专利名称：一种生理活性三七多糖的制备方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及天然药物制备技术领域，具体地说是一种具有生理活性的三七多糖的制备方法及其应用。
背景技术：
三七(/ : notoginseng (Burk.) F. H. Chen),又名田七、金不换等，为五加科 (Araliaceae)人参属(Panax、植物。三七为名贵中药，利用历史悠久。三七的主要活性成分为皂苷，已进行工业生产，并开发多种产品。近代药理学研究表明，除皂苷外，三七多糖亦有显著的生理活性。目前，三七多糖的提取多采取简单的提取、醇沉、浓缩、干燥等步骤。生产的三七多糖纯度低，重金属(特别是砷)和灰分含量过高，影响终端产品的质量。中国专利公开了三七多糖提取分离方法(申请号01108493. 6和CN1329094A)，即为三七粗多糖的制备方法，未进行纯化和精制。应用现代技术，工业化生产具有生理活性三七多糖，对于三七资源的综合利用，促进三七产业的持续发展均有积极的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种生理活性三七多糖的制备方法及其应用。本发明的制备方法通过纯化和精制等步骤，得到三七多糖。按本发明制得的三七多糖具有含量高，蛋白质、重金属和灰分低，质量稳定，有显著生理活性等特点。本发明提供的制备方法生产周期短，所用溶剂为水及乙醇，安全无毒，成本低，易于工业化生产。本发明提供的三七多糖的制备方法，其具体步骤如下
三七的地下部位(根茎、主根、支根和须根)粉碎，过20目筛的颗粒，用乙醇提取三七总皂苷后，挥去残留乙醇，加入6-10倍质量的水，于80-100°C加热提取三次，提取液合并， 置于离心机中，在5000-15000rm转速下高速离心10-15分钟。离心后的清液从经过预处理的树脂层析柱柱顶加入，上柱流速O. 3-1. O BV/h。提取液加入后，用相当于层析柱体积的I. 0-2. O BV的纯化水冲洗，流速为O. 5-1. O BV/h。合并洗脱液，洗脱液通过截留分子量 300-500的芳香聚酰胺平板式超滤膜，截留液相对密度I. 02-1. 03，超滤液加入3_5倍的乙醇静置，沉淀，离心。沉淀物用水溶解至截留液相对密度I. 02，喷雾干燥，得到三七多糖。上述过程中上树脂层析柱后可用活性炭脱色，活性炭用量为三七质量百分比的 4-5%，在温度45°C以上搅拌30分钟，过滤，离心，合并清液。按上述步骤使用的树脂须进行预处理。预处理方法为将树脂用水浸泡，过滤，装入层析柱，用75-98%乙醇饱和，静置15 36h后，顺序用乙醇冲洗，至乙醇液用水稀释后不混浊,用水冲洗,至无乙醇,用相当于树脂体积O. 5 5倍的质量浓度为3-5%盐酸洗涤，用水洗至中性，用相当于树脂体积O. 5 5倍的质量浓度为I 8%氢氧化钠洗涤,用水洗至中性,至HPLC检测无有机物质残留。按本发明提供的制备方法得到的三七多糖为淡黄色粉末，溶于水，不溶于乙醇、甲醇、丙酮等有机溶剂，水溶液为中性，pH=7.0。三七多糖按常法水解，用HPLC测定单糖组成，为半乳糖醛酸，半乳糖，葡萄糖醛酸，阿拉伯糖，葡萄糖，鼠李糖。其单糖的组成比例为 63:21:7:5:2:2ο三七多糖的红外光谱(IR)显示3431.02 cnT1为O-H伸缩振动的吸收，2928. 25 CnT1为C-H伸缩振动的吸收，这两组吸收峰是多糖的特征峰；1646. 62CHT1为C=O的伸缩振动的吸收峰，1400-1200cm_1为C-H的变角振动的吸收峰，1200-1000 cnT1是吡喃糖环的C-O (C-O-C和C-0-H)伸缩振动的吸收峰(图I)。三七多糖的13C核磁共振谱(13C-NMR)显示D_吡喃半乳糖的化学位移[δ 92. 5 (c-l )，69.61 ( C-2 )，70.13 ( C—3 )，71.05 (C—4)，71.50 (C—5)，62.71 (C—6) ];D-葡萄吡喃糖的化学位移[δ 94. 74 (C-I)，74. 90 (C-2)，77. 05 (C-3)，70. 13 (C-4), 76.76 (C-5), 61. 71 (C_6) ] ;D_吡喃半乳糖醛酸甲酯和D-葡萄吡喃糖醛酸的甲酯碳的化学位移(S 215.55，215.69，215. 81) ;D_吡喃阿拉伯糖的化学位移[δ 104. 88 (C-I) , 71. 13 (C-2) , 73. 75 (C-3 ) , 70. 13 (C-4), 64. 43 (C-5)](图 2)。三七多糖经部分降解，制备寡糖，证明具有β -D-半乳吡喃糖基(1-3)-[α-L-阿拉伯呋喃糖基(1-6) ]_β -D-半乳吡喃糖的寡糖单元结构。按本发明提供的制备方法得到的三七多糖经药理学实验研究，结果表明，三七多糖具有调节免疫功能、保护肝损伤、促进骨缺损修复、抑制肿瘤、降低血糖、抗病毒等作用。以下为实验研究的情况
I、三七多糖增强创伤大鼠免疫功能的作用
创伤引起机体代谢和免疫功能紊乱，增加感染几率，诱发多器官衰竭。免疫抑制与创伤的严重程度及炎症反应成正比。表现为外周血淋巴细胞减少，功能降低，CD4细胞减少，CD4 / CD8比值减少，自然杀伤细胞(NK)和淋巴因子激活杀伤细胞活力下降，由T细胞产生的白细胞介素-2 (IL-2)水平降低。及时提供早期肠内营养支持(EN)治疗，能减轻肠黏膜萎缩，防止细菌移位，维护肠道屏障，纠正免疫功能异常，降低死亡率。创伤模型大鼠在实施EN治疗的同时，加入三七多糖，观察三七多糖对机体免疫功能的影响。实验结果表明，仅提供蛋白质和热量的标准肠道营养支持(EN)对创伤机体免疫功能恢复虽有一定作用，但未能起到明显的促进作用。三七多糖可调节NK细胞，促进巨噬细胞活性，提高脾脏空斑形成细胞的数量。在提供EN的同时，加入三七多糖，不仅CD4细胞数量和OT4 / OT8比值均明显高于创伤组。而且血清的白细胞介素IL-2水平显著高于EN 治疗组。加入三七多糖有利于创伤机体免疫抑制的全面恢复(表3，4)。表3创伤大鼠T细胞表型含量变化
权利要求
1.一种具有生理活性的三七多糖的制备方法，其特征在于，三七多糖的制备按以下步骤进行三七的地下部位粉碎，过20目筛的颗粒，用乙醇提取三七总皂苷后，挥去残留乙醇，加入6-10倍质量的水，于80-100°C加热提取三次，提取液合并，置于离心机中，在 5000-15000rm转速下高速离心10-15分钟，离心后的清液从经过预处理的树脂层析柱柱顶加入，上柱流速0. 3-1. 0 BV/h，提取液加入后，用相当于层析柱体积的I. 0-2. 0 BV的纯化水冲洗，流速为0. 5-1. 0 BV/h，合并洗脱液，洗脱液通过截留分子量300-500的芳香聚酰胺平板式超滤膜，截留液相对密度I. 02-1. 03，超滤液加入3-5倍的乙醇静置，沉淀，离心，沉淀物用水溶解至截留液相对密度I. 02，喷雾干燥，得到三七多糖。
2.根据权利要求I所述的具有生理活性的三七多糖的制备方法，其特征在于所述的纯化用吸附树脂和离子交换树脂包括LSA-8、、LSA-21、LSA-30、LSA-10, LSC-AS, LSC-100、 LX-20、LX-68、0U-29、LAR-714、D-101 型号的树脂。
3.根据权利要求I所述的具有生理活性的三七多糖的制备方法，其特征在于所述的超滤，包括醋酸纤维素超滤膜、芳香聚酰胺平板式超滤膜和无机陶瓷超滤膜。
4.根据权利要求I所述的具有生理活性的三七多糖的制备方法，其特征在于上述过程中上树脂层析柱后用活性炭脱色，活性炭用量为三七质量百分比的5%以下，在温度45°C 以上搅拌30分钟，过滤，离心。
5.权利要求I所述的具有生理活性的三七多糖的应用，其特征在于三七多糖具有调节免疫功能、保护肝损伤、促进骨缺损修复、抑制肿瘤、降低血糖、抗病毒的作用，可单独或组合用做医药品和健康产品的原料。
全文摘要
本发明是一种具有生理活性的三七多糖的制备方法及其应用。该方法应用树脂柱层析、活性碳和膜分离技术纯化等步骤，精制纯化得到三七多糖。用本发明的制备方法得到的三七多糖具有蛋白质、重金属和灰分低，质量稳定的特点，并具有调节免疫、保护肝损伤、降低血糖、抗肿瘤等生理活性，可单独或组合作为天然药物和健康产品的原料。本发明提供的三七多糖制备方法操作简单，适于工业化生产，且成本低，达到节能降耗，实现中国名贵中药三七的综合开发、可持续利用的目的。
文档编号A61P3/10GK102585029SQ20121005894
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月8日 优先权日2012年3月8日
发明者丁艳芬, 张颖君, 李江霞, 杨崇仁, 王东 申请人:玉溪市维和生物技术有限责任公司