专利名称：苦玄参提取物在制药中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及植物提取物的医药应用领域，具体涉及苦玄参提取物在制药中的应用。
背景技术：
苦玄参(Picria Felterrae Lour),又名苦草、熊胆草、四环素草，为苦玄参科多年生草本植物，主产于广西、广东。全草可入药，民间用于肺炎、感冒、咽喉炎、跌打损伤、淋巴结炎等炎症的治疗已有悠久历史。许多学者对苦玄参中的化合物成分进行了较为系统的研究，从中分离到了三萜类、黄酮类及苯乙醇苷类等化合物。已有的药理和临床结果显示，苦玄参具有广谱性的抗菌消炎和抗病毒作用、神经系统兴奋作用、降脂作用以及对性功能障碍和健忘症等病症的治疗作用等。但目前还未见有苦玄参提取物用于制备镇痛药物的公开报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供苦玄参提取物在制药中的应用。本发明所述的苦玄参提取物在制药中的应用，具体地说，是苦玄参提取物在制备镇痛药物中的应用，其中，所述的苦玄参提取物的制备方法包括取苦玄参，加水煎煮提取，所得提取液过大孔树脂柱，水洗树脂柱，然后用体积浓度为40 50%的低碳醇洗脱，收集醇洗脱液，浓缩，干燥，即得。具体的苦玄参提取物的制备方法为取苦玄参，加水煎煮提取，所得提取液用截留分子量为5000 10000道尔顿的超滤膜超滤，超滤透过液过大孔树脂柱，水洗树脂柱至无色，然后用体积浓度为40 50%的低碳醇洗脱至流出液呈浅黄色，收集醇洗脱液，浓缩，干燥，即得。通过增加超滤步骤，以减少后序大孔树脂柱的吸附量，延长大孔树脂的使用寿命；可将超滤所得的超滤透过液先进行反渗透浓缩，然后再过大孔树脂柱。同样地，为了减少超滤膜的堵塞，可将提取液先用80 100目滤布粗滤，滤液再进行超滤步骤。更为具体的苦玄参提取物的制备方法为取苦玄参，加水煎煮提取I 3次，合并药液得到提取液，所得提取液用截留分子量为5000 10000道尔顿的超滤膜超滤，超滤透过液过大孔树脂柱，水洗树脂柱至无色，然后用体积浓度为40 50%的低碳醇洗脱呈浅黄色，收集醇洗脱液，浓缩，干燥，即得。上述制备方法中，每次提取时，水的加入量为药材重量的3 10倍，提取时间为O. 5 3. Oh ;提取之前可先将药材粉碎，以有利于活性成分的提出，粉碎的粒度以10 200目为好。 在用体积浓度为40 50%的低碳醇对树脂柱进行洗脱时，洗至流出液呈浅黄色即可，通常上述浓度低碳醇的用量为柱体积的4 8倍。所述大孔树脂的型号可以是D101、AB-8、HPD400或HP-20等。
所述用于洗脱的低碳醇的体积浓度为45%。所述的低碳醇为甲醇、こ醇或丙醇。申请人:经实验发现，将苦玄參的水提物上大孔树脂柱后，用体积浓度为40 50%的低碳醇对树脂柱进行洗脱得到的提取物有很好的镇痛作用，同等剂量下，其镇痛抑制率几乎相当于苦玄參水提物镇痛抑制率的2倍，并且在保证上述镇痛效果的同时具备较好的消炎作用，而且提取物毒副作用小，非常 适合用于制备镇痛药物。
具体实施例方式下面以实施例对本发明作进ー步说明，但本发明并不局限于这些实施例。实施例II)准备取苦玄參干药材，粉碎至100目，备用；2)提取称取粉碎的药材5kg，加水煎煮提取三次(水的加入量分别为药材重量的8倍、6倍、4倍，提取分别时间为2小吋、I. 5小吋、I. 5小吋)，合并药液，得到提取液80. OL ；取其中的10. OL提取液浓缩，真空干燥，得到苦玄參提取物A 66. 2g；3)超滤将剩余的提取液用截留分子量为10000的超滤膜超滤，收集超滤透过液，备用；同时将超滤截留物浓缩，真空干燥，得到苦玄參提取物B676. Sg ；4)大孔树脂柱吸附分离超滤透过液过HP-20大孔树脂柱，先用水洗树脂柱至流出液无色，然后用6倍柱体积的45% (v/v)こ醇洗柱，收集醇洗脱液，浓缩，真空干燥，得到苦玄參提取物C 786. Og ;最后再用6倍柱体积的80% (v/v)こ醇洗脱，洗脱液浓缩，真空干燥，得到苦玄參提取物D 361. 3g。实施例2I)准备取苦玄參干药材，粉碎至80目，备用；2)提取称取粉碎的药材5kg，加水煎煮提取二次(水的加入量分别为药材重量的8倍、6倍，提取分别时间为2小吋、I. 5小吋)，合并药液，得到提取液60. OL ;取其中的10. OL提取液浓缩，真空干燥，得到苦玄參提取物A 65. 7g；3)超滤将剩余的提取液用截留分子量为8000的超滤膜超滤，收集超滤透过液，备用；同时将超滤截留物浓缩，真空干燥，得到苦玄參提取物B674. Ig ；4)大孔树脂柱吸附分离超滤透过液过DlOl大孔树脂柱，先用水洗树脂柱至流出液无色，然后用8倍柱体积的40% (v/v)こ醇洗柱，收集醇洗脱液，浓缩，真空干燥，得到苦玄參提取物C 782. Og ;最后再用5倍柱体积的80%(v/v)こ醇洗脱，洗脱液浓缩，真空干燥，得到苦玄參提取物D 364. 0g。实施例3I)准备取苦玄參干药材，粉碎至160目，备用；2)提取称取粉碎的药材5kg，加水煎煮提取二次(水的加入量分别为药材重量的8倍、5倍，提取分别时间为2小吋、2. 0小吋)，合并药液得到提取液58. OL ;取其中的10. OL提取液浓缩，真空干燥，得到苦玄參提取物A 64. Ig ；3)超滤将剩余的提取液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，收集超滤透过液，备用；同时将超滤截留物浓缩，真空干燥，得到苦玄參提取物B661. Sg;4)大孔树脂柱吸附分离超滤透过液过AB-8大孔树脂柱，先用水洗树脂柱至流出液无色，然后用4倍柱体积的45% (v/v)乙醇洗柱，收集醇洗脱液，浓缩，真空干燥，得到苦玄参提取物C 782. Og ;最后再用7倍柱体积的80%(v/v)乙醇洗脱，洗脱液浓缩，真空干燥，得到苦玄参提取物D 364. 0g。实验例苦玄参镇痛药理活性部位筛选I、材料醋酸，由南通醋酸化工股份有限公司生产；二甲苯，由君安化工股份有限公司生产；伊文思蓝，上海蓝季生物技术有限公司生产； 阿司匹林，广东康博通药业实业有限公司生产；其余试剂均为国产分析纯；昆明种小鼠，雌雄各半，体质量18 22g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，生产许可证号=SCXKUfi ) 2009-0004，常规饲养，自由进食饮水。提取物为本发明实施例I制备得到的苦玄参提取物A、B、C、D02、方法与结果2. I分组及给药取昆明种小鼠140只，雌雄各半，根据体重随机分为14组，即空白对照组(给予等量生理盐水)、阳性对照组(阿司匹林O. 2g/kg)、苦玄参提取物A给药剂量(3. 0,2. O, I. Og/kg)，苦玄参提取物B、苦玄参提取物C、苦玄参提取物D的给药剂量(均为O. 5，I. O, 2. Og/kg) ο 按 O. 2mL · (log)-1, ig,连续给药 7d。2. 2小鼠醋酸所致扭体反应试验于末次给药后30min后，小鼠腹腔注射(ip) O. 6%醋酸溶液O. ImL · (IOgK1，记录注射醋酸后15min内小鼠扭体次数。镇痛抑制率=(空白组扭体次数_药物组扭体次数)/空白组扭体次数X 100%。具体数据如表I所示。表I醋酸对小鼠所致扭体反应的影响n=10)
_^_(g/kg) 扭体次数_抑制|Γ:%)
空白对照组一21. 9 土 6. 8
阿司匹林组0.217.6土2. f'19.6
苦玄参提取物A 3·°8-9±2·6"59·4
口糊 A2·ο14·9±9.4*31.9
I.O16.4±10. 3*25. I苦玄参提取物 B f °19n 2 ^ia7412· 3
L UZU. 9 ±9· 74. b
0.519·4±10·611.4
. ,>.t tn-rr,, ,Uil ^2. 08. 2 + 6.62. 6
S S 取物 I I. ο 15.2 + 8. I*30.6
0.516. 5 ±13.4*24. 7
苦玄参提取物D 2·°贿8·17·8
L ο19·3±5.511.9
__O1S__21. 4 土 15. 7___
注与空白对照组比较*P < 0. 05，**P < 0. Ol0结果表明，苦玄參提取物A和苦玄參提取物C均可明显降低抑制冰醋酸所致小鼠的扭体反应次数，与对照组比较差异有显著性(P〈0.01或P〈0. 05)，其中以高剂量组效果最为突出；由表中数据可知，在同等剂量条件下，提取物C的镇痛抑制率几乎相当于苦玄參提取物A镇痛抑制率的2倍；同等剂量条件下，提取物C的镇痛抑制率至少相当于提取物D的2. 5 倍。2. 3小鼠腹腔毛细血管通透性试验于末次给药30min后，小鼠尾静脉注射0. 5%伊文思蓝(生理盐水配制) 0.lmL.aOg)—1，并立即腹腔内注射0.6%冰醋酸(生理盐水配制)0.2mL /只。20min后颈椎脱臼处死，用6mL生理盐水冲洗腹腔,收集腹腔液,合并,定容至10mL,4000rpm离心IOmin,取上清液于590nm处测定吸光值(A)，计算通透性抑制率，通透性抑制率(％) =(空白对照组平均吸光值(A)-给药组平均吸光值(A)) /空白对照组平均吸光值(A) X 100%。具体数据如表2所示。表2醋酸对小鼠腹腔毛细血管通透性的(？±らn=10)
权利要求
1.苦玄參提取物在制备镇痛药物中的应用，其中， 所述的苦玄參提取物的制备方法包括取苦玄參，加水煎煮提取，所得提取液过大孔树脂柱，水洗树脂柱，然后用体积浓度为40 50%的低碳醇洗脱，收集醇洗脱液，浓缩，干燥，即得。
2.根据权利要求I所述的应用，其特征在于所述苦玄參提取物的制备方法为取苦玄參，加水煎煮提取，所得提取液用截留分子量为5000 10000道尔顿的超滤膜超滤，超滤透过液过大孔树脂柱，水洗树脂柱至无色，然后用体积浓度为40 50%的低碳醇洗脱呈浅黄色，收集醇洗脱液，浓缩，干燥，即得。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述苦玄參提取物的制备方法为取苦玄參，加水煎煮提取I 3次，合并药液得到提取液，所得提取液用截留分子量为5000 10000道尔顿的超滤膜超滤，超滤透过液过大孔树脂柱，水洗树脂柱至无色，然后用体积浓度为40 50%的低碳醇洗脱呈浅黄色，收集醇洗脱液，浓缩，干燥，即得。
4.根据权利要求I 3中任ー项所述的应用，其特征在于在苦玄參提取物的制备方法中，所述大孔树脂的型号为D101、AB-8、HPD400或HP-20。
5.根据权利要求I 3中任ー项所述的应用，其特征在于在苦玄參提取物的制备方法中，所述用于洗脱的低碳醇的体积浓度为45%。
6.根据权利要求I 3中任ー项所述的应用，其特征在于在苦玄參提取物的制备方法中，所述的低碳醇为甲醇、こ醇或丙醇。
全文摘要
本发明公开了苦玄参提取物在制药中的应用，具体是在制备镇痛药物中的应用，其中，所述的苦玄参提取物的制备方法包括取苦玄参，加水煎煮提取，所得提取液过大孔树脂柱，水洗树脂柱，然后用体积浓度为40～50%的低碳醇洗脱，收集醇洗脱液，浓缩，干燥，即得。申请人发现，上述提取物在同等剂量下的镇痛抑制率几乎相当于苦玄参水提物镇痛抑制率的2倍，并且在保证上述镇痛效果的同时具备较好的消炎作用，而且该提取物毒副作用小，非常适合用于制备镇痛药物。
文档编号A61K36/80GK102641376SQ201210140048
公开日2012年8月22日 申请日期2012年5月8日 优先权日2012年5月8日
发明者卢凤来, 吴建璋, 文永新, 李典鹏, 陈月圆, 黄永林 申请人:广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所