前比较无显著性差异，P > 0. 05，两组资料具有可比性。见表1。表1两组一般资料比较(S ± s )
治疗组对照组例数(男/女)75 (38/37)75(36/39)年龄(岁)53. 7±2. 454. 9±2. 3DM病程(年)8. 4±0. 98. 3±0. 8收缩压(mmHg)135. 5±6. 5130. 3±5. 6舒张压(mmHg)85. 5±5. 382. 6±5. 4视网膜病变(％)34. 7±2. 435. 3±2. 2周围神经病变(％)10. 0±0. 411. 3±0. 6UAE (mg/24h)108. 15±10. 54105. 13±10. 222.两组疗效比较实施例1制备的中药复方颗粒治疗组75例经治疗后完全缓解5例，显效观例，有效33例，无效9例，总有效率为89. 0% ；对照组75例经治疗后显效17例，有效观例，无效 30例，总有效率为60.0%。两组比较，经Ridit检验，P < 0.05中药复方颗粒组疗效优于对照组。见表2。表2两组疗效比较
组另IJ例数完全缓解显效有效无效治疗组755(7. 0%)28(38. 0%)33 (44. 0%)9(11. 0%)对照组750 (0%)17(23. 0%)28(37. 0%)30 (40. 0%)3.两组临床症状比较由表3可见，两组治疗后症状积分均明显降低P < 0. 05或0. 01，表明两组均可改善DN临床症状，组间比较两组有显著差异P < 0. 01，提示实施例1制备的中药复方颗粒在改善早期DN患者临床症状方面优于对照组。见表3。表3两组治疗前后症状积分的比较(^ ± s )
组别例数治疗前治疗后治疗组7518. 5±2.5610. 7±2. 24_δδ对照组7517. 3±2.6513. 3±1. 65s"注自身治疗前后比较※P < 0.05，※※P < 0.01 ；与对照组比较:ΔΡ < 0·05，ΔΔΡ < 0.01与下表同4.两组尿微量白蛋白排泄率(UAE)比较两组治疗后尿微量白蛋白明显降低P < 0. 01，组间比较有显著差异P < 0. 01，治疗组优于对照组，表明实施例1制备的中药复方颗粒可明显减少早期DN患者尿微量白蛋白的排泄率，阻止早期DN进展的作用。见表4。表4两组治疗前后UAE比较(S ± s，mg/24h)
组别例数治疗前治疗后治疗组75108. 15±10.6452. 07±4. 26^δδ对照组75105. 13±10.3280. 72 ±7. 35·5.两组肾功能比较两组治疗前后血肌酐(kr)无明显变化P > 0. 05，内生肌酐清除率(Ccr)两组治疗后明显降低P < 0. 01，组间比较，治疗组低于对照组P < 0. 05，表明实施例1制备的中药复方颗粒具有降低早期DN肾脏高滤过的作用。见表5。表5两组治疗前后kr、Ccr比较(s )
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权利要求
1.一种用于治疗糖尿病肾病的中药提取物，是以下述质量份的七味中药为原料提取得到的黄芪600-1000份、芡实400-600份、金樱子400-600份、倒扣草600-1000份、女贞子 400-480份、鬼箭羽400-480份和大黄320-480份。
2.根据权利要求1所述的中药提取物，其特征在于所述原料由如下质量份的中药组成黄芪600-1000份、芡实400-480份、金樱子400-480份、倒扣草600-1000份、女贞子 400-480份、鬼箭羽400-480份和大黄320-480份。
3.根据权利要求1或2所述的中药提取物，其特征在于所述中药的提取物是按照权利要求4-8中任一项所述方法制备得到的。
4.制备权利要求1所述治疗糖尿病肾病的中药提取物的方法，包括下述步骤1)将所述黄芪用质量浓度为60%-70%乙醇水溶液回流提取，收集提取液，记为提取液1 ；2)将所述芡实和女贞子混合后，加入质量浓度为80%-90%乙醇水溶液回流提取，收集提取液，记为提取液2;3)将金樱子、倒扣草、鬼箭羽和大黄混合，加水煎煮，收集煎煮液；4)将所述提取液1、提取液2和煎煮液合并，即得到所述治疗糖尿病肾病的中药提取物溶液；其中，步骤1)- 不分先后顺序。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于步骤1)中所述回流提取至少进行2次; 每次提取时，所述质量浓度为60% -70%乙醇水溶液的加入量为黄芪质量的6倍-7倍；每次提取的时间为1-2小时；步骤2、中所述回流提取至少进行2次；每次提取时，所述质量浓度为80% -90%乙醇水溶液的加入量为女贞子和芡实质量之和的5-6倍；每次提取的时间为1-2小时；步骤幻中所述加水煎煮至少进行2次；每次煎煮时，加水量为金樱子、倒扣草、鬼箭羽和大黄质量之和的12-13倍，每次煎煮的时间为1.5-2小时；所述煎煮的温度为 IOO0C -150"C。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于步骤1)中所述回流提取进行2次， 合并2次提取液；每次提取时，质量浓度为60%乙醇水溶液的加入量为黄芪质量的6倍；每次提取的时间为2小时。步骤2、中所述回流提取进行4次，合并4次提取液；每次提取时，质量浓度为80 %乙醇水溶液的加入量为女贞子和芡实质量之和的5倍；每次提取的时间为1小时；步骤幻中所述加水煎煮进行3次，合并3次煎煮液；每次煎煮时，加水量为金樱子、倒扣草、鬼箭羽和大黄质量之和的12倍，每次煎煮的时间为1.5小时，煎煮的温度为 100-120°C。
7.根据权利要求4-6中任一项所述的方法，其特征在于所述方法还包括下述步骤将所述提取液1和提取液2合并，浓缩至70°C测定相对密度为1. 35 1. 38的浸膏；将煎煮液浓缩至70°C测定相对密度为1. 35 1. 38的浸膏；将所述浸膏合并、减压干燥，即得所述治疗糖尿病肾病的中药提取物；或将提取液1、提取液2和煎煮液合并，浓缩至70°C测定相对密度为1. 35 1. 38的浸膏、减压干燥，即得所述治疗糖尿病肾病的中药提取物。
8.权利要求1-3中任一项所述中药提取物在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。
9.一种用于治疗糖尿病肾病的中药组合物，含有权利要求1-3中任一项所述中药提取物，以及药学上可接受的载体。
10.根据权利要求9所述的中药组合物，其特征在于所述中药组合物由下述质量份的物质组成权利要求1-3中任一项所述中药提取物500-700份、可溶性淀粉250-350份、糊精250-350份和甜菊苷10份-14份；所述中药组合物的剂型为颗粒剂。
全文摘要
本发明公开了一种用于治疗糖尿病肾病的中药提取物及其制备方法。该中药提取物是以下述质量份的七味中药为原料提取得到的黄芪600-1000份、芡实400-600份、金樱子400-600份、倒扣草600-1000份、女贞子400-480份、鬼箭羽400-480份和大黄320-480份。临床采用国际统一的糖尿病肾病(DN)诊断标准，按照随机对照原则将本发明的中药复方颗粒与洛汀新对照观察，通过300例糖尿病肾病患者观察，结果表明该复方颗粒①可改善DN患者临床症状。②可明显减少早期DN尿白蛋白及临床期糖尿病肾病尿蛋白，保护肾功能，从而有效的阻止早期DN的进展。根据制定的疗效评价标准，中药复方颗粒组总有效率86.7％，明显优于对照组。
文档编号A61P3/10GK102228536SQ20111015443
公开日2011年11月2日 申请日期2011年6月9日 优先权日2011年6月9日
发明者高彦彬 申请人:首都医科大学