专利名称：虎眼万年青皂甙osw-i口服抗癌制剂及其制备方法
技术领域：
本发明是涉及中药技术领域中，用虎眼万年青提取的皂甙OSW-I药用原料，制备口服抗癌制剂胶囊，口服液的组方制做方法。
背景技术：
虎眼万年青植物提取的皂甙类化合物用作于临床制药，在国外已应用临床多年， 其抑癌效果特别显著。我国是从2003年才开始对虎眼万年青中皂甙类化合物的药物研究， 所以起步较晚。但近几年已有用皂甙化合物与中草药配伍的口服抗癌药物在国内已先后上市，并应用于临床，其临床抑癌效果与国外的产品基本相同，但所利用的虎眼万年青皂甙类化合物均属粗提物，含有大量的化学成分，是必会产生一定的毒副作用。
发明内容
本发明的目地是向社会提供一种虎眼万年青皂甙类化合物0SW-I，与其它植物提取物相组配，制成的口服抗癌制剂，为口服抗癌制剂和临床用药的安全性，提供科学的技术路线支撑，其方法是I、虎眼万年青皂甙OSW-I化合物的作用机理传统的植物提取抗癌药物，虽作用温和，但抑癌活性较低，无法抵抗特异性超强的肿瘤细胞活性，化疗药物虽作用显著，但大都因靶向识别性差，至使癌细胞与正常细胞一同毒杀，患者服用后的免疫防御机能遭受不同层度的破坏。超强抗癌活性的虎眼万年青皂甙 OSW-I，具有亲和性和识别性，与癌细胞过度聚合，攻击和破坏癌细胞DNA的活性，阻断癌细胞新生微毛细血管的供氧与扩散的通路，诱导并杀伤癌细胞，其极强的靶向性，直接作用了肿瘤细胞微管蛋白，阻断癌细胞有丝分裂，抑制癌细胞复制，破坏肿瘤细胞新生血管形成， 又不损伤正常细胞。OSff-I的超强识别性，能够迅速识别T细胞，由于T细胞壁的电子分布高低、密度与OSW-I极性与非极性部位的拓扑学特性相匹配，而且细胞膜的主体组成物质的化学结构与SOW-I有着惊人的相似之处，于是OSW-I的穿透力得到了最大程度的发挥，极易轻松进入到T细胞核内，脱掉糖苷和水分，生成新的物质一有着高密度细胞毒活性的中间体、E-环氧碳稀离子(E-carbeniutn ions), E-环氧碳稀离子将直接刺激T细胞的抗癌活性反应,具体方式为(I) CD4+细胞的抗肿癌作用辅助T细胞的表面标志物CD4+是以增生扩散来激活其类的免疫细胞并产生直接免疫反应。OSW-I能辅助CTL细胞的作用，能够强化正常细胞的免疫功能，同时CD4+成为正常细胞厚厚的一层免疫保护层，对正常细胞直接产生免疫防御作用。(2)增强baT细胞的抗肿瘤作用baT细胞的表面标志物是CD8+，能对产生特殊抗原反应的目标细胞进行毒杀， OSff-I能将物化的CD8+激活和识别特异性抗原能力，被活化的CD8+像追击导弹一样，保持超灵敏的识别性和指向性，可迅速识别游离在淋巴液中游离态的病灶因子，当CD8+和肿瘤细胞同归于尽，破坏肿瘤营养库经脉组织，直接杀伤肿瘤细胞，直至分解、消失。令人叹服的是，CD8+在毒杀肿瘤细胞的同时,对正常细胞确没有任何毒副作用。(3) dgT细胞的抗肿瘤作用OSff-I能增强dgT细胞抗肿瘤作用，促进dgT细胞分泌多种Thl细胞因子并参与免疫调节及杀伤肿瘤，同时也增强了抑制肿瘤因子的数量，吞噬肿瘤细胞残留物，清除细胞环境。dgT细胞被OSW-I极强诱导后，通过分泌IL-4、IL-b激活NK和ΜΦ的抗肿瘤活性， 并可诱导T细胞直接杀伤肿瘤细胞活性，促进细胞毒TCL细胞和自然杀伤NK细胞的增殖与分化，TCL细胞的增殖反应与分泌，大大增强了细胞毒TCL和NK细胞杀伤效应。为了防止肿瘤细胞的生长、复制与转移，T淋巴细胞亚群CD4和CD8亚群共同组建了机体免疫防御体系，对生长复制的癌细胞发挥着重要作用和抑制变异细胞转癌的有效性。2、紫杉醇的药物机理作用紫杉醇是从红豆杉全株中无毒提取的一种强抗癌活性烷二萜类化合物-紫杉醇 (TaXOl)，紫杉醇与细胞受体后，释方出的TNF-a抑制因子，通过肿瘤新生血管和胞膜进入细胞核内，诱导并促进微管的装配和稳定微管蛋白的作用，致使快速分裂的肿瘤细胞在有丝分裂G2/m阶段被牢牢固定，免疫应答及修复应答信号失去攻能作用，破坏了端粒酶的活性，癌细胞中的DNA (脱氧核糖核酸)失去端粒酶的保护，则会停止分裂与复制而萎缩凋亡。紫杉醇的功能性作用是任何植物抗癌药物和生物碱中抑癌活性最强、最有效的一种抗癌药物，而且无毒处理后的紫杉醇对正常细胞无毒副作用，其抑癌活性极强。3、超氧化物歧化酶(SOD)的辅助抑癌作用SOD是人体内过剩自由基的消除剂。自由基是人体需氧化物生命过程中的多种生化反应中间代谢产物，是机体免疫防御系统中一种重要催化酶。当人体因各种药物、辐射、 烟酒、环境、食物和饮用水等因素产生过多自由基或因免疫力低下导致自由基清除过慢时， 过剩的氧自由基和羟自由基就会趁机直入，攻击和氧化正常细胞膜及各细胞器官造成机体在分子水平、细胞水平以及组织水平的各种损伤，并诱发包括肿瘤在内的各种疾病。自由基清除剂SOD是一类能够清除机体中过多自由基活性物质，也是超氧阴离子自由基(0_2)为底物的一种金属酶，其摧化反应为Ο、2+0-, 2. 2H+S0D, H202+02,即SOD能推化0_，2-歧化，并由此而得名。由于SOD能够清除0_，所以在防御氧阴离子自由基毒性、抗辐射对细胞的损伤以及预防细胞衰老等方面起着极其重要的作用。它通过上述反应可把机体内有害的超氧阴离子自由基O2和羟自由基OH转化为过氧化氢，尽管过氧化氢对正常细胞仍是有害的活性氧，但体内活性极强的过氧化物氢酶(CAT)和过氧化物酶(PLD)会立即将其分解为安全无害的水。因此，这三种酶也就构成了一个完整的抗氧化防御链。SOD虽然没有直接杀伤肿瘤细胞的功能，但辅助虎眼万年青皂甙和紫杉醇烷二萜类化合物强抑癌活性的作用，能够有效的减少正常细胞变异和变异细胞转癌的机制，同时， 使体内的过剩自由基消除掉，并随体液而排除体外。4、虎眼万年青皂甙OSW-I 口服抗癌制剂的组配方法(I)胶囊虎眼万年青皂甙OSW-I结晶粉100g、含量为60%，紫杉醇结晶粉80%、含量为 10%，超氧化物歧化酶SOD粉60g、20000IU/g。
将其全部放进三维药物混合机内，混合3min后取出，过筛100目，然后在放入胶囊机物料容器内装充硬胶囊，共计容装600粒，每粒含虎眼万年青皂甙O. 165g、紫杉醇 O. 135g、S0D0. lg，合计O. 4g/粒，成人每天口服3次，每次2粒。⑵口服液虎眼万年青皂甙OSW-I结晶粉100g、含量为60 %，紫杉醇结晶粉80g、含量为 10 %，SOD 粉 60g、20000IU/g，蒸馏水 2300ml，聚乙二醇 400、24ml，蜂胶 600g,冰糖粉 150g， 异抗坏血酸钠粉300mg。将蒸馏水2300ml放入一不锈钢容器内，间接加热40°C，加入冰糖粉150g，异抗坏血酸钠粉300mg，充分搅匀，待其全部溶解后，加入聚乙二醇400、24ml，搅拌成微乳状时， 再加入虎眼万年青皂甙0SW-I、结晶粉100g，再搅拌lOmin，制成3000ml水红色微乳状时， 用吸管将其输送到口服液灌装机密封的物料容器内，进行自动灌装，共计灌装300支，每支 10ml，每支内含虎眼万年青皂甙0SW-I、0. 333g，紫杉醇0. 27g，S0D0. 2g。成人每天口服3次， 每次I支。5、急性毒性试验⑴LD5tl 试验实验目地是观查虎眼万年青皂甙OSW-I胶囊、口服液灌胃给药后，对小鼠产生的急毒反应，预测其临床用药的安全性。实验鼠为上海ICR种小鼠。A组用胶囊粉与聚乙二醇 400稀释成2. 4g/kg，B组用口服液灌胃给药30ml/kg。灌胃前停食10小时，所有实验组在给药7d内均未发现I只死亡，未测出LD5tl致死量。(2)最大耐受量试验A组用稀释的胶囊粉给药2. 4g/kg,B组用口服液灌胃给药30ml/kg,—天内灌胃2 次，总剂量为A组4. 8g/kg,B组60ml/kg,此剂量相当于成人按60kg体重计算,是口服剂量
0.04g/kg的120倍，给药后7d内无一只鼠死亡和明显的毒性反应。因此，小鼠的最大耐受量为成人临床拟日用剂量的120倍。6、长期毒性试验(I)虎眼万年青皂甙OSW-I胶囊的长毒试验，小鼠按临床剂量10倍的量灌胃3个月，结果给药后90天内进食量，活动量和体重与对照组相比均无明显差异；所测定的生化、 血象等指标经统计学处理也无明显差异，对心、肝、脾、肾等器官进行组织形态学观查，实验组与对照组均居正常，说明虎眼万年青皂甙0SW-1胶囊灌胃给药对小鼠无毒副作用，也未发现由药物而引起的病理性改变，试验表明无长期性毒性。7、特殊毒理试验(I)细胞遗传毒性——微核及染色体畸变；按国家有关测试范围进行测试，虎眼万年青OSW-I胶囊、口服液各给药剂量组小鼠骨髓的微核及染色体数目、结构均无异常。(2)诱变试验虎眼万年青皂甙OSW-I胶囊、口服液用国家规定的全套菌株进行诱变性析测(Ames试验)，结果检品对各菌株在各个剂量范围内的回变数均与其它自发回变数接近，均未达到可判断的回变阳性标准，也无剂量效应关系。因此，虎眼万年青OSW-I胶囊口服液未见诱变作用。8、免疫试验用虎眼万年青皂甙OSW-I胶囊进行特异性和非特异性鼠体内、外的体液与细胞免疫试验，证实虎眼万年青皂甙OSW-I胶囊对ΜΦ巨噬细胞的吞噬功能有极为显著的促进作用，能增强T细胞免疫活性，对脐血活性花环形成试验(EaRFC)及移植物抗宿主反应(GVHR) 有增进影响，对a、r干扰素诱生以及a干扰素促NK细胞活性有协同作用，能够提高特异性抗体产生，促进小鼠脾细胞DNA合成。说明它能较明显的促进机体免疫机能。还能提高血清中血红蛋白含量，对红血球生长有一定的作用。9、体外诱导人胃癌细胞凋亡对端粒酶活性的影响用2. 4g虎眼万年青胶囊粉与聚乙二醇400、Iml稀释后，处理SGC-2961细胞后，用 MTT法测定胃癌细胞株的生长与抑制率，通过形态学观查及流式细胞术检测细胞凋亡率。结果，虎眼万年青皂甙OSW-I胶囊稀释液对胃癌细胞具有极为强烈的抑制作用， 且呈时间依赖及剂量依赖性，光镜及流式细胞术分析表明，2. 4g的OSW-I胶囊稀释剂处理 72小时后观查，细胞即出现极为明显的凋亡形态特征及凋亡峰，对端粒酶活性的同步检测结果显示，在诱导胃癌细胞凋亡的同时也伴随着端粒酶活性的下调，且随药物浓度增加其抑制作用也逐渐增强。处理12小时为72-89%，处理24小时为76-91 %，处理48小时为 83-95%，处理72小时为89-98%，即起变为阴性。只要处理时间延长其抑制作用就会逐渐增强。本发明实验还显示出，只要时间足够，即使偏小剂量或极小含量的虎眼万年青皂甙OSW-I胶囊也能对SGC-2961细胞株增殖产生极强烈的抑制效果。其抑制率为100%，抑癌率为98%，通过药效学研究统计表明，O. 04g的0SW-1对肿瘤转移及抑制率高达98%，是环磷酰胺30mg的1000倍。10、临床应用(I)通过多名患有肺癌、淋巴癌、胃癌、乳腺癌、肝癌患者志愿服用虎眼万年青皂甙 OSff-I胶囊、口服液，连服3个月后，抑癌效果极为显著。尤其是一位肝癌患者，初检瘤块
O.98-1. 63cm多块大小不一的瘤块，AFP阳性为7011，服用虎眼万年青皂甙OSW-I胶囊I个月，AFP阳性降至1082，服用I个月降至69，服用3个月后检查为AFP8. 7，CT检查肿瘤全部消失，血样检查全为阴性，彩超造型病灶无活动迹象，而且镇痛作用较为突出。因此，本发明虎眼万年青皂甙OSW-I胶囊可能会改变肝癌目前几乎束手无策局面。(2)对治疗乙型肝炎的作用经乙型肝炎患者志愿服用2个月后，其血清干扰素的诱生作用明显增强，对乙肝病毒DHBV在用药后使用HBV-DNA水平显著下降，3个月后HBeAg，阳性乙型肝炎患者的五项指标全部转阴，说明虎眼万年青皂甙OSW-I胶囊对慢性乙型肝炎有极为显著的治疗效果。 OSW-I胶囊能够较好的减轻肝区疼痛、消除腹胀乏力、改善黄胆、消退腹水、增加体重，无明显毒副作用表现。另外还能够阻断乙肝患者的癌变，而且疗效与疗程呈正相关，极为明显的高于对照组药物甲基斑胺30倍以上。因此，本发明虎眼万年青皂甙OSW-I胶囊、口服液组方科学，时间与剂量合理，其抑癌效果是其它植物抗癌药物作用的30倍以上，而且对人体正常细胞无毒性，这就为今后的临床制药与应用奠定了科学的技术工艺依据。
具体实施例方式虎眼万年青皂甙OSW-I 口服抗癌制剂及其制备方法，其工艺是
I、虎眼万年青皂甙OSW-I胶囊将虎眼万年青皂甙OSW-I结晶粉100g，紫杉醇结晶粉80g，SOD粉60g，全部放进三维药物混合机内，混合3min后取出，过筛100目，然后在放入胶囊机物料容器内装充硬胶
囊，每粒O. 4g。2、虎眼万年青皂甙OSW-I 口服液将蒸馏水2300ml，放入一不锈钢容器内，间接加热40°C，加入冰糖粉150g，异抗坏血酸钠粉300mg，充分搅匀，待其全部溶解后，加入聚乙二醇400、24ml，搅拌成微乳状时，再加入虎眼万年青皂甙0SW-1结晶粉100g，紫杉醇粉80g，SOD粉60g，充分搅拌lOmin，再加入蜂胶600g，再搅拌lOmin，制成3000ml，水红色微乳状时，用吸管将其输送到口服液灌装机密封的物料容器内，进行自动灌装300支，每支10ml。
权利要求
1.虎眼万年青皂甙OSW-I结晶粉100g，紫杉醇结晶粉80g，SOD粉60g。
2.蒸馏水2300ml。
3.冰糖150g,异抗坏血酸钠300mg。
4.聚乙二醇400、24ml。
5.蜂胶600g。
全文摘要
本发明提出了虎眼万年青提取的皂甙OSW-I结晶粉与无毒提取的紫杉醇结晶粉，辅与SOD粉等为组方的口服抗癌制剂虎眼万年青皂甙OSW-I胶囊的制备方法以及在临床应用方面，针对多种晚期及联合化疗失败的晚后期癌患的应用，显示出了极为强烈的抑癌活性。这种组方的抗癌制剂，生产工艺简单，理化性质稳定，抑癌活性极强，对正常细胞无细胞毒性。
文档编号A61K31/337GK102580065SQ201210030339
公开日2012年7月18日 申请日期2012年2月13日 优先权日2012年2月13日
发明者林树芳 申请人:林树芳